Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

عملية زرع الكلى التلقائية في نموذج بورسين باستخدام 24 ساعة لحفظ الأعضاء والقياس المستمر عن بعد

Published: August 21, 2020 doi: 10.3791/61591
Automatic Translation
*1,2, *2, 2, 1, 3, 2, 2, 1,4, 1, 5, 6, 1,6, 2, 1,2
1Department of Surgery and Transplantation, Faculty of Medicine, University Hospital RWTH Aachen, 2Institute for Laboratory Animal Science, Faculty of Medicine, University Hospital RWTH Aachen, 3Department of General-, Visceral-, and Transplantation Surgery, University Hospital Muenster, 4Department of Surgery, Maastricht University Medical Centre (MUMC), 5Institute of Pathology, Faculty of Medicine, University Hospital RWTH Aachen, 6Department of Surgery, Campus Charité Mitte | Campus Virchow-Klinikum, Charité-Universitätsmedizin
* These authors contributed equally

Summary

نماذج الحيوانات الكبيرة تلعب دورا أساسيا في بحوث زرع قبل الإكلينيكية. نظرا لتشابهه مع الإعداد السريري، فإن نموذج porcine لزرع الكلى التلقائي في العظام الموصوفة في هذه المقالة يوفر ممتازة في بيئة الجسم الحي لاختبار تقنيات الحفاظ على الأعضاء والتدخلات العلاجية.

Abstract

في العصر الحالي من زرع الأعضاء مع نقص الأعضاء الحرجة، وتستخدم استراتيجيات مختلفة لتوسيع مجموعة من allografts المتاحة لزرع الكلى (KT). على الرغم من أن استخدام allografts من المانحين المعايير الموسعة (ECD) يمكن أن يخفف جزئيا من نقص المتبرعين بالأعضاء ، وأجهزة النماء في مرحلة الطفولة المبكرة تحمل خطرا أكبر من المحتمل أن تكون النتائج أدنى من مضاعفات ما بعد الجراحة. تقنيات الحفاظ على الأعضاء الديناميكية ، وتعديل حقن الإقفاريات وإصابة الحفظ ، وعلاجات allograft هي في دائرة الضوء من الاهتمام العلمي في محاولة لتحسين استخدام allograft ونتائج المرضى في KT.

تلعب التجارب الحيوانية قبل الظهر دورًا أساسيًا في الأبحاث الانتقالية ، خاصة في الجهاز الطبي وتطوير الأدوية. الميزة الرئيسية لنموذج زرع السيارات في العظام porcine على السابقين فيفو أو دراسات الحيوانات الصغيرة تكمن في التشابه الجراحية التشريحية والفسيولوجية إلى الإعداد السريري. وهذا يسمح بالتحري عن الطرق والتقنيات العلاجية الجديدة ويضمن الترجمة السريرية الميسرة للنتائج. يوفر هذا البروتوكول وصفا شاملا وموجها نحو حل المشاكل لنموذج زرع الكلى الأورثوري البورسين، باستخدام وقت الحفظ 24 ساعة ورصد القياس عن بعد. الجمع بين التقنيات الجراحية المتطورة مع أساليب موحدة للغاية و الحديثة للتخدير، والإسكان الحيواني، والمتابعة حول الجراحة، والرصد ضمان استنساخ ونجاح هذا النموذج.

Introduction

منذ أول زرع كلوي بشرية ناجحة بين التوائم متطابقة في عام 1954, التي تقوم بها مجموعة رائدة من الجراح الحائز على جائزة نوبل جوزيف موراي1, وقد تطورت زراعة الكلى (KT) كدعامة أساسية للعلاج للمرضى الذين يعانون من مرض كلوي نهاية المرحلة (ESRD)2. KT يظهر نتائج سريرية متفوقة على المدى الطويل ونوعية الحياة مقارنة مع غسيل الكلى2. معدلات البقاء على قيد الحياة على المدى القصير والطويل بعد KT تحسنت بشكل مستمر، وذلك بسبب التقدم في التقنيات الجراحية، والحفاظ على الأعضاء، والعلاج المناعي، والرعاية الحرجة، وبالتالي KT أصبحت متاحة على نطاق واسع على نطاق عالمي2،3،4.

بسبب نقص الأعضاء الحرجة، وهناك فجوة متزايدة باستمرار بين العرض allograft والطلب3،5،6. في عام 2018 ، كان ما يقرب من 12031 مريضًا ينتظرون KT في ألمانيا ، ومع ذلك ، لا يمكن أن يتلقى سوى أقل من 20٪ (2291 مريضًا) كلية متبرعة بسبب النقص الشديد في الأعضاء لزراعة7. للأسف ، ليس فقط العدد المطلق من المتبرعين بالأعضاء ، ولكن أيضا الجودة العامة لل allografts عرضت على زرع انخفضت في العقود الماضية8،9. لوحظ اتجاه متزايد في أعداد من قبل أو "هامشية" allografts الكلى التي كان لا بد من قبولها لزراعة10. استخدام allografts النماء في مرحلة الطفولة المبكرة قد يقلل من وقت الانتظار وقائمة الانتظار المراضة والوفيات، ومع ذلك، يرتبط مع زيادة حدوث مضاعفات الكسب غير المشروع مثل الكسب غير الوظيفية (PNF) و / أو وظيفة الكسب غير المشروع المتأخر (DGF)8،9،10. مزيد من البحوث أمر ضروري لتحسين allograft الاستفادة ، وتوسيع تجمع المانحين وحماية وتجديد allografts الهامشية التي قد تحسن في نهاية المطاف نتائج المرضى3،6.

نظرا لطبيعة كثيفة الموارد ومعقدة من نماذج زرع الحيوانات الكبيرة، يتم تنفيذ عدد كبير من الدراسات باستخدام الحيوانات الصغيرة أو في إعدادات الجسم الحي السابق11،12،13،14،15. على الرغم من أن هذه النماذج يمكن أن تقدم بيانات علمية هامة، فإن ترجمة هذه النتائج إلى البيئة السريرية غالباً ما تكون محدودة. نموذج porcine من العظام زرع الكلى التلقائي هو نموذج راسخة وقابلة للاستنساخ التي تسمح لاختبار نهج العلاج المبتكرة الجديدة في وضع ذات الصلة سريريا في الجسم الحي، مع فترات متابعة أطول المحتملة وإمكانيات وفيرة لجمع عينة المتكررة16،17. وراء ميزة حجم مماثل، والذي يسمح بالترجمة المباشرة نسبيا في الإعداد السريري (وخاصة بالنسبة لتطوير الجهاز الطبي والجرعة الدوائية)، والتشابه الجراحية التشريحية والفسيولوجية من حيث إصابة الإقفارية-reperfusion (IRI) الاستجابة وتلف الكلى، ودعم استخدام هذا النموذج في البحوث الترجمة17،18،19. يوفر هذا النموذج أيضا فرصة تدريبية ممتازة لإعداد جراحي زراعة الأعضاء الشباب لمواجهة التحديات التقنية لزرع الأعضاء السريرية20.

وهناك أيضا اختلافات متعددة مقارنة مع الإنسان والتعديلات الفنية المختلفة للنموذج ويمكن العثور عليها في الأدب16,17,19,20,21. هذه المادة يصف بشكل شامل التفاصيل التقنية، المزالق، والتوصيات التي يمكن أن تساعد على إنشاء نموذج زرع الكلى الترابسي التلقائي. تسمح طريقة القياس عن بعد ورصد الفيديو الموصوفة وكذلك مرفقنا السكني المصمم خصيصًا بتقييم شدة عن قرب وملاحظة سريرية للحيوانات. استخدام قسطرة البولية عن طريق الجلد والسترات porcine المعينة توفر إمكانية إجراء تقييم مفصل لوظائف الكلى دون استخدام أقفاص التمثيل الغذائي. وتوصف هذه التعديلات التقنية بأنها حلول محتملة للامتثال للتحديات الحديثة لمبدأ 3R (الاستبدال والتخفيض والصقل) وتحسين التجارب الحيوانية باستخدام النماذج الحيوانية الكبيرة22.

Protocol

وقد صممت هذه الدراسة وفقا لمبادئ وصول (البحوث الحيوانية: الإبلاغ عن التجارب في فيفو) المبادئ التوجيهية23. وأجريت التجارب وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية والقانون الاتحادي الألماني فيما يتعلق بحماية الحيوانات. تمت الموافقة على الاقتراح الأخلاقي الكامل من قبل السلطات المسؤولة (اللجنة الحكومية لرعاية الحيوانات واستخدامها، LANUV NRW - "Landesamt für Natur، Umwelt und Verbraucherschutz Nordrhein-Westfalen"، Recklinghausen، ألمانيا، معرف البروتوكول: 81-02.04.2018.A051). تلقت جميع الحيوانات في هذه الدراسة رعاية إنسانية وفقا لمبادئ دليل رعاية واستخدام المختبرات (الطبعة الثامنة، منشور المعاهد القومية للصحة، الولايات المتحدة الأمريكية) والتوجيه 2010/63/EU بشأن حماية الحيوانات المستخدمة في الأغراض العلمية (الجريدة الرسمية للاتحاد الأوروبي، 2010). تم الحصول على الخنازير الألمانية من تربية الحواجز المحسنة صحيا (Heinrichs GbR، هاينسبرغ، نوردرهاين - Westfalen). 10- ويصور الشكل 1 ملخص البروتوكول التجريبي الموصوف.

1- الحيوانات والسكن

  1. استخدام الخنازير إناث الأراضي الألمانية (أو مماثلة) لهذا البروتوكول. تسليم الحيوانات إلى منشأة البحوث 14 يوما قبل الجراحة الأولى (زرع القياس عن بعد) للتأقلم وسكن لهم في بيئة حاجز درجة الحرارة والرطوبة التي تسيطر عليها مع 12 ساعة دورة خفيفة وداكنة ( الشكل 2).
  2. جبل اثنين من أجهزة الاستقبال القياس عن بعد على سقف الغرفة التي تسمح بنقل البيانات المسجلة مباشرة إلى جهاز كمبيوتر موجود في غرفة المراقبة. ضمان أن الحيوانات يتم ملاحظتها بصريا خلال الزيارات المنتظمة من قبل ضباط البيطرية ومن قبل حارس الحيوان المسؤول (كل 8 ساعة وعند الطلب).
    ملاحظة: علاوة على ذلك، في هذه التجربة تم استخدام لقطات كاميرا في الوقت الحقيقي مع التصوير الحراري المتكاملة المتصلة بالشبكة المحلية. وترد تفاصيل مرفق الإسكان المستخدم في هذه الدراسة في الشكل 2.

2- التقنيات الأساسية والإجراءات المشتركة

  1. سرع الحيوانات بين عشية وضحاها قبل الجراحة.
  2. Premedicate عن طريق حقنة عضلية أولية من الأزابرون (4 ملغ / كغ) والأتروبين (0.1 ملغ / كغ) ، تليها حقن الكيتامين (15 ملغ / كغ) 10 دقيقة في وقت لاحق.
  3. بعد التطبيب المسبق ، قم بوزن الحيوان ونقله مباشرة من مرفق الإسكان إلى غرفة إعداد التخدير في منشأة أو CENTRAL.
  4. Cannulate واحدة من الأوردة الأذن الكبيرة باستخدام قسطرة الوريدية الطرفية 18 G. مراقبة الحيوان من قبل تخطيط القلب القياسية وقياس النبض.
  5. بدء التخدير مع بروبوفول (3 ملغ / كغ).
  6. اكشف الحبل الصوتي بمنظار الحنجرة وأدخل أنبوب انتراراخي 7.5 مم. يتم حظر الكفة مع الهواء وفقا لتوصيات الشركة المصنعة.
  7. أدخل أنبوب تصريف أورو معدية لإزالة السوائل والهواء من المعدة.
  8. أدخل قسطرة بولية عبر مجرى البول.
  9. في وقت لاحق، تقليم الجلد في منطقة الشق الجراحي.
  10. تطبيق مرهم العين لمنع تجفيف القرنية أثناء الجراحة.
  11. بعد النوبات الأوروتراشية، والحفاظ على التخدير مع ايزوفلوران (النهائي انتهائي 1.45-2.0 المجلد٪) والفنتانيل (3 -7.5 ميكروغرام / كغ / ساعة).
  12. ضمان التحكم في درجة الحرارة النشطة داخل العملية للحيوان بواسطة وسادة التدفئة واستخدام الهواء الدافئ. إدراج مسبار المستقيم لرصد درجة حرارة الجسم (درجة الحرارة المستهدفة 36.5 درجة مئوية - 37.5 درجة مئوية).
  13. إدارة المضادات الحيوية الوقاية باستخدام cefuroxime (35 ملغم / كغ i.v.). محلول Infuse Ringer في 4 مل / كغ / ساعة وزيادة إلى 8 مل / كغ / ساعة بعد شق الجلد. إدارة جرعة وقائية من بانتوبرازول (40 ملغ i.v.) على وصول الوريد الأذن.
  14. إجراء جميع العمليات الجراحية في ظل ظروف معقمة وفقا للمبادئ العامة للsisepsis الجراحية وداء. تطهير الحقل الجراحي مع محلول بوديوني اليود وتغطية مع الستائر الجراحية.

3- زرع القياس عن بعد

  1. إعداد الحيوان لعملية جراحية بعد الخطوات الموضحة في القسم 2 من البروتوكول وتأكيد التخدير السليم عن طريق انخفاض معدل ضربات القلب وعدم وجود حركة واعية للحيوان.
  2. جمع عينات الدم والبول لتحديد القيم المعملية الأساسية الفردية.
  3. وضع علامة على مواقع الشق باستخدام علامة دائمة.
  4. لزرع جهاز استشعار الشرياني من جهاز الإرسال والاستقبال عن بعد، وإجراء شق 3-4 سم في الفخذ. كشف وتشريح الشريان في 360 درجة بطريقة.
  5. باستخدام المشبك Overholt سحب من خلال حلقات اثنين من السفينة تحت الشريان وتأمين لهم المشابك البعوض.
  6. بعد إجراء عملية استئصال الشرايين باستخدام مشرط #11 شفرة، أدخل جهاز استشعار الشريان. أغلق عملية استئصال الشرايين باستخدام خياطة البولي بروبلين 5-0 مع خياطة عقدة واحدة وتأمين جهاز استشعار الشريان باستخدام واحدة من هذه الغرز.
  7. جعل شق كبير 3-4 سم على الجناح الأيسر من الحيوان وخلق الحقيبة تحت الجلد للمستجيب عن طريق تشريح حادة.
  8. نفق جهاز الإرسال والاستقبال عن بعد إلى الجناح وإصلاحه إلى الفوسية العضلات (3-0 البولي بروبلين، عقدة واحدة). نفق أقطاب ECG الحمراء والبيضاء إلى الجانب الأيمن والأيسر من الصدر. جعل شقين 1 سم وتأمين الأقطاب الكهربائية في الأنسجة العضلية لضمان إشارة تخطيط القلب جيدة مع الغرز عقدة واحدة (3-0 بوليلاكتين).
  9. ابدأ تسجيل بيانات القياس عن بعد وتحقق من الإشارات المختلفة (على سبيل المثال، درجة حرارة الجسم المسجلة من قبل الجسم المُستجيب نفسه، وضغط الدم الشرياني، وإشارات تخطيط القلب).
  10. إغلاق الشقوق في الفخذ، على الجناح الأيسر واثنين من شقوق الصدر الصغيرة باستخدام العضلات والخيوط تحت الجلد (3-0 البوليلاكتين) وإغلاق الجلد باستخدام خياطة أحادية غير قابلة للامتصاص (على سبيل المثال، 2-0 برولين).
  11. استخدام رذاذ فيلم خلع الملابس لختم مواقع شق.
  12. في هذه المرحلة الزمنية إعداد الحيوان لارتداء سترة porcine المعينة التي يرتديها الحيوان لبقية فترة الدراسة. استبدل السترات بسترة نظيفة بعد كل عملية جراحية.
    ملاحظة: لتسجيل بيانات خط الأساس مستقرة، يتم زرع أجهزة الإرسال والاستقبال عن بعد 14 يوما قبل جراحة مؤشر (استئصال الكلية الأيسر، يرجى أيضا انظر المناقشة).

4. استئصال الكلية واسترجاع الكسب غير المشروع في الكلى

  1. إعداد الحيوان لجراحة استرجاع الكسب غير المشروع بعد الإجراءات الموضحة في القسم 2.
  2. بعد تحريض التخدير، cannulate الوريد الوداجي الخارجي. بعد التطهير العقيم للحقل الجراحي، يتم إجراء شق 4 سم على الجانب الأيمن في الأخدود الوداجي.
  3. تشريح الأنسجة تحت الجلد والعضلات لفضح الوريد الوداجي الخارجي.
  4. كشف وتشريح الوريد في 360 درجة بطريقة.
  5. باستخدام المشبك Overholt سحب من خلال حلقات اثنين من السفينة تحت الوريد وتأمين لهم المشابك البعوض.
  6. نفق القسطرة الوداجية إلى الجزء الخلفي من الحيوان. لهذا، ضع الخنزير على جانبه الأيسر. استخدم طريقة Seldinger لإدخال القسطرة الوداجية.
  7. أغلق الفتحة على الوريد واضمن القسطرة باستخدام خياطة البولي بروبلين 5-0.
  8. أغلق الشق في طبقتين (على سبيل المثال، 3-0 بوليلاكتين للعضلات وتحت الجلد و 2-0 بولي بروبلين للجلد).
  9. تأمين القسطرة إلى الجلد مع الغرز متعددة (2-0 البولي بروبلين).
  10. اختبر قسطرة الوريد الوداجي للحصول على الطموح المجاني والحقن. في وقت لاحق، قم بتبديل الخط الوريدي من قنية الوريد إلى الخط الوريدي المركزي.
  11. بعد التطهير الجراحي واللف، قم بإجراء عملية استئصال البطن المتوسطة لفتح البطن (25-30 سم). استخدم مُعدِّلًا قياسيًا للبطن لفضح المجال الجراحي.
  12. استخدام المناشف الرطبة والدافئة في البطن لتغطية القولون والأمعاء الدقيقة. اطلب من المساعد الثاني أن يمسك الأمعاء باتجاه البطن الهيمي الأيمن الذي يعرض الكلى وهياكلها الوعائية.
  13. فتح طبقة البريتوني وتشريح الكلى اليسرى والكالب من أي الأنسجة الملتصاق باستخدام الكي monopolar, ملقط ثنائي القطب, ومقص غرامة.
  14. Ligate وتقسيم الحالب الأيسر (3-0 البوليجلاكتين) ترك ما لا يقل عن 10 إلى 12 سم قطعة طويلة.
  15. استكمال تشريح الوريد الكلوي الأيسر (ق) والشريان لأصلهم من الوريد السفلي والكافا الأبهر، على التوالي.
    ملاحظة: تجنب إصابة وفتح الأوعية اللمفاوية الكبيرة في هذه المنطقة التشريحية. أيضا أن تكون على بينة من إصابة محتملة للوريد azygo-lumbar الانضمام إلى الوريد الكلوي بالقرب من أصله من الكافا فينا.
  16. تشريح وligate الوريد azygo-lumbar بين اثنين من الأربطة (3-0 البوليجلاكتين).
  17. الاستعداد لتشريح الطاولة الخلفية باستخدام وعاء من الثلج وغطاء معقمة.
  18. لاسترداد الكلى الكسب غير المشروع، المشبك الشريان الكلوي والوريد الكلوي على مقربة من الشريان الأورطي والكافا vena مع المشابك الوعائية. إزالة الكسب غير المشروع للكلى عن طريق قطع الأوعية مع مقص قريب من المشابك ثم تسليم الكلى إلى فريق الطاولة الخلفية.
  19. إغلاق جذع الشريان الكلوي باستخدام خياطة البولي بروبلين 5-0. أغلق الوريد الكلوي باستخدام خياطة مستمرة من طبقتين مع 5-0 بولي بروبلين. إزالة المشابك الوعائية.
  20. بعد التحقق من المنطقة بحثا عن نزيف أو تسرب اللمفاوي، أغلق البطن في 4 طبقات.
    ملاحظة: البريتونيوم: 3-0 البوليجلاكتين تشغيل خياطة. اللفافة: 0 البوليجلات تشغيل خياطة; طبقة تحت الجلد: 3-0 البوليجلاكتين تشغيل خياطة. الجلد: دباسات الجلد بعد جراحة استرداد الكلى، لتسهيل إعادة فتح البطن في اليوم التالي و 2-0 البولي بروبلين خياطة عقدة واحدة بعد إجراء زرع لإغلاق نهائي.
  21. بعد تطبيق تضميد الجرح العقيم، والعودة إلى مرفق الإسكان والسماح للتعافي بعد اضماب endotracheal. للاكتئاب بعد الجراحة، استخدم البوبرينورفين (0.05 - 0.1 ملغ/ كغ) عضلياً كل 8 ساعات حتى زرع السيارات.

5. الطاولة الخلفية والحفاظ على الجهاز

  1. بعد استرجاع الكسب غير المشروع، على الفور cannulate الشريان الكلوي باستخدام معيار 14 G (البرتقالي) قسطرة الطرفية وإصلاحه باستخدام tourniquet أعدت من 3-0 البوليجلاكتين.
  2. شطف الكلى مع محلول الحفاظ على الجهاز البارد.
  3. بعد التنظيف مع 500 مل من الجهاز الحفاظ على الحل، وإزالة كانية الشرايين، والتفاف الكسب غير المشروع في الكلى في أكياس الأعضاء العقيمة وتخزينها في الجهاز الحفاظ على حل مع وقت نقص تروية الباردة المستهدفة (CIT) من 24 ساعة في 4 درجة مئوية باستخدام دائرة التبريد التي تسيطر عليها الكمبيوتر.
    ملاحظة: يوصى بمسح قصير بعد الحفظ باستخدام محلول ملحي طبيعي 500 مل من 4 درجات مئوية.

6. استئصال الكلية اللاتينية وزراعة الكلى التقويمية

  1. أثناء عملية المتلقي، والتكيف قبل الطبية والتخدير الأولي إلى التمثيل الغذائي الكلوي المقيد وتجنب استخدام الكيتامين. يتم إجراء الحث مع البروبوفول (3-5 ملغم / كغ i.v.) ، midazolam (0،25 ملغم / كغ i.v.) ، والأتروبين (0.1 ملغ / كغ i.m). وبعد ذلك، فإن التحضير قبل الجراحة مطابق للإجراءات الموصوفة في الفرع 2.
  2. الحفاظ على التخدير مع isoflurane (النهائي منتهية 1.45-2.0 المجلد٪) والفنتانيل (3-7،5 ميكروغرام / كغ / ساعة) وبروبوفول (2 - 4 ملغم / كغ / ساعة).
  3. فحص ورصد مستمر ECG، قياس أكسدة النبض، درجة حرارة المستقيم ووظيفة جهاز الإرسال والاستقبال عن بعد.
    ملاحظة: التخدير الصارم والسيطرة على ضغط الدم أمر بالغ الأهمية أثناء عملية الزرع.
  4. في حالات نادرة حيث إشارة ضغط الدم الشرياني المسجلة عبر جهاز الإرسال والاستقبال عن بعد غير مرضية بسبب موقف supine من الحيوان، ووضع قسطرة إضافية الشرياني في الشريان الفخذي الأيمن باستخدام ثقب عن طريق الجلد وتقنية Seldinger.
  5. بعد اللف العقيم، أعد فتح البطن المتوسط وفضح المجال الجراحي باستخدام المناعد البطني. يتم وضع القولون والأمعاء الدقيقة على الجانب الأيسر من البطن لفضح الكلى اليمنى سليمة.
  6. على غرار الإجراء المانح، تشريح الكلى contra-lateral وسفنها من الأنسجة المحيطة بها. تشريح الوريد الكلوي الأيمن والشريان الكلوي في اتجاه هيلوم الكلى لضمان طول السفينة كافية لالاستئصال.
  7. 5 دقائق قبل لقط الأوعية الدموية، وحقن الناتيوم-الهيبارين عن طريق الوريد (100 وحدة ائية/ كغ).
  8. المشبك الشريان الكلوي الأيمن والوريد الكلوي الأيمن باستخدام المشابك الوعائية. تتم إزالة الكلى اليمنى. يتم التحقق من سلامة السفن قبل بدء anastomoses.
  9. ضع الكلى غير المشروع المحفوظة في البطن وابدأ في أنستووز الوريدي والشري.
  10. من هذه النقطة فصاعدا، والحفاظ على الضغط الشرياني المتوسط أكثر من 80-90 ملم زئبق لضمان ضخ جيد في وقت مبكر من الكسب غير المشروع في الكلى بعد reperfusion. تحقيق ذلك جزئيا عن طريق إدارة حجم كافية وجزئي من خلال إدارة النورادرينالين (0.1 - 1.0 ميكروغرام / كغ / دقيقة كضخ مستمر باستخدام متوسط ضغط الدم الشرياني ومعدل ضربات القلب لمراقبة الكفاءة).
  11. أداء استئصال الأوعية الدموية من نهاية إلى نهاية الوريد الكلوي:
    1. بعد وضع اثنين من غرز الزاوية باستخدام البولي بروبلين 5-0، خياطة الجدار الخلفي بطريقة مستمرة.
    2. التعادل في غرزة الزاوية القحفية وربطها جنبا إلى جنب مع الخيط المستخدمة للجدار الخلفي.
    3. بعد الانتهاء من الجدار الخلفي، استخدم غرزة الزاوية القحفية لخياطة الجدار الأمامي في اتجاه القحف السد. دافق الوريد بمحلول ملحي (100 I.U./mL). ربط غرزة الزاوية السدية.
      ملاحظة: في حالة عدم تطابق حجم بين الجهات المانحة والمتلقية، يمكن استخدام عامل نمو صغير لضمان وجود اسيستومسيس واسع وكافي. هناك العديد من الاختلافات المحتملة من فروع الوريد الكلوي بورسين. في حالة التشريح الوريدي المعقد ، من الضروري اتباع نهج اناستوموسي معدل (انظر الشكل 3).
  12. إجراء استئصال الأوعية من نهاية إلى نهاية الشريان الكلوي:
    1. استخدم غرزة ركن القحفية البولي بروبلين 6-0 لإجراء التهاب الأوعية الشريانية. وضع مزيد من الcaudal، ودعم غرزة الزاوية التي تتم إزالتها في وقت لاحق، هو اختياري.
    2. خياطة الجدار الخلفي بطريقة مستمرة باستخدام تقنية المظلة. بعد وصوله إلى الزاوية السدية إزالة غرزة الزاوية الثانية (إن وجدت).
    3. خياطة الجدار الأمامي مع الطرف الآخر من خياطة البولي بروبلين مزدوجة الذراعين 6-0. دافق الشريان بمحلول ملحي heparinized (100 I.U./mL). ربط الخيوط اثنين في الزاويةcaudal.
  13. تسجيل الوقت اللازم لأداء كل من anastomoses مع وقت الإقفار الدافئة المستهدفة من <40 دقيقة.
  14. إعادة زرع الكلى عن طريق فتح المشبك الوعائي الوريدي وبعد ذلك المشبك الشرياني. تحقق من وجود نزيف كبير.
  15. إذا لم يلاحظ أي نزيف كبير من أنستوموز، فك الكسب غير المشروع في الكلى وصب محلول ملحي طبيعي دافئ في البطن يغطي الكسب غير المشروع.
  16. إعادة وضع الكسب غير المشروع، إذا لزم الأمر، لضمان reperfusion متجانسة وتجنب الازدحام.
  17. إدارة بابافيرين موضعيا إلى خارج الشريان الكلوي وosistomosis الشرياني (5 مل غير مخفف).
  18. بعد reperfusion، ضخ 250 مل من 20٪ محلول الجلوكوز للحث على ديريسيس التناضح تليها إدارة جرعة واحدة من 80 ملغ من فوروسيميد.
    ملاحظة: بعد ذلك، يمكن ملاحظة إنتاج البول الأولي.
  19. لضمان الصرف البولي، تمرير قسطرة البول للأطفال الفرنسية 12 من خلال جدار البطن من الجناح الأيمن من الحيوان، و retroperitoneally.
  20. تأمين القسطرة في الحالب باستخدام الأربطة (2-0 بوليلاكتين) ومنع القسطرة مع 2 مل المالحة. وتستخدم خياطة أخرى للتكيف وتأمين الحالب إلى الصفاق من جدار البطن (2-0 البولي بروبلين). يتم تأمين القسطرة أيضا إلى الجلد مع اثنين على الأقل من الغرز عقدة واحدة (2-0 البولي بروبلين).
  21. أغلق طبقة الصفاق فوق الكلى لمنع خلع ترقيع الكلى وتشابك أنستووز الأوعية الدموية (3-0 بوليجلاكتين).
  22. أغلق البطن بطريقة مماثلة من 4 طبقات كما هو موضح في وقت سابق لاسترجاع الكسب غير المشروع.
  23. بعد إغلاق البطن، والحفاظ على normothermia على طاولة OR.
    ملاحظة: ينبغي الحفاظ على ضغط الدم الشرياني المتوسط أكثر من 80 ملم زئبق حتى يكون الحيوان مستيقظاً ويكون في وضع عرضة.
  24. بعد إغلاق البطن، واستخدام اللون دوبلر الموجات فوق الصوتية لضمان كافية الشرياني وريدي في ضخ الكلى الكسب غير المشروع(الشكل 4). مراقبة الحيوان عن كثب حتى يكون مستيقظا تماما ويمكن المشي والشراب تلقائيا. تعطى الحيوانات 1 L من الحل رينجر خلال مرحلة الانتعاش.
  25. في وقت لاحق، والعودة إلى مربع الحيوان في مرفق الإسكان.

7- المتابعة، العينة وجمع البيانات

  1. توفير الحيوانات المياه الإعلانية libitum في أقرب وقت لأنها يمكن أن تشرب تلقائيا. توفير المواد الغذائية الصلبة من يوم ما بعد الجراحة 1.
  2. للاكتئاب بعد الجراحة، وإعطاء buprenorphine (0.05 - 0.1 ملغ / كغ) العضلي كل 8 ح لمدة 72 ساعة، وإعطاء pantozol (40mg i.v.) مرة واحدة في اليوم لمدة 72 ساعة. توفير العلاج بالمضادات الحيوية (cefuroxime 35 ملغم / كغ i.v. 2x يوميا) والتكفير الخثار (500 ملغ من حمض أسيتيل الساليسيليك من اليوم 1 بعد العملية) خلال فترة المراقبة بأكملها حتى نهاية التجربة.
    ملاحظة: إذا حدثت مضاعفات النزيف، يتم إيقاف الأسبرين.
  3. تسجيل بيانات القياس عن بعد المستمر طوال فترة المراقبة. تأكد من أن يتم زيارة الحيوانات على الأقل كل 8 ساعة من قبل الضابط البيطري و / أو من قبل فني بيطري من ذوي الخبرة ويتم تقييم حالتهم السريرية باستخدام ورقة النتيجة التي تستخدم كأساس لإنهاء التجربة قبل الأوان إذا كان ذلك مطلوبا من قبل الشرط السريري للحيوان.
    ملاحظة: هذه ما يسمى معايير نقطة النهاية الإنسانية يتم تعريف كما هو موضح سابقا24.
  4. قم بإجراء جمع العينات اليومي باستخدام الخط الوريدي المركزي والقسطرة البولية عن طريق الجلد. تغيير أكياس البولية (2000 مل) 2x يوميا.
  5. بعد جمع العينات أو إدارة السوائل أو الأدوية ، قم بحظر القسطرة الوريدية المركزية بمحلول ملحي heparinized (100 I.U./mL) بين كل استخدام لتجنب الانسداد وتغطيته بغطاء معقمة جديد.
  6. بعد فترة المراقبة المقابلة من 5 إلى 7 أيام ، تضحية الحيوانات في التخدير العميق بعد الرلاة ، وجمع العينات وزراعة طعم الكلى. يتم تنفيذ التضحية باستخدام حقنة واحدة من pentobarbital (50 -60 ملغ / كغ i.v.).
    ملاحظة: وامتثالا لمبدأ 3R، يمكن استخدام الأجهزة والأنسجة المتبقية من الحيوانات المضحى لأغراض مختلفة البحوث والبحوث في المؤسسات التعليمية السابقة في المعاهد الداخلية.

Representative Results

لدينا مجموعة عدة سنوات من الخبرة مع نماذج زرع الأعضاء الصلبة في الحيوانات الصغيرة والكبيرة، وتستخدم porcine تقويم العظام الكلى نموذج زرع السيارات، والحصول على نتائج استنساخها في مختلف الإعدادات التجريبية16،25،26،27. اعتمادا على الإعداد التجريبي، نوصي بإجراء 3 إلى 5 عمليات زرع السيارات كالتجارب الأولية التي تضمن منحنى التعلم كافية للفريق التجريبي بأكمله. في الوضع الحالي كان مطلوبا 5 عمليات زرع لتدريب جراح، مع 8 سنوات من التجارب السابقة- و 5 سنوات من الخبرة الجراحية السريرية في مجال جراحة زرع، في إجراء هذه التجارب. هذا يمكن أن تختلف تبعاً للتعرض السابق للجراح لهذه التقنيات.

ضمن أطر هذا البروتوكول، يتم عرض نتائج مجموعة من 5 تجارب زرع الكلى الترابع العظمي. وكان زرع جهاز الإرسال والاستقبال ناجحا في كل مع إشارات كافية القياس عن بعد طوال فترة المراقبة (باستثناء واحد مع خلل جزئي في جهاز الإرسال والاستقبال). وكان الفاصل بين السكين والجلد لزرع جهاز الإرسال والاستقبال 85 دقيقة ± 5 دقائق(الجدول 1). بعد استرجاع الكسب غير المشروع، تعافت جميع الحيوانات بشكل جيد في مرفق الإسكان. كان الفاصل الزمني من السكين إلى الجلد لجراحة الاسترجاع 135 دقيقة ± 32 دقيقة (بما في ذلك حوالي 30-45 دقيقة للإدخال والنفق وتأمين القسطرة الوداجية). تم تخزين الكلى اليسرى في حمام الماء البارد مع وقت نقص التروية الباردة المستهدفة من 24 ساعة (24 ساعة ± 30 دقيقة). في اليوم التالي، بعد تحريض التخدير وrlaparotomy، تمت إزالة الكلى contralateral (يمين) تليها عملية زرع السيارات في العظام من الكسب غير المشروع الكلى الأيسر المخزنة الباردة كما وصف في وقت سابق. كان الفاصل الزمني من السكين إلى الجلد لجراحة الزرع التلقائي 168 دقيقة ± 27 دقيقة (بما في ذلك استئصال الكلى اليمنى). دافئة الإقفاريّة وقت كان 34 [مين] ± 7 [مين]. وكان كل زرع الكسب غير المشروع في الكلى الحد الأدنى ولكن إنتاج البول مباشرة بعد reperfusion. بعد إغلاق البطن، وأظهرت لون دوبلر الموجات فوق الصوتية مرضية الشرياني وريدي في كل من الكلى في جميع الحالات (الشكل 4). وقد شفيت جميع الحيوانات من التخدير ولم تلاحظ أي مضاعفات كبيرة طوال فترة المراقبة. وتم جمع عينات يومية من الدم والبول. وكانت جميع الخنازير في حالة سريرية جيدة خلال المتابعة، وتم التضحية بعد 5 أيام. بلغت قيم كرياتينين الدم والبوتاسيوم ذروتها في POD3-4. وقد بقي الرقم الH الدم ضمن النطاقات الطبيعية (الشكل 5). تعافى خرج البول إلى القيم الطبيعية خلال الأيام الأربعة الأولى بعد الجراحة. وقد زاد عدد خلايا الدم البيضاء قليلا في نهاية فترة المتابعة (الشكل 5). وأظهرت درجة حرارة الجسم، التي تقاس برصد القياس عن بعد المستمر، تقلبات طفيفة خلال فترة ما بعد الجراحة.

Figure 1
الشكل 1: مخطط انسيابي للدراسة وبروتوكول. الاختصارات المستخدمة: يوم POD-بعد العملية الجراحية؛ و 1000000000000000000000 تخطيط القلب الكهربية في القلب. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 2
الشكل 2: مرفق الإسكان الحيواني مع رصد القياسعن بعد في الوقت الحقيقي والمستمر من ما يصل إلى 6 حيوانات. (أ) مخطط تخطيطي لمرفقنا مناسبة لرصد السكن والقياس عن بعد من الحيوانات تصل إلى 6. تم تحديد حجم صناديق الحيازة الواحدة بناءً على المبادئ التوجيهية لتوجيه الاتحاد الأوروبي 2010/63 و ETS 123 Appendix A. لوحات A-E إظهار صور تمثيلية لتنظيم مرفقنا. (ب) غرفة الحيوانات لإسكان 6. (C)غرفة المراقبة مع جهاز كمبيوتر يستخدم للتسجيل المستمر لبيانات القياس عن بعد. (D) فيديو في الوقت الحقيقي ولقطات حرارية للحيوانات. (هـ) عقد فردي يضمن الاتصال الصوتي والحاسم للحيوانات مع مرافقيها لتجنب العزلة الاجتماعية. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 3
الشكل 3: العظام الكلى زرع السيارات والاختلافات التشريحية وإمكانيات إعادة الإعمار. (أ،ب) الخطوات من تقويم العظام الكلى نموذج زرع السيارات في حالة "معيار" تشريح الأوعية الدموية. (C)الاختلاف 1: في حين أن الوريد أكبر واحد يأتي مع الكلى المانحة، وهناك اثنين من الأوردة على الجانب المتلقي. الإدارة: يتم إغلاق الوريد الأصغر عن طريق ربطة عنق ويتم تنفيذ التهاب الأوعية الدموية من النهاية إلى النهاية بين الأوردة الكلوية. (D)الاختلاف 2: بينما يأتي الوريد الأكبر مع الكلى المانحة، لا يوجد وعاء مستلم مناسب على الجانب الآخر (على سبيل المثال، عدم تطابق الحجم). الإدارة: نهاية إلى جانب منظار الوريد الكلوي إلى الوريد السفلية الكافا. (E) الاختلاف 3: عروقين متشابهين على كلا الجانبين. الإدارة: إعادة الإعمار من قبل اثنين من anastomoses الوريدية. (F) الاختلاف 4: في حين أن اثنين من الأوردة ذات الحجم المماثل تأتي مع الكلى المانحة، لا يوجد وعاء المتلقي مناسبة على الجانب contralateral. الإدارة: نهاية إلى جانب منظار الوريد الكلوي إلى الوريد السفلي في حالة اثنين من الأوردة الكلوية. (G)الاختلاف 5: الكلى المانحة يأتي مع الوريد تظهر التشعب في وقت مبكر، في حين أن هناك وريد واحد كبير على الجانب المقابلة. الإدارة: إنهاء إلى إنهاء الورم القذري للقناة الشائعة القصيرة للوريد الكلوي المتبرع مع وريد واحد كبير على الجانب المتلقي. (H) الاختلاف 6: في حين أن الكلى المانحة تأتي مع وريد كلوي واحد مع تشعب مبكر ، لا يوجد وعاء مناسب للمستلم على الجانب المقابل. الإدارة: نهاية إلى جانب anastomosis من القناة المشتركة القصيرة للوريق الكلوي المانحة إلى الكافا الوريدي السفلي. هذا الرقم يصور حفنة من الاختلافات أكثر تواترا وليس شاملا إحصائيا من حيث جميع الاختلافات الممكنة في الخنازير landrace الألمانية. الاختصارات المستخدمة: KG-الكلى الكسب غير المشروع; RK-الحق في الكلى; IVC-السفلي فينا الكافا; AO-الشريان الأورطي يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 4
الشكل 4: لون تمثيلي دوبلر صور الموجات فوق الصوتية، مباشرة بعد زرع الكلى التقويمي وإغلاق البطن. (أ)يتم إجراء الموجات فوق الصوتية دوبلر اللون مباشرة بعد زرع الكلى وإغلاق البطن، لضمان جيدة الشريانية وريدي الضخ من الكسب غير المشروع في الكلى ولفحص لداء الأوعية الدموية المحتملة. كما تم استخدام الموجات فوق الصوتية يوميًا وبناءً على الطلب ، استنادًا إلى الأداء السريري للحيوان لفحص المشاكل المختلفة. (B-E) صور الموجات فوق الصوتية التمثيلية لرقم الكلى بعد الزرع. صورة الكسب غير المشروع للكلى مع وبدون دوبلر اللون (B, C) يظهر الشرايين ممتازة (D) و وريدية (E). هذا الرقم يظهر صور ممثل من نفس الحيوان. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 5
الشكل 5: نتائج المختبر التمثيلي وبيانات القياس عن بعد لنموذج زرع الكلىالتلقائي لتقويم العظام مع وقت نقص التروية البارد من 24 ساعة. (أ) مصل قيم البوتاسيوم (ب) مصل القيم الكرياتينين (C) pH (D) خلايا الدم البيضاء عدد (WBC) (E) البول الناتج. (F)متوسط درجة حرارة الجسم المسجلة عن طريق الرصد عن بعد طوال فترة المراقبة في أربع عمليات زرع كلية متتالية (لا توجد بيانات مقدمة من الحيوانالخامس بسبب الخلل الجزئي في جهاز الإرسال والاستقبال). الاختصارات المستخدمة: يوم POD-بعد العملية الجراحية. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 6
الشكل 6: أمثلة على المضاعفات المحتملة شبه العملية والمزالق. (A-C) احتقان ما بعد الجراحة من زرع الكلى الكسب غير المشروع على POD3 بعد عملية زرع السيارات كيندي تقويم العظام. (D) تم تحديد سبب الازدحام على أنه اتحام القسطرة بسبب خياطة مفرطة على مستوى الجلد. بعد إعادة تعديل خياطة الازدحام حل تماما تقريبا في 24 ح. (E) هنا يتم عرض الكسب غير المشروع الكلى الأخرى على POD2 التالية زرع الكلى لصناعة السيارات في العظام. Asterix (*) يظهر مجموعة السوائل حول تحت القطب من الكسب غير المشروع (جمع الدموية مقابل lymphocele). بسبب أسلوبنا مع إغلاق الصفاق على الكلى هذه المجموعات عادة ما تكون ذاتية الحد بسبب الآثار المفيدة للضغط المحلي. يجب مراقبة الحيوانات عن كثب من حيث الاكتشاف المحلي أو علامات النزيف أو العدوى. (F)مؤهل لون دوبلر الموجات فوق الصوتية التي تجرى يوميا (وعلى الطلب) في مرفق الإسكان لديها، إلى جانب استخدامها الأكاديمية (على سبيل المثال، وثائق، وتسجيل مؤشرات مقاومة الشرايين)، دورا حاسما التشخيص في التعرف على المضاعفات المحتملة في مرحلة تحت كلينيكية في وقت مبكر. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

مهمة تجريبية/ خطوة أيام الوقت (دقيقة) الجراح موظف بيطري فني بيطري فني مختبر طالب الدكتوراه مجموع
Nr
الرعاية السابقة للprepreative مد-29 إلى مد-15 ن.أ. 1 1 1 3
جراحة زرع عن بعد مد-15 85±5 1 1 1 1 1 5
الرعاية بعد الجراحة بعد زرع القياس عن بعد مد-15 إلى مد-1 ن.أ. 1 1 1 3
جراحة استرجاع الطعوم مد-1 135±32 1 2 1 2 2 8
جراحة زرع الكلى التلقائي دال 0 168 ±27 1 2 1 2 2 8
الرعاية بعد الجراحة بعد زرع الكلى تلقائيًا من 0 إلى دال 5 ن.أ. 2 1 2 5
التضحيه دال 5 ن.أ. 2 1 1 4

الجدول 1- الانبعاثات 1000 وصف الموارد البشرية المطلوبة والجداول الزمنية لأداء مختلف الخطوات التجريبية لنموذج زرع الكلى بورسين لصناعة السيارات.

Discussion

نموذج porcine من KT يسمح للتحقيق في الأساليب العلاجية الجديدة والأجهزة الطبية في إعداد الحيوانية كبيرة ذات الصلة سريريا15,17,21. يمكن التشابه التشريحي والفيزيولوجي المرضي والجراحي التقني بين البورسين والإعداد البشري تسهيل التفسير السريري للبيانات والترجمة السريعة للنتائج والتقنيات إلى الاختبارات السريرية15،16،17،18،19،21.

نموذج زرع الكلى التقويمي لا يتوافق فقط مع مبدأ 3R من خلال تقليل أعداد الحيوانات المطلوبة مقارنة بزراعة الكلى ، على سبيل المثال لا يوجد متبرع منفصل مطلوب ، ولكنه يوفر أيضًا فرصة فريدة للتحقيق في آثار IRI وإصابة الحفظ دون الآثار المحيرة للإستجابة المناعية والأدوية المثبطة للمناعة17،21.

تعديلات طفيفة للبروتوكول تسمح نموس مجموعة واسعة من الحالات السريرية. لتقليد KT باستخدام التبرع بعد الوفاة الدورة الدموية (DCD) الكلى، يتم تثبيت هياكل الأوعية الدموية لمدة 30 إلى 60 دقيقة في الموقع قبل استرداد الكلى، في حين أن فترات نقص التروية الباردة المطولة (24 ساعة وأطول) يمكن تطبيقها لنموذج إصابة المحافظة على نطاق واسع16،17،28،29.

على الرغم من أن نموذج KT porcine هو جراحيا أقل تحديا من نماذج زرع الأعضاء الصلبة في الحيوانات الصغيرة (مثل الفئران والجرذان)26، وهناك جوانب فنية متعددة والمزالق التي يجب أن يوضع في الاعتبار لتحسين النتائج وتجنب مضاعفات محددة17.

الفشل في تجنب الأوعية اللمفاوية الكبيرة حول الكافا الوريدي السفلي والأبهر خلال استرجاع الكسب غير المشروع أو زرع بسبب خطأ فني أو الاختلافات التشريحية، يمكن أن يؤدي إلى ناسور اللمفاوية الناتجة العالية وجمع السوائل في البطن بعد العملية الجراحية، والعدوى، والفشل التقني المحتمل. وينبغي تجنب الأوعية اللمفاوية تماما أثناء الجراحة أو مغلقة مع 5-0 أو 6-0 خياطة البولي بروبلين. ومن الحكمة أيضا تجنب استخدام ثنائي القطب أو أي جهاز تخثر آخر في حالة تسرب اللمفاوية. وعادة ما يؤدي إلى تفاقم الوضع. في حالة تسرب اللمفاوي منخفض الإخراج ، يتمتع فريقنا بخبرة جيدة في تطبيق بقع الكولاجين القائمة على الفيبرين (على سبيل المثال ، Tachosil)30، ومع ذلك ، فإن تكلفتها العالية تحد من تطبيقها في هذا الإعداد.

في هذا البروتوكول نبرهن على نهج transperitoneal لاسترجاع الكلى وزرع السيارات. هذا هو الفرق التقني الرئيسي بالمقارنة مع الحالة السريرية، حيث يتم زرع عادة الطعوم الكلى في fossa الحرقفي باستخدام نهج خارج الصفاق. على الرغم من أن معظم المجموعات استخدام transperitoneal ونهج تقويم العظام في نموذج porcine، زرع غير متغايرة لfossa الحرقفي من الممكن أيضا في الخنازير31. ومع ذلك، نظرا لانخفاض قطر الشريان الحرقفي الخارجي في 30-40 كجم الخنازير وميلها إلى vasospasm يجعل من الصعب في بعض الأحيان لأداء منظار end-to-side من الشريان الكلوي إلى الشريان الثالثي الخارجي31. فيما يتعلق بحقيقة أننا نسترجع الكلية اليسرى عن طريق نهج transperitoneal لإجراء زرع تلقائي لاحق ، فمن الأجدى إجراء عملية الزرع عن طريق إعادة فتح الشق نفسه واستخدام نهج الترقويم straigtforward ، خاصة أن كل بروتوكول مطلوب أيضا لإزالة الكلى اليمنى الأصلية لضمان أن الحيوان سوف يتعافى مع واحد فقط قبل صبغة kindey. فالوصف الشامل لجميع الاختلافات التقنية الممكنة للنموذج خارج نطاق هذا البروتوكول وقد لخصه آخرون في المواد الاستعراضية الشاملة31.

خلع الكسب غير المشروع في الكلى المزروعة وخلل الخلل الناتج عن الأوعية الدموية هو مصدر رئيسي للفشل في نموذج KT porcine ، مما يؤدي بسرعة إلى انسداد الأوعية الدموية والفشل الكامل للتجربة ، بسبب مضاعفات جراحية. لتجنب هذا، وبعد زرع السيارات ونحن إغلاق طبقة البريتونية على الكلى مع خياطة جارية باستخدام 3-0 بوليجلاتين. وعلاوة على ذلك، يتم إجراء الموجات فوق الصوتية دوبلر اللون مباشرة بعد زرع الكلى وإغلاق البطن، لضمان جيدة الشريانية وريدي من الكسب غير المشروع للكلى. كما يستخدم الموجات فوق الصوتية يوميًا وبناءً على الطلب ، استنادًا إلى الأداء السريري للحيوان ، لفحص ضخ الكلى ، ومشاكل ما بعد الكلى (مثل الانسداد أو اتم القسطرة البولية) ، وجمع السوائل بسبب ناسور الغدد الليمفاوية أو النزيف أو العدوى(الشكل 4 والشكل 6).

كما 24 ساعة من نقص التروية الباردة غالبا ما يؤدي إلى ضعف وظيفي وتأخير وظيفة الكسب غير المشروع، قد تحتاج الحيوانات على الطلب العلاج الطبي إذا كان يعتبر ضروريا من قبل ضابط البيطرية. قد يشمل ذلك العلاج بالضخ باستخدام محلول الجلوكوز و/أو الرينغر بنسبة 5% الذي يتم إدارته عبر الخط الوريدي المركزي، حقن بلورات فوروسميد (في حالة oliguria /anuria اعتمادا على الحالة السريرية والنتائج المختبرية، 60-80 حقن البلوز ملغ تصل إلى 200 ملغ/يوم)، والإعطاء عن طريق الفم من الصوديوم بوليسترين السلفونات (ريسونيوم A) في حالة فرط بوتاسيومالشديد 32. لتجنب التحيز التجريبي ، يجب أن يكون المسؤول البيطري المسؤول عن الرعاية البيطرية بعد زرع الحيوانات أعمى للعلاج التطبيقي والتجمع.

على الرغم من أن تشريح الشريان الكلوي هو واضح نوعا ما في الخنازير landrace الألمانية مع شريان واحد لإعادة الإعمار عادة، وهناك مجموعة واسعة من الاختلافات التشريحية من فروع الوريد الكلوي التي تتطلب بعض الإبداع الجراحي خلال إعادة الإعمار الوريدي. في كثير من الأحيان اثنين (أو أكثر) فروع الوريد الكلوي الانضمام على مستويات مختلفة بين هيلوم الكلى وسفين الكافا السفلي. وتظهر في الشكل 3الاختلافات الأكثر تكراراً وخيارات إعادة الإعمار المحتملة17.

بعد التدخل الجراحي الأول (يوم -15 ، زرع عن بعد) ، تتلقى جميع الحيوانات سترة بورسين ترتديها طوال فترة التجارب بأكملها. يوفر هذا حماية ممتازة ضد الإصابات العرضية وخلع القسطرة المزروعة ويوفر مساحة لتخزين أكياس جمع البول. استخدام هذه السترات هو أيضا حل ممكن للقضاء على الحاجة إلى أقفاص التمثيل الغذائي لتقييم إزالة الكرياتينين كوسيلة صقل وفقا لمبدأ 3R.

مرفقنا السكني يدمج استخدام القياس عن بعد والرصد شبه المنطوق القائم على الفيديو. وعلى الرغم من أن هذه الأساليب لا يمكن أن تحل محل الزيارات المنتظمة التي يقوم بها المسؤول البيطري والفنيون، فإنها تسهل التدخلات السريعة وتحسن تقييم الخطورة لزيادة تحسين أوضاعنا التجريبية للمستقبل. هناك مجموعة واسعة من المؤشرات لاستخدام جهاز القياس عن بعد للزرع في نماذج الحيوانات الكبيرة33. على الرغم من أن, الرصد الوثيق من paramters السريرية بعد الجراحة الكبرى مثل تخطيط القلب, ضغط الدم, درجة الحرارة تعتبر أن تكون معيارا في الإعداد السريرية البشرية من وحدة الرعاية الجراحية المكثفة والمتوسطة, في مراقبة الجراحة التجريبية توقف في الغالب عندما يستيقظ الحيوان من التخدير33,34,35. لذلك، يوفر القياس عن بعد طريقة مجدية للمراقبة المستمرة لهذه الحيوانات. ونحن نعتقد أن جميع هذه البيانات تسهم في الكشف المبكر عن المضاعفات المحتملة بعد الجراحة بدقة وفي الوقت المناسب (على سبيل المثال، صدمة نزفية، أو الإنتان الكشف عن طريق زيادة درجة الحرارة، وانخفاض ضغط الدم وعدم انتظام دقات القلب). وهذا قد يسهل التدخل في الوقت المناسب (على سبيل المثال، إدخال العلاج بالمضادات الحيوية العلاجية، استبدال السوائل، وقف تخثر الدم، أو التضحية من الحيوان لتجنب المعاناة). وإلى جانب هذه "الوقت الحقيقي" رصد الجانب، مجموعتنا تركز حاليا على تقييم شدة وصقل التجارب الحيوانية36،37،38. قد يسمح لنا التحليل الاستعادي لكمية كبيرة من بيانات القياس عن بعد المجمعة في هذه التجارب بأن نحسن تصنيف خطورة هذا النوع من التدخلات الجراحية وتحسين الرعاية في ما حول الجراحة (مثل المسكن) في المختبرات.

من حيث القياس عن بعد الزرع، يوصى بفترة لا تقل عن 12 يوما بعد زرع نظام القياس لضمان بيانات قياس مستقرة و الأمثل (استنادا إلى التواصل الشخصي). بعد مناقشة هذه المسألة مع مختلف الشركات المصنعة التي توفر حلول القياس عن بعد للحيوانات الكبيرة وكذلك مع مجموعات بحثية أخرى باستخدام هذه الأنظمة في بيئات تجريبية مختلفة ، قررنا دمج فترة 14 يومًا بين زراعة الزرع عن بعد وزراعة الكلى. خلال الأيام السابقة، قد لا تزال تحدث الانحرافات بسبب حركة الحيوان حيث أن عمليات التندب والشفاء لا تزال غير مكمّل.

وعلى الرغم من مزاياه، فإن النموذج المذكور أعلاه له بعض القيود. 10- إن التعقيد والموارد والهياكل الأساسية المطلوبة هي أهم قيود النموذج. بروتوكول تجريبي يستغرق وقتا طويلا، والتقنيات المعقدة، والمتابعة المكثفة حول العمليات يتطلب توافر قدر كبير من السكن وOR القدرات ويتطلب مشاركة فريق أكبر، بما في ذلك زملاء الدكتوراه، والجراحين، والضباط البيطريين، والفنيين (الجدول 1). لذلك ، استنادا إلى ملاحظاتنا التجريبية ، فإنه عادة ما يكون من غير المجدي تنفيذ أكثر من اثنين من الإجراءات في اليوم. ومن المساوئ الأخرى لنموذج البورسين مقارنة بالنماذج الحيوانية الصغيرة محدودية الإمكانية للقيام بتحرّات ميكانيكية وجزيئية- بيولوجية. وفي هذا البروتوكول لم يُبلّغ إلا عن خمسة أيام من المتابعة. وكان هذا مناسباً لبيان أهم الخصائص التجريبية للنموذج، غير أن هذه المتابعة القصيرة نسبياً قد لا تكون كافية للإجابة على بعض الأسئلة البحثية المحددة (مثل استعادة الوظيفة في الأجل الطويل مقابل الضرر الحاد). ولذلك، قد يكون من الضروري توسيع نطاق المتابعة المتصلة بالمشروع. تصف هذه المخطوطة "أفضل ممارسة" حالية لدينا في الإعداد التجريبي لزرع الكلى الأورثامي البورسين. في حين أن بعض الخطوات إلزامية لإنشاء هذا النموذج بنجاح، الجوانب الثانوية (على سبيل المثال، الاستخدام داخل العملية من قسطرة المثانة، وضع القسطرة الشريانية إلى الشريان الفخذي مقابل السباتي) هي facultativeative ويمكن تجنبها / تغيير حسب تقدير المحققين. وصف وتبرير كل جانب منهجي سيكون خارج نطاق هذا البروتوكول وقد نوقش في مكان آخر31. وأخيرا، فإنه من الصعب أيضا لتكرار الحالة السريرية الدقيقة لل ك ك في مرحلة الطفولة المبكرة في نموذج porcine حيث المانحين المسنين، allografts مع إصابات الكلى الحادة والمتبرعين مع العديد من الأمراض المشتركة والأمراض المزمنة مثل ارتفاع ضغط الدم والسكري أو تصلب الشرايين تمثل جزءا رئيسيا من مجموعة المانحينهامشية 8،9.

على الرغم من القيود المذكورة أعلاه، فضلا عن التحديات التقنية واللوجستية، هذا النموذج الحيواني الكبير الراسخ والقابل للتكرار من KT يوفر فرصة فريدة للتحقيق في العلاجات الجديدة والتقنيات لتحسين الحفاظ على الأعضاء والنتائج السريرية ويمثل منصة ممتازة للجراحين الأصغر سنا لإتقان تقنيات زرع الأعضاء في نموذج حيواني كبير.

Disclosures

ولا يوجد لدى أصحاب البلاغ أي تضارب في المصالح للكشف عنه.

Acknowledgments

ويود أصحاب البلاغ الإعراب عن امتنانهم لباسكال باشندا، وماريكي شولتس، وبريتا بونغاردت، وآنا كومكي على مساعدتهم التقنية الماهرة.

يعلن المؤلفون التمويل جزئيا من برنامج ستارت لكلية الطب، جامعة RWTH Aachen (#23/19 إلى Z.C. ) ، من مؤسسة B.Braun ، Melsungen ، ألمانيا (BBST-S-17-00240 to Z.C) ، ومؤسسة الأبحاث الألمانية (Deutsche Forschungsgemeinschaft - DFG) ؛ for-2591, to 542/5-1, to 542/6-1; 2016 إلى R.T. و SFB/TRR57، SFB/TRR219، BO3755/3-1، BO3755/6-1 إلى P.B.) ووزارة التعليم والبحث الألمانية (BMBF: STOP-FSGS-01GM1901A إلى P.B) ، دون مشاركة الممولين في تصميم الدراسة أو جمع البيانات أو تحليل البيانات أو إعداد المخطوطات أو قرار النشر.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Anesthesia materials, drugs and medications
Aspirin 500mg i.v., powder for solution for injection  Bayer Vital AG, Leverkusen, Germany 4324188 antiplatelet agents
Atropine sulfate solution for injection, 100mg Dr. Franz Köhler Chemie GmbH, Bensheim, Germany  1821288 parasympatholytic agent, premedication
Bepanthen ointment for eyes and nose Bayer Vital AG, Leverkusen, Germany 1578675 eye ointment
BD Discardit II syringes, 2ml, 5ml, 10ml,20ml Becton Dickinson GmbH, Heidelberg, Germany 300928, 309050,309110, 300296  syringes
BD Micolance 3 (20G yellow) Cannula Becton Dickinson GmbH, Heidelberg, Germany 305888 venous catheter
BD Venflon Pro Safety (20G pink) Becton Dickinson GmbH, Heidelberg, Germany 4491101 venous catheter
Buprenorphine (Buprenovet) Bayer Vital AG, Leverkusen, Germany 794-996 analgesia
Cefuroxime 750mg, powder for preparing  injection solution FRESENIUS KABI Deutschland GmbH, Bad Homburg, Germany J01DC02 antibiotics
Covidien Hi-Contour, Endotracheal Tube 7,5 with Cuffed Murphy Eye Covidien Deutschland GmbH,Neustadt/Donau, Germany COV-107-75E endotracheal Tube
FENTANYL 0,5 mg Rotexmedica solution for injection  Rotexmedica GmbH Arzneimittelwerk, Trittau, Germany 4993593 opioide analgetic agent
Furosemide-ratiopharm 250 mg/25 ml solution for injection Ratiopharm GmbH, Ulm, Germany 1479542 loop diuretics
Glucose 5% solution for infusion (500ml, 250ml) B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany  3705273,03705422 infusion fluid
Glucose 20% solution for infusion B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany  4164483 osmotic diuresis
Heparin-Sodium 5000 I.E./ml B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany  15782698 anticoagulant
Isoflurane-Piramal (Isoflurane) Piramal Critical Care Deutschland GmbH, Hallbergmoos, Germany 9714675 volatile anaesthetic agent
Ketamine (Ketamine hydrochloride) 10% Medistar Arzneimittelvertrieb GmbH, Ascheberg, Germany 0004230 general anaestetic agent
MIDAZOLAM 15mg/3ml Rotexmedica GmbH Arzneimittelwerk, Trittau, Germany 828093 hybnotica, sedative agent
NaCl 0,9% solution for infusion (500ml,1000ml) B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany  864671.8779 infusion fluid
Norepinephrine (Arterenol) Sanofi-Aventis Deutschland GmbH, Frankfurt, Germany 16180 increase in blood pressure 
Organ preservation solution (e.g. HTK) Dr. Franz Köhler Chemie GmbH, Bensheim, Germany  should be decided based on preference and experimental design organ preservation
Pantoprazole 40mg/solution for injection Laboratorios Normon,Madrid, Spain 11068 proton pump inhibitor
Paveron N 25mg/ml solution for injection (Papaverine Hydrochloride) LINDEN Arzneimittel-Vertrieb-GmbH, Heuchelheim, Germany 2748990 spasmolytic agent for vasodilatation
Pentobarbital (Narcoren) Boehringer Ingelheim vetmedica GmbH, Ingelheim, Germany 1,204,924,565 used for euthanasia
Propofol 1% (10mg/ml) MCT Fresenius FRESENIUS KABI Deutschland GmbH, Bad Homburg, Germany 654210 general anaesthetic agent
Ringer solution B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany  1471411 infusion fluid
Sterofundin ISO solution for infusion (1000ml) B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany  1078961 Infusion fluid
Stresnil (Azaperone) 40mg/ml Elanco 797-548 sedative
Urine catheter ruffle 12CH  Wirutec Rüsch
Medical Vertriebs GmbH, Sulzbach, Germany		 RÜSCH-180605-12 transurethral urinecatheter
Surgical materials
Appose ULC Skin Stapler Covidien Deutschland GmbH,Neustadt/Donau, Germany 8886803712 skin stapler
Cavafix Certo 375  B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany  4153758 central venous catheter
EMKA Easytel +L-EPTA Transponder emka TECHNOLOGIES S.A.S,Paris,France L-EEEETA 100 telemetry transponder
EMKA Reciever and Data Analyzer System emka TECHNOLOGIES S.A.S,Paris,France Reviever  telemetry receiver
Feather Disposable Scapel (11)(21) Feather, Japan 8902305.395 scapel
Prolene 2-0, blue monofil VISI-BLACK, FS needle Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany EH7038H skin
Prolene 3-0,blue monofil,FS1 needle Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany EH7694H skin
Prolene 5-0 (simply angulated, C1 needle) blue monofil VISI-BLACK Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany EH7227H vascular
Prolene 5-0 (double armed, C1 needle) 60cm Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany KBB5661H vascular
Prolene 6-0 (double armed, C1 needle) 60cm Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany EH7228H vascular
Sempermed derma PF Surgical Gloves Seril Gr. 7, 7.5, 8  Semperit investment Asia Pte Ltd, Singapore 4200782,4200871,4200894 surgical gloves
Sentinex® PRO Surgical Gowns Spunlace XL 150cm Lohmann & Rauscher GmbH & Co. KG, Neuwied, Germany 19302 surgical gown
Tachosil Takeda Pharma Vertrieb GmbH & Co. KG, Berlin, Germany MAXI 9,5 x 4,8 cm haemostasis
Telasorp Belly wipes (green 45x45cm) PAUL HARTMANN AG,Heidenheim, Germany 4542437 abdominal towel
Pediatric urine catheter Uromed Kurt Drews KG, Oststeinbeck, Germany PZN 03280856 used for the uretero-cutaneus stoma
VICRYL- 0 MH Plus Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany V324 fascial closure
VICRYL - 3-0, SH1 Plus needle, 75cm Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany W9114 subcutaneous suture, peritoneal suture, 
VICRYL - 3-0, SH1 Plus needle, 4*45cm Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany V780 subcutaneous suture, peritoneal suture, 
VICRYL - ligatures Sutupak purple braided, 3-0 Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany V1215E threats for ligature
3M™ Standard Surgical Mask 1810F 3M Deutschland GmbH, Neuss, Germany 3M-ID 7000039767 surgical mask
Surgical instruments
Anatomical forceps Standard ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  PZ0260 anatomical forceps
Atraumatic tweezers steel, De Bakey Tip 1,5mm 8" ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  GF0840 anatmical atraumatic forceps
Bipolar forceps 16 cm straight, Branch 0,30 mm pointed, universal fit Bühler Instrumente Medizintechnik GmbH,Tuttlingen, Germany 08/0016-A biopolar forceps
Bulldog clamp atraumatic,curved, De bakey 78 mm, 3" ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  GF0900 bulldog clamps
DE BAKEY-SATINSKY vascular clamp 215mm ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  GF1661 vascular clamp
Dissecting scissors Mayo,250 mm, 10" ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  SC2232   Scissors for dissection
Dissecting scissors Metzenbaum-Fino, 260 mm, 101/4" ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  SC2290 Scissors for dissection
Draeger CATO Anesthetic machine with PM8050 Monitor Dräger, Drägerwerk AG & Co. KGaA, Lübeck, Germany  106782 Ventilation System
 Fine Tweezers, ADSON 180 mm ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  ADSONPZ0571 fine forceps
Gosset abdomenal wall spreader CHIRU-INSTRUMENTE, Kaierstuhl,Germany 09-621512 abdominal retractor
HALSTEAD MOSQUITO,curved, surgical 125mm ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  KL2291 mosquite clamps
HF surgical device ICC 300, Electrocautery Erbe Elektromedizin Gmbh; Tübingen, Germany 20132-043 cautery, biopolar
MICRO HALSTED-MOSQUITO 100mm, curved ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  KL2187 mosquite clamps
Micro steel needle holder straight 0,5mm, with spring lock ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  MN1324D microsurgical needle holder
Microsurgical/watermaker tweezers LINZ 150mm 6" Ergo round handle ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  MN0087 fine microsurgical forceps
needle holder Mayo-hegar,190 mm, 71/2" ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  NH1255 needle holder
Overhold Slimline Fig. 0 8 1/2" ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  KL4400 overholds
Sterile Gauze 10X10 Paul HaRTMANN AG,Heidenheim, Germany 401725 sterile gauze
Suction tip OP-Flex Handpiece Yankauer Pfm Medical AG, Köln, Germany 33032182 suction
surgical forceps Standard 5 3/4"  ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  PZ1260 surgical forceps
surgical scissors standard pointed-blunt (thread/cloth scissors)175 mm, 7" ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  SC1522 surgical Scissors
Titanit vascular scissors POTTS-SMITH,185 mm, 71/4"60° ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  SC8562 Pott scissors
Tunneling instrument Marina Medical Instruments Inc,Davies,US MM-TUN06025 subcutaneous tunneling
Vessel loops Medline International Germany GmbH,Kleve, Germany VLMINB hold and adjust the vessel
Wound spreaders Weitlander, Stump,110 mm, 41/4" ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  WH5210 wound care
Further material
Heating pad Eickemeyer - Medizintechnik für Tierärzte KG, Tuttlingen, Germany 
648050 MHP-E1220		 maintain body temperature during surgery
Laryngoscope, customized Wittex GmbH, Simbach, Germany 333222230  expose the vocal cord
Rectal temperature probe Asmuth Medizintechnik, Minden, Germany ASD-RA4 measure body temperature
Spray wound film Mepro-Dr. Jaeger und Bergmann GmbH, Vechta, Germany 2830  keep sterile condition
Sterile organ bag Raguse Gesellschaft für medizinische Produkte, Ascheberg, Germany 800059 organ preservation
swine jacket small, adult Landrasse swine 30-50kg, customized for Emka Telemetry and urinary catheterization  Lomir Biomedical Inc., United Kingdom SS J1LAPMP swine jackets to pretect implanted catheters and store urine bag
 Ultrasound device, Sonosite Edge-II FUJIFILM SonoSite GmbH, Frankfurt, Germany V21822 ultrasound and color Doppler
Urine bag 2000ml Volume ASID BONZ GmbH, Herrenberg, Germany  2062578 disposable urine bag connected to the uretero-cutaneous fistula catheter

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Watts, G. Joseph Murray: innovative surgeon and pioneer of transplantation. Lancet. 377 (9770), 987 (2011).
  2. Merion, R. M., et al. Deceased-donor characteristics and the survival benefit of kidney transplantation. Journal of the American Medical Association. 294 (21), 2726-2733 (2005).
  3. Jochmans, I., O'Callaghan, J. M., Pirenne, J., Ploeg, R. J. Hypothermic machine perfusion of kidneys retrieved from standard and high-risk donors. Transplant International. 28 (6), 665-676 (2015).
  4. Czigany, Z., et al. Machine perfusion for liver transplantation in the era of marginal organs-New kids on the block. Liver International. 39 (2), 228-249 (2018).
  5. Fabrizii, V., et al. Patient and graft survival in older kidney transplant recipients: does age matter. Journal of the American Soceity of Nephrology. 15 (4), 1052-1060 (2004).
  6. Jochmans, I., Nicholson, M. L., Hosgood, S. A. Kidney perfusion: some like it hot others prefer to keep it cool. Current Opinion in Organ Transplantation. 22 (3), 260-266 (2017).
  7. DSO. DSO Jahresbericht. , Available from: https://www.dso.de/SiteCollectionDocuments/DSO_Jahresbericht_2018.pdf (2018).
  8. Meister, F. A., et al. Hypothermic Oxygenated Machine Perfusion of Extended Criteria Kidney Allografts from Brain Dead Donors: Protocol for a Prospective Pilot Study. JMIR Research Protocols. 8 (10), 14622 (2019).
  9. Meister, F. A., et al. Hypothermic oxygenated machine perfusion-Preliminary experience with end-ischemic reconditioning of marginal kidney allografts. Clinical Transplantation. 33 (10), 13673 (2019).
  10. Siedlecki, A., Irish, W., Brennan, D. C. Delayed graft function in the kidney transplant. American Journal of Transplantation. 11 (11), 2279-2296 (2011).
  11. Plenter, R., Jain, S., Ruller, C. M., Nydam, T. L., Jani, A. H. Murine Kidney Transplant Technique. Journal of Visualized Experiments. (105), e52848 (2015).
  12. Fabry, G., et al. Cold Preflush of Porcine Kidney Grafts Prior to Normothermic Machine Perfusion Aggravates Ischemia Reperfusion Injury. Scientific Reports. 9 (1), 13897 (2019).
  13. Kalenski, J., et al. Improved preservation of warm ischemia-damaged porcine kidneys after cold storage in Ecosol, a novel preservation solution. Annals of Transplantation. 20, 233-242 (2015).
  14. Kalenski, J., et al. Comparison of Aerobic Preservation by Venous Systemic Oxygen Persufflation or Oxygenated Machine Perfusion of Warm-Ischemia-Damaged Porcine Kidneys. European Surgical Research. 57 (1-2), 10-21 (2016).
  15. Kaths, J. M., et al. Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation. Journal of Visualized Experiments. (101), e52909 (2015).
  16. Schreinemachers, M. C., et al. Improved preservation and microcirculation with POLYSOL after transplantation in a porcine kidney autotransplantation model. Nephrology Dialysis Transplantation. 24 (3), 816-824 (2009).
  17. Kaths, J. M., et al. Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol. Journal of Visualized Experiments. (108), e53765 (2016).
  18. De Deken, J., et al. Postconditioning effects of argon or xenon on early graft function in a porcine model of kidney autotransplantation. British Journal of Surgery. 105 (8), 1051-1060 (2018).
  19. Faure, A., et al. An experimental porcine model of heterotopic renal autotransplantation. Transplantation Proceedings. 45 (2), 672-676 (2013).
  20. Golriz, M., et al. Do we need animal hands-on courses for transplantation surgery. Clinical Transplantation. 27, Suppl 25 6-15 (2013).
  21. Gallinat, A., et al. Transplantation of Cold Stored Porcine Kidneys After Controlled Oxygenated Rewarming. Artificial Organs. 42 (6), 647-654 (2018).
  22. Russell, W. M. S., Burch, R. L. The Principles of Humane Experimental Technique. , Methuen. (1959).
  23. Kilkenny, C., Browne, W. J., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: the ARRIVE guidelines for reporting animal research. PLoS Biology. 8 (6), 1000412 (2010).
  24. Hagemeister, K., et al. Severity assessment in pigs after partial liver resection: evaluation of a score sheet. Laboratory Animals. 54 (3), (2019).
  25. Doorschodt, B. M., et al. Hypothermic machine perfusion of kidney grafts: which pressure is preferred. Annals of Biomedical Engineering. 39 (3), 1051-1059 (2011).
  26. Czigany, Z., et al. Improving Research Practice in Rat Orthotopic and Partial Orthotopic Liver Transplantation: A Review, Recommendation, and Publication Guide. European Surgical Research. 55 (1-2), 119-138 (2015).
  27. Nagai, K., Yagi, S., Uemoto, S., Tolba, R. H. Surgical procedures for a rat model of partial orthotopic liver transplantation with hepatic arterial reconstruction. Journal of Visualized Experiments. (73), e4376 (2013).
  28. Doorschodt, B. M., et al. Evaluation of a novel system for hypothermic oxygenated pulsatile perfusion preservation. The Internation Journal of Artificial Organs. 32 (10), 728-738 (2009).
  29. Kaths, J. M., et al. Continuous Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion Is Superior to Brief Normothermic Perfusion Following Static Cold Storage in Donation After Circulatory Death Pig Kidney Transplantation. American Journal of Transplantation. 17 (4), 957-969 (2017).
  30. Tammaro, V., et al. Prevention of fluid effusion in kidney transplantation with the use of hemostatic biomaterials. Transplantation Proceedings. 46 (7), 2203-2206 (2014).
  31. Golriz, M., et al. Pig kidney transplantation: an up-to-date guideline. European Surgical Research. 49 (3-4), 121-129 (2012).
  32. Higgins, R., et al. Hyponatraemia and hyperkalaemia are more frequent in renal transplant recipients treated with tacrolimus than with cyclosporin. Further evidence for differences between cyclosporin and tacrolimus nephrotoxicities. Nephrology Dialysis and Transplantation. 19 (2), 444-450 (2004).
  33. Markert, M., et al. A new telemetry-based system for assessing cardiovascular function in group-housed large animals. Taking the 3Rs to a new level with the evaluation of remote measurement via cloud data transmission. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 93, 90-97 (2018).
  34. Längin, M., et al. Perioperative Telemetric Monitoring in Pig-to-Baboon Heterotopic Thoracic Cardiac Xenotransplantation. Annals of Transplantation. 23, 491-499 (2018).
  35. Willens, S., Cox, D. M., Braue, E. H., Myers, T. M., Wegner, M. D. Novel technique for retroperitoneal implantation of telemetry transmitters for physiologic monitoring in Göttingen minipigs (Sus scrofa domesticus). Comparative Medicine. 64 (6), 464-470 (2014).
  36. van Dijk, R. M., et al. Design of composite measure schemes for comparative severity assessment in animal-based neuroscience research: A case study focussed on rat epilepsy models. PLoS One. 15 (5), 0230141 (2020).
  37. Zieglowski, L., et al. Severity assessment using three common behavioral or locomotor tests after laparotomy in rats: a pilot study. Laboratory Animals. , (2020).
  38. Bleich, A., Bankstahl, M., Jirkof, P., Prins, J. B., Tolba, R. H. Severity Assessment in animal based research. Laboratory Animals. 54 (1), 16 (2020).

Tags

هذا الشهر في JoVE، العدد 162، porcine، زرع الكلى، توسيع المعايير الكسب غير المشروع، والحفاظ على الأعضاء، والحفاظ على الحل، والسيارات زرع، القياس عن بعد
عملية زرع الكلى التلقائية في نموذج بورسين باستخدام 24 ساعة لحفظ الأعضاء والقياس المستمر عن بعد
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Liu, W. J., Ernst, L., Doorschodt,… More

Liu, W. J., Ernst, L., Doorschodt, B., Bednarsch, J., Becker, F., Nakatake, R., Masano, Y., Neumann, U. P., Lang, S. A., Boor, P., Lurje, I., Lurje, G., Tolba, R., Czigany, Z. Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry. J. Vis. Exp. (162), e61591, doi:10.3791/61591 (2020).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter