Summary
इस लेख का लक्ष्य प्रयोगशाला माउस के इंटुबशन की एक परिष्कृत विधि का वर्णन करना है। विधि noninvasive है और इसलिए, अध्ययन के लिए आदर्श है कि श्वसन समारोह के धारावाहिक निगरानी की आवश्यकता है और/
Abstract
साहित्य माउस इंटुबेशन के लिए कई तरीकों का वर्णन करता है जिन्हें या तो ट्रेचिया में कैनुला प्लेसमेंट की सीधी पुष्टि के लिए वेंट्रल गर्दन में मौखिक गुहा या चीरा के माध्यम से ग्लोटिस के दृश्य की आवश्यकता होती है। सापेक्ष कठिनाई या ऊतक आघात ऐसी प्रक्रियाओं द्वारा विषय के लिए प्रेरित एक अन्वेषक की देशीयद्रि अध्ययन करने की क्षमता के लिए एक बाधा हो सकती है । यह लेख एक तकनीक दिखाता है जिसमें वेंट्रल गर्दन से बालों को हटाने के लिए एक डिपिलेटरी के उपयोग के बाद माउस के शारीरिक हेरफेर त्वचा की डिग्री की परवाह किए बिना ओरोट्रेचेल इंट्यूबेशन के लिए श्वासनली के ट्रांसक्यूटेनियस दृश्य की अनुमति देता है Pigmentation. यह विधि विषय के लिए अहानिकर है और आसानी से मूत्र रचना विज्ञान की सीमित समझ के साथ हासिल की जाती है। यह परिष्कृत दृष्टिकोण दोहराया intubation की सुविधा है, जो रोग की प्रगति की निगरानी या उपचार के आसवन के लिए आवश्यक हो सकता है । इस विधि का उपयोग करने से श्वसन रोग के माउस मॉडल में फेफड़ों के कार्य को मापने के लिए आवश्यक जानवरों की संख्या और तकनीकी कौशल में कमी हो सकती है।
Introduction
प्रयोगशाला माउस मानव श्वसन रोग के लिए एक आम पशु मॉडल है। इस प्रकार, उपचार और श्वसन यांत्रिकी की माप दोनों के उद्देश्य से माउस इंट्यूबेशन के लिए कई प्रकाशित तरीके हैं। वर्णित अधिकांश प्रक्रियाओं में मौखिक गुहा के माध्यम से ग्लॉटिस के दृश्य की आवश्यकता होती है , विशेष उपकरणों जैसे लैरिंगोस्कोप या फाइबर ऑप्टिक प्रकाश स्रोत1,2,3,4,5,6,,7।, हालांकि, यह मुश्किल हो सकता है जब एक अपेक्षाकृत बड़े cannula की आवश्यकता है, क्योंकि यह शोधकर्ता के विचार अस्पष्ट कर सकते हैं । लिम्जुन्यावोंग एट अल8 ने इस चिंता को इंटुबेशन की एक विधि के साथ संबोधित किया है जिसमें ट्रेलिया के दृश्य के लिए अनुमति देने वाली वेंट्रल गर्दन के मिडलाइन के साथ एक छोटा सा कटनीस चीरा बनाया जाता है । प्रक्रिया का पालन करते हुए, चीरा ऊतक चिपकने के साथ बंद कर दिया जाता है।
लगातार दोहराए जाने वाले इंटुबेशन की आवश्यकता वाले अध्ययनों के लिए, लगातार चीरा और इस साइट को बंद करने के लिए त्वचा मार्जिन और वेंट्रल गर्दन को ऊतक आघात की डिब्राइडेशन की आवश्यकता होती है। मौखिक इंट्यूबेशन के लिए ट्रांसक्यूटेनेस श्वास विज़ुअलाइज़ेशन दृष्टिकोण का उद्देश्य विशेष रूप से बार-बार इंटुबेशन अध्ययन के साथ-साथ चूहों में एकल इंटुबेशन घटनाओं के लिए उपयुक्त एक परिष्कृत, नॉनइनवेसिव तकनीक प्रदान करना है।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
यहां वर्णित सभी पशु गतिविधियों को ओहियो स्टेट यूनिवर्सिटी की इंस्टीट्यूशनल एनिमल केयर एंड यूज कमेटी (आईएसयूसी) ने मंजूरी दी है और उन्हें AAALAC-मान्यता प्राप्त सुविधाओं में संचालित किया गया था ।
1. प्रक्रिया तैयारकरना
- इंटुबशन प्लेटफॉर्म का निर्माण। उपयुक्त मंच ढलान को प्राप्त करने के लिए, तीन इंच (7.6 सेमी) 3-रिंग बाइंडर का उपयोग करें। आधे में 3-0 रेशम या अन्य धागे सामग्री की 15−20 सेमी लंबाई मोड़ें और एक निलंबन लूप(चित्रा 1)बनाने के लिए टेप के साथ झुकाहुआ मंच के शीर्ष पर धागे के सिरों का पालन करें।
- उपयुक्त आकार और लंबाई का एक कैनुला चुनें।
नोट: 20−30 ग्राम माउस के लिए, 1−1.5 इंच (2.5−3.8 सेमी) लंबे कैथेटर का उपयोग 18 ग्राम तक किया जा सकता है। इस अध्ययन के लिए 18 सप्ताह की मादा बीएएलएलबी/सी और 10 सप्ताह पुरानी C57BL/6 चूहों (प्रत्येक तनाव के n = 3) का इस्तेमाल किया गया । एक अपारदर्शी सफेद कैथेटर म्यान सबसे अच्छा ट्रांसक्यूटेनेस दृश्य प्रदान करता है। - कैथेटर के डिस्टल टिप पर एक बेवेल काटें और एक गोल बेवेल टिप बनाने के लिए घर्षण पेपर के साथ कट सतह को चिकना करें। धीरे-धीरे बेवेल(चित्रा 2)से लगभग 1 सेमी कैनुला में एक मामूली मोड़ बनाएं।
नोट: प्रत्येक माउस के लिए एक नए कैथेटर का उपयोग किया जाना चाहिए। - केटामाइन (5.4 मिलीग्राम/जी शरीर का वजन) और जाइलाज़ीन (16 μg/g शरीर का वजन) के साथ माउस को इंट्रापेरिटोनी प्रशासित करें। आंखों पर बाँझ ओफेथलिक मरहम लगाएं।
नोट: उचित संवेदनानुसार गहराई माउस की प्रतिक्रिया की कमी से एक फर्म के अंगूठे चुटकी तक हासिल की जाती है। - कोण सतह(चित्रा 3)के शीर्ष पर रेशम धागे के चारों ओर ऊपरी छेदक हुक करके इंटुबशन प्लेटफॉर्म पर एक सुप्लिन स्थिति में माउस को निलंबित करें। एक बार जब माउस पृष्ठीय रीक्यूबेंसी में तैनात हो जाता है, तो धीरे-धीरे पूंछ के आधार को समझें और पूंछ को मेज की ओर वापस ले लें। माउस को सुरक्षित करने के लिए पूंछ के आधार पर टेप का एक टुकड़ा रखें।
- 30−45 एस के लिए वेंट्रल सर्वाइकल क्षेत्र में डिपिलेटरी क्रीम(सामग्री की तालिका)लागू करें फिर सूखी धुंध का उपयोग करके गर्भाशय ग्रीवा क्षेत्र से सभी डिपिलेटरी क्रीम को हटा दें। जरूरत पड़ने पर आवेदन प्रक्रिया दोहराएं। किसी भी अवशेष को हटाने के लिए खारा या आसुत पानी के साथ त्वचा को अच्छी तरह से कुल्ला करें फिर सूखी पोंछ लें।
2. इंटुबशन प्रक्रिया
- सीधे, गैर-प्रमुख हाथ में फ्लैट संदंश का उपयोग करें ताकि जीभ को धीरे-धीरे इस तरीके से वापस लिया जा सके कि कैनुला की शुरूआत के लिए मुंह खुलता है।
नोट: चूहे के दांत संदंश का उपयोग नहीं किया जाना चाहिए क्योंकि इससे जीभ को नुकसान होगा। - प्रमुख हाथ से, कैनुला को मुंह में आगे बढ़ाएं ताकि अंत जो मामूली मोड़ तक डिस्टर्ब हो, विषय के मुंह की छत के खिलाफ हो।
- जीभ छोड़ें और बंद संदंश के फ्लैट किनारे को हवादार गर्दन के साथ तब तक स्लाइड करें जब तक कि मैंउब्रियम पहुंच न जाए। यह प्रस्ताव पार्श्व में लार ग्रंथियों को विस्थापित करता है और श्वासनली को कवर करने वाली मांसपेशियों को सपाट करता है। श्वासनली एक सफेद रेखा(चित्रा 3A)के रूप में ट्रांसक्यूटेलिया रूप से दिखाई देती है। यदि आवश्यक हो, तो एक कॉडल दिशा में त्वचा पर तनाव बनाए रखते हुए संदंश को एक क्रैनिडोरस दिशा में घुमाएं ताकि पार्श्व रूप से विस्थापित लार ग्रंथियों को चोटी पर ले जाया जा सके। यह पैंतरेबाज़ी श्वासनलिया(चित्रा 3B)के आसपास अधिक विपरीत बनाता है ।
नोट: वेंट्रल गर्दन पर अत्यधिक बल से बचें क्योंकि यह श्वासनली को ध्वस्त कर सकता है और सांस ख़राब कर सकता है। - कलाई के एक साथ फ्लेक्सिअन के साथ प्रमुख हाथ के सूपन द्वारा कैनुला वेंरैली के डिस्टल टिप को एक साथ करते हुए कैनुला को आगे बढ़ाएं।
- कैनुला का उचित प्लेसमेंट श्वासनली में अपारदर्शी कैनुला(चित्रा 4बी, डी)के दृश्य द्वारा इंगित किया गया है। यदि कैनुला को मसेसर मांसपेशी की उत्पत्ति के स्तर से उन्नत किया गया है और श्वासनली में कैनुला के दृश्य की पुष्टि नहीं की गई है, तो कैनुला को वापस लेना और पैंतरेबाज़ी को फिर से प्रयास करना।
- कैनुला से फेफड़ों के मुद्रास्फीति बल्ब को जोड़कर और डिवाइस के समवर्ती अवसाद के साथ छाती के विस्तार को देख कर उचित कैनुला प्लेसमेंट की पुष्टि करें।
- कैनुला को विस्थापित किए बिना, ध्यान से इंटुबेशन प्लेटफॉर्म से माउस के चीरों को अनहुक करें। माउस को एक क्षैतिज मंच(सामग्री की तालिका)में ले जाएं और वेंटिलेटर पर अनुकूलनक में कैनुला डालें। गहरी मुद्रास्फीति के बाद, 60 एस के लिए माउस हवादार तो श्वसन प्रतिरोध उपाय।
3. वसूली
- एक बार प्रक्रिया पूरी हो जाने के बाद, माउस को गर्म मंच पर ले जाएं। सहज श्वसन को प्रोत्साहित करने के लिए हल्के टो या पूंछ चुटकी के माध्यम से निरंतर उत्तेजना प्रदान करें।
- एक्सट्यूबेशन तब हो सकता है जब माउस सिर्फ चबाना शुरू कर देता है। हब के स्तर पर कैनुला को समझ ें और धीरे-धीरे ट्यूब को क्रेनली और माउस से दूर खींचें जब तक कि कैनुला विषय के मुंह से पूरी तरह से हटा न जाए।
नोट: वसूली प्रक्रिया के दौरान यथासंभव लंबे समय तक कठोर कैनुला के साथ वायुमार्ग सहायता प्रदान करना बेहतर है। - एक बार extubated, गर्मी समर्थन के साथ एक साफ वसूली पिंजरे के लिए माउस हस्तांतरण । लगातार माउस की निगरानी जब तक यह पूरी तरह से आंचल है, और वसूली पूरी हो गई है।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
बेसलाइन पल्मोनरी फंक्शन की सीरियल मॉनिटरिंग
अठारह सप्ताह पुरानी महिला BALB/c और 10 सप्ताह पुराने C57BL/6 चूहों (n = प्रत्येक तनाव के 3) 0, 3, 10, और 17 दिन पर वर्णित विधि का उपयोग कर intubated थे । प्रत्येक दिन इंटुबशन के बाद, विषय को 100% ऑक्सीजन(सामग्री की तालिका)के साथ आपूर्ति किए गए यांत्रिक वेंटिलेटर से जोड़ा गया था। श्वसन प्रतिरोध (आरआरएस) को 5 एस के लिए आयोजित 25 सेमी एच2ओ के लिए गहरी मुद्रास्फीति के बाद 60 एस के लिए मजबूर दोलन तकनीक का उपयोग करके मापा गया था। शारीरिक सीमा के भीतर आरआरएस मूल्यों के साथ इस निरंतर सांस पकड़ के साथ जुड़े कोई सॉफ्टवेयर त्रुटियों cannula के उचित प्लेसमेंट के लिए अतिरिक्त सहायता प्रदान करते हैं । डेटा प्रत्येक तनाव के भीतर समय अंक के बीच मनाया मापा आरआरएस के कोई महत्वपूर्ण अंतर से पता चला(चित्रा 5)। यह माना जाता है कि समय के साथ आरआरएस में वृद्धि की अनुपस्थिति लगातार चार समय बिंदुओं पर श्वसन प्रणाली में आघात से जुड़ी सूजन की कमी को इंगित करती है।
सांख्यिकीय विश्लेषण
सांख्यिकीय विश्लेषण सॉफ्टवेयर(सामग्री की तालिका)का उपयोग करके वर्णनात्मक सांख्यिकी (मतलब और मानक त्रुटि) की गणना की गई थी। कोल्मोगोरोव-स्मिरनोव विधि का उपयोग गॉसियन डेटा वितरण को सत्यापित करने के लिए किया गया था। डेटासेट के सांख्यिकीय विश्लेषण अपेयद एनोवा द्वारा किए गए थे, जिसमें पोस्ट हॉक टकी-क्रामर कई तुलना परीक्षण के बाद थे। सभी डेटा को मतलब के रूप में प्रस्तुत किया जाता है ± एसईएम पी एंड एलटी; 0.05 को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना जाता था।
चित्रा 1: इंटुबशन प्लेटफॉर्म। इंटुबशन प्लेटफॉर्म में एक तीन अंगूठी बांधने की मशीन होती है जिसमें रेशम धागे के लूप का पालन किया जाता है जो एक निलंबन लूप बनाने के लिए बांधने की मशीन के शीर्ष का पालन करता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 2: कैनुला तैयारी। (क)तैयार कैनुला का पार्श्व दृश्य। ध्यान दें कोमल कोण कैथेटर के डिस्टल अंत में गोल बेवेल से लगभग 1 सेमी बनाया गया और बेवेल के संबंध में कैनुला कोण का अभिविन्यास। (ख)तैयार कैनुला का डोरसोवेंट्रल व्यू । बेवेल के गोल और चिकनी किनारे पर ध्यान दें। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 3: श्वासविकाविज़ुअलाइजेशन। (ए)संदंश वेंट्रल गर्दन पर रखे जाते हैं और त्वचा को धीरे से लार ग्रंथियों को विस्थापित करने और वेंट्रल मिडलाइन (काले तीर) पर सफेद संरचना के रूप में श्वासनली का दृश्य प्रदान करने के लिए धीरे से वापस आ जाता है। (ख)वेंट्रल गर्दन पर संदंश का क्रैनिडोरसल रोटेशन लार ग्रंथियों (*) का फलाव पैदा करता है। श्वासनलिया लार ग्रंथियों (काले तीर) के बीच वेंट्रल मिडलाइन पर सफेद रैखिक संरचना के रूप में कल्पना की जाती है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 4: उचित कैनुला प्लेसमेंट। (A)C57BL/6 माउस समीपस्थ मौखिक गुहा में पेश किए गए कैनुला के साथ इंटुबशन प्लेटफॉर्म पर तैनात । (ख)C57BL/6 माउस के साथ कैनुला ठीक से श्वासनली में रखा । नोट कैनुला को श्वासनचिया (सफेद तीर) के भीतर सफेद संरचना के रूप में आसानी से कल्पना की जा सकती है। (ग)बालब/सी माउस को निकटस्थ मौखिक गुहा में पेश किए गए कैनुला के साथ इंटुबेशन बोर्ड पर तैनात किया गया । (D)कैनिला के साथ बाल्ब/सी माउस को श्वासनली में ठीक से रखा गया है । सफेद कैनुला को श्वासनलिया (काला तीर) के भीतर आसानी से कल्पना की जा सकती है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 5: प्रतिरोध का धारावाहिक माप। प्रत्येक तनाव के भीतर समय बिंदुओं के बीच मापा आरआरएस का कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं देखा गया। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
ट्रांसक्यूटेनेस श्वास विज़ुअलाइज़ेशन तकनीक का उपयोग करके इंटुबीशन मानक त्वचा चीरा विधि के लिए एक परिष्कृत दृष्टिकोण प्रदान करता है। कई प्रमुख चरणों पर विशेष ध्यान देने के साथ, इंटुबेशन आसानी से और जल्दी से प्राप्त किया जा सकता है। जानवर को कोमल रिऐक्शन में सुरक्षित माउस के साथ इंटुबेशन प्लेटफॉर्म पर पृष्ठीय रिक्यूलबेंसी में रखा जाना चाहिए। यह जानवर को ऊर्ध्वाधर संरेखण और इंटुबशन के लिए उचित स्थिति में विस्तारित करेगा। इसके अलावा, डिपिलेटरी क्रीम को 30−45 से अधिक समय तक जानवर की त्वचा के संपर्क में नहीं रहना चाहिए और सभी अवशेषों को हटाने के लिए अच्छी तरह से धोया जाना चाहिए। डिपिलेटरी क्रीम के साथ त्वचा के संपर्क में विस्तारित होने से पशु के लिए अनावश्यक दर्द होगा और छाले श्वासनली9के दृश्य में बाधा डाल सकते हैं । उचित कलाई गति का उपयोग करना अनिवार्य है क्योंकि प्रमुख हाथ कैथेटर को ग्लोटिस में पेश करता है। प्रमुख कलाई फ्लेक्स चाहिए, जबकि हाथ एक सुपाणि गति में चलता है । इस विषय की बारीकी से निगरानी करना भी महत्वपूर्ण है क्योंकि श्वासनली की कल्पना करने के लिए वेंट्रल गर्दन पर संदंश के सपाट किनारे को दबाया जाता है। संदंश से दबाव श्वासनली को कम करेगा और लंबे समय तक बनाए रखने पर हाइपोक्सिया का कारण बनेगा। यदि रोगी साइनोटिक दिखाई देता है, तो बलगम झिल्ली को गुलाबी रंग में लौटने और प्रयास दोहराने से पहले स्थिर होने के लिए श्वसन के लिए एक संक्षिप्त ठहराव की अनुमति दें।
इस तकनीक को करने के लिए व्यापक माउस इंटुबशन अनुभव आवश्यक नहीं था। अनुभवहीन व्यक्तियों में सबसे आम जटिलताओं में कई इंट्यूबेशन प्रयासों के कारण लैरिंजियल ट्रामा और ऊपरी वायुमार्ग सूजन शामिल है। इन रोगियों की वसूली के दौरान बारीकी से निगरानी आवश्यक है क्योंकि नॉनस्टेरॉयड विरोधी भड़काऊ के साथ चिकित्सा हस्तक्षेप का संकेत दिया जा सकता है। बार-बार असफल इंटुबेशन के प्रयासों के परिणामस्वरूप ऊतक आघात और डिस्टल ओरल गुहा की सूजन हो सकती है, जिसके परिणामस्वरूप ऊपरी श्वसन शोर, डिस्प्निया, हाइपोक्सीमिया, लंबे समय तक वसूली, बार-बार इंटुबेशन या मृत्यु करने में असमर्थता हो सकती है।
इस घटना में कई संशोधनों की सिफारिश की जाती है कि इंटुबशन सफल नहीं होता है। सबसे पहले, सुनिश्चित करें कि कैनुला का बेवेल चिकनी, गोल और जानवर के आकार के लिए उचित लंबाई में कटौती की है। बेवेल किनारे को ऊतक आघात को कम करने और इंटुबेशन7की सुविधा प्रदान करने के लिए घर्षण कागज का उपयोग करके चिकना किया जा सकता है। इसके अलावा, चेक करें कि कैनुला बेवेल से एक-तीसरी दूरी पर लगभग 15 डिग्री का मामूली वक्र प्रदर्शित करता है और कैनुला की नोक को ब्राउन एट अल6में वर्णित 45 डिग्री कोण पर किया जाता है। हमेशा जांच करें कि कैथेटर इस प्रक्रिया को करने से पहले और दौरान उचित अभिविन्यास में है।
इस अध्ययन के लिए, चूहों को फेफड़ों के कार्य माप को रिकॉर्ड करने के लिए यांत्रिक वेंटिलेशन सिस्टम का उपयोग करके बार-बार फेफड़ों के कार्य परीक्षणों के लिए इंटुबट किया गया था। एक बड़ी, 18 जी कैनुला का उपयोग एक तंग सील बनाने के लिए किया गया था। उम्र या तनाव के कारण एक छोटे श्वासव्यास के साथ चूहों पर दोहराने वाले फेफड़ों के कार्य अध्ययन करने के लिए, एक बड़ा कैनुला रखना चुनौतीपूर्ण हो सकता है। यदि एक छोटे कैनुला उपयोग के लिए चुना जाता है, तो सुनिश्चित करें कि एक उचित मुहर अभी भी प्राप्त की जा सकती है, और यह कि कैनुला का प्रतिरोध परीक्षण विषय के वायुमार्ग10के प्रतिरोध से अधिक नहीं है। एक सफल गहरी मुद्रास्फीति क्षोभ एक उचित मुहर की पर्याप्त पुष्टि है । ध्यान दें कि इस तरह की मुहर अनावश्यक है यदि केवल फेफड़ों में उपचार की स्थापना वांछित है।
यद्यपि वर्णित विधि ने बाहरी ऊतक क्षति को रोकने वाले संशोधन किए हैं, लेकिन कैनुला की अत्यधिक शुरुआत के कारण ग्लोटिस और ट्रेलिया के लिए संचयी आघात का कार्य अभी भी इंटुबेशन की ऊपरी सीमा है। एक अध्ययन के दौरान वायुमार्ग प्रतिरोध में महत्वपूर्ण वृद्धि के लिए एक नियंत्रण समूह की समवर्ती निगरानी की सिफारिश की जाती है क्योंकि ऊतक आघात सूजन के साथ होता है जिसके परिणामस्वरूप श्वासनली के चमकदार व्यास में कमी आएगी। बार-बार इंटुबेशन प्रक्रियाओं के दौरान वायुमार्ग प्रतिरोध में महत्वपूर्ण वृद्धि वर्तमान अध्ययन में नहीं देखी गई। चूहे अध्ययन अवधि के लिए चिकित्सकीय रूप से सामान्य रहे और सभी जानवरों में अध्ययन निष्कर्ष पर ऊपरी वायुमार्ग संरचनाओं की सकल नेफसली अपूर्व थी।
संक्षेप में, वर्णित इंटुबशन तकनीक एंडोट्रेहील कैनुला को एक झुका हुआ सतह, संदंश, पॉलीप्रोपाइलीन कैनुला और डिपिलेटरी आपूर्ति सहित न्यूनतम उपकरणों के साथ रखने के लिए एक नॉनइनवेसिव विधि प्रदान करती है। यह परिष्कृत विधि आवर्ती ऊतक आघात और वेंट्रल गर्दन या एक श्वासनली प्रक्रिया पर एक कटनेस चीरा साइट से जुड़े दर्द के बिना दोहराया intubation घटनाओं को सक्षम बनाता है। इसके अलावा, यह विधि आवश्यक चूहों की संख्या को कम कर देता है क्योंकि व्यक्तिगत चूहों को अध्ययन के दौरान बार-बार इंटुट्यूट किया जा सकता है। यह वायुमार्ग दृश्यके लिए विशेष रूप से डिजाइन किए गए इंटुबेशन संयम उपकरणों, स्कोप या ट्रांसलाइटिंग उपकरणों की आवश्यकता को भी समाप्त करता है। इस अध्ययन में बाल्ब/सी और C57BL/6 उपभेदों का उपयोग अपेक्षाकृत कम उम्र और छोटे आकार (10−20 सप्ताह पुराने चूहों) के प्रकाश और गहरे वर्णक उपभेदों और जानवरों दोनों में तकनीक की सफलता को प्रदर्शित करने के लिए किया गया था । यह परिष्कृत तकनीक यौगिकों, ब्रोंकोएल्वेलर लावेज, इमेजिंग या फेफड़ों के कार्य परीक्षण के एकल या दोहराए गए इंट्राट्रेचेल इंस्टिलेशन के लिए उपयुक्त है। इस न्यूनतम आक्रामक, बहुमुखी विधि को लगभग किसी भी प्रक्रिया के लिए लागू किया जा सकता है जिसके लिए निचले श्वसन तंत्र तक पहुंच की आवश्यकता होती है।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
लेखक लूसिया रोसास, लॉरेन डूलिटिल, लिसा जोसेफ और लिंडसे फर्गगुसन को उनकी तकनीकी सहायता और विश्वविद्यालय प्रयोगशाला पशु संसाधनों को उनके पशु देखभाल समर्थन के लिए धन्यवाद देते हैं । यह काम एनआईएच T35OD010977 और R01-HL102469 द्वारा वित्त पोषित है।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 18 G x 1 1/4" intravenous catheter, Safelet | Fisher Scientific | #14-841-14 | Cannula for intubation |
| 70% ethanol, 10 L | Fisher Scientific | 25467025 | Cleaning cannula |
| Abrasive paper (sandpaper) | Porter-Cable | 74001201 | Cannula preparation |
| AnaSed (xylazine sterile solution) injection (100 mg/mL) | Akorn Animal Health | NDC# 59399-111-50 | Anesthesia |
| Blue labeling tape (0.5 in x 14 yds) | Fisher Scientific | 15966 | Restraint on intubation platform |
| Braided silk suture without needle, nonsterile, (3-0) | Henry Schein | Item #1007842 | Intubation platform |
| Deltaphase Isothermal Pad | Braintree Scientific | 39DP | Mouse thermoregulation and recovery |
| Deltaphase Operating Board | Braintree Scientific | 39OP | Mouse recovery (prior to extubation) |
| Distilled water | ThermoFisher | 15230253 | Cleaning mouse following depilation |
| Eye Scissors, angled, sharp/sharp | Harvard Apparatus | 72-8437 | Cannula preparation |
| FlexiVent (FX Module 2) | Scireq | N/A | Record lung function data (not required to perform procedure, used in this study to validate procedure) |
| Gauze sponges | Fisher scientific | 13-761-52 | Hair removal |
| Heavy-Duty 3" 3-Ring View Binders | Staples | 24690CT | Intubation platform |
| Instat Software | Graphpad | N/A | Statistical analysis software |
| Insulin syringe (0.5 cc, U100) | Fisher Scientific | 329461 | Anesthesia administration |
| Ketamine HCl Injection, USP (100 mg/mL) | Llyod Laoratories | List No. 4871 | Anesthesia |
| Lung inflation bulb | Harvard Apparatus | 72-9083 | Confirm cannula placement |
| Micro Forceps, Curved, Smooth | Harvard Apparatus | 72-0445 | Retract tongue and create tension on neck for cannula visualization |
| Nair (hair removal lotion), 9 oz bottle | Church & Dwight | 42010440 | Hair removal |
| Sterile saline (0.9%), 10 mL | Fisher Scientific | NC9054335 | Anesthesia, cleaning skin following hair removal |
References
- Spoelstra, E. N., et al. A novel and simple method for endotracheal intubation of mice. Laboratory Animals. 41 (1), 128-135 (2007).
- Rivera, B., Miller, S. R., Brown, E. M., Price, R. E. A Novel Method for Endotracheal Intubation of Mice and Rats Used in Imaging Studies. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 44 (2), 52-55 (2005).
- Sparrowe, J., Jimenez, M., Rullas, J., Martinez, A. E., Ferrer, S. Refined Intratracheal Intubation Technique in the Mouse, Complete Protocol Description for Lower Airway Models. Global Journal of Animal Scientific Research. 3 (2), 363-369 (2015).
- Deyo, D. J., Wei, J. A Novel Method of Intubation and Ventilation in Mice. Anesthesia & Analgesia. 88 (2), 179 (1999).
- Vergari, A., et al. A new method of orotracheal intubation in mice. European Review for Medical and Pharmacological Sciences. 8 (3), 103-106 (2004).
- Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice. Journal of Applied Physiology. 87 (6), 2362-2365 (1999).
- Das, S., MacDonald, K., Chang, H. S., Mitzner, W. A Simple Method of Mouse Lung Intubation. Journal of Visualized Experiments. (73), e50318 (2013).
- Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research. Journal of Visualized Experiments. (102), e52964 (2015).
- Qin, W., Baran, U., Wang, W. Lymphatic response to depilation-induced inflammation assessed with label-free optical lymphangiography. Lasers in Surgery and Medicine. 47 (8), 669-676 (2015).
- McGovern, T. K., Robichaud, A., Fereydoonzad, L., Schuessler, T. F., Martin, J. G. Evaluation of Respiratory System Mechanics in Mice using the Forced Oscillation Technique. Journal of Visualized Experiments. (75), e50107 (2013).
