Этот протокол вводит метод разработки каркаса с использованием децеллюляризированных почек крыс. Протокол включает процессы децеллюляризации и рецеллюляризации для подтверждения биодоступности. Децеллюляризацию проводят с использованием Тритона Х-100 и додецилсульфата натрия.
Тканевая инженерия является передовой дисциплиной в биомедицине. Методы культивирования клеток могут применяться для регенерации функциональных тканей и органов для замены больных или поврежденных органов. Каркасы необходимы для облегчения генерации трехмерных органов или тканей с использованием дифференцированных стволовых клеток in vivo. В этом отчете мы описываем новый метод разработки васкуляризированных каркасов с использованием децеллюляризованных почек крыс. В этом исследовании использовались восьминедельные крысы Sprague-Dawley, и гепарин вводили в сердце, чтобы облегчить поступление в почечные сосуды, позволяя гепарину перфузировать в почечные сосуды. Брюшную полость открыли, а левую почку собрали. Собранные почки перфузили в течение 9 ч с использованием моющих средств, таких как Triton X-100 и додецилсульфат натрия, для децеллюляризации ткани. Затем децеллюляризованные каркасы почек осторожно промывали 1% пенициллином /стрептомицином и гепарином для удаления клеточного мусора и химических остатков. Ожидается, что трансплантация стволовых клеток с децеллюляризованными сосудистыми каркасами облегчит генерацию новых органов. Таким образом, васкуляризированные каркасы могут обеспечить основу для тканевой инженерии трансплантатов органов в будущем.
Методы культивирования клеток применяются для регенерации функциональных тканей и органов для замены больных или поврежденных органов. Аллогенная трансплантация органов в настоящее время является наиболее распространенным методом лечения необратимых повреждений органов; однако такой подход требует использования иммуносупрессии для предотвращения отторжения трансплантированного органа. Более того, несмотря на достижения в иммунологии трансплантата, 20% реципиентов трансплантата могут испытывать острое отторжение в течение 5 лет, а в течение 10 лет после трансплантации 40% реципиентов могут потерять свой пересаженный трансплантат или умереть1.
Достижения в технологиях тканевой инженерии привели к новой парадигме трансплантации новых органов без иммунного отторжения с использованием дифференцированных стволовых клеток. После дифференцировки стволовых клеток каркас, называемый синтетическим внеклеточным матриксом, необходим для облегчения генерации трехмерных органов и обеспечения процветания новой ткани в реципиенте. Каркасы из децеллюляризованных нативных органов имеют преимущества, в том числе более эффективную среду для созданияклеток и усиления пролиферации стволовых клеток, хотя эти механизмы не были полностью выяснены2. В частности, почка является подходящим органом для генерации каркасов, поскольку она имеет обильную циркуляцию и нишу для создания стволовых клеток. Кроме того, из-за сложной структуры почки трудно искусственно регенерировать почки для трансплантации органов.
В этом отчете мы представляем метод разработки васкуляризированных каркасов с использованием децеллюляризованных органов в модели крысы для облегчения будущих исследований на животных в целях тканевой инженерии.
Для децеллюляризации органов и других тканей использовались различные протоколы. Оптимальный протокол децеллюляризации должен сохранять трехмерную архитектуру внеклеточного матрикса (ECM). В общем, такие протоколы состоят из лизирования клеточной мембраны путем физической обработки…
The authors have nothing to disclose.
Это исследование было поддержано грантом Института биомедицинских исследований от больницы Пусанского национального университета.
1 cc syringe (inject probes and vehicle solutions | Becton Dickinson | 305217 | |
10-0 ethilon for vessel anastomosis | Ethicon | 9032G | |
25 gauge inch guide needle(for vascular catheters) | Becton Dickinson | 305145 | |
3-0 PDS incision closure rat | Ethicon | Z316H | |
3-0 Prolene incision closure rat | Ethicon | 8832H | |
3-0 silk spool vascular access/ligation in rat | Braintree Scientific | SUT-S 110 | |
4-0 PDS incision closure mouse | Ethicon | Z773D | |
4-0 Prolene incision closure mouse | Ethicon | 8831H | |
5-0 silk spool vascular access/ligation in mouse | Braintree Scientific | SUT-S 106 | |
Fine Scissors to cut fascia/connective tissue | Fine Science Tools | 14058-09 | |
Halsey needle holder | Fine Science Tools | 12001-13 | |
Kelly Hemostat for rats: muscle clamp to minimize bleeding when cut | Fine Science Tools | 13018-14 | |
Polyethelyne 50 tubing, catheter tubing 100 ft | Braintree Scientific | .023" × .038” | |
Schwartz microserrefine vascular clamps | Fine Science Tools | 18052-01 (straight) | |
18052-03 (curved) | |||
Surgical Scissors to cut skin | Fine Science Tools | 14002-12 | |
Vannas-Tubingen Spring scissors for arteriotomy | Fine Science Tools | 15003-08 |