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Neuroscience

Lesão cerebral induzida por laser no córtex motor de ratos

doi: 10.3791/60928 Published: September 26, 2020
* These authors contributed equally

Summary

O protocolo aqui apresentado mostra uma técnica para criar um modelo de roedor de lesão cerebral. O método descrito aqui usa irradiação a laser e tem como alvo o córtex motor.

Abstract

Uma técnica comum para induzir derrame em modelos experimentais de roedores envolve o transitório (muitas vezes denotado como MCAO-t) ou permanente (designado como MCAO-p) oclusão da artéria cerebral média (MCA) usando um cateter. Essa técnica geralmente aceita, no entanto, tem algumas limitações, limitando assim seu uso extensivo. A indução de AVC por este método é frequentemente caracterizada por alta variabilidade na localização e tamanho da área isquêmica, ocorrências periódicas de hemorragia e altas taxas de mortalidade. Além disso, a conclusão bem sucedida de qualquer um dos procedimentos transitórios ou permanentes requer perícia e muitas vezes dura cerca de 30 minutos. Neste protocolo, é apresentada uma técnica de irradiação a laser que pode servir como um método alternativo para induzir e estudar lesões cerebrais em modelos de roedores.

Quando comparada com ratos nos grupos de controle e MCAO, a lesão cerebral por indução a laser mostrou variabilidade reduzida na temperatura corporal, volume infarto, edema cerebral, hemorragia intracraniana e mortalidade. Além disso, o uso de uma lesão induzida pelo laser causou danos aos tecidos cerebrais apenas no córtex motor, ao contrário dos experimentos de MCAO, onde a destruição do córtex motor e dos tecidos estriais é observada.

Os achados desta investigação sugerem que a irradiação a laser pode servir como uma técnica alternativa e eficaz para induzir lesões cerebrais no córtex motor. O método também reduz o tempo para concluir o procedimento e não requer manipuladores especializados.

Introduction

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Globalmente, o AVC é a segunda principal causa de morte e a terceira principal causa de incapacidade1. O AVC também leva a uma incapacidade grave, muitas vezes exigindo cuidados extras da equipe médica e dos parentes. Há, portanto, a necessidade de compreender as complicações associadas ao transtorno e melhorar o potencial de desfechos mais positivos.

O uso de modelos animais é o passo inicial para a compreensão das doenças. Para garantir os melhores resultados da pesquisa, um modelo típico incluiria uma técnica simples, acessibilidade, alta reprodutibilidade e variabilidade mínima. Os determinantes nos modelos de derrame isquêmico incluem volume de edema cerebral, tamanho do infarto, a extensão da quebra da barreira hematoencefálica (BBB) e comprometimento funcional geralmente avaliado via escore de gravidade neurológica2.

A técnica de indução de derrame mais utilizada em modelos roedores oclui a artéria cerebral média (MCA) transitoriamente oupermanentemente 3. Esta técnica produz um modelo de avc semelhante ao dos humanos: tem uma penumbra em torno da área acariciada, é altamente reprodutível, e regula a duração da isquemia e a reperfusão4. No entanto, o método MCAO tem algumas complicações. A técnica é propensa a hemorragia intracraniana e lesão na retina ipsilateral com disfunção do córtex visual e hipertermia comum que muitas vezes levam a resultados adicionais5,,6,7. Outras limitações incluem altas variações no AVC induzido (decorrentes da provável extensão da isquemia para regiões não intencionais, como a região da artéria carótida externa), oclusão insuficiente do MCA e reperfusão prematura. Além disso, ratos de diferentes cepas e tamanhos exibem vários volumes de infarto8. Além de todas as desvantagens mencionadas, o modelo MCAO não pode induzir pequenos derrames isolados em áreas cerebrais profundas, pois é limitado tecnicamente em termos de sua exigência de tamanho mínimo do vaso para cateterismo. Isso torna a necessidade de um modelo alternativo ainda mais crítica. Outro método, fototrombose, fornece uma possível alternativa aos procedimentos de MCAO, mas não melhora a eficiência9. Esta técnica visa o traçado com luz e oferece algumas melhorias nos modelos anteriores. No entanto, a fototrombose requer uma craniotomia invasiva que esteja associada a compicações secundárias9.

À luz das deficiências descritas, o protocolo aqui apresentado fornece uma técnica de laser alternativa capaz para induzir lesões cerebrais em roedores. O mecanismo de ação da técnica laser é baseado nos efeitos fototérmicos do laser transmitidos em tecidos vivos, o que leva à absorção de feixes de luz por tecidos corporais e sua conversão em calor. As vantagens de usar uma técnica a laser são sua segurança e facilidade de manipulação. A capacidade de um laser de produzir calor para parar o sangramento torna-o muito importante na medicina, enquanto sua capacidade de amplificar diferentes feixes em um determinado ponto de encontro garante que os lasers evitem destruir tecidos saudáveis que estão no caminho do pontoalvo 10. O raio laser usado neste protocolo pode passar por um meio líquido baixo, como o osso, sem emitir sua energia e/ou causar qualquer destruição. Uma vez que atinge um meio líquido elevado, como tecidos cerebrais, ele usa sua energia para destruir os tecidos alvo. A técnica, portanto, pode induzir lesões cerebrais apenas na área apropriada do cérebro.

A técnica aqui apresentada mostrou uma enorme quantidade de capacidade de regular seus níveis de irradiação, produzindo as variações escolhidas de lesão cerebral pretendida desde o início. Ao contrário do MCAO original que impacta tanto o córtex quanto o estriato, a técnica de laser foi capaz de regular o impacto da lesão cerebral, induzindo lesões apenas no córtex motor pretendido. Aqui, o protocolo de lesão cerebral induzido pelo laser e um resumo dos resultados representativos para o procedimento realizado no córtex cerebral dos ratos são fornecidos.

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Protocol

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O procedimento a seguir foi realizado de acordo com as Diretrizes do Uso de Animais Experimentais da Comunidade Europeia. Os experimentos também foram aprovados pelo Comitê de Cuidados Com Animais da Universidade Ben-Gurion do Negev.

1. Seleção e preparação animal

  1. Selecione 65 ratos sprague-dawley machos pesando 300 a 350 g sem patologia arrota para este procedimento. O tamanho menor apresenta dificuldades técnicas para o procedimento de MCAO.
  2. Atribua 3 ratos por gaiola e deixe-os se adaptar por pelo menos 3 dias.

2. Procedimento de MCAO

  1. Selecione 25 ratos para MCAO permitindo 10— 20% de mortalidade associada ao procedimento11.
  2. Realize o MCAO utilizando uma técnica padrão, como descrito anteriormente no detalhe12.

3. Procedimento experimental de lesão cerebral induzida por laser

  1. Atribua 20 ratos a um grupo marcado como grupo laser e 20 ratos para outro grupo de controle (operado por farsas).
  2. Submeter os ratos do grupo laser à irradiação a laser a 50J X 10 pontos da seguinte maneira:
    1. Anesthetize rato com uma mistura de 2% de isoflurane em oxigênio permitindo a ventilação espontânea. Verifique se há profundidade anestésico suficiente beliscando a cauda com fórceps para ver a ausência do reflexo de retirada.
    2. Mantenha a temperatura corporal do núcleo do rato a 37 °C durante todo o procedimento experimental usando uma almofada de aquecimento regulada pela temperatura retal.
    3. Remova o cabelo local com uma máquina de barbear e desinfete com 70% de álcool e 0,5% de cloroexidina gluconato. Repita o passo de desinfecção mais duas vezes.
      NOTA: O tamanho da incisão cirúrgica deve ser de aproximadamente 3 cm. Remova o cabelo pelo menos 2 cm ao redor da área de incisão.
    4. Coloque o rato sobre um suporte de cabeça estereotaxic em uma posição propensa e faça uma incisão de 3 cm para refletir o couro cabeludo lateralmente e expor a área entre Bregma e Lambda.
    5. Mantenha a anestesia através do cone do nariz.
    6. Use laser Neodímio-YAG (Nd-YAG) (comprimento de onda de pico 1064 nm) para administrar 50J X 10 pontos,com 1 s de duração de pulso, à área exposta do crânio acima do hemisfério direito.
    7. Certifique-se de que a parte geradora de laser do aparelho esteja a uma distância de 2 mm da área exposta para produzir um raio laser. 50pontos J X 10 foram selecionados após avaliação cuidadosa de diferentes combinações de energia/superfície. Esta combinação é eficiente e não causa destruição óssea do crânio após a administração por menos de um segundo10.
      NOTA: 2 mm é a distância entre o terminal do raio laser (a partir do cabo óptico pelo seu passar) e o osso do crânio. Caso seja usada uma lente focalizada, a distância deve ser calculada levando-se em conta o ângulo de inclinação da lente para focar o feixe na área desejada de dano. Certifique-se de segurança adequada ao usar um dispositivo laser, incluindo treinamento adequado e proteção ocular.
    8. Retire o rato do dispositivo e feche o couro cabeludo com suturas cirúrgicas de seda 3-0.
    9. Descontinuar a anestesia e devolver o rato à sua gaiola para recuperação. Administre 0,1 mL de bupivacaína localmente para reduzir a dor pós-operatória imediatamente após a cirurgia.
      NOTA: Todo o procedimento deve durar menos de 5 min se realizado corretamente.
  3. Observe o rato para qualquer sinal de aflição durante a recuperação pós-anestesia. Antes do surgimento da anestesia, dê buprenorfina intramuscular de 0,01mg/kg para analgesia pós-operatória e continue com doses repetidas a cada 12 h por pelo menos 48 h.
  4. Subsuem os ratos às mesmas condições sem subesá-los ao laser.

4. Escore de gravidade neurológica (NSS)

  1. Avalie o escore de gravidade neurológica 24 h após a lesão cerebral induzida pelo laser usando uma pontuação de 43 pontos13. Teste os animais para déficits neurológicos, distúrbios de comportamento, tarefa de balanceamento de feixes e reflexos, atribuindo pontuações mais altas para deficiências mais graves, conforme detalhado anteriormente13.

5. Manipulações pós-lesões

  1. Após a avaliação do NSS, eutanize os ratos expondo-os a 20% de oxigênio e 80% de CO2 (via inspiração) e transcardialmente perfundear o rato com soro fisco tamponado heparinizado (PBS, 0,9% NaCl).
    NOTA: Certifique-se de que o CO2 seja entregue a uma taxa predeterminada de acordo com as diretrizes do Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais. Esta etapa também pode ser realizada abaixo de 5% de anestesia isoflurane.
  2. Colher cérebros e preparar-se para um exame mais aprofundado, conforme descrito em um protocolo anterior11.
  3. Avalie a hemorragia subaracnóide (SAH) através de exame visual de todo o cérebro após seu isolamento do crânio. Se necessário, um microscópio ou óculos de ampliação podem ser usados para este fim.

6. Avaliação da lesão cerebral

  1. Determinando o volume de infarto cerebral e edema cerebral por manchas de TTC
    NOTA: 2,3,5-Trihenyltetrazolium cloreto (TTC) é um procedimento conveniente para detecção de infarto cerebral11.
    1. Selado os cérebros colhidos em 6 fatias coronais, cada uma com 2 mm de espessura.
    2. Incubar o conjunto de fatias de cada cérebro por 30 min a 37 °C em 0,05% TTC.
    3. Após a coloração, escaneie as fatias com um scanner óptico com uma resolução de 1600 X 1600 dpi.
    4. As áreas não manchadas das fatias cerebrais fixas são definidas como infartas12.
    5. Usando um software de processamento de imagem (por exemplo, freeware Image J) mede a área infarto não localizada, os hemisférios ipsi e contralateral para cada uma das 6 fatias coronais.
    6. Calcule o volume infartado como uma porcentagem do cérebro total:
      Equation 1
    7. Calcule o edema cerebral usando o método Kaplan:
      Equation 2
  2. Determinando a extensão da quebra da barreira cerebral sanguínea (BBB)
    NOTA: Avalie a quebra do BBB 24 h após a lesão cerebral induzida pelo laser da seguinte forma:
    1. Administre 2% de Evans Blue misturado com solução salina de 4 mL/kg por via intravenosa aos ratos através da veia da cauda cristalina e permita que a solução circule por 1h.
    2. Eutanize os ratos expondo-os a 20% de oxigênio e 80% de CO2 (via inspiração) 24 h após o último NSS, como descrito anteriormente13.
    3. Colher o corante localizado intravascularmente da seguinte forma:
      1. Abra os peitos dos ratos com pincettes cirúrgicas e tesouras cirúrgicas.
      2. Perfuuse os animais com soro fisiológico de 0,9% refrigerado através do ventrículo esquerdo usando 110 mmHg até obter um líquido de perfusão incolor do átrio direito.
    4. Colhe os cérebros e corte-os rostrocaudally em fatias de 2 mm.
    5. Separe as fatias cerebrais esquerdas das porções direitas para avaliar os hemisférios feridos e não feridos separadamente.
    6. Pesar, homogeneizar usando argamassa e pilão, e depois incubar os tecidos cerebrais em ácido tricloroacético de 50% por 24 h.
    7. Centrifugar as fatias cerebrais homogeneizadas a 10.000 × g por 20 min.
    8. Misture 1 mL do supernacido do cérebro centrifugado com 1,5 mL de 96% de etanol em 1:3 e avalie a quebra da barreira hematoencefálica usando um detector de fluorescência a 620 nm comprimento de onda de excitação (largura de banda de 10 nm) e 680 nm de comprimento de onda de emissão (largura de banda de 10 nm).
      NOTA: Ambos os grupos de ratos passam pelo mesmo protocolo para determinar o colapso do BBB.

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Representative Results

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Não foram registradas mortes ou HAS nos grupos de controle ou experimental(Tabela 1). O grupo MCAO apresentou uma taxa de 20% de mortalidade e HAS.

As variações relativas da temperatura corporal nos ratos de ambos os grupos também foram semelhantes, apesar da diferença na variabilidade de ambos os grupos(Tabela 1).

Houve um NSS significativamente pior nos modelos laser (16 ± 1,1) e MCAO (20 ± 1,5), em comparação com o grupo de controle operado por farsa (1 ± 0,3; Tabela 1; p<0,01).

A lesão cerebral induzida pelo laser também causou um aumento significativo no volume de infarto no hemisfério alvo, em comparação com o grupo de controle operado por farsa (2,4% ± 0,3 vs 0,5% ± 0,1; Tabela 2 e Figura 1A; p<0,01), de acordo com o teste de Mann-Whitney U. Entretanto, o volume de infarto do modelo laser foi menor em comparação com a técnica MCAO (2,4% ± 0,3 vs 9,9% ± 2,9).

Edema cerebral determinado 24 h após lesão cerebral são mostrados na Figura 1B e Tabela 2. Não houve diferença no edema cerebral entre o modelo de lesão cerebral induzida pelo laser e o grupo de controle operado por farsa (3,4% ± 0,6 vs 0,7% ± 1,2). Houve diferença significativa no edema cerebral entre o modelo laser e a técnica MCAO (3,4 ± 0,6 vs 7 ± 2,6†). Os dados são apresentados como média ± SEM.

Em comparação com o grupo de controle operado por farsa, a lesão cerebral induzida pelo laser e a técnica de MCAO causaram um aumento significativo na quebra do BBB no hemisfério não ferido (563 ng/g ± 66 e 1176 ng/g ± 168, respectivamente, vs 141 ng/g ± 14; Figura 2A e Tabela 2; p<0,01) e hemisfério-alvo (2204 ng/g ± 280 e 2764 ng/g ± 256, respectivamente, vs 134 ng/g ± 11; Figura 2B e Tabela 2; p<0,01).

O exame histológico dos cérebros dos ratos é mostrado na Figura 3.

Nss Temperatura, °C SAH, % Mortalidade, %
Grupos média ± SEM variabilidade, % média ± SEM variabilidade, %
Controle operado por sham 1 ± 0,3 97 37,2 ± 0,1 59 0 0
Laser 50J x10 16 ± 1,1* 30 37,4 ± 0,1 84 0 0
p-MCAO 20 ± 1,5* 37 38,3 ± 0,1* 129 20* 20*

Tabela 1: Avaliação de NSS, temperatura corporal, hemorragia subaracnóide e mortalidade. * = p < 0,01

Bbb Volume infartado Edema cerebral
Grupos média ± SEM variabilidade, % média ± SEM variabilidade, % média ± SEM variabilidade, %
Controle operado por sham 134 ± 11 25 0,5 ± 0,1 77 0,7 ± 1,2 573
Laser 50J x10 2204 ± 280* 40 2,4 ± 0,3* 34 3,4 ± 0,6 58
p-MCAO 2764 ± 256* 29 9,9 ± 2,9* 92 7 ± 2,6* 115

Tabela 2: Avaliação da quebra do BBB, zona infarto e edema cerebral. * = p < 0,01

Figure 1
Figura 1: Avaliação da lesão cerebral no modelo laser 24 h após a lesão em comparação com o modelo MCAO e controle operado por farsa. (A) Avaliação do volume de infarto. Houve aumento no volume de infarto no modelo laser em comparação com o controle operado por farsa (*p<0,01). No entanto, o volume de infarto no modelo laser foi menor em relação ao modelo MCAO (*p<0,01). (B) Avaliação do edema cerebral total. Houve um aumento no edema cerebral no modelo MCAO em comparação com o modelo laser ou o controle operado por farsa. Não houve diferença no edema cerebral entre o modelo laser e o controle operado por farsas. Os dados são medidos como % para o hemisfério contralateral e expressos como média ± SEM. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 2
Figura 2: A extensão da quebra do BBB em comparação com os controles falsos. (A) Hemisfério contralateral (não ferido). Tanto os modelos laser quanto o MCAO, levaram a um aumento significativo da quebra do BBB no hemisfério não ferido em comparação com o grupo de controle operado por farsa (*p<0,01). (B) Hemisfério ipsilateral (ferido). Houve diferença na quebra do BBB ipsilateral nos modelos laser e MCAO em comparação com o controle operado por sham (*p<0,01). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 3
Figura 3: Exame histológico dos cérebros dos ratos de grupos falsos, laser e MCAO. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Discussion

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É justo supor que a técnica de laser é minimamente invasiva, dado que não ocorreu mortes ou HAS no grupo laser. A causa primária da morte e a HAS é o dano aos vasos sanguíneos que leva a uma elevação da pressão intracraniana (ICP), como mostrado nas técnicas originais de MCAO10. A ausência de morte e HAS no grupo laser é provavelmente devido aos efeitos específicos dos lasers: eles não têm impacto direto nos vasos sanguíneos e podem induzir coagulação em caso de vazamento. O baixo volume de infarto e o edema cerebral também ajudam a minimizar o risco de morte. O uso de lasers deve ser considerado como uma técnica adequada para induzir lesões cerebrais com desfechos adversos mínimos, uma vez que as técnicas originais de MCAO para desencadear o AVC (transitório e permanente) têm sido demonstradas para produzir mortes e SAH6.

Achados de baixa temperatura corporal no grupo laser mostram que a técnica de laser não oclui a artéria hipotalâmica que regula a temperatura corporal, como o MCAO original faz tipicamente7, apoiando a teoria de que a técnica de laser é mais direcionada. A baixa variabilidade em toda a placa de parâmetros investigados indicou consistência no uso de lasers para induzir lesões cerebrais, mas tais resultados finos dependem muito da escolha do poder. A potência suficiente fornece resultados desejados, enquanto calibrações pouco ou excedentes podem causar baixo ou excesso de desempenho, o que em ambos os casos é prejudicial. No entanto, a capacidade de mirar o alvo ainda torna a técnica menos arriscada. Assim, o manuseio correto facilita a obtenção de resultados com precisão utilizando a técnica de laser, bem como a regulação do método para efeitos desejáveis.

A precisão e a eficácia da técnica laser ficaram evidentes em sua capacidade de golpear apenas o córtex motor sem causar danos ao estriado, sugerindo que a técnica de laser pode produzir lesões localizadas que é quase impossível de alcançar com MCAO10. Este resultado alcançável com a técnica de laser deve-se à capacidade de regular o raio laser e sua potência e faz do método laser uma técnica modelo para induzir lesões cerebrais menores, periféricas e profundas e definidas que não podem ser obtidas com MCAO. A simplicidade de manipular uma máquina laser torna-a muito desejável. Ao contrário das técnicas de MCAO que exigem treinamento árduo e especialistas, o uso de lasers é mais simples, não exigindo especialistas ou treinamento caro. O uso da técnica de laser poderia impulsionar a pesquisa e ajudar a descobrir melhores resultados mais rapidamente do que o método MCAO sozinho.

Em termos de limitações da técnica de laser, o uso de raios laser não produz lesões cerebrais perfeitamente semelhantes a derrames vasculares oclusivos agudos. Especificamente, os lasers produzem cicatrizes imediatas de tecido no local alvo que são comparáveis a um derrame vascular oclusivo que tem vários dias de idade. A técnica pode, portanto, não ser adequada para avaliar medicamentos que visam prevenir a propagação do AVC, mas deve ser ideal na avaliação de um avc isolado do córtex motor em prejuízos motores, cognitivos e comportamentais prolongados. O uso de um pequeno número de ratos para esta pesquisa também foi uma limitação, com apenas metade do número de ratos (n = 10) em cada grupo utilizado para colheita cerebral e exame do tamanho do derrame, a extensão do edema cerebral, quebra do BBB e presença de HAS.

A falta de comparações entre nossa técnica e outros métodos a laser também pode ser considerada uma limitação. Deliberamos sobre a realização de métodos comparativos, mas decidimos não fazê-lo porque avaliar os danos causados por esses outros métodos laser é difícil. Por exemplo, a técnica de fototrombose6 causa danos fracos que o tornam desafiador avaliar o inchaço cerebral e outras condições que podem ocorrer. Além disso, o uso de craniotomia na técnica de laser para isquemia é problemático porque a craniotomia é muito invasiva e pode aumentar a permeabilidade do BBB, causando lesões cerebrais adicionais que não estão associadas ao derrame. Avaliar tais danos para comparação com nosso método é quase impossível. O modelo laser induz derrame com radiação através do crânio sem craniotomia.

Como muitos modelos, o modelo a laser tem seus benefícios e limitações, com a desvantagem mais gritante é sua incapacidade de imitar golpes perfeitamente humanos tão precisamente quanto outros modelos. No entanto, a baixa variabilidade nos resultados primários da maioria dos parâmetros, sua precisão, acessibilidade, capacidade de induzir lesões cerebrais menores, e sua aplicação direta torna-se uma técnica alternativa adequada para lesão cerebral em roedores.

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Disclosures

Os autores não têm nada a revelar.

Acknowledgments

Gostaríamos de agradecer ao Departamento de Anestesiologia do Centro Médico da Universidade de Soroka e à equipe de laboratório da Universidade Ben-Gurion do Negev por sua ajuda no desempenho deste experimento.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride SIGMA - ALDRICH 298-96-4
50% trichloroacetic acid SIGMA - ALDRICH 76-03-9
Brain & Tissue Matrices SIGMA - ALDRICH 15013
Cannula Venflon 22 G KD-FIX 1.83604E+11
Centrifuge Sigma 2-16P SIGMA - ALDRICH Sigma 2-16P
Compact Analytical Balances SIGMA - ALDRICH HR-AZ/HR-A
Digital Weighing Scale SIGMA - ALDRICH Rs 4,000
Dissecting scissors SIGMA - ALDRICH Z265969
Eppendorf pipette SIGMA - ALDRICH Z683884
Eppendorf Tube SIGMA - ALDRICH EP0030119460
Ethanol 96 % ROMICAL Flammable Liquid
Evans Blue 2% SIGMA - ALDRICH 314-13-6
Fluorescence detector Tecan, Männedorf Switzerland model Infinite 200 PRO multimode reader
Heater with thermometer Heatingpad-1 Model: HEATINGPAD-1/2
Infusion Cuff ABN IC-500
Isofluran, USP 100% Piramamal Critical Care, Inc NDC 66794-017
Multiset TEVA MEDICAL 998702
Olympus BX 40 microscope Olympus
Optical scanner Canon Cano Scan 4200F
Petri dishes SIGMA - ALDRICH P5606
Scalpel blades 11 SIGMA - ALDRICH S2771
Sharplan 3000 Nd:YAG (neodymium-doped yttrium aluminum garnet) laser machine Laser Industries Ltd
Stereotaxic head holder KOPF 900LS
Sterile Syringe 2 ml Braun 4606027V
Syringe-needle 27 G Braun 305620

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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Lesão cerebral induzida por laser no córtex motor de ratos
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Cite this Article

Kuts, R., Melamed, I., Shiyntum, H. N., Gruenbaum, B. F., Frank, D., Knyazer, B., Natanel, D., Severynovska, O., Vinokur, M., Boyko, M. Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats. J. Vis. Exp. (163), e60928, doi:10.3791/60928 (2020).More

Kuts, R., Melamed, I., Shiyntum, H. N., Gruenbaum, B. F., Frank, D., Knyazer, B., Natanel, D., Severynovska, O., Vinokur, M., Boyko, M. Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats. J. Vis. Exp. (163), e60928, doi:10.3791/60928 (2020).

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