Summary
Dette papiret gir tre enkle og tilgjengelige analyser for å vurdere lipidmetabolisme hos mus.
Abstract
Vurdering av lipidmetabolisme er en hjørnestein i evaluering av metabolsk funksjon, og det anses som viktig for in vivo metabolisme studier. Lipider er en klasse av mange forskjellige molekyler med mange veier involvert i syntese og metabolisme. Et utgangspunkt for evaluering av lipid hemostase for ernæring og fedme forskning er nødvendig. Dette dokumentet beskriver tre enkle og tilgjengelige metoder som krever liten kompetanse eller praksis for å mestre, og som kan tilpasses av de fleste laboratorier for å screene for lipidmetabolismeavvik hos mus. Disse metodene er (1) måle flere faste serum lipid molekyler ved hjelp av kommersielle sett (2) analyse for kosthold lipid-håndtering evne gjennom en muntlig intralipid toleranse test, og (3) evaluere responsen på en farmasøytisk forbindelse, CL 316,243, hos mus. Sammen vil disse metodene gi en høy nivå oversikt over lipidhåndteringsevne hos mus.
Introduction
Karbohydrater og lipider er to store substrater for energimetabolisme. Avvikende lipidmetabolisme resulterer i mange menneskelige sykdommer, inkludert type II diabetes, kardiovaskulære sykdommer, fettleversykdommer og kreft. Dietary lipider, hovedsakelig triglyserider, absorberes gjennom tarmen inn i lymfesystemet og går inn i venøs sirkulasjon i chylomicrons nær hjertet1. Lipider bæres av lipoproteinpartikler i blodet, hvor fettsyremoieties frigjøres ved virkningen av lipoprotein lipase ved perifere organer som muskel og fettvev2. De resterende kolesterolrike restpartiklene fjernes av leveren3. Mus har blitt mye brukt i laboratorier som forskningsmodell for å studere lipidmetabolisme. Med omfattende genetiske verktøysett tilgjengelig og en relativt kort avlssyklus, er de en kraftig modell for å studere hvordan lipider absorberes, syntetiseres og metaboliseres.
På grunn av kompleksiteten i lipidmetabolismen brukes sofistikerte lipidomiske studier eller isotopiske tracerstudier vanligvis til å kvantifisere samlinger av lipidarter eller lipidrelaterte metabolske fluxer og skjebner4,5. Dette skaper en massiv utfordring for forskere uten spesialutstyr eller kompetanse. I dette dokumentet presenterer vi tre analyser som kan fungere som innledende tester før teknisk utfordrende teknikker brukes. De er ikke-terminale prosedyrer for musene, og dermed svært nyttige for å identifisere potensielle forskjeller i lipidhåndteringskapasitet og begrense de berørte prosessene.
For det første kan måling av faste serum lipidmolekyler hjelpe en med å fastslå musens generelle lipidprofil. Mus bør fastes, fordi mange lipidarter stiger etter måltider, og omfanget av økningen påvirkes sterkt av sammensetningen av dietten. Mange lipidmolekyler, inkludert totalt kolesterol, triglyserid og ikke-esterifisert fettsyre (NEFA), kan måles ved hjelp av et kommersielt sett og en plateleser som kan lese absorbans.
For det andre evaluerer en oral intralipidtoleransetest lipidhåndteringsevne som en netto effekt av absorpsjon og metabolisme. En oralt administrert intralipid forårsaker en økning i sirkulerende triglyseridnivåer (1-2 timer), hvoretter serum triglyseridnivåene går tilbake til basale nivåer (4-6 timer). Denne analysen gir informasjon om hvor godt en mus kan håndtere de eksogene lipidene. Hjerte-, lever- og brun fettvev er aktive forbrukere av triglyserider, mens hvitt fettvev lagrer det som et energireservat. Endringer i disse funksjonene vil føre til forskjeller i testresultatene.
Til slutt, fremme lipolyse for å mobilisere lagrede lipider anses som en mulig strategi for vekttap. Den β3-adrenerge reseptorsignaleringsveien i fettvevet spiller en viktig rolle i adipocytt lipolyse, og menneskelig genetikk har identifisert et tap av funksjon polymorfisme Trp64Arg i β3-adrenerge reseptor korrelert med fedme6. CL 316,243, en spesifikk og potent β3-adrenerge reseptoragonist, stimulerer fettvev lipolyse og frigjøring av glyserol. Evaluering av musens respons på CL 316,243 kan gi verdifull informasjon om utvikling, forbedring og forståelse av effekten av forbindelsen.
Samlet kan disse testene brukes som en startskjerm for endringer i musens lipidmetaboliske tilstand. De er valgt for tilgjengeligheten av instrumenter og reagenser. Med resultatene fra disse analysene kan forskere danne et samlet bilde av dyrenes metabolske kondisjon og bestemme seg for mer sofistikerte og målrettede tilnærminger.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dyr er plassert i standardiserte forhold etter dyrepleie og eksperimentelle protokoller godkjent av Institutional Animal Care and Use Committee fra Baylor College of Medicine (BCM). Dyr blir matet en standard eller spesiell diett, vann ad libitum, og holdes med en 12-timers dag / natt syklus.
1. Måling av faste serumlipider
- Overfør mus til et nytt bur etter kl. 17.00 og rask med fri tilgang til vann, over natten (med rundt 16 timers faste før eksperimentet). Nattfastingen sikrer fullstendig tømming av musenes mage-tarmkanaler.
MERK: Mus spiser avføringen under faste, så matuttak kan ikke sikre at de er tilstrekkelig fastet. - Neste morgen, ta tak i musen ved halen og legg den på en overflate. Trekk forsiktig tilbake på musens hale for å plassere musen i holdeplassen. Plasser nesebeherskelsen for å omskolere bevegelsen av musen mens du fortsatt lar musen puste. Stram knotten på nesebeherskelsen. Overvåk brystbevegelser for å sikre at dyret puster normalt og minimere tiden en mus tilbringer i restrainers.
- Lag et overfladisk snitt (nick) i halevenen til den fritt bevegelige musen, og trekk 25 μL blod fra snittet til en glasskapillær (fyller ca. 1/3 av kapillæren) uten å begrense musen. Blås blodet raskt inn i et mikrosenterrør.
- Stopp blødningen ved hjelp av styptiske pulver, fyll på fôret i buret, og sørg for at musene ikke viser tegn på stress.
- Fullfør bloduttaket for alle musene.
- La blodet koagulere ved å la det være uforstyrret ved romtemperatur i 1 time. Spinn de koagulerte blodprøvene ved 2000 x g ved 4 °C i 10 minutter i en nedkjølt mikrocentrifuge på benken, og overfør supernatant (serum) for analyse.
MERK: Serumet kan oppbevares ved –20 °C i flere uker frem til analyse. Oppbevar serumet ved –70 °C ved langvarig lagring. - Analyser hver lipidmetabolitt ved hjelp av produsentens medfølgende protokoll.
2. Oral intralipid toleransetest
- Etter 17:00, vei musene for beregning av intralipidvolumet som skal gis til dem neste dag. Overfør deretter musene til et nytt bur og fest dem over natten (16 timer).
- Neste morgen, merk haler av musene som ligger i ett bur for å identifisere dem i de påfølgende blødningstrinnene.
- Lag et hakk i halevenen og trekk 15 μL blod fra snittet til en glasskapillær (fyller ca. 1/5 av kapillæren), og blås raskt blodet inn i et mikrocentrifugerør for T = 0 serum.
MERK: Det er ikke nødvendig å stoppe blødningen under analysen med mindre musene viser overflødig blødning. - Gavage mus 20% intralipid ved hjelp av en 18G gavage nål i et forhold på 15 μl per gram kroppsvekt, ved hjelp av pre-fasting kroppsvekt. Stable hver mus med 1 minutt.
MERK: Vei dyret og bestem riktig gavage nålstørrelse. Vanligvis er en 18 gauge gavage nål egnet for mus >25 g, og en 20-22 gauge gavage nål ville være mer hensiktsmessig for mindre dyr. Scruff musen, gripe huden over skuldrene for å holde dyrets hode på plass. Plasser gavage nålen i munnen og gå deretter forsiktig videre langs den øvre ganen, til spiserøret er nådd. Røret skal passere uten motstand. Når riktig dybde er nådd, kan Intralipid sakte administreres. Fjern kanylen forsiktig i samme vinkel under innsetting av nålen etter administrering av Intralipid. Returner dyret til buret og overvåk for tegn på arbeidspust eller annen nød.
MERK: Forskere som er uerfarne med oral gavage eller hale blødning teknikker kan stable hver mus med 2 minutter eller enda lenger. - Trekk blod ved T = 1, 2, 3, 4, 5 og 6 timer: Trekk 15 μL blod (1/5 kapillær) per mus gjennom haleblødning, og blås blodet raskt inn i et mikrocentrifugerør.
- Snurr blodprøvene ved 2000 x g ved romtemperatur i 10 minutter i en mikrocentrifuge. Overfør supernatanten, inkludert det flytende fettlaget, til et PCR-rør for lagring. Supernatanten kan oppbevares ved –20 °C i flere uker frem til analyse.
MERK: Supernatanten skal være plasma. Hvis noen prøver allerede har koagulert ved sentrifugeringstidspunktet, påvirker det ikke triglyseridmåling. - Etter den siste blodsamlingen, stopp blødningen ved hjelp av styptiske pulver, fyll på fôret i buret, og sørg for at musene ikke viser tegn på ekstrem stress.
- Legg 2 μL triglyseridstandard og samlet supernatanter i en 96-brønnsplate.
- Tilsett 200 μL triglyseridreagens og la platen inkubere i 5 minutter ved 37 °C for fargeutvikling.
- Mål absorbansen ved 500 nm med en referansebølgelengde på 660 nm i en laboratorieplateleser, og beregn prøvens konsentrasjon.
3. β3 Adrenerge reseptoragonist CL 316,243 Stimulert lipolyseanalyse
- Klargjør CL 316 243 som en lagerløsning på 5 mg/ml (50x) i steril saltvann, og oppbevar den ved –20 °C til bruk.
- Om morgenen, vei musene for å beregne mengden fortynnet CL 316,243 løsning som trengs for eksperimentet. Musen vil motta 10 μL per gram kroppsvekt av fortynnet CL 316,243, for en sluttdose på 1 mg / kg kroppsvekt.
- Overfør musene til et nytt bur med fri tilgang til vann, og fest dem i 4 timer.
- Lag nok 1x CL 316,243 løsning fra 50x lager ved hjelp av saltvann. Den endelige konsentrasjonen av 1x CL 316,243 oppløsning er 0,1 mg / ml. Bruk saltvann til kontrollbehandlingsgruppen.
- Merk halene på musene som ligger i samme bur for enkel identifisering under blødningstrinnene.
- Lag et hakk i halevenen, og trekk 15 μL blod fra snittet til en glasskapillær (fyll ca. 1/5 av kapillæren), og blås blodet raskt inn i et mikrosenterrør for T = 0 prøve.
MERK: Det er ikke nødvendig å stoppe blødningen under analysen med mindre musene viser overflødig blødning. - Injiser fortynnet CL 316,243 oppløsning (eller kontroll hvis inkludert i forsøket) intraperitonealt med et volum på 10 μL/g kroppsvekt. Stable hver mus med 1 minutt. Bruk maksimalt 5 mus for hvert 60-minutters eksperiment, eller 10 mus for et team med to personer.
- Trekk blod ved T = 5, 15, 30, 60 minutter: trekk 15 μL blod (1/5 kapillær) per mus gjennom haleblødning.
- Etter den siste blodsamlingen, stopp blødningen ved hjelp av styptiske pulver, fyll på fôret i buret, og sørg for at musene ikke viser tegn på ekstrem stress.
- Spinn blodprøver ved 2000 x g ved 4 °C i 5 minutter i en nedkjølt mikrosenter. Overfør supernatanten til et PCR-rør for lagring. Supernatanten kan oppbevares ved –20 °C i flere uker frem til analyse.
- Last 1 μL 2x seriefortynnet glyserolstandarder (0,156, 0,312, 0,625, 1,25 og 2,5 mg/ml Trioleine-ekvivalente konsentrasjoner) og samlet supernatanter i en 96-brønnsplate. Tilsett 100 μL fritt glyserolreagens, og la platen inkubere i 5 minutter ved 37 °C for at fargen skal utvikle seg.
- Mål absorbansen ved 540 nm ved hjelp av en laboratorieplateleser, og beregn prøvens konsentrasjon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vi viser med tre utdrag at hver analyse gir verdifull informasjon om musenes lipidmetabolisme. For C57BL/6J hannmus, utfordret av åtte uker med fettfattig diett (HFD) fôring fra åtte uker, ble det totale kolesterolnivået betydelig forhøyet, mens serum triglylyserid og NEFA ikke var (Tabell 1), noe som tyder på at triglyserid og NEFA i blodet ikke er overveiende regulert av en kostholdsfettutfordring. I den andre kohorten av mus ble C57BL/6J og C57BL6/N substrains av C57BL6 matet HFD i åtte uker, fra åtte ukers alder. Deres serum triglyseridnivåer ble sammenlignet etter en oral intralipid utfordring. Resultatene viste en slående forskjell mellom 6N og 6J substrains, med 6J som hadde en betydelig høyere topp i serum triglyseridnivåer etter intralipid administrering, noe som indikerer en forbedret absorpsjon eller en mye langsommere triglyseridclearance (figur 1). Til slutt, for åtte uker gamle mannlige C57BL / 6J mus matet på normal chow (NC), en enkelt CL 316,243 behandling gjør (1 mg / kg kroppsvekt) førte til en betydelig økning i serum glyserol. Imidlertid førte daglig intraperitoneal forbehandling av mus med 1 mg / kg kroppsvekt CL 316,243 i en uke til en stump reaksjon på CL 316,243, noe som tyder på utviklingen av motstand mot CL 3116,263 hos disse musene (Figur 2).
| Serum Parametere | NC | HFD | P-verdi |
| Kolesterol (mg/dl) | 132.7±10.3 | 202.3±8.4 | 0.0002 |
| Triglyserid (mg/dl) | 91.7±9.1 | 79.3±4.5 | 0.26 |
| Ikke-esterifiserte fettsyrer (mmol/L) | 1.47±0.12 | 1.48±0.08 | 0.73 |
Tabell 1: Faste lipidarter hos mus matet på normal chow (NC) eller fettfattig diett (HFD) i åtte uker. Data uttrykkes som gjennomsnittsverdier ± SEM. N = 6 for NC-gruppen, n = 12 for HFD-gruppen. P-verdi ble bestemt ved hjelp av to-tailed Student t-test.
Figur 1: Et eksempel på resultater som viser forskjellen i serum triglyserid av C57BL/6 substrains etter en oral intralipid utfordring. Data uttrykkes som gjennomsnittsverdier ± SEM. N = 5 for hver gruppe. P-verdien ble bestemt ved hjelp av tosidige Student t-test på hvert tidspunkt. * p < .05, ** p < .01. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: Et eksempel på resultater som viser utviklingen av resistens mot CL 316 243 behandling hos C57BL/6J-musetter en uke med daglig CL 316 243-behandling. Data uttrykkes som gjennomsnittsverdier ± SEM. N = 5 for hver gruppe. P-verdien ble bestemt ved hjelp av tosidige Student t-test på hvert tidspunkt. ** p < .01. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De tre analysene som beskrives fungerer robust i laboratoriet, med noen få kritiske hensyn. Nattfasting er nødvendig for å bestemme fastende serum lipidnivåer og oral intralipid toleransetest. For oral intralipid toleransetest er det viktig å spinne blodet ved romtemperatur for å minimere dannelsen av et fettlag, spesielt ved 1- og 2-timers tidspunkter; det er viktig å ikke kaste bort dette fettlaget hvis det dannes. Sørg for å overføre supernatanten med lipidlaget, og rør forsiktig for å blande dem sammen for triglyseridbestemmelse.
Tolkning av faste serum lipid nivåer
Fasting har vist seg å senke totalt kolesterolnivå hos mus7, mens kronisk forbruker høyt fettinnhold dietter øker totalt kolesterolnivå8. Det finnes to hovedtyper av kolesterol: lipoprotein-kolesterol med høy tetthet (HDL-C) og lipoproteinkolesterol med lav tetthet (LDL-C). HDL-C regnes som den "gode" lipiden hos mennesker. Den bærer kolesterol og transporterer det til leveren som skal skylles ut av systemet. LDL-Cs utgjør det meste av kolesterolet i det menneskelige serumet, og de kan bygge seg opp i arterier, noe som fører til store arteriesykdommer. Mus mangler imidlertid et viktig enzym, kolesteryl ester overføring protein (CETP)9, som formidler utveksling av triglyserider for esterifisert kolesterol mellom HDL og apoB-lipoproteiner10. Dette gir mus en helt annen lipoproteinpartikkelprofil, med HDL som hovedart. Som et resultat gjenspeiler en endring i totalt serumkolesterolnivåer først og fremst endringer i HDL-C-nivåer.
Hos både mus og mennesker kan høye serum triglyseridnivåer øke lavgradig betennelse og kan svekke hjertefunksjonen11,12. HFD øker imidlertid ikke serum triglyseridnivået. Genetiske faktorer kan spille en dominerende rolle i serum triglyseridnivåer over metabolske forhold13. NEFA i blodet kan ivrig absorberes og brukes av mange organer, undertrykkes av insulin og fôring, og økes med epinefrin14. HFD-fôring endrer ikke serum NEFA-nivå, noe som tyder på at hormonell signal dominerer reguleringen av serum NEFA-nivåer.
Tolke oral intralipid clearance test
En oralt administrert intralipid absorberes av tarmepitelceller og bæres i lipoproteinpartikler i blodet, hvor den frigjøres og brukes av perifere organer. Endringer i lipoprotein lipaseaktivitet, perifert vev triglyseridopptak, og oksidasjon vil påvirke dynamikken i serum triglyseridnivåer. For eksempel oksiderer brune og beige adipocytter ivrig fettsyrer for varmeproduksjon. Kald eksponering øker brun og beige adipocyttaktivitet betydelig, og akselererer plasmaclearance av triglyserider15. Den orale intralipidtoleranse clearance testen var avgjørende for å evaluere effekten av kald eksponering på triglyserid metabolisme, som vist i papiret15.
Evaluering av forbindelser rettet mot fettvev lipolyse
Aktivering av lipolyse formidles av det sympatiske nervesystemet, endokrine faktorer og ulike metabolitter. Mange forbindelser har blitt satt i utvikling av farmasøytiske selskaper for å fremme fettvev lipolyse16,17. Å vurdere effekten i prekliniske dyremodeller som mus er avgjørende for å lette utviklingsprosessen. Her bruker vi en β3- adrenerge reseptoragonist, CL 316,243, som et eksempel for å illustrere hvordan vi kan vurdere hvordan en mus reagerer på forbindelsen og om musen viser forskjellige nivåer av følsomhet for forbindelsen i forskjellige metabolske tilstander. Som sett i de eksemplariske resultatene, forårsaket gjentatt bruk av CL 316,243 desensibilisering til behandlingen hos musene. Vi brukte CL 316,243 for å illustrere hvordan vi kunne vurdere musens respons på akutt behandling; Enda viktigere, dette konseptet og designet kan enkelt brukes på andre molekyler rettet mot fettvev lipid metabolisme.
Begrensninger
Noen få utvalgte lipidarter gir begrenset informasjon om lipidmetabolisme hos mus. På grunn av den lille mengden serum som er tilgjengelig fra haleblødning, måler denne protokollen bare totalt kolesterol og skiller ikke HDL-C og LDL-C, da disse analysene krever betydelige mengder blod. Fordi mus er unike i måten de mangler CETP, er totalt kolesterol en god tilnærming, og mer HDL-C hos mus indikerer ikke en sunn lipidprofil, så tilleggsinformasjon oppnådd ved å skille kolesterolet i forskjellige lipoproteinpartikler er begrenset.
Serum lipidnivåer, inkludert triglyseridnivåer, er vanligvis en netto effekt av absorpsjon og ekskursjon av mange organer som virker på en svært dynamisk måte. Tolking av resultatene krever vanligvis et eksperimentelt oppsett med bare én variabel. Som vist i det eksemplariske resultatet, kan det ikke gjøres noen spesifikk konklusjon om lipidabsorpsjon eller ekskursjon mellom C57BL / 6J og C57BL / 6N underskoler av C57BL / 6 mus. Men i den siterte kaldeksponeringsstudien15, forkunnskaper og noen ganger kan forutsetninger brukes til å utelukke bidrag fra andre variabler, og forfattere var i stand til å feste seg til et bestemt vev og oppdaget at brunt fettvev bidro til forbedret triglyseridclearance.
Til slutt er metabolisme en dynamisk prosess. Endringen av en metabolitt i en lipid metabolsk vei gir bare et øyeblikksbilde av den generelle tilstanden. For å forstå strømmen er det nødvendig med en mer sofistikert fluxstudie ved hjelp av isotopsporingsteknikker.
Oppsummert er enkelheten både kraften og svakheten i denne protokollen. De tre analysene som presenteres her er ikke designet for studiet av spesifikke lipidmetabolismebaner, men heller for å gi en innledende screening eller et utgangspunkt for evaluering av lipidmetabolisme i generell ernærings- og fedmeforskning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingenting å avsløre.
Acknowledgments
Dette arbeidet støttes av National Institutes of Health (NIH), grant R00-DK114498, og United States Department of Agriculture (USDA), grant CRIS: 3092-51000-062 til Y. Z.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 20% Intralipid | Sigma Aldrich | I141 | |
| BD Slip Tip Sterile Syringes 1ml | Shaotong | B07F1KRMYN | |
| CL 316,243 Hydrate | Sigma-Aldrich | C5976 | |
| Curved Feeding Needles (18 Gauge) | Kent Scientific | FNC-18-2-2 | |
| Free Glycerol Reagent | Sigma Aldrich | F6428 | |
| Glycerol Standard Solution | Sigma | G7793 | |
| HR SERIES NEFA-HR(2)COLOR REAGENT A | Fujifilm Wako Diagnostics | 999-34691 | |
| HR SERIES NEFA-HR(2)COLOR REAGENT B | Fujifilm Wako Diagnostics | 991-34891 | |
| HR SERIES NEFA-HR(2)SOLVENT A | Fujifilm Wako Diagnostics | 995-34791 | |
| HR SERIES NEFA-HR(2)SOLVENT B | Fujifilm Wako Diagnostics | 993-35191 | |
| Matrix Plus Chemistry Reference Kit | Verichem | 9500 | |
| Micro Centrifuge Tubes | Fisher Scientific | 14-222-168 | |
| Microhematrocrit Capillary Tube, Not Heparanized | Fisher Scientific | 22-362-574 | |
| NEFA STANDARD SOLUTION | Fujifilm Wako Diagnostics | 276-76491 | |
| Phosphate Buffered Saline | Boston Bioproducts | BM-220 | |
| Thermo Scientific Triglycerides Reagent | Fisher Scientific | TR22421 | |
| Total Cholesterol Reagents | Thermo Scientifi | TR13421 |
References
- Dixon, J. B. Mechanisms of chylomicron uptake into lacteals. Annals of the New York Academy of Sciences. 1207, Suppl 1 52-57 (2010).
- Nuno, J., de Oya, M. Lipoprotein lipase: review. Revista Clínica Española. 170 (3-4), 83-87 (1983).
- Williams, K. J. Molecular processes that handle -- and mishandle -- dietary lipids. Journal of Clinical Investigation. 118 (10), 3247-3259 (2008).
- Burla, B., et al. MS-based lipidomics of human blood plasma: a community-initiated position paper to develop accepted guidelines. Journal of Lipid Research. 59 (10), 2001-2017 (2018).
- Umpleby, A. M. Hormone measurement guidelines: Tracing lipid metabolism: the value of stable isotopes. Journal of Endocrinology. 226 (3), 1-10 (2015).
- Mitchell, B. D., et al. A paired sibling analysis of the beta-3 adrenergic receptor and obesity in Mexican Americans. Journal of Clinical Investigation. 101 (3), 584-587 (1998).
- Mahoney, L. B., Denny, C. A., Seyfried, T. N. Caloric restriction in C57BL/6J mice mimics therapeutic fasting in humans. Lipids in Health and Disease. 5, 13 (2006).
- Hayek, T., et al. Dietary fat increases high density lipoprotein (HDL) levels both by increasing the transport rates and decreasing the fractional catabolic rates of HDL cholesterol ester and apolipoprotein (Apo) A-I. Presentation of a new animal model and mechanistic studies in human Apo A-I transgenic and control mice. Journal of Clinical Investigation. 91 (4), 1665-1671 (1993).
- Hogarth, C. A., Roy, A., Ebert, D. L. Genomic evidence for the absence of a functional cholesteryl ester transfer protein gene in mice and rats. Comparative Biochemistry and Physiology - Part B: Biochemistry & Molecular Biology. 135 (2), 219-229 (2003).
- Tall, A. R. Functions of cholesterol ester transfer protein and relationship to coronary artery disease risk. Journal of Clinical Lipidology. 4 (5), 389-393 (2010).
- Singh, A. K., Singh, R. Triglyceride and cardiovascular risk: A critical appraisal. Indian Journal of Endocrinology and Metabolism. 20 (4), 418-428 (2016).
- Miller, M., et al. Triglycerides and cardiovascular disease: a scientific statement from the American Heart Association. Circulation. 123 (20), 2292-2333 (2011).
- Dron, J. S., Hegele, R. A. Genetics of Hypertriglyceridemia. Frontiers in Endocrinology (Lausanne). 11, 455 (2020).
- Dole, V. P. A relation between non-esterified fatty acids in plasma and the metabolism of glucose. Journal of Clinical Investigation. 35 (2), 150-154 (1956).
- Bartelt, A., et al. Brown adipose tissue activity controls triglyceride clearance. Nature Medicine. 17 (2), 200-205 (2011).
- de Souza, C. J., Burkey, B. F. Beta 3-adrenoceptor agonists as anti-diabetic and anti-obesity drugs in humans. Current Pharmaceutical Design. 7 (14), 1433-1449 (2001).
- Braun, K., Oeckl, J., Westermeier, J., Li, Y., Klingenspor, M. Non-adrenergic control of lipolysis and thermogenesis in adipose tissues. Journal of Experimental Biology. 221, Pt Suppl 1 (2018).
