Summary
Syftet med detta manuskript är att presentera en sonografibaserad metod som möjliggör in vivo-avbildning av blodflödet i cerebrala artärer hos möss. Vi visar dess tillämpning för att bestämma förändringar i blodflödet hastigheter är associerade med vasospasm i murin modeller av subarachnoid blödning (SAH).
Abstract
Cerebral vasospasm som uppstår under veckorna efter subarachnoid blödning, en typ av hemorragisk stroke, bidrar till fördröjd cerebral ischemi. Ett problem som uppstår i experimentella studier med murinmodeller av SAH är att metoder för in vivo övervakning av cerebral vasospasm hos möss saknas. Här visar vi tillämpningen av högfrekvent ultraljud för att utföra transkraniella Duplex sonography undersökningar på möss. Med hjälp av metoden kunde de inre halspulsådern (ICA) identifieras. Blodflödet hastigheter i intrakraniell ICAs accelererades betydligt efter induktion av SAH, medan blod flöde hastigheter i extrakraniell ICAs förblev låg, vilket anger cerebral vasospasm. Sammanfattningsvis tillåter metoden som demonstreras här funktionell, noninvasive in vivo övervakning av cerebral vasospasm i en murin SAH modell.
Introduction
Spontan subarachnoid blödning (SAH) är en form av hemorragisk stroke som främst orsakas av sprängning av en intrakraniell aneurysm1. Det neurologiska resultatet påverkas främst av två faktorer: tidig hjärnskada (EBI), som orsakas av effekterna av blödningen och den associerade övergående globala cerebrala ischemin, och fördröjd cerebral ischemi (DCI), som inträffar under veckorna efterblödningen 2,3. DCI rapporterades påverka upp till 30% av SAH patienter2. Patofysiologi av DCI innebär angiographic cerebral vasospasm, en störd mikrocirkulation orsakad av microvasospasms och microthrombosis, när spridning depressioner och effekter utlöses av inflammation4. Tyvärr är den exakta patofysiologin fortfarande oklar och det finns ingen behandling tillgänglig som effektivt förhindrar DCI3. DCI undersöks därför i många kliniska och experimentella studier.
Numera använder de flesta experimentella studier på SAH små djurmodeller, särskilt hos möss5,6,7,8,9,10,11,12,13. I sådana studier undersöks cerebral vasospasm ofta som en slutpunkt. Det är vanligt att bestämma graden av vasospasm ex vivo. Detta beror på att icke-invasiva metoder för in vivo-undersökning av cerebral vasospasm som kräver kort anestesitid och som endast ålägger djuren lite ångest saknas. Undersökning av cerebral vasospasm in vivo skulle dock vara fördelaktigt. Detta beror på att det skulle möjliggöra longitudinella in vivo-studier på vasospasm hos möss (dvs. avbildning av cerebral vasospasm vid olika tidpunkter under dagarna efter induktion av SAH). Detta skulle öka jämförbarheten mellan de uppgifter som insamlades vid olika tidpunkter. Dessutom är användning av en longitudinell studiedesign en strategi för att minska antalet djur.
Här visar vi användningen av högfrekvent transkraniell ultraljud för att bestämma blodflödet i cerebrala artärer hos möss. Vi visar att, i likhet med transkraniell Doppler sonography (TCD) eller transkraniell färgkodad Duplex sonography (TCCD) i klinisk praxis14,15,16,17,18, denna metod kan användas för att övervaka cerebral vasospasm genom att mäta blodflödet hastigheter i intrakraniell artärer efter SAH induktion i murin modell.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Djurförsöken godkändes av den ansvariga djurvårdskommittén (Landesuntersuchungsamt Rheinland-Pfalz) och genomfördes i enlighet med den tyska djurskyddslagen (TierSchG). Alla tillämpliga internationella, nationella och institutionella riktlinjer för vård och användning av djur följdes. I denna studie utförde vi mätningar av blodflödeshastigheter av intrakraniella och extrakraniella artärer hos kvinnliga C57BL/6N möss i åldern 11-12 veckor med en kroppsvikt mellan 19-21 g. Mössen utsattes för antingen SAH-induktion eller skenkirurgi, som har beskrivits i detaljnågon annanstans 10,12,13.
1. Beredning av material
- Slå på ultraljudsmaskinen och ange djur-ID: t.
- Värm ultraljudssystemets värmeplatta till 37 °C. Se till att rektaltemperatursonden är klar att användas.
- Använd ett vattenbad för att värma ultraljudsgelen till 37 °C. Förbered hårborttagningskräm, kontaktkräm för elektroderna och ögonsalva.
2. Anestesi
- Inducera anestesi genom att sätta musen i en kammare spolad med 4% isofluran och 40% O2 i 1 min. Skydda ögonen med ögonsalva. Fortsätt först efter att en tillräckligt djup anestesi har uppnåtts (frånvaro av reaktioner på smärtstimulans).
- Behåll anestesi med 1,5% isofluran och 40% O2 med en anestesimask under hela proceduren.
3. Bestämning av blodflödeshastigheterna hos de intrakraniella inre halspulsådern med transkraniell högfrekvent duplexsonografi
- Placera musen i benägen position på ultraljudssystemets värmeplatta för att bibehålla en kroppstemperatur på 37 °C.
- Täck djurets fyra extremiteter med ledande pasta och fixa dem med tejp på EKG-elektroderna inbäddade i brädan. Kontrollera om de fysiologiska parametrarna (EKG, andningssignal) visas korrekt på avbildningssystemets skärm (t.ex. Vevo3100). Vid behov justera anestesinivån för att få målpuls på 400-500 slag per minut (bpm).
- Placera glidmedel på en rektal temperatursond och sätt försiktigt in det för att övervaka kroppstemperaturen. Använd vid behov en extra värmelampa.
- Före den första undersökningen, ta bort pälsen vid occiput kemiskt med hårborttagningskräm. Använd en bomullspinne för att sprida och gnugga grädden i 2 minuter tills håren börjar falla ut.
- Efter ytterligare 2 minuter, ta bort grädden och håren med en spatel och desinficera huden med ett alkoholhaltigt hudantiseptiskt medel. Täck den med ultraljudsgel värmd till 37 °C.
- Använd en linjär matrisgivare på 38 MHz och en bildhastighet över 200 bildrutor/s för att skaffa ultraljudsbilder och fixera sonden i den mekaniska armen. Placera givaren på occiput lutad tillbaka med 30°.
- Använd ljusstyrd(B)-läge och Färgvåg-(CW) Doppler-läge för att visualisera rätt intrakraniell inre halsartär och flytta givaren med styrenheten fram och tillbaka tills artärernas maximala flöde hittas.
- För att samla in anatomisk information, använd det traditionella B-mode- och CW-Doppler-läget och starta förvärvet genom att klicka på knappen Hämta.
- För att registrera information om flödesegenskaperna hos de intrakraniella fartygen klickar du på Knappen Pulse-Wave (PW) Doppler, placerar provvolymen i mitten av kärlet och förvärvar en cine-slinga längre än 3 s.
- Fortsätt identiskt med vänster sida.
- Fortsätt med de extrakraniella halspulsådern.
4. Bestämning av blodflödeshastigheterna hos de extrakraniella inre halspulsådern med högfrekvent duplexsonografi
- Placera musen i supin position på ultraljudssystemets värmeplatta för att bibehålla en kroppstemperatur på 37 °C.
- Täck djurets fyra extremiteter med ledande pasta och fixa dem med tejp på EKG-elektroderna inbäddade i brädan. Kontrollera igen för korrekt visning av de fysiologiska parametrarna på skärmen.
- Före den första undersökningen, ta bort håret vid framhalsen kemiskt genom att använda hårborttagningskräm enligt beskrivningen ovan. Täck framhalsen med ultraljudsgel värmd till 37 °C.
- Använd en linjär matrisgivare på 38 MHz och en bildhastighet över 200 bildrutor/s för att skaffa ultraljudsbilder. Placera givaren parallellt med djuret och justera positionen för att få longitudinella bilder av rätt halspulsåder.
- Använd Ljusstyrdhet-(B)-läge och Färgvåg-(CW) Doppler-läge för att visualisera rätt halspulsåder. Bilden ska innehålla rätt gemensam halsartär (RCC), rätt inre halspulsåder (RICA) och rätt extern halspulsåder (RECA).
- För att samla in anatomisk information, använd det traditionella B-mode- och CW-Doppler-läget och starta förvärvet genom att klicka på knappen Hämta.
- För att registrera information om flödesegenskaperna hos den extrakransiga halspulsådern klicka på Pulse-Wave (PW) Doppler-knappen, placera provvolymen i mitten av mitten av den gemensamma halsartären, den inre halspulsådern och den yttre halsartären och förvärva en cine-slinga längre än 3 s.
- Fortsätt identiskt med vänster sida.
- Avsluta anestesi och ta bort djuret från uppvärmningsplattan. Sätt tillbaka djuret i en bur som placerats i en inkubator uppvärmd till 37 °C i 1 timme för att förhindra hypotermi och kontrollera om den är helt återställd.
5. Behandling av ultrasonografidata
- Använd en extern arbetsstation för efterbehandling av ultraljudsdata med hög frekvens. Exportera bilder och cine-bilder i B-läge, CW-Doppler-läge och PW-Doppler-läge.
- Öppna den exporterade ultraljudsstudien. Välj ett djur och öppna PW-Doppler cine-slingan i den intrakraniella halspulsådern. I det här protokollet registreras vanligtvis 7 till 8 pulsslag och motsvarande flödeshastighetskurvor.
- Pausa cine-slingan och klicka på knappen Mått. Välj kärlpaketet och klicka på RICA PSV för att mäta topp systoliskt tryck (PSV). Klicka nu åt vänster på toppen av en hastighetskurva och dra den raka linjen till nolllinjen. Bestäm mätningen med ett klick med höger musknapp.
- Välj nu RICA EDV för att mäta den enddiastoliska hastigheten (EDV). Klicka åt vänster på minimala utslag av hastighetskurvan i slutet av diastolen. Dra linjen direkt till nolllinjen och bestäm mätningen med ett klick med höger musknapp.
- Välj RICA VTI för att mäta hastighetstidens integral (VTI). Klicka åt vänster i början av en hastighetskurva och följ kurvan med musen till slutet av den diastoliska platån. Klicka sedan åt höger igen för att bestämma mätningen.
- Exportera data från de intrakraniella inre halspulsådern med hjälp av rapportknappen. Tryck på Exportera och spara data som en VSI-rapportfil.
- Använd samma metod för att mäta PSV, EDV och VTI för rätt extrakransiga inre halspulsåder och exportera data i enlighet därmed.
- Fortsätt identiskt med vänster sida.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Hos 6 möss, i 3 varav SAH inducerades med hjälp av endovaskulära glödtråd perforering modell medan 3 erhöll sham kirurgi, blodflödet hastigheter i intrakraniell inre halsartären (ICA) och av extrakraniell ICA fastställdes en dag före kirurgi och 1, 3 och 7 dagar efter kirurgi. Mätningarna utfördes som en del av ekokardiografiundersökningarna av en annan studie under anestesi med isofluran samtidigt som kroppstemperaturen vid 37 °C19 bibehålls.
Före operationen var extra- och intrakraniell blodflödeshastigheter, liksom kvoterna för intra- och extrakraniellt blodflöde liknande mellan SAH och falska djur. Den första dagen efter SAH induktion fanns det inga större förändringar i intra- eller extrakraniell blod flöde hastigheter eller förhållandet mellan intra- och extrakraniell blodflödet.
På dag 3 och 7 ökade icas intrakraniella blodflödeshastighet markant hos 2 av SAH-djuren, vilket indikerar cerebral vasospasm efter SAH. Eftersom de extrakraniella blod flöde hastigheterna förblev nästan oförändrade, förhållandet mellan intra-/extrakraniell blod flöde hastigheter ökade också betydligt dag 7 i SAH djur, vilket anger cerebral vasospasm.
Representativa duplexsonografiinspelningar av intra- och extrakraniell ICA visas i figur 1. Blodflödeshastigheterna visas i figur 2.
Figur 1 Representativa duplex sonography resultaten av intra- och extrakraniell ICA . A) visar representativa resultat av intrakraniell ICA dag 7 efter SAH induktion eller bluff kirurgi. Observera den accelererade blodflödeshastigheten efter SAH. B) visar representativa resultat av den extrakraniella ICA dag 7 efter SAH induktion eller bluff kirurgi. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 2 Blodflödeshastigheter hos SAH och skenstyrda möss Blodflödeshastigheter i rätt intrakraniell (A, D) och extrakraniell (B, E) ICA. C) Och f) visa förhållandet mellan intra- och extrakraniell blodflödeshastighet. Den övre panelen (A-C) visar genomsnittliga blodflödeshastigheter, den nedre panelen (D-F) visar topp blodflödeshastigheter. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bäst av vår kunskap är denna studie den första att presentera ett protokoll för övervakning av cerebral vasospasm i en murinmodell av SAH med högfrekvent transkraniell färgkodad Duplex ultraljud. Vi visar att denna metod kan mäta en ökning av intrakraniell blodflödeshastigheter efter SAH-induktion hos möss. I humanmedicin är detta fenomenvälkänt 3,15. Flera kliniska studier har visat att förhöjda blodflödeshastigheter hos de stora intrakraniella artärerna och en förhöjd kvot av intra- och extrakraniell blodflödeshastigheter är en funktionell följd av att kärlet smalnar av och korrelerar med angiografisk vasospasm (granskasi 15). I klinisk praxis är det därför vanligt att använda TCD eller TCCD för icke-invasiv sängövervakning av cerebral vasospasm efter SAH3,15.
DCI är en betydande faktor som påverkar neurologiska resultatet efter icke-traumatiska SAH2,3. Eftersom patofysiologin för DCI fortfarande är oklar och effektiva strategier för att förebygga och behandla DCI saknas, är det i fokus för klinisk och experimentell forskning. Eftersom vasospasm av cerebrala artärer bidrar till DCI, utvärderar många studier cerebral vasospasm som enslutpunkt 5,6,7,8,9,11,12,20. Medan tidigare stora djur ofta användes i experimentella studier på SAH, har det skett en förskjutning mot små djurmodeller under de senaste åren, särskilt till murinmodeller21. Ett problem är dock att bildframställningsmetoder för cerebral vasospasm som används i humanmedicin inte direkt kan överföras till möss och andra små djur. Klinisk sonography utrustning ger inte en tillräcklig upplösning för att övervaka cerebral vasospasm hos möss. Det finns möjlighet till små djur MRI eller CT skanning22. Dessa metoder är dock kostnadskrävande och tidskrävande. Dessutom framkallar de ångest hos djuren på grund av avbildningsprotokollens varaktighet och kontrastapplikation. Dessutom är en exakt mätning av diametrar eller volymer av intrakraniella fartygssegment också begränsad med dessa in vivo-metoder. I SAH-studier med möss är det därför vanligt att bestämma graden av cerebral vasospasm ex vivo5,6,7,8,9,11,12,20. Metoden som presenteras här är snabb, vilket minskar anestesitiden för undersökningen till mindre än 10 minuter, och inducerar därför förmodligen bara lite ångest hos djuren. Undersökningen är icke-invasiv och uppvisar en tillräcklig upplösning för att visualisera och bestämma blodflödeshastigheterna hos stora intrakraniella kärl (ICA och mellersta cerebrala gatan). Det skulle därför vara väl lämpat för funktionell övervakning av cerebral vasospasm i longitudinella studier, undersöka samma djur vid olika tidpunkter. I studier som inte kräver histologi eller andra vävnadsundersökningar tillsammans med undersökningar på vasospasm kan en longitudinell studiedesign användas för att minska antalet djur. För framtida studier med inriktning på modulering av vasospasm efter SAH bör bestämning av blodgaser utföras vid tidpunkten för ultraljudsbestämningar av cerebrala blodflödeshastigheter.
Metoden som visas här innehåller flera kritiska steg, som bör ses över vid metodproblem. Det är viktigt att djurets kroppstemperatur hålls konstant under hela proceduren. Möss utvecklar snabbt hypotermi efter induktion av anestesi om de inte värms (t.ex. med en värmeplatta). Hypotermi kan ändra resultaten av mätningarna. På grund av detta bör ultraljudsgelen också värmas till 37 °C i ett vattenbad före applicering. För det andra, för att standardisera mätningarna, är det nödvändigt att vinkeln där ultraljudssonden appliceras är konstant mellan tentorna. Det är därför nödvändigt att placera djuret försiktigt. Ultraljudssonden ska inte användas utan monteras på en hållare med en mikromanipulator för att möjliggöra insonation i definierad position och vinkel. Dessutom är det viktigt att använda konstanta tekniska inställningar för ultraljudsenheten inom en experimentell serie för att minska tekniska variationer. För det tredje bör det noteras att Duplex-undersökningen inte är genomförbar omedelbart efter SAH-induktion. Under denna period leder ett förhöjt intrakraniellt tryck till cerebral hypoperfusion, vilket begränsar tillämpningen av transkraniell duplex sonography. Duplex undersökning av extrakraniell halsartären exponeras under operationen för SAH induktion kan dessutom försämras av kirurgiska artefakter.
Slutligen vill vi diskutera begränsningar och framtida riktlinjer för den metod som presenteras här. I likhet med TCD eller TCCD i klinisk praxis kan vi inte direkt mäta kärlets diameter. En acceleration av blodflödet hastigheter av cerebrala artärer kan därför också orsakas av cerebral hyperperfusion. Kliniska studier visade dock ett samband mellan en accelererad blodflödeshastighet och angiografisk vasospasm15. Dessutom observerade vi inte cerebrala när hyperperfusion efter SAH induktion i murin modell som användshär 19, och ökningen av intrakraniell blod flöde hastigheter åtföljdes av en ökning av kvoterna av intra- och extrakraniell blod flöde hastigheter ica, som rapporterades att indikera vasospasm i en klinisk studie23. Vi antar därför att de accelererade blod flöde hastigheterna också indikerar vasospasm i SAH mus modell, även om, som i den kliniska tillämpningen av Doppler ultrasonography, det är inte möjligt att skilja mellan vasospasm och cerebral hyperperfusion med hyperdynamiskt flöde. För det andra tillåter funktionell övervakning av cerebrala blodflödeshastigheter endast slutsatser om cerebral vasospasm. Direkt imaging och kvantifiering av cerebral perfusion i samband med DCI är inte möjligt. Det bör dock noteras att bestämning av cerebral perfusion med ultrasonography har rapporterats i en klinisk ansökan24. Vi spekulerar därför att ultrasonographic kvantifiering av cerebral perfusion hos möss kommer att bli tillgänglig i framtiden. En ändring av metoden i detta avseende skulle då möjliggöra slutsatser inte bara om vasospasm av de stora fartygen, utan också om mikrocirkulatoriska störningar. För det tredje har kliniska studier rapporterat ett högt prövarberoende av transkraniella ultrasonografistudier vid sängen17,25. Detta är dock förmodligen inte fallet för den experimentella applikationen som visas här, på grund av de mycket standardiserade och kontrollerade inställningarna i experimentella studier, och eftersom bildupplösningen hos möss tillät en tydlig identifiering av kärlsegmenten att analyseras. Slutligen är det en nackdel att vasospasm bestäms vid definierade anatomiska positioner. Vasospasm av närliggande segment kunde därför undkomma utvärdering. Det bör dock noteras att detta problem också uppstår med andra metoder som bestämmer vasospasm. Ett mått för att minska fel från denna källa i framtida experimentella studier skulle vara att bestämma cerebrala blodflödeshastigheter för flera intrakraniella kärlsegment.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna förklarar inga konkurrerande intressen.
Acknowledgments
Författarna vill tacka Stefan Kindel för att han har beredningen av illustrationerna i videon. PW, MM och SHK stöddes av det tyska federala ministeriet för utbildning och forskning (BMBF 01EO1503). Arbetet stöddes av ett stort instrumenteringsbidrag från den tyska forskningsstiftelsen (DFG INST 371/47-1 FUGG). MM fick stöd av ett bidrag från Else Kröner-Fresenius-Stiftung (2020_EKEA.144).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Balea hair removal creme | Balea; Germany | ASIN B0759XM39V | hair removal creme |
| C57BL/6N mice | Janvier; Saint-Berthevin Cedex, France | n.a. | mice |
| Corneregel | Bausch&Lomb; Rochester, NY, USA | REF 81552983 | eye ointment, lube |
| cotton swabs | Hecht Assistent; Sondenheim vor der Röhn, Germany | REF 44302010 | cotton swabs |
| Ecco-XS razor | Tondeo; Soligen, Germany | DE 28693396 | razor |
| Electrode cream | GE; Boston, MA, USA | REF 21708318 | conductive paste |
| Heating plate | Medax; Kiel, Germany | 2005-205-01 | |
| Isoflurane | Abvie; Wiesbaden, Germany | n.a. | volatile anesthetic |
| Leukofix | BSN medical; Hamburg, Germany | REF 02137-00 | tape |
| Mechanical arm + micromanipulator | VisualSonics; FujiFilm, Toronto, CA | P/N 11277 | |
| Microbac tissues | Paul Hartmann AG; Hamburg, Germany | REF 981387 | antimicrobial tissues |
| MZ400, 38 MHz linear array transducer | VisualSonics; FujiFilm, Toronto, CA | REF 51068-30 | ultrasound transducer |
| Sonosid | ASID Bonz GmbH; Herrenberg, Germany | REF 782010 | ultrasonography gel |
| Ultrasound platform with heating plate and ECG-recording | VisualSonics; FujiFilm, Toronto, CA | P/N 11179 | |
| UniVet-Porta | Groppler; Oberperasberg, Germany | S/N BKGM0437 | isoflurane vaporizer |
| Vevo3100 | VisualSonics; FujiFilm, Toronto, CA | REF 51073-45 | ultrasonography device |
| VevoLab software | VisualSonics; FujiFilm, Toronto, CA | n.a. | evaluation software |
References
- Macdonald, R. L., Schweizer, T. A. Spontaneous subarachnoid haemorrhage. Lancet. 389 (10069), 655-666 (2017).
- Macdonald, R. L. Delayed neurological deterioration after subarachnoid haemorrhage. Nature Reviews Neurology. 10 (1), 44-58 (2014).
- Francoeur, C. L., Mayer, S. A. Management of delayed cerebral ischemia after subarachnoid hemorrhage. Critical Care. 20 (1), 277 (2016).
- van Lieshout, J. H., et al. An introduction to the pathophysiology of aneurysmal subarachnoid hemorrhage. Neurosurgical Review. , (2017).
- Altay, T., et al. A novel method for subarachnoid hemorrhage to induce vasospasm in mice. J Neurosci Methods. 183 (2), 136-140 (2009).
- Momin, E. N., et al. Controlled delivery of nitric oxide inhibits leukocyte migration and prevents vasospasm in haptoglobin 2-2 mice after subarachnoid hemorrhage. Neurosurgery. 65 (5), 937-945 (2009).
- Froehler, M. T., et al. Vasospasm after subarachnoid hemorrhage in haptoglobin 2-2 mice can be prevented with a glutathione peroxidase mimetic. Journal of Clinical Neuroscience. 17 (9), 1169-1172 (2010).
- Provencio, J. J., Altay, T., Smithason, S., Moore, S. K., Ransohoff, R. M. Depletion of Ly6G/C(+) cells ameliorates delayed cerebral vasospasm in subarachnoid hemorrhage. Journal of Neuroimmunology. 232 (1-2), 94-100 (2011).
- Kamp, M. A., et al. Evaluation of a murine single-blood-injection SAH model. PLoS One. 9 (12), 114946 (2014).
- Luh, C., et al. The Contractile Apparatus Is Essential for the Integrity of the Blood-Brain Barrier After Experimental Subarachnoid Hemorrhage. Translational Stroke Research. , (2018).
- Neulen, A., et al. A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage. Journal of Visualized Experiments. (137), (2018).
- Neulen, A., et al. Large Vessel Vasospasm Is Not Associated with Cerebral Cortical Hypoperfusion in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage. Translational Stroke Research. , (2018).
- Neulen, A., et al. Neutrophils mediate early cerebral cortical hypoperfusion in a murine model of subarachnoid haemorrhage. Scientific Reports. 9 (1), 8460 (2019).
- Neulen, A., et al. Volumetric analysis of intracranial vessels: a novel tool for evaluation of cerebral vasospasm. Int J Comput Assist Radiol Surg. 14 (1), 157-167 (2019).
- Washington, C. W., Zipfel, G. J. Participants in the International Multi-disciplinary Consensus Conference on the Critical Care Management of Subarachnoid, H. Detection and monitoring of vasospasm and delayed cerebral ischemia: a review and assessment of the literature. NeuroCritical Care. 15 (2), 312-317 (2011).
- Greke, C., et al. Image-guided transcranial Doppler sonography for monitoring of defined segments of intracranial arteries. Journal of Neurosurgical Anesthesiology. 25 (1), 55-61 (2013).
- Neulen, A., Prokesch, E., Stein, M., Konig, J., Giese, A. Image-guided transcranial Doppler sonography for monitoring of vasospasm after subarachnoid hemorrhage. Clinical Neurology and Neurosurgery. 145, 14-18 (2016).
- Neulen, A., et al. Image-Guided Transcranial Doppler Ultrasound for Monitoring Posthemorrhagic Vasospasms of Infratentorial Arteries: A Feasibility Study. World Neurosurgery. 134, 284-291 (2020).
- Neulen, A., et al. Correlation of cardiac function and cerebral perfusion in a murine model of subarachnoid hemorrhage. Scientific Reports. 11 (1), 3317 (2021).
- Neulen, A., et al. A segmentation-based volumetric approach to localize and quantify cerebral vasospasm based on tomographic imaging data. PLoS One. 12 (2), 0172010 (2017).
- Marbacher, S., et al. Systematic Review of In Vivo Animal Models of Subarachnoid Hemorrhage: Species, Standard Parameters, and Outcomes. Translational Stroke Research. , (2018).
- Figueiredo, G., et al. Comparison of digital subtraction angiography, micro-computed tomography angiography and magnetic resonance angiography in the assessment of the cerebrovascular system in live mice. Clinical Neuroradiology. 22 (1), 21-28 (2012).
- Lindegaard, K. F., Nornes, H., Bakke, S. J., Sorteberg, W., Nakstad, P. Cerebral vasospasm diagnosis by means of angiography and blood velocity measurements. Acta Neurochirurgica. 100 (1-2), 12-24 (1989).
- Cassia, G. S., Faingold, R., Bernard, C., Sant'Anna, G. M. Neonatal hypoxic-ischemic injury: sonography and dynamic color Doppler sonography perfusion of the brain and abdomen with pathologic correlation. American Journal of Roentgenology. 199 (6), 743-752 (2012).
- Shen, Q., Stuart, J., Venkatesh, B., Wallace, J., Lipman, J. Inter observer variability of the transcranial Doppler ultrasound technique: impact of lack of practice on the accuracy of measurement. Journal of Clinical Monitoring and Computing. 15 (3-4), 179-184 (1999).
