Summary
इस प्रयोग में, एक माउस को रोडामाइन बी आइसोथियोसाइनेट-डेक्सट्रान के साथ अपनी पूंछ की नस में इंजेक्ट किया जाता है जो रक्त वाहिकाओं को दाग सकता है। जिगर के उजागर होने और तय होने के बाद, लिवर के एक विशिष्ट हिस्से को मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके जीवित शरीर में गहरे ऊतक का निरीक्षण करने के लिए चुना जा सकता है।
Abstract
माउस जिगर के ऊतकों की इंट्रावैस्कुलर गतिशीलता को देखना हमें माउस यकृत के ऊतकों से संबंधित रोगों पर आगे गहराई से टिप्पणियों और अध्ययनों का संचालन करने की अनुमति देता है। एक माउस को डाई के साथ इंजेक्ट किया जाता है जो रक्त वाहिकाओं को दाग सकता है। वीवो में माउस लिवर का निरीक्षण करने के लिए, यह एक फ्रेम में उजागर और तय किया जाता है। जिगर के ऊतकों में रक्त वाहिकाओं की दो और त्रि-आयामी छवियों को मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोप का उपयोग करके प्राप्त किया जाता है। चयनित स्थलों पर ऊतकों की छवियां दीर्घकालिक परिवर्तनों का निरीक्षण करने के लिए लगातार प्राप्त की जाती हैं; यकृत ऊतकों में रक्त वाहिकाओं के गतिशील परिवर्तन भी देखे जाते हैं। मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी गहरे ऊतक वर्गों या अंगों में कोशिका और कोशिका कार्य को देखने के लिए एक विधि है। मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी में ऊतक माइक्रोस्ट्रक्चर के प्रति संवेदनशीलता होती है और वीवो में उच्च स्थानिक संकल्प पर जैविक ऊतकों की इमेजिंग को सक्षम बनाता है, जो संगठन की जैव रासायनिक जानकारी को कैप्चर करने की क्षमता प्रदान करता है। मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी का उपयोग यकृत के हिस्से का निरीक्षण करने के लिए किया जाता है लेकिन छवि को अधिक स्थिर बनाने के लिए यकृत को ठीक करना समस्याग्रस्त है। इस प्रयोग में, यकृत को ठीक करने और माइक्रोस्कोप के नीचे जिगर की अधिक स्थिर छवि प्राप्त करने के लिए एक विशेष वैक्यूम सक्शन कप का उपयोग किया जाता है। इसके अलावा, इस विधि का उपयोग रंगों के साथ ऐसे पदार्थों को चिह्नित करके जिगर में विशिष्ट पदार्थों के गतिशील परिवर्तनों का निरीक्षण करने के लिए किया जा सकता है।
Introduction
रक्त वाहिकाएं मानव शरीर के विभिन्न अंग ऊतकों के लिए पोषक तत्व प्रदान कर सकती हैं, और पदार्थों का आदान-प्रदान कर सकती हैं। साथ ही, कई साइटोकिन्स, हार्मोन, दवाएं और कोशिकाएं विशिष्ट स्थानों पर संवहनी परिवहन के माध्यम से भी कार्य करती हैं। यकृत ऊतक में संवहनी परिवर्तन देखने से यकृत ऊतकों में रक्त प्रवाह के वितरण और पदार्थों के परिवहन को समझने में मदद मिल सकती है, और कुछ संवहनी से संबंधित रोगों के विश्लेषण में सहायता1,2।
चूहों में जिगर की रक्त वाहिकाओं का निरीक्षण करने के कई तरीके हैं। उनमें से, ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी अपारदर्शी संवहनी ऊतक3अवलोकन में कई सीमाएं हैं। मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी का उपयोग जीवित यकृत की रक्त वाहिकाओं को गैर - निवास उच्च संकल्प4के साथ छवि बनाने के लिए किया जा सकता है। न केवल रक्त वाहिकाओं की त्रि-आयामी छवियों को प्राप्त किया जा सकता है, बल्कि तकनीक का उपयोग ऊतक को जैविक प्रभावों का निरीक्षण करने के लिए व्यवस्थित करने में मदद करने के लिए भी किया जा सकता है; इसके अलावा, पूरे ऊतक के बजाय केवल माइक्रोवेसेल्स के रूप में गणना टोमोग्राफी और चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग5में इमेज किया जा सकता है ।
मल्टीफोटॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग कम फोटोकॉक्सिसिटी 6 के साथ गहरे जीवित ऊतकों में बिखरे हुए फ्लोरोसेंट संकेतों का प्रभावीढंगसे पता लगाने के लिए किया जा सकता है। इसलिए, जीवित ऊतक की गतिविधि सुनिश्चित की जा सकती है, और नुकसान की मात्रा को कम किया जा सकता है। मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी में कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी की तुलना में बेहतर मर्मज्ञ शक्ति होती है, जिससे गहरी परतों को7देखा जा सकता है, जो अद्वितीय 3 डी इमेजिंग प्रदान करता है। मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी का उपयोग अब अक्सर कपालनसों 8 में किया जाता है और इसे जीवित चूहों 9 , 10,11में न्यूरोनल गतिशीलता के अध्ययन तक बढ़ाया गयाहै।
इस प्रयोग में, माउस रक्त वाहिकाओं के फ्लोरोसेंट लेबलिंग के बाद, यकृत को एक फ्रेम में तय किया जाता है, और जीवित यकृत ऊतक में रक्त वाहिकाओं की गतिशीलता को मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके देखा जा सकता है। यह प्रयोग विशिष्ट पदार्थों को चिह्नित करने के तरीके को दर्शाता है, ऊतक के भीतर किसी स्थान का निरीक्षण करने में मदद करने के लिए मल्टीफोटॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग करें, अंतरकोशिकीय ऊतक में सेलुलर घटनाओं का निरीक्षण करें, फोटोकेमिकल माप12,13,14बनाएं और जीवित ऊतक15के अंदर सामग्री गतिशीलता का निरीक्षण करें। उदाहरण के लिए, ट्यूमर एंडोथेलियल मार्कर 1 (TEM1) को कई ठोस ट्यूमर में रक्त वाहिकाओं और स्ट्रोमा पर एक उपन्यास सतह मार्कर अपविनियमित के रूप में पहचाना गया है, जो टेम1 के खिलाफ एकल-श्रृंखला चर टुकड़ा (एससीएफवी) 78 को चिह्नित करता है, और फिर मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी का उपयोग माउस हेमंगियोमा स्थान और ट्यूमर16के मूल्यांकन के लिए किया जा सकता है।
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Protocol
सभी पशु देखभाल और प्रक्रियाओं हीथ और भलाई के लिए चीन नानफेंग अस्पताल की नीतियों के अनुसार थे (आवेदन नहीं: NFYY-2019-73) ।
1. माउस की तैयारी
- माउस को एनेस्थेटाइज करें।
- एक सिरिंज में सोडियम पेंटोबार्बिटल (50 मिलीग्राम/किलो) तैयार करें।
- माउस (8 सप्ताह पुराने पुरुष C57BL/6) को बाएं हाथ से पकड़ो ताकि उसका पेट ऊपर आ जाए और उसका सिर उसकी पूंछ से कम हो। पेट की त्वचा को 75% अल्कोहल से कीटाणुरहित करें।
- सिरिंज को दाहिने हाथ में पकड़े हुए, सुई के साथ पेट की सफेद रेखा को 3-5 मिमी तक त्वचा के दाईं ओर थोड़ा छेदें। सुनिश्चित करें कि सिरिंज सुई और त्वचा 45 डिग्री कोण पर हैं, पेट की गुहा में धीरे-धीरे पेंटोबार्बिटल इंजेक्ट करें। शेविंग के बाद, माउस की चीरा साइट के चारों ओर 75% अल्कोहल और क्लोरहेक्सिडीन समाधान के साथ 3 बार बारी-बारी से कीटाणुरहित होता है।
- जांच करें कि क्या संज्ञाहरण एक दक्षिणपंथी पलटा की कमी से सफल रहा था ।
- रोडामाइन बी आइसोथिओसाइनेट-डेक्सट्रान को कौडल नस में इंजेक्ट करें।
- एक सिरिंज में 10 मिलीग्राम/एमएल रोडामाइन बी आइसोथिओसाइनेट-डेक्सट्रान के 100 माइक्रोन तैयार करें।
- 75% शराब के साथ माउस की पूंछ को मिटा दें।
- पूंछ को बाएं हाथ से पकड़ें, दाहिने हाथ में सिरिंज को नस के समानांतर सुई से पकड़ें, और 100 माइक्रोन डाई इंजेक्ट करें।
- इंजेक्शन के बाद एक कपास झाड़ू के साथ रक्तस्राव बंद करो।
- माउस के पेट के फर को बाँझ पानी से गीला धुंध के साथ भिगो दें, और फर की दिशा में स्ट्रोक बनाने के लिए एक रेजर का उपयोग करके माउस के पेट को दाढ़ी करें। शेविंग के बाद, माउस की चीरा साइट के चारों ओर 75% अल्कोहल और क्लोरहेक्सिडीन समाधान के साथ 3 बार बारी-बारी से कीटाणुरहित होता है।
- 75% अल्कोहल के साथ एक हीटिंग पैड पोंछने के बाद, हीटिंग पैड खोलें, और माउस को 37 डिग्री सेल्सियस पर अपने शरीर के तापमान को बनाए रखने के लिए हीटिंग पैड में अपनी पीठ पर रखें।
2. शरीर अंग इमेजिंग फ्रेम के साथ माउस जिगर फिक्सिंग
नोट: वाणिज्यिक अंग इमेजिंग फ्रेम अभी तक जारी नहीं किया गया है ।
- एक निश्चित स्थिति में एक साफ सक्शन कप रखें।
- एक अंग इमेजिंगस्थिरता (अनुपूरक चित्रा 1) स्थापितकरें और 75% शराब के साथ हीटिंग पैड और सक्शन कप पोंछें।
- सक्शन कप (5 मिमी व्यास) को वैक्यूम पंप नली से कनेक्ट करें और वैक्यूम पंप चालू करें।
- एक बाँझ मेज पर 75% शराब के साथ निष्फल, माउस के चीरा साइट के चारों ओर कीटाणुशोध 3 बार बारी-बारी से 75% अल्कोहल और क्लोरहेक्सीडीन समाधान के साथ, फिर माउस के चीरा साइट के चारों ओर कीटाणुशोध 3 बार बारी-बारी से 75% अल्कोहल और क्लोरहेक्सीडीन समाधान के साथ, फिर माउस की निचली कड़ी सीमा से 2 सेमी त्वचा को काटने और जिगर का पर्दाफाश करने के लिए सर्जिकल कैंची का उपयोग करें।
- धारक आधार पर हीटिंग पैड के साथ माउस को एक साथ रखें।
- अंग इमेजिंग स्थिरता को समायोजित करें ताकि सक्शन कप जिगर को धारण करे। फिर सक्शन के लिए 30-35 केपीए के नकारात्मक दबाव का उपयोग करें ताकि यकृत सक्शन कप(अनुपूरक चित्रा 2)से जुड़ा हो।
3. मल्टीफोटोन लेजर स्कैनिंग माइक्रोस्कोप का समायोजन
- मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोप चालू करें और 60x/1.00 डब्ल्यू उद्देश्य का चयन करें।
- उद्देश्य लेंस के तहत फ्रेम और माउस को ठीक करें।
- सामान्य नमकीन की एक बूंद जोड़ें जो पूरे लेंस को कवर कर सकती है, जो सक्शन कप का केंद्र है, और सामान्य नमकीन को छूने के लिए ऑब्जेक्टिव लेंस को समायोजित करें।
- लेजर सॉफ्टवेयर को चालू करने और स्विच चालू करने के लिए कंप्यूटर आइकन पर डबल क्लिक करें। फिर 3 एस के लिए पावर बटन और शटर दबाएं और दबाएं।
- तरंगदैर्ध्य को 800 एनएम तक सेट करें।
- कंप्यूटर का उपयोग कर माइक्रोस्कोप ऑपरेटिंग सॉफ्टवेयर शुरू करें।
- अधिग्रहण सेटिंगके लिए , लेजर 800सेट करें।
4. मल्टीफोटोन लेजर स्कैनिंग माइक्रोस्कोप का उपयोग कर अवलोकन
- इमेज एक्विजिशन कंट्रोलके लिए फ्लोरोसेंट स्विच पर क्लिक करें।
- सुनिश्चित करें कि कमरे और उपकरण रोशनी बंद कर रहे हैं। शोर के स्तर को कम करने के लिए, एक अंधेरे वातावरण में माइक्रोस्कोप का उपयोग करें।
- माइक्रोस्कोप पर लाइट पाथ का शटर खोलें।
- फ्लोरेसेंस फिल्टर को चौथे गियर में घुमाएं और ऑप्टिकल स्विच के दो लीवर खींचें।
- आईपीस के माध्यम से देखतेहुए, फोकल लंबाई को समायोजित करने के लिए मोटे और ठीक फोकसिंग क्वासिस्पिरल का उपयोग करें, और लक्ष्य क्षेत्र को खोजने के लिए देखने के क्षेत्र को समायोजित करने के लिए एक्स/वाईकुल्हाड़ियों का उपयोग करें।
5. मल्टीफोटोन लेजर स्कैनिंग माइक्रोग्राफी
- सॉफ्टवेयर पर फ्लोरोसेंट स्विच बंद करें, फ्लोरोसेंट फिल्टर को दूसरे गियर में स्विच करें (दूसरा गियर RXD1 है), और ऑप्टिकल स्विच के दो लीवर को पुश करें।
- लक्ष्य क्षेत्र का पूर्वावलोकन करने और अधिग्रहण सेटिंग और छवि अधिग्रहण नियंत्रण मापदंडों (छवि संकल्प: 1024) को समायोजित करने के लिए फोकस ×2 पर क्लिक करें।
- प्रेस नियंत्रण + सी और उच्च वोल्टेज, लाभ, और ऑफसेट समायोजित (शोर के स्तर को कम करने के लिए) ।
- पूर्वावलोकन रोकने के लिए स्टॉप पर क्लिक करें, दो आयामों में स्कैन करने के लिए XY बटन पर क्लिक करें, और पूरा होने के बाद सहेजें(चित्रा 1)।
- एक क्षेत्र का चयन करें, गहराईपर क्लिक करें, और फिर माइक्रोस्कोप सेटिंग में अंतिम सेट का चयन करने और सेट सेट (रक्त वाहिका का पूरा आवश्यक हिस्सा देखें) शुरू करने के लिए पूर्वावलोकन करें। 3D छवियों को स्कैन करें और पूरा होने के बादसहेजें (चित्रा 2)।
- एक क्षेत्र का चयन करें, समयपर क्लिक करें, और अन्य अधिग्रहण सेटिंग और छवि अधिग्रहण नियंत्रण मापदंडों को समायोजित करें (चरण आकार: 1 माइक्रोन; स्लाइस: 10; टाइम स्कैन संख्या: 40)। विभिन्न स्लाइस स्कैन करें और चलती छवियों(वीडियो 1)प्राप्त करने के लिए पूरा होने के बाद सहेजें।
नोट: स्कैन के दौरान चूहों के लिए किसी की देखभाल और तदनुसार संज्ञाहरण जोड़ें । - गर्दन विच्छेदन द्वारा माउस का बलिदान करें।
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Representative Results
जिगर में रक्त वाहिकाओं का वितरण चित्र 1 में देखा जा सकता है,जो मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके प्राप्त किया जाता है। रक्त वाहिका को एक ट्रंक से निकलने वाली शाखाओं की बहुलता में विभाजित किया जाता है और आसपास के अंतरिक्ष में वितरित किया जाता है। रक्त वाहिका की बाहरी परिधि लाल है, भीतरी गुहा अंधेरा है, और अंदर कई चीजें हैं। छवि स्पष्ट है, अवलोकन के विमान के करीब है। चारों ओर कुछ लाल धब्बे भी हैं, शायद इसलिए कि डाई अन्य पदार्थों को दाग देने के लिए आसपास के ऊतकों में प्रवेश करती है। वीडियो 1में, गैर-लाल चीजें हैं जो लाल रक्त वाहिकाओं में चलने वाली कोशिकाएं हो सकती हैं। वीडियो के अंत में इनमें से कुछ बातों पर अंधेरा छा जाता है। ऐसा शायद इसलिए है क्योंकि तय लिवर को समय के साथ अच्छी तरह से तय नहीं किया गया है। यह विधि इमेजिंग को 2 घंटे तक अनुमति देगी।
चित्र 1: मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी के तहत जिगर के ऊतकों में रक्त वाहिकाओं। रक्त वाहिकाएं लाल हैं। 2048 के संकल्प और 512 के एचवी के साथ रक्त वाहिका की एक दो आयामी छवि, धुंधला होने के बाद लाल रक्त वाहिकाओं को स्पष्ट रूप से छवि सकती है। चारों ओर कुछ लाल धब्बे भी हैं, और डाई अन्य पदार्थों को डाई करने के लिए आसपास के ऊतकों में भी प्रवेश कर सकती है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 2: एक ही स्थिति में जीवित जिगर के ऊतकों की त्रि-आयामी छवि। मोटाई 9 माइक्रोन है, रक्त वाहिकाओं की आकृति विज्ञान विभिन्न कोणों से देखी जाती है, और गतिशील छवियों को एकत्र किया जाता है। संश्लेषण के बाद, रक्त वाहिकाओं (अंधेरे) में कोशिकाओं को बहते हुए देखा जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
अनुपूरक चित्रा 1: शरीर अंग इमेजिंग फ्रेम। (क)हीटिंग पैड: यह माउस शरीर के तापमान को बनाए रखता है। (ख)ब्रैकेट: यह घुंडी के साथ माउस और समायोज्य सक्शन कप स्थिति को रखने के लिए एक आधार प्रदान कर सकता है। (ग)सक्शन कप: यह ब्रैकेट द्वारा तय किया जाता है। नकारात्मक दबाव पंप द्वारा प्रदान किए गए नकारात्मक दबाव सक्शन कप के केंद्र में पारदर्शी लेंस को सोज़ोर्ब करने के लिए जिगर का कारण बनता है। (घ)लचीला पाइप: यह सक्शन कप को प्रेशर पंप से जोड़ता है। दबाव पंप सक्शन कप के लिए नकारात्मक दबाव प्रदान करता है। (ङ)सेंट्रलाइज ट्यूब: लचीले पाइप के बीच में सेंट्रलाइज ट्यूब तरल पकड़ सकता है, इन तरल पदार्थों को वैक्यूम पंप में चूसा जाने से रोकने के लिए। (च)निगेटिव प्रेशर पंप: यह फ्लेक्सिबल पाइप द्वारा सक्शन कप से जुड़ा होता है। नकारात्मक दबाव पंप सक्शन कप को नकारात्मक दबाव प्रदान कर सकता है ताकि यकृत लेंस से चिपक जाए। इस आंकड़े को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें ।
अनुपूरक चित्रा 2: पारदर्शी लेंस से जुड़ी जिगर की एक क्लोज-अप छवि। पारदर्शी लेंस सक्शन कप के केंद्र में है। पंप सक्शन कप को नकारात्मक दबाव प्रदान करता है ताकि यह जिगर को चूसना हो और जिगर पारदर्शी लेंस से जुड़ा हो। क्योंकि सक्शन का सामना करने वाला लिवर माउस से थोड़ा दूर होता है, इसलिए कलाकृतियों पर सांस लेने और दिल की धड़कन का असर कम हो जाता है। पारदर्शी लेंस मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोप के लिए एक स्थिर दृश्य प्रदान कर सकता है। इस आंकड़े को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें ।
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Discussion
एक विशिष्ट जीवित ऊतक को देखते हुए ऊतक17के अंदर सामग्री के परिवर्तनों, स्थानीयकरण और जैविक प्रभावों को समझने का एक प्रभावी साधन है। इस प्रयोग में, महत्वपूर्ण कदम एक अंग इमेजिंग स्थिरता के साथ जिगर को ठीक कर रहे हैं, जो सांस लेने और दिल की धड़कन के कारण गति कलाकृतियों की समस्या को हल कर सकते हैं, और अवलोकन के लिए एक मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोप का उपयोग करें। इस विधि का उपयोग करके, वीवो में यकृत के आंतरिक ऊतकों को मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोप के माध्यम से मनाया जाता है, और रक्त वाहिकाओं को स्पष्ट रूप से उनकी स्थिति और त्रि-आयामी संरचना का निरीक्षण करने के लिए फ्लोरोसेंट रूप से लेबल किया जाता है। इस विधि का उपयोग फ्लोरोसेंटली रूप से किसी पदार्थ को लेबल करके और आगे के दृश्य प्रदान करने के लिए जीवित ऊतक में पदार्थ का गतिशील रूप से पालन करके विशिष्ट प्रभावों का निरीक्षण करने के लिए किया जा सकता है।
मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी एक संगठित ऊतक वातावरण में सेलुलर घटनाओं से जानकारी एकत्र करने के लिए एक अनिवार्य उपकरण बनने के लिए एक उपन्यास तकनीक होने से विकसित हुआ है। हालांकि, एक स्थिर छवि का उत्पादन करने के लिए अंग को तय किया जाना चाहिए ताकि विधि कुछ ऊतकों और अंगों को देखने में प्रभावी हो सके। सांस लेने और दिल की धड़कन से आंदोलन कलाकृतियों जिगर सीधे छवि होने से रोक सकते हैं, तो एक शरीर अंग स्थिरता का उपयोग किया जाता है, जो वैक्यूम सोखेंपन के सिद्धांत का उपयोग करता है अंग सुरक्षित और छवि हिला को रोकने के लिए । वैक्यूम चक शरीर के अंगों की एक किस्म को भी ठीक कर सकते हैं। हालांकि, ऊतक टूटने का खतरा है यदि उचित नकारात्मक दबाव का उपयोग नहीं किया जाता है या इमेजिंग समय 2 घंटे से परे फैला हुआ है।
यद्यपि मल्टीफोटोन माइक्रोस्कोपी का संकल्प कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी की तुलना में थोड़ा कम है, लेकिन प्रवेश की गहराई 9-10 माइक्रोन तक बढ़ जाती है, जिससे गहरे ऊतक अवलोकन, सेलुलर घटनाओं और भौतिक प्रभावों के लिए छवियों के प्रावधान को सक्षम किया जाता है।
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Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
इस काम को नेशनल नेचुरल साइंस फाउंडेशन ऑफ चाइना (81772133, 81902444), गुआंगडोंग नेचुरल साइंस फंड (2020A1515010269, 2020A1515011367), ग्वांग्झू नागरिक स्वास्थ्य विज्ञान और प्रौद्योगिकी अनुसंधान परियोजना (201803010034, 201903010072), और सैन्य चिकित्सा नवाचार परियोजना (17CXZ008) ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1 mL syringe x 2 | Hunan Pinan Medical Devices Technology | YA0551 | |
| 5 W heating pad | BiolinkOptics Technology | BL336 | |
| 75% absolute ethanol | Guangdong Guanghua Sci-Tech | 1.17113.023 | |
| Absorbent cotton ball | Healthy Sanitation Kingdom | ||
| Mouse surgical instrument | RWD Life Science | SP0001-G | Including scissors and tweezers |
| Multiphoton microscopy | Olympus | FV1200MPE | |
| Organ imaging fixture | BiolinkOptics Technology | BL336 | Including suction cup, hose, negative pressure pump and bracket |
| Rhodamine B isothiocyanate–Dextran | Sigma | R9379 | |
| Shaving machine | Lei Wa | RE-3201 | |
| Sodium pentobarbital | Sigma | P3761-25G |
References
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