Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

تحريض كامل من إصابة الحبل الشوكي من نوع الترانصيب في الفئران

Published: May 6, 2020 doi: 10.3791/61131
* These authors contributed equally

Summary

يصف هذا البروتوكول كيفية إنشاء عملية استئصال لامينكومي دقيقة للتحريض على إصابة الحبل الشوكي المستقرة من نوع الترانسكشن في نموذج الماوس ، مع الحد الأدنى من الأضرار الجانبية لأبحاث إصابة الحبل الشوكي.

Abstract

إصابة الحبل الشوكي (SCI) يؤدي إلى حد كبير إلى فقدان لا رجعة فيه ودائمة من وظيفة, الأكثر شيوعا نتيجة للصدمة. ويجري البحث في العديد من خيارات العلاج، مثل طرق زرع الخلايا، للتغلب على الإعاقات المنهكة الناشئة عن SCI. وتجري معظم التجارب قبل السريرية الحيوانية في نماذج القوارض من SCI. في حين أن نماذج الفئران من SCI قد استخدمت على نطاق واسع ، فقد تلقت نماذج الماوس اهتمامًا أقل ، على الرغم من أن نماذج الماوس يمكن أن يكون لها مزايا كبيرة على نماذج الفئران. ويعادل صغر حجم الفئران تكاليف صيانة الحيوانات أقل من الجرذان، كما أن توافر العديد من نماذج الماوس المعدلة وراثياً مفيد لأنواع عديدة من الدراسات. إن الحث على الإصابة المتكررة والدقيقة في الحيوانات هو التحدي الرئيسي لأبحاث SCI ، والتي تتطلب في القوارض الصغيرة جراحة عالية الدقة. كان نموذج الإصابة من نوع النقل نموذج إصابة شائع الاستخدام على مدى العقد الماضي للأبحاث العلاجية القائمة على الزرع ، ومع ذلك لا توجد طريقة موحدة لحث إصابة كاملة من نوع الترانصيب في الفئران. لقد قمنا بتطوير بروتوكول جراحي لحفز إصابة نوع نقل كامل في الفئران C57BL/6 في المستوى الفقري الصدري 10 (T10). يستخدم الإجراء حفر طرف صغير بدلاً من الارونجروس لإزالة اللامينا بدقة ، وبعد ذلك يتم استخدام شفرة رقيقة مع حافة قطع مستديرة للحث على نقل الحبل الشوكي. هذه الطريقة تؤدي إلى الإصابة من نوع النقل القابلة للتكاثر في القوارض الصغيرة مع الحد الأدنى من الأضرار العضلية والعظمية الجانبية وبالتالي تقلل من العوامل المحيرة ، وتحديدًا حيث يتم تحليل النتائج الوظيفية السلوكية.

Introduction

إصابة الحبل الشوكي (SCI) هي مشكلة طبية معقدة تؤدي إلى تغييرات جذرية في الصحة ونمط الحياة. لا يوجد علاج لـ SCI ، ولا يتم فهم الفيزيولوجيا المرضية لـ SCI تمامًا. نماذج SCI الحيوان، ولا سيما نماذج القوارض، تقدم أداة لا تقدر بثمن لتجربة العلاجات الجديدة، وقد استخدمت لاستكشاف SCI لعقود. حتى الآن، أكثر من 72٪ من الدراسات قبل السريرية SCI استخدمت نماذج الفئران، بالمقارنة مع مجرد 16٪ التي استخدمت الفئران1. على الرغم من أن الفئران ، بسبب حجمها الأكبر وميلها إلى تشكيل تجاويف أقرب إلى SCIs البشرية ، كانت تقليديا الحيوانات النموذجية المفضلة لدراسة المناهج العلاجية الجديدة ، فإن الفئران (بما في ذلك العديد من النماذج الماوس المعدلة وراثيا) تستخدم الآن بشكل أكثر تواترا لدراسة الآليات الخلوية والجزيئية من SCI2. ويقدم نموذج الماوس فوائد إضافية من حيث سهولة التعامل مع الفئران، ومعدلات إنجاب أسرع، وتكاليف أقل من الفئران؛ الفئران أيضا يحمل درجة عالية من التشابه الجينومي مع البشر1،2،3. وقد تم تحديد العيب الرئيسي لنموذج الماوس على أنه حجم أصغر بكثير يخلق تحديات للتدخلات الجراحية لخلق وعلاج إصابات الحبل الشوكي4,5.

هناك فجوة في المؤلفات الموجودة التي تسلط الضوء على الحاجة إلى بروتوكول جراحي قوي ويمكن استنساخه للحث على استقرار SCI في نموذج الماوس. لذلك، نحن نقدم نهجا جراحية جديدة ودقيقة في هذا البروتوكول للتغلب على هذه القيود. يوفر هذا البروتوكول مبادئ توجيهية متعمقة للحث على إصابة من نوع النقل في الفئران ، حيث تم التعرف على هذا النوع من الإصابة ليكون الأنسب لدراسة التغيرات التجديدية والتنكسية بعد الإصابة6، وكذلك المرونة العصبية والدوائر العصبية وهندسة الأنسجة7. لقد اخترنا للحث على الإصابة في المنطقة الصدرية السفلى، منذ يستخدم SCI المستوى الصدري الأكثر شيوعا في الأدب1.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

تم تنفيذ جميع الإجراءات بموافقة لجنة أخلاقيات الحيوان بجامعة غريفيث (ESK/04/16 AEC و MSC/04/18 AEC) بموجب المبادئ التوجيهية للمجلس الوطني للصحة والبحوث الطبية في أستراليا.

1. الحيوان انشاء العملية الجراحية

  1. تخدير واستقرار الحيوان.
    1. استخدام 8-10 أسابيع من العمر أنثى C57BL/ 6 الفئران. استخدام 5٪ ايزوفلوران في 1 L/min الأكسجين لاستقراء التخدير. للحفاظ على التخدير، استخدم 1.5-2٪ ايزوفلوران في 1 لتر / دقيقة من الأوكسجين. تأكيد التخدير المناسب من خلال إنشاء نقص في عدم انعكاس الألم في الذيل والكفوف الخلفية.
  2. إدارة البوبرينورفين (0.03 ملغ / كجم من وزن الجسم) للانسة وenrofloxacin (10 ملغ / كجم من وزن الجسم) لتغطية المضادات الحيوية، تحت الجلد وفقا لوزن الجسم. ميلوكسيكام (2 ملغ / كجم من وزن الجسم) يمكن أن تعطى للتكليس على المدى الطويل إذا لزم الأمر.
  3. حافظ على ثبات درجة حرارة جسم الحيوان عند 37 درجة مئوية مع وسادة تدفئة
    1. حلق الفراء الخلفي لفضح المنطقة الجراحية على العمود الفقري الظهري. إزالة الفراء الحليق من منطقة جراحية قبل تعقيم موقع شق. تعقيم المنطقة الحليقة مع مسحات القطن العقيمة المنقوعة في سائل مطهر اليود povidone والروح الجراحية.
  4. الشريط الكفوف من الماوس إلى منطقة جراحية لتحقيق الاستقرار في الحيوان (الشكل 1A). وضع إطار البيضاوي الستار على الماوس(الشكل 1B).

2. استئصال لامينك

  1. إجراء شق خط الوسط الرأسي في مستوى T10 الفقرية باستخدام مشرط جراحي.
    1. حدد موقع العملية العرضية لفقرة T10 لتحديد موقع استئصال لامينيك. يقع جسم الفقرات قليلاً في الجمجمة على طرف العملية الانساحية8 (انظر الشكل 2). تقع التلميح تقريبًا عند نقطة منتصف فقرة T118.
    2. جعل شق ~ 2.5 سم طويلة، بحيث العمود الفقري من الفقرات T10 هو تقريبا في منتصف طول الشق.
  2. تعكس الجلد والتراجع مع الداحف.
    1. استخدام ملقط على التوالي لرفع الجلد من اللفافة الكامنة. سيؤدي هذا إلى إنشاء مساحة للسحب ليتم وضعها; هذه سوف تبقي المجال الجراحي مفتوحا.
  3. إجراء تشريح حاد من الأنسجة تحت الجلد واللفافة لفضح العمليات العرضية.
    1. استخدام حافة حادة من مشرط لجعل شق خط الوسط الصغيرة في الأنسجة تحت الجلد والزية الكامنة لفضح العمود الفقري من T9-T11 الفقرات. استخدام ملقط تلميح غرامة (غير حادة) لأداء تشريح حادة وتعكس اللفافة.
  4. تقسيم وفصل العضلات شبه العرضية لفضح الصفيحة.
    1. استخدم الطرف الحاد للمشرط لتقسيم عضلات الجذع الظهرية والعضلات شبه العرضية على طول العمود الفقري في فقرات T9-T11. استخدام ملقط تلميح غرامة حادة لأداء تشريح صريح من العضلات في طبقات وفضح الصفيحة من الفقرات. هذا ينبغي أن تقلل أي نزيف.
      ملاحظة: إذا كان هناك أي نزيف، استخدم مياه الملحية الدافئة (37 درجة مئوية) الري ومسحات القطن للسيطرة عليه ومسح الدم من المجال الجراحي.
    2. استخدام نفس ملقط لجعل جيوب صغيرة حول العمليات العرضية من T10 فقرة. استخدام ملقط منحني لتحقيق الاستقرار في الجسم الفقري T10 عن طريق ربط شوكات لها تحت العمليات العرضية، في جيوب خلق(الشكل 1C).
    3. شطف بدقة t10 laminae مع المالحة الدافئة ومسح بلطف نظيفة مع مسحات القطن لتصور واضح سطح عظمي. تأكد من عدم وجود العضلات / الرباط المرفقات تبقى على طول السطح ثنائيا.
  5. استخدام الحفر مع طرف غرامة (0.55 ملم قطر، 7 مم طول) لكسر الصفيحة ثنائيا.
    1. استخدم طرف الحفر لتتبع مسار عمودي من الفضاء بين الفقرات T9-T10 إلى الفضاء بين الفقرات T10-T11 على طول كل من صفح T10، دون تشغيل الحفر. هذا هو التأكد من أن بت الحفر لا يمسك أي نسيج (الشكل 1D).
    2. الآن تشغيل الحفر على، ببطء وبعناية حفر خندق عمودي على الصفيحة اليمنى من الفقرات T10. هذا الجزء من استئصال لامينك يجب أن يخلق عيب جراحي دقيق في جميع أنحاء سمك العظام في خط عمودي مستقيم. حافظ على قبضة ملقط منحني للحفاظ على الفقرات مستقرة.
  6. تأكد من أن غيض من التدريبات لا تخترق العظام وإصابة الحبل الشوكي. كرر نفس العملية على الجانب الأيسر من الصفيحة، مع الحفاظ على الفقرات مستقرة مع ملقط منحني. ري مع المالحة الدافئة لغسل أي شظايا العظام المتبقية.
  7. رفع وإزالة الجزء الخلفي من القوس العصبي (الشكل 1F).
    1. استخدام ملقط طرف غرامة الزاوية لقبضة عملية شائكة وإزالة الجزء كله الظهري من الصفيحة مفصولة بالحفر الثنائي. ري ومسحة مرة أخرى إذا كان هناك أي نزيف، تصور بوضوح الحبل الشوكي يتعرض تحت نافذة استئصال لاميني (الشكل 1E).

3. النقل

  1. الحث على إصابة الحبل الشوكي عن طريق نقل الحبل المكشوف مع شريحة واحدة من النصل.
    1. استخدم شفرة قطعية مستديرة ضيقة لشرائح الحبل في وسط نافذة استئصال لاميني. ضمان اكتساح الاستراحة الجانبي من العمود الفقري للحث على إصابة كاملة في عملية النقل (الشكل 1G).
  2. تأكيد اكتمال إصابة النقل باستخدام ملقط طرف غرامة حادة وإزالة أي اتصالات المتبقية في موقع النقل.
  3. السيطرة على النزيف إن وجدت، قبل إغلاق الطبقات الجراحية.
  4. استخدم الملح الحار لري و مسح أي نزيف يحدث من جذوع الحبل المقطّع. استخدام مسحة القطن لتطبيق ضغط لطيف لتحقيق الهباس إذا لزم الأمر. الحرص على عدم ضغط الحبل الشوكي.

4 - الإغلاق والرعاية الفورية بعد الجراحة

  1. جمع العضلات معا وخياطة في طبقة.
    1. بمجرد تحقيق الهوساسي في موقع النقل، حرر قبضة ملقط منحنية على فقرات T10. جلب حواف العضلات تشريح معا على طول خط الوسط لتحقيق شهية جيدة.
    2. خياطة العضلات في طبقة باستخدام 5-0 البوليجلاكتين 910 خياطة للامتصاص. تأكد من أن الانحناء الطبيعي للعمود الفقري لا يسبب أي توتر عند خط الغرز أو يفتح الغرز ، مما يعرض موقع استئصال لامينك.
  2. إغلاق الأنسجة تحت الجلد والجلد.
    1. استخدم 5-0 خياطة حريرية غير قابلة للامتصاص لإغلاق شق الجلد. تأكد من عدم وجود نزيف أو جلطات أو حطام متبقي تحت الجلد قبل الإغلاق. قد يكون من الضروري وجود الري النهائي مع الملح الحار في هذه الخطوة.
  3. أوقف التخدير مراقبة الحيوان لمدة 10-30 دقيقة حتى الانتعاش. يجب أن يبقى الحيوان على وسادة التدفئة لهذه المدة. توفير جل الماء والطعام الرطب في القفص.
  4. بالنسبة للرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية، تشمل البوبرينورفين (مرتين يوميًا) وenrofloxacin (مرة واحدة يوميًا) لأول يومين وقائيًا. بالإضافة إلى ذلك، إفراغ المثانة يدويا على الأقل مرتين يوميا، والالتزام بالمبادئ التوجيهية للجنة أخلاقيات الحيوان.
    ملاحظة: تم تقييم الحيوانات في هذه التجربة مرتين يوميًا لصحتها العامة وعافيتها ، والتي شملت التحقق من الألم المستمر (لإعطاء جرعات إضافية من البوبرينورفين) أو العدوى (إنروفلوكساسين الإضافية) ، وحالتها التغذوية والترطيب (إعطاء السوائل القابلة للحقن إذا كانت جافة) وأي علامات على استئصال الأنف (توفير الرعاية في حالة استئصال الأنف أوتوماتيوم). ويوصى بشدة بأن تُحدد هذه الجوانب من الرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية، بما في ذلك قرارات القتل الرحيم بتوجيه من اللجنة المؤسسية لأخلاقيات الحيوان.

5- تقييم نموذج الإصابة

  1. تأسيس فقدان وظيفة المحرك.
    1. تقييم السلوك الحركي على الفئران المصابة 2 و7 و14 و21 و28 يوماً بعد الإصابة في حقل مفتوح باستخدام مقياس باسو ماوس (BMS) لتحديد فقدان الوظيفة9 (الشكل 3C-E).
  2. تأكيد الهَلَكِيّة للإصابة
    1. حصاد النخاع الشوكي المصاب مع أعمدة العمود الفقري بعد القتل الرحيم (القيام به مع ثاني أكسيد الكربون في هذه التجربة، كما وافقت عليها لجنة أخلاقيات الحيوان).
    2. إصلاح الأنسجة عن طريق الغمر بين عشية وضحاها في 4٪ paraformaldehyde وdealcify العظام عن طريق العلاج مع 20٪ حمض رباعية الاثيلين ديامين (EDTA) على مدى 3 أسابيع، واستبدال EDTA الطازجة كل 48 ساعة.
    3. إعداد العمود الفقري decalcified لجلاء المقطع وقطعها إلى 30 ميكرومتر سميكة المقاطع.
    4. قم بتركيب المقاطع على الشرائح الزجاجية المغلفة بالجيلاتين للتلوين المناعي مع الأجسام المضادة المضادة لـ GFAP وHoechst 33342.
    5. صورة الشرائح على المجهر الفلورسنت (الشكل 3A) وإجراء قياسات لحجم الإصابة باستخدام برنامج تحليل الصور (على سبيل المثال ، نيكون تحليل البرمجيات -- عناصر NIS [الشكل 3B]).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

الطريقة الناتجة كما هو مبين في الشكل 1، ينطوي على تثبيت كاف من الماوس (الشكل 1A) والتصور الجيد للعمود الفقري والأنسجة الطفيلية(الشكل 1B). يمكن تصور العملية العرضية والرقي بوضوح مع الحد الأدنى من تشريح العضلات وفقدان الدم(الشكل 1C، منطقة سلط الضوء). يتم تنفيذ الحفر تلميح غرامة كما هو مبين في الشكل 1D، لإنشاء إطار استئصال لامينكدي كما هو مبين في المستطيل. نافذة استئصال لامينكومي الناتجة واضحة وتسمح بالتصور المباشر والوصول إلى الحبل الشوكي(الشكل 1E، منطقة مميزة). يتم شرح المفهوم التخطيطي لهذه العملية في الشكل 1F. يمكن أن تتناسب شفرة النقل الضيقة بسهولة من خلال نافذة استئصال لامينكومي المنفصلة (الشكل 1G) وفي حركة الضرب السلس ، يمكن إنشاء إصابة نوع نقل كامل (الشكل 1H-I). وهكذا، هذه الطريقة يسبب تشريح العضلات الحد الأدنى، الحد الأدنى من الأضرار العظام الجانبية، ويؤدي إلى إصابة مستقرة من نوع النقل الكامل مع الحد الأدنى من فقدان الدم. على الرغم من تحريض من SCI شديدة في الحيوانات، وأسفرت العمليات الجراحية والرعاية بعد العملية الجراحية في ارتفاع معدلات البقاء على قيد الحياة للحيوانات. جميع الحيوانات التي تم الإبلاغ عنها لهذه المخطوطة نجت من جراحة الحبل الشوكي. وأسفرت العمليات الجراحية اللاحقة التي أجراها مختبرنا عن معدل نجاة من >99٪.

لتقييم ما إذا كانت هذه الطريقة لحفز من نوع SCI في الفئران قابلة للتكرار ومتسقة ، قمنا بتحليل الحبل الشوكي المصاب باستخدام الأنسجة / الكيمياء المناعية والاختبار السلوكي (ن = 8 حيوانات) (الشكل 2). تحديد المناعة ضد علامة الفلكية glial البروتين الحمضية (GFAP) حدود الحبل الشوكي سليمة، مع موقع الإصابة يجري المنطقة بين جذوع الحبل عند النظر مع المقاطع الطولية (الشكل 3A). وقد تسبب في وجود عيب ثابت الحجم في موقع النقل، مع متوسط أدنى مسافة قدرها 550.4 ± 17.3 ميكرومتر(الشكل 3B). وأظهرت البيانات السلوكية نشر مقياس الماوس باسو (BMS)9 من اختبار حقل مفتوح أن الفئران المصابة لا تظهر أي حركة الأطراف الخلفية بعد الإصابة (الشكل 3C). ويمثل ذلك درجة 0 على BMS لمدة تصل إلى 28 يوما بعد الإصابة. وهكذا، فإن البروتوكول ينتج إصابة كاملة وموثوقة من نوع النقل مما يؤدي إلى فقدان كامل للوظيفة تحت مستوى الإصابة ولا يؤدي إلى انعكاس تلقائي للشلل (الشكل 3D, E).

Figure 1
الشكل 1: الخطوات الرئيسية في بروتوكول إصابة النقل. (أ)إعداد الحيوان وتثبيته قبل الجراحة. يتم عرض كل من التخطيط والصورة من الجراحة. (ب) التخطيطي والصورة التي تظهر شق، وضع السحب وتشريح حادة لفضح طبقات العضلات العميقة. (C) تثبيت العمود الفقري مع ملقط وفضح الصفيحة من T10 فقرة. يبرز المستطيل في الصورة صفعًا وعملية غير مريحة في فقرة T10. (D) غرامة تلميح الحفر لأداء استئصال لامينك. المستطيل في هذه الصورة يتتبع نافذة استئصال لامينك. (E) كامل نافذة استئصال لامينكتي التي أبرزها المستطيل، الذي في الحبل الشوكي هو واضح للعيان. (F) سلسلة من الرسومات التخطيطية التي تبين مفهوم الحفر لإجراء استئصال لامينيك كامل، في اتجاه مقطعي. (G) هذه الصورة تصور استخدام سكين نقل شفرة غرامة لأداء إصابة نوع النقل الكامل، وفي (H) الإصابة الكاملة مرئية داخل المستطيل، كخط عرضية حمراء داكنة عبر الحبل الشوكي. (ط) التخطيطي تبين مجمل عرض لامينكتي وموقع الإصابة. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 2
الشكل 2: تخطيطي يشرح تعريف المعلم الفقري لـ T10. العملية العرضية من T10 الفقرات هي واحدة من أبرز المعالم التي يمكن أن يكون محورها في انحناء الطبيعية للعمود الفقري الصدري. عند هذه النقطة العمليات spinous تغيير مورفولوجيا بحيث نصائح من العمليات العرضية الجمجمة من نقطة T10 caudally، ونصائح من العمليات الانسالية spinous من T10 نقطة الجمجمة. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 3
الشكل 3: النتائج التمثيلية من نوع إصابة الاستئصال المستحث في فئران C57BL/6. (أ)قسم طولي من الحبل الشوكي يكشف عن إصابة كاملة من نوع الترانزيت. تم تصوير الأنسجة على مجهر مقلوب. المضادة لGFAP تسميات العلامات المناعية الفلكية (الحمراء) في حين يتم تسمية النوى مع Hoechst 33342 (الأزرق). وكانت فجوة الإصابة باستخدام قياس خطي لأقصر نقطة 550 ميكرومتر. شريط مقياس = 200 μm. IS = موقع الإصابة، IVD = القرص الفقري، SC = الحبل الشوكي، VB = الجسم الفقري. (ب) تم قياس حجم الإصابة في 8. وكان متوسط حجم الإصابة 550.4 ± 17.3 ميكرومتر، مع الحد الأقصى 577.8 ميكرومتر والحد الأدنى 525.4 ميكرومتر. (C) السلوك الحركي الذي سجل على مقياس باسو ماوس (BMS) ، والذي كان 9 في جميع الفئران قبل الإصابة وبقي في 0 لمدة 4 أسابيع بعد الإصابة ، مما يشير إلى فقدان كامل للوظيفة الحركية تحت موقع الإصابة (n = 8 فئران). (D) مشية فأر صحي قبل الإصابة. (E)مشية من نفس الماوس بعد الإصابة. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

هذه الطريقة تحفز إصابة كاملة من نوع النقل في مستوى T10 الفقري في الفئران ، مما يؤدي إلى شلل نصفي كامل للحيوان ، أقل من مستوى الإصابة. عموما، هذه الطريقة ينتج عن الحد الأدنى من النزيف، والأضرار الجانبية لا تذكر ومستقرة، وإصابة استنساخ. بالمقارنة مع الأساليب المنشورة سابقا من نقل دون استئصال لامينكومي10، وهذا الأسلوب يوفر فوائد من حيث التصور المباشر دون التلاعب انحناء العمود الفقري ، وأفضل السيطرة على اكتمال الإصابة ، وتعزيز القدرة على السيطرة على النزيف وتحقيق الهدس. وميزة هذا الأسلوب هو أن البروتوكول يمكن تعديلها للاستخدام في أي مستويات فقرية أخرى غير T10، وكذلك لأداء أنواع أخرى من الإصابات مثل أقسام هيمي، والقطع الظهرية الجزئية، avulsions الجذر الظهري، سحق وكدمات.

أحد المكونات الرئيسية لهذا البروتوكول هو أنه يستخدم استخدام حفر دقيقة. في حين أن استخدام التدريبات قد يتطلب مستوى مهارة عالية وتدريب أكثر شمولا، فإنه يحقق استئصال لامينكومي كامل ونظيف. عامل آخر حاسم هو استخدام سكين ذات شفرة ضيقة للانفط ، بدلاً من المقص الصغير. وهذا يؤدي إلى أضرار جانبية أقل غير مرغوب فيها بالمقارنة مع استخدام مقص. على العكس من ذلك ، إذا كان هناك الكثير من الضغط الجانبي ، يمكن أن يسبب النصل بعض الإصابات للجسم الفقري. قد يتطلب البروتوكول الموصوف من الجراح إجراء بعض استكشاف الأخطاء وإصلاحها. إذا لم يتم إجراء استئصال لامينك بشكل صحيح، قد يكون هناك سبيرز العظام المتبقية، والتي يمكن أن تحد من الوصول إلى نافذة استئصال لامينك. إدراج واحدة من شوكات من ملقط تلميح غرامة يمكن تمكين الجراح لفهم وكسر أي سبيرز العظام المتبقية. ومع ذلك، يجب الحرص على عدم إصابة الحبل الشوكي المعرضة في هذه العملية. إذا كان يؤدي إلى استئصال لامينك في حافة العظام خشنة، يمكن إجراء الحفر مرة أخرى لتصويب هامش استئصال لامينك. قد يكون هذا غير عملي إذا كانت نافذة استئصال لامينك بالفعل واسعة بما فيه الكفاية ، وفي هذه الحالة ، يجب إجراء عملية نقل دون العبث بموقع استئصال لامينك.

ويوصى بشدة أن المستخدمين ممارسة إجراءات استئصال لامينك ما لا يقل عن 8-10 مرات على مستوى العمود الفقري ذات الصلة في تشريح كادافيريك قبل محاولة في عملية جراحية البقاء على قيد الحياة. على الرغم من أن الحفر وعقد وتقنيات المناورة بسيطة، فإنها قد تتطلب المستخدمين للتعرف على المعدات. هنا، ونحن نقدم أيضا بعض النصائح المفيدة للمساعدة في العمود الفقري وتثبيت اليد أثناء إجراء الحفر. إذا كان المستخدم هو اليد اليمنى، يجب أن تستقر العمود الفقري باستخدام ملقط منحني مع اليد اليسرى بحيث أن ملقط نهج العمود الفقري من الجانب القحفي. هذا يحافظ على الجانب السدي للعمود الفقري واضحة للاقتراب مع الحفر التي عقدت في اليد اليمنى (أو الغالبة). وينبغي أن تعقد الحفر مع قبضة دبوس بين الإبهام، مؤشر والأصابع الوسطى. يجب أن تكون اليد مدعومة بشكل جيد على طول الحافة الوسيطة للرسغ والإصبع الخامس الممدودة. الحفاظ على الذراع adducted تماما بحيث يلامس الكوع الجسم قد تساعد على تحقيق سيطرة أفضل على قبضة الحفر أثناء الممارسة. وينبغي أن يتضمن إجراء الحفر فقط الحركة في الأصابع التي تمسك الحفر وليس في المعصم ، وليس على عكس استخدام القلم للكتابة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

ليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

Acknowledgments

وقد تم دعم هذا العمل من قبل طالب جامعة غريفيث الدولي (دكتوراه) إلى RR، منحة مؤسسة بيري كروس إلى JE وJ، منحة مؤسسة كليم جونز إلى JSJ وJ، ومنحة لجنة التأمين ضد حوادث السيارات في كوينزلاند إلى JSJ وJJ.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Baytril injectable 50 mg/mL, 50 mL Provet BAYT I Post-operative care drug
Betadine 500 mL Provet BETA AS Consumable
Castroviejo needle holder, locking ProSciTech T149C Reusable
Ceramic zirconia blade, round with sharp sides, single edge, angled ProSciTech TXD101A-X Reusable
Cotton swabs (5pcs) Multigate 21-893 Consumable
Dremel Micro DREMEL 8050-N/18 Cordless rotary tool
Dressing forceps fine Multigate 06-306 Single use disposable
Drill bits Kemmer Präzision SM 32 M 0550 070 Reusable
Dumont #7b forceps Fine Science Tools 11270-20 Reusable
Dumont tweezers, style 5 ProSciTech T05-822 Reusable
Fur trimmer WAHL WA9884-312 Zero Overlap Hair Trimmer
Iris scissors, Ti, sharp tips, straight, 90mm ProSciTech TY-3032 Reusable
Isoflurane isothesia NXT 250 Provet ISOF 00 HS Anaesthetic agent
Colibri Retractor - 4cm Fine Science Tools 17000-04 Reusable
Scalpel handle ProSciTech T133 Reusable
Signature latex surgical gloves size 7.5 Medline MSG5475 Consumable
Sodium Chloride 0.9% STS PHA19042005 Consumable
Sterile Dressing Pack Multigate 08-709 Single use disposable
Sterile Fluid Impervious Drape 60x60 cm Multigate 29-220 Single use disposable
Surgical spirit 100 mL Provet # SURG SP Consumable
Suture Material - SILK BLK 45CM 5/0 FS-2 Johnson & Johnson Medical 682G Silk Suture
Suture Material - Vicryl 70CM 5-0 S/A FS-2 Johnson & Johnson Medical VCP421H Vicryl Suture
Temgesic 0.3 mg in 1 mL, x 5 ampoules (class S8 drug) Provet TEMG I Post-operative care drug

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Sharif-Alhoseini, M., et al. Animal models of spinal cord injury: a systematic review. Spinal Cord. 55 (8), 714-721 (2017).
  2. Lee, D. H., Lee, J. K. Animal models of axon regeneration after spinal cord injury. Neuroscience Bulletin. 29 (4), 436-444 (2013).
  3. Sharif-Alhoseini, M., Rahimi-Movaghar, V. Topics in Paraplegia. Dionyssiotis, Y. , IntechOpen. (2014).
  4. Talac, R., et al. Animal models of spinal cord injury for evaluation of tissue engineering treatment strategies. Biomaterials. 25 (9), 1505-1510 (2004).
  5. Nakae, A., et al. The animal model of spinal cord injury as an experimental pain model. Journal of Biomedicine & Biotechnology. 2011, 939023 (2011).
  6. Kwon, B., Oxland, T., Tetzlaff, W. Animal models used in spinal cord regeneration research. Spine. 27, 1504-1510 (2002).
  7. Kundi, S., Bicknell, R., Ahmed, Z. Spinal cord injury: current mammalian models. American Journal of Neuroscience. (4), 1-12 (2013).
  8. Harrison, M., et al. Vertebral landmarks for the identification of spinal cord segments in the mouse. Neuroimage. 68, 22-29 (2013).
  9. Basso, D. M., et al. Basso Mouse Scale for locomotion detects differences in recovery after spinal cord injury in five common mouse strains. Journal of Neurotrauma. 23 (5), 635-659 (2006).
  10. Seitz, A., Aglow, E., Heber-Katz, E. Recovery from spinal cord injury: a new transection model in the C57Bl/6 mouse. Journal of Neuroscience Research. 67 (3), 337-345 (2002).

Tags

هذا الشهر في جوفي، العدد 159، إصابة عرضية، بروتوكول، استئصال لاميناك، جراحة، C57BL/6 الفئران، العصبية
تحريض كامل من إصابة الحبل الشوكي من نوع الترانصيب في الفئران
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Reshamwala, R., Eindorf, T., Shah,More

Reshamwala, R., Eindorf, T., Shah, M., Smyth, G., Shelper, T., St. John, J., Ekberg, J. Induction of Complete Transection-Type Spinal Cord Injury in Mice. J. Vis. Exp. (159), e61131, doi:10.3791/61131 (2020).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter