Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Neuroscience
Click here for the English version

Neuroscience

Parkinson Hastalığının Genetik Sıçan Modelinde Yürüme Analizi için RatWalker Sisteminin Uygulanması

Published: January 18, 2021 doi: 10.3791/62002
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1, 1, 1
1Department of Neurological Sciences, University of Nebraska Medical Center

Summary

Burada, MouseWalker aparatının sıçanların artan boyutuna ve ağırlığına uyum sağlayacak şekilde yeniden tasarlanmasıyla inşa edilen RatWalker sistemini tanımlıyoruz. Bu sistem, yürüyüş parametrelerini izlemek ve ölçmek için hayal kırıklığına uğramış toplam dahili yansıma (FTIR), yüksek hızlı video yakalama ve açık erişimli analiz yazılımı kullanır.

Abstract

Parkinson hastalığı (PD), substantia nigra pars compacta'da dopaminerjik (DA) nöronların kaybından kaynaklanan ilerleyici nörodejeneratif bir hastalıktır. Azalmış kol sallanması, daha yavaş yürüme hızı ve daha kısa adımlar dahil olmak üzere yürüme anormallikleri PD hastalarında yaygındır ve hastalığın seyrinde erken ortaya çıkar. Bu nedenle, PD'nin hayvan modellerinde motor paternlerin nicelleştirilmesi, hastalık seyri sırasında ve terapötik tedavi sırasında fenotipik karakterizasyon için önemli olacaktır. PD vakalarının çoğu idiyopatiktir; Bununla birlikte, PD'nin kalıtsal formlarının tanımlanması, hayvan modelleri oluşturmak için kullanılabilecek mitokondriyal kalite kontrolünde yer alan iki protein olan Pink1 ve Parkin'deki fonksiyon kaybı mutasyonları gibi gen mutasyonlarını ve varyantlarını ortaya çıkarmıştır. Fareler Pink1 ve Parkin (tek ve kombine delesyon) kaybı üzerine nörodejenerasyona dirençli iken, sıçanlarda, Pink1 ancak Parkin eksikliği nigral DA nöron kaybına ve motor bozulmaya yol açmaz. Burada, serbestçe yürüyen genç (2 aylık) erkek sıçanlarda, bu sıçanlar yaşlandıkça (4-6 ayda gözlenen) brüt görsel olarak belirgin motor anormallik gelişmesinden önce Pink1 ve Parkin'in kombine kaybı olan yürüyüş değişikliklerini ortaya çıkarmak için FTIR görüntülemenin yararlılığını bildiriyoruz.

Introduction

Yaşa bağlı en yaygın nörodejeneratif hareket bozukluğu olan PD, substantia nigra pars compacta'daki DA nöronlarının kaybından kaynaklanır. Nigral DA nöronlarının bu kaybı ve striatuma DA girişleri, PD 1,2'li hastalarda görülen gözlenen motor fonksiyon bozukluklarına yol açmaktadır. Toplu olarak Parkinsonizm olarak bilinen PD'li hastaların tanımlayıcı motor özellikleri arasında sertlik, istirahat titremesi, bradikinezi, postüral instabilite ve mikrografi3 bulunur. Ayrıca PD hastalarında sık görülen yürüme bozukluklarıhastalığın seyrinde erken ortaya çıkmaktadır 1,4,5. Sağlıklı beslenme ve düzenli egzersiz gibi bazı yaşam tarzlarının PH'nin ilerlemesini yavaşlatmaya yardımcı olduğu öne sürülürken, şu anda PD için bir tedavi yoktur, sadece semptomları yönetmek için ilaçlar vardır. Bu, iyileştirilmiş terapötikler umuduyla daha fazla araştırmaya ihtiyaç duyulmasına yer bırakmaktadır. Bu nedenle, PD hayvan modellerinde yürüme paterninin karakterizasyonu, modelin alaka düzeyini ve PD'yi kontrol etmeyi amaçlayan terapötik tedavilerin motor bozuklukları nasıl önlediğini veya iyileştirdiğini karakterize etmek için çok önemli bir araçtır.

Terapötik tedavileri test etmek için kullanılan çeşitli PD hayvan modelleri vardır, ancak her birinin sınırlamaları vardır. Örneğin, nörotoksin 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridin (MPTP) ile tedavi edilen hayvan modelleri, nigral DA nöron kaybı ve müteakip striatal adaptasyonlar için önemli süreçler hakkında büyük bir bilgi zenginliği sağlamış ve PD patogenezinde mitokondrinin rolüne işaret etmiştir; Bununla birlikte, MPTP modelinin patogenetik arka planı, insan PD6'da olduğu gibi nörodejeneratif bir süreçten ziyade toksik bir yapıya sahiptir. Ek kimyasal olarak indüklenebilir modeller arasında 6-hidroksidopamin (6-OHDA) ve rotenon bulunur. 6-OHDA, ilacın DA nöronlarında seçici birikimi ile PD'yi indüklemek için kullanılan ilk ajandı, bu da sonunda nöronları öldürür ve PD benzeri semptomlara yol açar. Bu model ilk olarak amfetamin ve apomorfin7'ye yanıt olarak davranışı inceleyerek DA tükenmesinin izlenmesi için kullanılmıştır. Bu PD indüksiyon yönteminin, DA ve reseptörlerini etkileyen farmakolojik ajanların taranmasında yararlı olduğu kanıtlanmıştır8. 6-OHDA modeli, ölçülebilir motor açıklarını izlemek için harika bir model olsa da, bu model nöronların kademeli olarak kaybının ve Lewy cisimlerinin oluşumunun hayvanı nasıl etkilediğini göstermez. Diğer indüksiyon yöntemi olan rotenonun, tirozin hidroksilaz ve DA taşıyıcı kaybı ile nigrostriatal nöronların ilerleyici dejenerasyonuna sahip olduğu ve zamanla nöron kaybını izlemek için daha iyi bir modele izin verdiği gösterilmiştir9. Rotenon ile tedavi edilen sıçanlar bradikinezi, postüral instabilite ve kararsız yürüyüş10 gösterdi. Bununla birlikte, bu yöntemin farklı sıçan suşları arasında geniş ölçüde değişken olduğu bulunmuştur, bu da rotenonun güvenilir bir PD modeli11,12,13 olup olmadığının sorgulanmasına neden olmuştur. Yürüme analizinin sıçanlarda PD indüksiyonundan etkilendiği gösterilmiş olsa da, bugüne kadar, genetik olarak indüklenen PD sıçan modelleri, bir pistte serbestçe yürüyerek yürüyüş analizi için kolayca kullanılmamıştır.

Serbestçe yürüyen kemirgenlerde motor bozulmasını analiz etmenin bir yolu, FTIR görüntüleme kullanılarak gerçekleştirilebilen kinematik yürüyüş analizidir. Bu yerleşik yöntem, kemirgenlerin14,15,16 pistinden aşağı inerken ayak izlerini kaydeden ve izleyen FTIR'a dayalı bir optik dokunma sensörü kullanır. Diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında, FTIR, hayvanın vücudunda pençe izlerine müdahale edebilecek herhangi bir işaretleyiciye bağlı değildir. Video verilerinin oluşturulması, çeşitli kemirgen modelleri için dinamik ve tekrarlanabilir bir yürüyüş paterni oluşturmak için birleştirilebilen dört uzuvun tümünün dijital pençe baskılarını üretir. Görüntüleme tabanlı yürüyüş analizinin prensibi, her bir pençeyi almak ve kemirgen pistte yürürken zaman içinde temas alanını ölçmektir. Her duruş, pençe alanında (frenleme aşamasında) bir artış ve pençe alanında (tahrik aşamasında) bir azalma ile temsil edilir. Bu, pençe sinyalinin algılanmadığı salıncak aşaması ile devam eder. Videonun değerlendirilmesinden sonra, vahşi tip (WT) ile PD modelini karşılaştırmak için kullanılabilecek çeşitli parametreler oluşturulur. Parametrelerin bazı örnekleri adım uzunluğu (pençenin bir adımda kat ettiği mesafe), salınım süresi (pençenin pistle temas etmediği süre), salınım hızı (salınım süresinin bir fonksiyonu olarak adım uzunluğu) ve adım desenidir (çapraz adımlar, yanal adımlar veya kuşak adımları).

Sıçanlardaki erken yürüyüş paterni değişikliklerini ortaya çıkarmak için FTIR'ın faydasını göstermek için, PD'nin genetik bir sıçan modelini kullandık. PD vakalarının çoğu idiyopatik olmakla birlikte; PD'nin kalıtsal formlarının tanımlanması, mitokondriyal kalite kontrolünde yer alan iki protein olan Pink1 ve Parkin'deki fonksiyon kaybı mutasyonları gibi gen mutasyonlarını ve varyantlarını ortaya çıkardı17, hayvan modelleri oluşturmak için kullanılabilecek18. Ne yazık ki, fareler bu proteinlerin (tek ve kombine) kaybı üzerine nörodejenerasyona karşı dirençlidir19,20,21. Sıçanlarda, Pembe1 ancak Parkin eksikliği değil, nigral DA nöron kaybına ve motor bozukluklarayol açar 22, ancak tam penetrans olmadan. Bu nedenle, erkek Pink1 KO sıçanları22'de bildirilen açık görsel olarak görünür arka bacak sürükleme fenotipini görüntüleyen, ancak şimdi daha yüksek bir oranda gösteren kombine bir Pink1 / Parkin çift nakavt (DKO) sıçan modeli oluşturduk: 4-6 ay arasında erkeklerin% 30-50'sine karşı% 100.

Bu yöntem, farelerde motor açıklarını analiz etmek için iyi çalışsa da,14, sıçanların büyüklüğünü ve ağırlığını karşılamak için FTIR görüntüleme yürüyüş sistemi özellikleri daha önce ticari olmayan bir şekilde kullanılamıyordu. Burada, sıçanların büyüklüğü ve ağırlığı için uyarlanmış olanlar dışında, MouseWalker14'ten sonra modellenmiş modifiye edilmiş bir FTIR yürüyüş görüntüleme sistemi olan RatWalker'ın nasıl inşa edileceğini açıklıyoruz. Bu sistem, hayvan ayak izlerini görselleştirmek ve daha sonra analiz için kaydetmek için bir yöntem sağlamak üzere optik bir etki olan FTIR'ı kullanır. Bir hayvanın ayağının optik dalga kılavuzu (platform) ile teması, ışık yolunda bozulmaya neden olur ve bu da ev içi sınıf, yüksek hızlı videografi ve açık kaynaklı yazılım kullanılarak işlenerek yakalanan görünür bir saçılma etkisine neden olur. Bu çalışma, PD'nin genetik sıçan modellerindeki yürüyüş değişikliklerini incelemede FTIR görüntülemenin gücünü göstermektedir. Örneğin, erkek DKO sıçanlarında en erken 4 ayda açık görsel olarak belirgin motor değişiklikler (yani arka bacak sürükleme) gözlenirken, FTIR kullanarak 2 aylıkken erkek DKO sıçanlarında kapı anormalliklerini ortaya çıkarabiliyoruz.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Tüm hayvan çalışmaları, Nebraska Üniversitesi Tıp Merkezi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.

1. Yürüyüş aparatı

NOT: MouseWalker14'ten modellenen RatWalker, sıçanlar ve fareler arasındaki adım uzunluğu farkıyla orantılı boyutlarda tasarlanmıştır. Bir yan aydınlatma arka ışığı, geçit muhafazası, optik dalga kılavuzu geçidi, ayna ve kameradan oluşur (Şekil S1). Kademeli bir konumda yönlendirilmiş LED şeritler, ekstra malzemeyi barındırmak için yürüyüş yolunun her iki tarafında ve arka ışık dalga kılavuzlarında kullanılmıştır. Modifiye edilmiş yürüyüş aparatını oluşturmak için gereken malzemeler Tablo S1'de bulunabilir.

  1. Yazılım tarafından konum, hareket yönü ve morfometrik nitelikler atamak için kullanılan hayvanın siluetini oluşturmak için bir arka ışık (Şekil S2) kullanın. İnşaat, bir stok alüminyum çerçeve içinde monte edilmiş bir akrilik difüzör, optik dalga kılavuzu, reflektör ve LED ışık şeritlerinin katmanlı bir panelinden oluşur (Tablo S1).
  2. Hayvanı platform boyunca yönlendirmek ve hayvanı ev kafesine yönlendirmek için bir geçit muhafazası kullanın (Şekil S3). Konstrüksiyon, diklorometan ile kaynaklanmış şeffaf akrilik levhalardan oluşur (Tablo S2).
  3. Yanan ayak izleri oluşturmak için ortamı sağlamak üzere yürüyüş yolunu (Şekil S4) kullanın. Geçit, şerit LED'lerle yandan aydınlatılmış ve alüminyum açıda (Tablo S3) yerleştirilmiş şeffaf akrilikten yapılmıştır.
  4. Videografi için geçitin alt tarafını yansıtmak için 45 derecelik bir açıyla doğrudan geçitin altına bir ayna (Şekil S5) yerleştirin. Akrilik ile desteklenen 1/4" kalınlığında cam aynadan ve arka arkaya düzenlenmiş açılı braketlerden yapılmıştır (Tablo S4).
  5. Tripod monteli, ev tipi kalitede, yüksek hızlı bir aksiyon kamerası kullanarak videografi gerçekleştirin.

2. Ekipman Kurulumu

  1. Arka ışığı, yürüyüş yolunu ve aynayı Şekil S1'e göre, tezgahın, tezgahın veya sabit arabanın üzerine hizalayın. Her bileşenin geçide göre ortalandığından emin olun.
  2. Bir seviye kullanarak, bileşenlerin yatay olarak dolgun olduğundan emin olun.
  3. Geçit muhafazasını yürüyüş yolunun üstüne yerleştirin.
  4. Tüm temas yüzeyi alanlarını% 70 etanol ile temizleyin. Yürüyüş yolunun çizilmesini önlemek için aşındırıcı olmayan bir havlu kullandığınızdan emin olun.
  5. Yüksek hızlı kamerayı 57 inçlik bir tripoda monte edin ve görüş alanının içindeki tüm yürüyüş yolunu yakalayacak kadar uzağa yerleştirilmiş olarak aynanın ortasına yerleştirin. Video ayarları menüsünden, yüksek hızlı kameranın 1080p modunda saniyede 120 kare (fps) hızında doğrusal çekime ayarlandığından ve her türlü otomatik ayarlama veya optimizasyonun kapalı olduğundan emin olun.
  6. Arka ışık ve geçit için LED şerit ışıklarını takın ve açın. Arka plan yakalamayı azaltmak için arka ışığı kısmak gerekebilir.

3. Hayvan Uyumu

NOT: İlk deneyden bir hafta önce, hayvanları modifiye edilmiş yürüyüş aparatından geçirin.

  1. Yürüyüş yolunun ucuna bir ev kafesi yerleştirin.
  2. Muhafaza takılı ve ışıklar kapalıyken, sıçanı ev kafesinin karşısındaki yürüyüş yolunun sonuna yerleştirin ve yürüyüş yolunda zorlanmadan yürümesine izin verin.
  3. Her sıçanı, tüm yürüyüş yolunu sorunsuz bir şekilde geçene kadar modifiye edilmiş yürüyüş aparatından birkaç kez geçirin.
  4. İşlemi denemeden iki gün önce tekrarlayın.

4. Yürüyüş Prosedürü

  1. Sıçanın geçitten geçmesi için olumlu bir ipucu olarak hizmet etmek için her koşunun başlamasından önce yürüyüş yolunun sonuna bir ev kafesi yerleştirin.
  2. Oda ışıklarını kapatın, kamerayı açın ve sıçan platforma yerleştirilmeden birkaç saniye önce kayda başlayın.
    NOT: Fotoğraf makinesi üreticisi tarafından resmi olarak önerilen bir bellek kartı kullandığınızdan emin olun. Listelenmemiş bir bellek kartı çalışmaya devam edebilir, ancak iddia edilen kare hızında çekim yapacağı garanti edilmez.
  3. Muhafaza monte edildiğinde, sıçanı ev kafesinin karşısındaki yürüyüş yolunun sonuna yerleştirin ve yürüyüş yolu boyunca zorlanmadan yürümesine izin verin.
  4. Hayvan yürüyüş yolunun sonuna ulaştığında kaydı durdurun.
  5. Koşular arasında ve bir hayvan idrar yaptıktan veya dışkıladıktan sonra% 70 etanol ve aşındırıcı olmayan bir havlu kullanarak geçidi temizleyin, ardından başka bir hayvanı tanıtmadan önce etanolün buharlaşmasına izin verin.
  6. Sıçanları her gözlem periyodu boyunca toplam 7 kez geçitten geçirin ve ilk üç koşuyu analiz için geçen olarak kabul edin.
  7. Hayvan, tımar, duraklama veya hatalı hareketler nedeniyle kesintisiz olarak ev kafesi yönünde dört veya daha fazla ardışık adım atarsa, bir koşuyu geçiyormuş gibi puanlayın.
    NOT: Her önlem turundan önce hayvanların kütlesini kaydetmek iyi bir uygulamadır. Çalışmamız için WT (n = 7) ve DKO (n = 8) sırasıyla 200.3 ± 21.67 g ve 296.6 ± 3.85 g ağırlığındaydı (p = 0.004, Welch'in düzeltmesi ile eşleşmemiş t testi). Herhangi bir yaş veya büyüklükteki sıçanlarla ilgili bir sorun görmüyoruz.

5. Video ön işleme

NOT: Yüksek hızlı kamera tarafından çekilen videolar, 120 fps'de mp4 formatında ve 1080p çözünürlükte işlenir. Analitik yazılımın yükünü aşağı yönde hafifletmek için, önce gereksiz çekimleri kırpın ve LosslessCut yazılımını (sürüm 3.23.7, https://github.com/mifi/lossless-cut) kullanarak her videodaki sesi çıkarın, ardından açık kaynaklı yazılım FFmpeg'i (sürüm 4.2, http://ffmpeg.org/) kullanarak mp4 video akışını bir png görüntü dizisine dönüştürün. Not: png yerine tiff gibi diğer Kayıpsız formatlar kullanılabilir.

  1. Windows 7 veya üstünü çalıştıran bir bilgisayarda videolar için bir dizin oluşturun, ardından videoları yüksek hızlı kameranın depolama cihazından yeni oluşturulan dizine aktarın. Ayrıca, ffmpeg.exe aynı konuma kopyalayın.
  2. LosslessCut'ta, açmak için videoları arayüze sürükleyin. Sesi atın, başlangıç ve bitiş kesme noktalarını videonun yalnızca analitik olarak alakalı bölümünü içerecek şekilde ayarlayın, yakalama kare biçimini png olarak ayarlayın ve dışa aktarın. Video dışa aktarıldıktan sonra, herhangi bir adlandırma kuralını ve ardından "_trimmed" ifadesini kullanarak video dosyasını yeniden adlandırın.
  3. Videoları toplu olarak görüntü dizilerine dönüştürmek için bir komut istemi açın, çalışma dizinini "cd [dizin yolu]" ile videoların konumuna ayarlayın ve aşağıdaki komutları çalıştırın:
    %i in (*) için mkdir "%~ni_cropped"
    %i in (*) için mkdir "%~ni_trimmed"
    /f için "tokens=1 delims=." %a in ('dir /B *_trimmed. MP4') do ffmpeg -i "%a.MP4" "%a/%a_%04d.png"
  4. Toplu işlem tamamlandıktan sonra, her görüntü dizisini ImageJ Fiji23'te açın ve diziyi, sıçanın gözlemlendiği zeminin alanını kapsayan ilgi alanına (ROI) kırpın.
  5. Geçit aydınlatmasından arka planı azaltmak için, camgöbeği kanalının minimum renk dengesini 76'ya yükseltin.
  6. Görüntü sırası olarak kaydedin ve "_trimmed" sonekini "_cropped" olarak değiştirin ve dosyaları ilgili "_cropped" klasörüne kaydedin.

6. Yürüyüş İşleme

NOT: Yürüyüş verileri, ücretsiz olarak kullanılabilen MouseWalker (http://biooptics.markalab.org/MouseWalker/)14 yazılımı kullanılarak işlenir ve ölçülür.

  1. MouseWalker yazılımını paketinden çıkarın ve Microsoft Excel'in yüklü olduğu 64 bit Windows ortamı çalıştıran bir bilgisayara yükleyin.
  2. MouseWalker.exe başlattıktan sonra, her çalıştırma kümesi için bir ilk terazi kalibrasyonu gerçekleştirin. Bir görüntü dizisi yükleyin ve videoda yakalanan yer işaretlerini veya cetvelleri kullanarak bilinen iki mesafe noktasını ölçün. Video karesindeki santimetre başına piksel sayısını hesaplayın ve bu değeri, video alma kare hızıyla birlikte ayarlar formunun parametreler bölümüne girin.
  3. Benzer şekilde, kafa uzunluğunu, maksimum kuyruk genişliğini ve alanını, minimum ve maksimum ayak alanını ve MouseWalker ayar formunun izleme parametreleri bölümünü tamamlamak için gerekli diğer özellikleri belirlemek için sıçanın başını, kuyruğunu ve ayaklarını ölçün. Kullanım kılavuzu ve diğer belgeler için http://biooptics.markalab.org/MouseWalker/ bakın.
  4. Gövde alanı değerlerini elde etmek için aynı görüntü dizisini ImageJ'de açın, sıçanı özetleyen bir seçim çizin ve bir ilgi alanı bölgesi (YG) piksel sayımı gerçekleştirin.
  5. Bu yayın için kullanılan parametreler ve ayarlar (Şekil S6).
    NOT: Parametreler örnek olarak verilmiştir ve videonun ölçeğine, edinme donanımına ve koşullarına bağlıdır. Kamera veya ekipman her yeniden konumlandırıldığında yazılım kalibrasyonu ve ayarı gerekir. Satın alma sırasında bir ölçüm cihazının yakalanması doğruluğu artırır ve kalibrasyonu kolaylaştırır.
  6. Kalibrasyonun ardından her görüntü dizisini yükleyin. Otomatik seçeneğinin seçilmesi, ayak izlerinin özerk olarak atanmasını başlatır.
  7. Dizinin her karesinde gezinerek yanlış atanan ayak izlerini manuel olarak düzeltin. Bu adım tamamlandıktan sonra kaydedin.
  8. Son olarak, ayak izi konumunu ve basınç verilerini işlemek için değerlendir'i seçin. Bir dizi grafik, resim ve nicel yürüyüş ölçümleri içeren bir elektronik tablo, bir sonuç klasörüne dışa aktarılır.

7. Veri Analizi

  1. Her değerlendirmenin sonunda dışa aktarılan ve her çalıştırma için nicel yürüyüş verilerini içeren elektronik tabloyu kullanın. Her çalıştırmadan ve sıçan başına ortalamadan gelen verileri birleştirin. Ortalama verileri çizin ve GraphPad Prism sürüm 7.0a'yı kullanarak anlamlılığı test edin.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Sıçan Kolonisi Bakımı
Pink1 ve Parkin tek KO sıçanlarının üretimi ve karakterizasyonu daha önce22 olarak tanımlanmıştır. Pink1 ve Parkin tek KO sıçanları SAGE Labs'tan elde edildi (ve şimdi Envigo'dan temin edilebilir). DKO sıçanları, Pink1-/-/Parkin-/- sıçanları elde etmek için Pink1-/-- sıçanları Parkin-/- sıçanlarla geçerek Pink1-/-/Parkin+/- sıçanları elde etmek için iç içe geçmiş olarak üretildi (Envigo'dan temin edilebilecek). Park6'da (Pink1 kodlayan gen) 26 bp'nin silinmesini doğrulamak için, genotipleme 5'-CCCTGGCTGACTATCCTGAC-3' ileri ve 5'-CCACCACCCACTACCACTTACT-3' ters primerler kullanılarak gerçekleştirildi. Park2'de (Parkin gen kodlaması) 5 bp'nin silinmesi, DNA ileri 5'-GGTGTCTTGGCTCAGTGTGA-3' ve ters 5'-GCCACCCAGAATAGCATCTC-3' kullanılarak çoğaltıldıktan sonra test edildi. Güçlendirilmiş Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) örnekleri dizileme için ACGT Inc'e (Wheeling, IL) gönderildi (Şekil S7). Tüm sıçanlar Uzun Evans Kapüşonlu (LEH) arka planda tutuldu. DKO sıçanları canlı ve verimliydi; Bununla birlikte, doğum sırasında DKO barajları arasında yüksek bir ölüm oranı vardı (yaklaşık% 30). Bu deneylerde sadece erkek sıçanlar kullanılmıştır. Sıçanlar, 12 saatlik bir ışık / karanlık döngüsü ve sıçan chow ve suya serbest erişim ile sıcaklık kontrollü bir ortamda tutuldu.

Sonuç -ları
14'ten uyarlanan sıçanlar için FTIR yürüyüş analizi sisteminin yararlılığına bir örnek olarak hizmet etmek için, kinematik yürüyüş analizinin kullanılmasının, 4 aylıktan itibaren brüt motor problemlerinin ortaya çıkmasından önce insan görsel algısıyla gözlenmeyen ince motor bozukluklarını ortaya çıkarıp çıkaramayacağını belirlemek için 2 aylıkken erkek WT ve Pink1 / Parkin DKO sıçanları üzerinde yürüyüş analizi gerçekleştirdik.

Fareler14'teki önceki yürüyüş çalışmalarına benzer şekilde, uyarlanmış FTIR sistemi, yürüyen sıçan tarafından oluşturulan ayak izi modelini ve vücut merkezi tarafından oluşturulan yolu gösterebildi (Şekil 1A). DKO sıçanlarının WT'ye kıyasla artan ağırlığına rağmen (Şekil 1B), FTIR sinyalinin yoğunlukları tarafından belirlenen yürüme yüzeyine uygulanan ayak basıncı (ısı haritaları olarak görselleştirilmiştir) değişmemiştir (Şekil 1C). Yürüme hızının bir fonksiyonu olarak birkaç yürüyüş parametresinin değerlendirilmesi üzerine (Şekil 1D-H), yürüme hızının ve adım uzunluklarının WT ve DKO sıçanları arasında benzer olduğunu gözlemledik (Şekil 1D). Bununla birlikte, WT ve DKO sıçanları arasındaki varyasyon, daha yavaş yürüme hızlarında duruş fazında ve salınım süresinde belirginleşmiştir (Şekil 1E, F). Bacağın duruş aşamasında olduğu adım döngüsünün fraksiyonu (duruş süresi / periyodu) görev faktörüdür ve bu parametre, koşmanın tipik bir örneği olan görev faktörü azaldıkça salıncak aşamasında duruş aşamasından daha fazla zaman harcandığını vurgular (Şekil 1G). Yine, farklılıklar daha düşük hızlarda vurgulanır. Ayrıca, WT hayvanlarında salınım hızları artan hız ile artarken, DKO sıçanlarında korelasyon körelir (Şekil 1H).

FTIR yürüyüş analizi ayrıca, serbestçe yürüyen sıçanlarda vücuda göre her bacağın duruş fazı izlerinin grafiklerine izin verdi (Şekil 2A, B). Duruş izleri vücut uzunluğuna normalleştirilir ve ayağın pençe temasından (ön aşırı pozisyon, AEP) duruş fazının sonuna (posterior extreme position, PEP) kadar vücut merkezine göre pozisyonu olarak tanımlanır. Pençe konumlandırmasını karşılaştırdıktan sonra, AEP (sol arka bacak) ve PEP'de (sağ arka bacak) önemli değişiklikler gözlemledik, bu da sol arka bacağımın pençe touchdown (AEP) sırasında vücuda daha yakın olduğunu, sağ arka bacak ise WT sıçanlarına kıyasla DKO'da pençe kalkışı (PEP) sırasında vücuttan daha uzakta olduğunu düşündürmektedir (Şekil 2C).

DKO sıçanlarında WT'ye kıyasla birkaç ek parametre önemli ölçüde değiştirildi. Özellikle, arka bacak salıncak desenlerindeki değişiklikler ortaya çıkarıldı. DKO sıçanlarında WT sıçanlarına göre hem sol hem de sağ arka bacakların salınım hızı artmış (Şekil 3A), hem sol hem de sağ arka bacakların salınım süresi azalmıştır (Şekil 3B). Not olarak, adım uzunluğu değişmemiştir (Şekil 4).

Figure 1
Şekil 1. Ayak izi deseni ve adım parametresi analizi. (A) WT ve (B) DKO sıçanları için temsili ayak izi desenleri, piksel yoğunluğunu ve gövde yolunu temsil eden yatay çizgiyi temsil eden ayak izi ısı haritasını ve (alt panel) farklı renklerle etiketlenmiş bireysel ayakları gösterir: sol ön (LF, sarı), sol arka (LH, mavi), sağ ön (RF, turuncu) ve sağ arka (RH, yeşil). (C) Her WT (n = 7) ve DKO (n = 8) sıçan için ortalama yürüme hızı. SEM ile ortalama. Önemli değil. (D-H) WT (n = 7) ve DKO (n = 8) sıçanlarında hızın bir fonksiyonu olarak adım parametreleri. Doğrusal regresyon çizgileri ve R kare değerleri dahildir. (D) WT ve DKO sıçanlarında adım uzunluğu hız ile artar. (E) Salınım süresi WT sıçanlarında hız ile ters orantılıdır, ancak DKO sıçanlarında değildir (anlamlı değildir). (F) WT ve DKO sıçanlarında duruş süresi hız ile azalır. (G) Görev faktörü DKO sıçanlarındaki hız ile ters orantılıdır, ancak WT sıçanlarında değildir (anlamlı değildir). (H) Salınım hızı, WT sıçanlarında hız ile doğrusal olarak artar, ancak DKO sıçanlarında değil (önemli değildir). Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Figure 2
Şekil 2. Duruş izleri ve pençe konumlandırma analizi. (A) Bir WT sıçanı için burun (kırmızı katı), kafa konturu (mavi kesikli), kuyruk konturu (yeşil kesikli), vücut merkezi (beyaz kesikli) ve ayak izleri (daireler: yeşil, RF ve açık mavi, LH) ile görselleştirilmiş temsili yürüyüş parkuru analizi. (B) Serbestçe yürüyen WT ve DKO sıçanları için duruş izlerinin temsili çizimleri. (C) WT (n = 7) ve DKO (n = 8) sıçanlarında pençe konumlandırması gösterilmiştir. AEP, ön aşırı pozisyon; PEP, posterior aşırı pozisyon; L, solda; R, doğru; F, ön pençe; H, arka pençe. İki yönlü ANOVA ve Sidak'ın çoklu karşılaştırma testi kullanılarak WT (p < 0.05*, 0.001***) ile karşılaştırıldığında anlamlı. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Figure 3
Şekil 3. DKO sıçanlarında Hindpaw salıncak parametreleri değişti. Pençelerin hareket ettiği (A) hızının ve (B) zaman pençelerinin WT (n = 7) ve DKO (n = 8) sıçanlarında havalandırıldığının ön pençe ve arka pençe ölçümleri. L, solda; R, doğru; F, ön pençe; H, arka pençe. SEM ile ortalama. Welch'in düzeltmesi ile Student'ın eşlenmemiş iki kuyruklu t-testi kullanılarak WT (p < 0.01**) ile karşılaştırıldığında anlamlı. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Figure 4
Şekil 4. DKO sıçanlarında değişmemiş adım uzunluğu. WT (n = 7) ve DKO (n = 8) sıçanlarında adım uzunluğunun forepaw ve hindpaw ölçümleri. L, solda; R, doğru; F, ön pençe; H, arka pençe. SEM ile ortalama. Welch'in düzeltmesi ile Student'ın eşlenmemiş iki kuyruklu t-testini kullanarak WT ile karşılaştırıldığında anlamlı (anlamlı değil). Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Ek Şekil. Bu dosyayı indirmek için lütfen tıklayınız.

Ek Tablo. Bu tabloyu indirmek için lütfen tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Azalmış kol sallanması, daha yavaş yürüme hızı ve daha kısa adımlar dahil olmak üzere yürüme bozuklukları, PD'nin tanımlayıcı bir özelliğidir ve hastalık seyri sırasında erken ortaya çıkar 1,5. PD'nin kemirgen modellerinde yürüyüş analizi için ayak izlerini gözlemlemek ve kaydetmek için yıllar içinde çeşitli yöntemler geliştirilmiştir; ayak basma pozisyonunu ölçmek için manuel teknikler, daha hassas ve dinamik parametreleri yakalayabilen otomatik yaklaşımlara yol açmaktadır. Bazı statik yaklaşımlar, kemirgenin pençelerini,24,25,26 numaralı bir geçit üzerine yerleştirilen medyaya izlenecek bir göstergeyle "mürekkeplemeyi" içerir. Artık ayak izleri daha sonra elle ölçülür. Bu yöntemler genellikle manuel kinematik puanlama için videoya kaydetme ile birlikte kullanılır. Yürüyüş kalıplarını yakalamak ve ölçmek için özerk yöntemler daha yakın zamandatanıtıldı 15,16 ve ticari olarak temin edilebilir. Otonom yürüyüş ölçümü, aksi takdirde statik ayak izlerine zamansal nitelikler ekler ve araştırmacıların mesafe ve açı27'ye ek olarak hız ve zamana atfedilen anormallikleri aramalarını sağlar. Basınç, FTIR yöntemiyle birleştirildiğinde de ölçülebilir.

Yürüme paterni anormallikleri, PD'nin toksin kaynaklı sıçan modellerinde de bildirilmiştir. Özellikle, 6-OHDA lezyon modelinde ticari bir yürüyüş analiz platformu 28,29,30 kullanılarak yürüyüş değişiklikleri bildirilmiştir. Bu modeldeki en belirgin değişiklik, yürüme hızı ve kadansındaki düşüşler olmuştur. Ayrıca, ticari yürüyüş analizi platformu, tek taraflı 6-OHDA kaynaklı lezyonların etkisi ve dopaminerjik nöronların transplantasyonunun yürüyüş değişikliklerini nasıl kurtardığı gibi PD modellerinin bir dizi dinamik ve statik yürüyüş parametresini değerlendirmek için kullanılmıştır31. Ek olarak, bir çalışma, beynin yaralı ve yaralanmamış taraflarındaki 6-OHDA lezyonlarından parametrelerin oranını analiz ederken, arka bacak adım döngüsü, arka bacak baskı alanı ve adım dizisi gibi ilgili parametrelerdeki hızı düzeltirken, bunların hepsi farklı lezyon tiplerini salin kontrolleri ile karşılaştırırken önemli ölçüde değiştirilmiştir32 . Bununla birlikte, toksin kaynaklı modellerin patogenetik arka planının, insan PD6'da olduğu gibi nörodejeneratif bir süreçten ziyade toksik bir yapıya sahip olduğunu ve bu nedenle lezyon indüksiyonunu takiben yapılan yürüyüş değerlendirmesinin, nöronlar kaybolduğunda ileri PD'yi taklit edebileceğini, ancak erken motor değişikliklerle ilgili çalışmaları daha zor hale getirebileceğini belirtmek önemlidir.

Yürüme geometrisi, yaşlanma ile birlikte ilerleyici nigral dopaminerjik nöron kaybı sergileyen kalıtsal PD modelleri olan Pink1 KO, Parkin KO ve DJ-1 KO sıçanları22'de ölçülmüştür. Yürüyüş, sıçanların geometriye ve dinamik özelliklere bakarak bir daire içinde yürümelerine izin verilen ticari NeuroCube aparatı kullanılarak ölçüldü. Pink1 ve DJ-1 KO sıçanları, 4 ve 8 aylarda WT ile karşılaştırıldığında adım, salınım ve duruşta daha kısa süre gösterdi.

Ticari yürüyüş analiz sistemleri maliyetli olduğundan ve tescilli analiz boru hatlarıyla geldiğinden, PD'nin kalıtsal sıçan modelleri üzerine çalışmamız için açık bir alternatif aradık. Yapım talimatları ve açık erişimli yazılımlarla birlikte gelen MouseWalker sistemi14, küçük kemirgenler için tasarlanmış ticari ekipmanların tüm parametrelerini yakalar. Platform, yetişkin sıçanlarla tutarlı bir şekilde geçirilebilir sonuçlar elde etmek için çok küçük olduğundan, yani yürüme hızında hareket sırasında kesintisiz dört adım, donanımı fareleri barındıracak şekilde yeniden ölçeklendirdik. Buna ek olarak, ticari bir yüksek hızlı video çözümü yerine yerli bir aksiyon kamerası kullandık.

Düşük kare yoğunluğu, yüksek hızlı bir kamera yerine bir aksiyon kamerası kullanmanın potansiyel bir tuzağıydı. Bununla birlikte, ev içi videografide kalite eşiği hızla yükseliyor ve yüksek çözünürlükte 120 fps'de kayıt yapabiliyor. Ayrıca, lens bozulması kayıt sırasında sürekli doğrusal görüş alanı (FOV) üreten kamera yazılımı tarafından düzeltilebilir.

Başlangıçta, daha geniş bir tabana ve daha ağır hayvanlara sahip geçit için benzer bir akrilik kalınlığı kullanmanın basınç dinamikleri ve yazılımın daha büyük hayvanların videolarını daha geniş bir FOV'da işleme yeteneği konusunda endişeliydik. Fareler ve sıçanlar arasındaki kütle aralığının, tüm yaşam döngüleri boyunca sıçanları ölçmemize izin veren akrilik FTIR platformunun hassasiyet aralığına girdiğini tahmin ediyoruz. Ayrıca, potansiyel piksel seyreltmesinin, sıçanların pençelerinin FOV'da yakalanan alana göre daha yüksek yüzey alanı ile dengelenmesi mümkündür, eğer önemli bir fark varsa. Burada belgelendiği gibi, uygun kalibrasyonla, serbestçe kullanılabilen yazılım14 , sıçan yürüyüş videosunu açıklandığı gibi işleyebildi.

Bu protokolle, sıçanlar için burada modifiye edilen FTIR fare yürüyüş sistemi14'ün , erkek DKO sıçanlarında arka bacak sürüklenmesinin görsel gözleminden önce yürüyüşteki değişiklikleri tespit edebileceğini gösterebildik. Not olarak, DKO sıçanlarında gözlenen açık görsel olarak görünür motor bozukluğu (arka bacak sürükleme) daha önce erkek Pink1 tek KO sıçanlarında22 bildirilmiştir. Erkek DKO sıçanları, 4-6 aylıktan başlayarak görsel olarak gözlemlenebilir arka bacak sürüklenmesi sergilerken, yürüyüş analizi 2 aylıkken hareket değişikliklerini ortaya çıkardı. Özellikle, arka bacak yürüyüş parametrelerinde değişiklikler bulundu. DKO sıçanları, arka bacak (hem sol hem de sağ) salınım hızında artış ve arka bacak (hem sol hem de sağ) salınım süresinde ilişkili bir azalma sergiler. Ayrıca, DKO sıçanları sol arka pençelerini pençe teması sırasında vücutlarına daha yakın yerleştirirken, sağ arka pençe pençe kalkışı sırasında vücutlarından daha uzaktadır. DKO sıçanlarında 2 ayda adım veya duruş süresindeki değişiklikleri ortaya çıkarmamış olsak da, Pink1 ve DJ-1 KO sıçanları22'de benzer şekilde bildirildiği gibi DKO sıçanlarında salınım süresi daha kısaydı. Genel olarak, bu değişiklikler arka bacak yürüyüş parametrelerinin erkek DKO sıçanlarında arka bacak sürüklenmesinin gelişmesinden önce değiştirildiğini göstermektedir. Lokomotif değişikliklerinin gelişimini izleyen gelecekteki uzunlamasına yürüyüş çalışmaları, yürüyüş değişikliklerinin önemli hale geldiği yaşı belirlemeye yardımcı olacaktır.

Bu çalışmada, sıçanların incelenmesi için burada modifiye edilmiş bir FTIR fare yürüyüş sistemi14'ün , kalıtsal PD için bir model olan 2 aylık erkek DKO sıçanlarında, yaşa uygun WT sıçanlarına kıyasla yürüyüş parametrelerindeki değişiklikleri ayırt etmek için kullanılabileceğini gösterdik. PD hastalarında yapılan önceki çalışmalarda, azalmış adım uzunluğu ve daha düşük ortalama salınım süresinin yanı sıra adım süresi değişkenliğinin ve salınım süresi değişkenliğinin arttığı ortayakonmuştur 4. Bu nedenle, DKO sıçanlarında salınım süresindeki değişikliklere ilişkin bulgularımız ve Pink1 KO ve DJ-1 KO sıçanları22'deki salınım zamanı değişikliklerinin önceki raporları, PD ilerlemesi ile ilgili görünmektedir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar rakip finansal çıkarlar olmadığını beyan ederler.

Acknowledgments

KS ve HF, Parkinson hastalığı konusundaki çalışmalarını destekledikleri için Michael J Fox Parkinson Araştırma Vakfı'na teşekkür eder.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Aluminum
1.5” Aluminum Angle (1/8” - 6063) Dimensions: 8'
Qty: 8
1” Aluminum Square Tube (1/16” - 6063) Dimensions: 8'
Qty: 4
32 Gauge Aluminum Sheet Dimensions: 10'
Qty: 1
1” Aluminum Tube (1/8” - 6063) Dimensions: 8'
Qty: 1
Acrylic
7/32” Clear Acrylic Sheet Dimensions: 4'x8'
Qty: 2
1/8” White Acrylic Sheet 55% (2447) Dimensions: 4'x8'
Qty: 1
Mirror
7/32” Glass Mirror Dimensions: 60"x12"
Qty: 1
LED
5050 LED Tape Light (Green) Dimensions: 16.4'
Qty: 1
5050 LED Tape Light (Red) Dimensions: 16.4'
Qty: 1
Camera
GoPro Hero 6 Black Qty: 1
Tripod Dimensions: 57"
Qty: 1

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Behari, M., et al. Parkinson's disease. Annals of Indian Academy of Neurology. 14, Suppl 1 2-6 (2011).
  2. Kalia, L. V., Lang, A. E. Parkinson's disease. Lancet. 386 (9996), 896-912 (2015).
  3. Fahn, S. Description of Parkinson's disease as a clinical syndrome. Annals of the New York Academy of Sciences. 991, 1-14 (2003).
  4. Frenkel-Toledo, S., et al. Effect of gait speed on gait rhythmicity in Parkinson's disease: variability of stride time and swing time respond differently. Journal of NeuroEngineering and Rehabilitation. 2, 23 (2005).
  5. Shulman, J. M., De Jager, P. L., Feany, M. B. Parkinson's disease: genetics and pathogenesis. Annual Review of Pathology. 6, 193-222 (2011).
  6. Klemann, C., Martens, G. J. M., Poelmans, G., Visser, J. E. Validity of the MPTP-Treated Mouse as a Model for Parkinson's Disease. Molecular Neurobiology. 53 (3), 1625-1636 (2016).
  7. Ungerstedt, U. Striatal dopamine release after amphetamine or nerve degeneration revealed by rotational behaviour. Acta Physiologica Scandinavian Supplementum. 367, 49-68 (1971).
  8. Beal, M. F. Experimental models of Parkinson's disease. Nature Reviews Neuroscience. 2 (5), 325-334 (2001).
  9. Betarbet, R., et al. Chronic systemic pesticide exposure reproduces features of Parkinson's disease. Nature Neuroscience. 3 (12), 1301-1306 (2000).
  10. Cannon, J. R., et al. A highly reproducible rotenone model of Parkinson's disease. Neurobiology of Disease. 34 (2), 279-290 (2009).
  11. Quary, S., et al. Major strain differences in response to chronic systemic administration of the mitochondrial toxin 3-nitropropionic acid in rats: implications for neuroprotection studies. Neuroscience. 97 (3), 521-530 (2000).
  12. Cicchetti, F., Drouin-Ouellet, J., Gross, R. E. Environmental toxins and Parkinson's disease: what have we learned from pesticide-induced animal models. Trends in Pharmacological Sciences. 30 (9), 475-483 (2009).
  13. Greenamyre, J. T., Cannon, J. R., Drolet, R., Mastroberardino, P. G. Lessons from the rotenone model of Parkinson's disease. Trends in Pharmacological Sciences. 31 (4), 142-143 (2010).
  14. Mendes, C. S., et al. Quantification of gait parameters in freely walking rodents. BMC Biology. 13, 50 (2015).
  15. Hamers, F. P., Lankhorst, A. J., van Laar, T. J., Veldhuis, W. B., Gispen, W. H. Automated quantitative gait analysis during overground locomotion in the rat: its application to spinal cord contusion and transection injuries. Journal of Neurotrauma. 18 (2), 187-201 (2001).
  16. Hamers, F. P., Koopmans, G. C., Joosten, E. A. CatWalk-assisted gait analysis in the assessment of spinal cord injury. Journal of Neurotrauma. 23 (3-4), 537-548 (2006).
  17. Pickrell, A. M., Youle, R. J. The roles of PINK1, parkin, and mitochondrial fidelity in Parkinson's disease. Neuron. 85 (2), 257-273 (2015).
  18. Dawson, T. M., Ko, H. S., Dawson, V. L. Genetic animal models of Parkinson's disease. Neuron. 66 (5), 646-661 (2010).
  19. Gispert, S., et al. Parkinson phenotype in aged PINK1-deficient mice is accompanied by progressive mitochondrial dysfunction in absence of neurodegeneration. PLoS One. 4 (6), 5777 (2009).
  20. Goldberg, M. S., et al. Parkin-deficient mice exhibit nigrostriatal deficits but not loss of dopaminergic neurons. Journal of Biological Chemistry. 278 (44), 43628-43635 (2003).
  21. Kitada, T., Tong, Y., Gautier, C. A., Shen, J. Absence of nigral degeneration in aged parkin/DJ-1/PINK1 triple knockout mice. Journal of Neurochemistry. 111 (3), 696-702 (2009).
  22. Dave, K. D., et al. Phenotypic characterization of recessive gene knockout rat models of Parkinson's disease. Neurobiology of Disease. 70, 190-203 (2014).
  23. Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
  24. Hruska, R. E., Kennedy, S., Silbergeld, E. K. Quantitative aspects of normal locomotion in rats. Life Sciences. 25 (2), 171-179 (1979).
  25. de Medinaceli, L., Freed, W. J., Wyatt, R. J. An index of the functional condition of rat sciatic nerve based on measurements made from walking tracks. Experimental Neurology. 77 (3), 634-643 (1982).
  26. Kunkel-Bagden, E., Dai, H. N., Bregman, B. S. Methods to assess the development and recovery of locomotor function after spinal cord injury in rats. Experimental Neurology. 119 (2), 153-164 (1993).
  27. Jacobs, B. Y., Kloefkorn, H. E., Allen, K. D. Gait Analysis Methods for Rodent Models of Osteoarthritis. Current Pain and Headache Reports. 18 (10), 456 (2014).
  28. Boix, J., von Hieber, D., Connor, B. Gait Analysis for Early Detection of Motor Symptoms in the 6-OHDA Rat Model of Parkinson's Disease. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 12, 39 (2018).
  29. Zhou, M., et al. Gait analysis in three different 6-hydroxydopamine rat models of Parkinson's disease. Neuroscience Letters. 584, 184-189 (2015).
  30. Vandeputte, C., et al. Automated quantitative gait analysis in animal models of movement disorders. BMC Neuroscience. 11, 92 (2010).
  31. Chuang, C. S., et al. Quantitative evaluation of motor function before and after engraftment of dopaminergic neurons in a rat model of Parkinson's disease. Journal of Biomedical Science. 17, 9 (2010).
  32. Baldwin, H. A., Koivula, P. P., Necarsulmer, J. C., Whitaker, K. W., Harvey, B. K. Step Sequence Is a Critical Gait Parameter of Unilateral 6-OHDA Parkinson's Rat Models. Cell Transplantation. 26 (4), 659-667 (2017).

Tags

Nörobilim Sayı 167 Lokomotor Yürüyüş analizi Parkinson hastalığı Parkin Pembe1
Parkinson Hastalığının Genetik Sıçan Modelinde Yürüme Analizi için RatWalker Sisteminin Uygulanması
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Stauch, K. L., Totusek, S., Farmer,… More

Stauch, K. L., Totusek, S., Farmer, T., Lamberty, B. G., Dyball, K. N., Almikhlafi, M. A., Fox, H. S. Applying the RatWalker System for Gait Analysis in a Genetic Rat Model of Parkinson's Disease. J. Vis. Exp. (167), e62002, doi:10.3791/62002 (2021).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter