Abstract
Membranbaserede sidestrøm immunkromatiske strimler (ICSs) er nyttige værktøjer til billig selvdiagnosticering og er blevet effektivt anvendt på toksin, fysiologisk indeks og klinisk biomarkørdetektering. I denne protokol giver vi en detaljeret beskrivelse af trinene til at udvikle en hurtig, følsom og kvantitativ lateral-flow immunoassay (ved hjælp af auNPs som markør og mAbs som sonde). Proceduren beskriver forberedelse og karakterisering af kolloidt guld, syntese af AuNP-mAb konjugat, samling af den immunokromatiske strimmel, og metodologisk undersøgelse af analysen. Resultaterne viste, at de sidste strimler kan udnyttes yderligere til hurtig og bekvem selvdiagnosticering af et lille molekyle, som kan give et alternativt værktøj i den hurtige og præcise analyse af fysiologiske og biologiske indekser.
Introduction
Membranbaserede sidestrøm immunokromatiske strimler (ICSs) er nyttige værktøjer til billig og hurtig detektion. Nitrocellulosemembranen som bærer og kolloidguld som markører for immunkromatografi rapid diagnostic reagenser er den mest almindeligt anvendte POCT (punkt for plejetest), og projektets testområde er bredere. Fra deres oprindelige anvendelse i overvågning under graviditeten er deres anvendelse blevet udvidet til at overvåge blodkoagulationstilstand1,2, myokardieskade3,veterinærmedicin4, pesticidrester5,smitsomme sygdomme6 og lægemiddelkoncentrationer. Flere typer prøver kan vurderes, herunder urin, spyt, fuldblod, serum og andre kropsvæsker7,8,9.
I de senere år er der udviklet talrige nye analyser til påvisning af biomarkører i diagnosticering af lidelser, herunder HPLC, UPLC, LC-MS og ELISA, som er følsomme og præcise, troværdige og specifikke. Disse metoder kræver dog sofistikeret instrumentering, kompleks forbehandling og tidskrævende behandlinger9. Derfor er det presserende10, 11at udvikle en hurtigere og bekvem point-of-care diagnostisk strategi for selv- og realtidsdetektion af medicinske aktive forbindelser.
Populariteten af ICSs, især for almindelige tests, er drevet af deres brugervenlighed, da de ikke kræver fagfolk eller udarbejde instrumentale opsætninger12. Med andre ord kan folk, der ikke har særlig træning, betjene strimler eller selvtest13. Resultaterne af testen kan opnås på 5 minutter, hvilket betyder, at den kan bruges til inspektioner på stedet14. Desuden kan omkostningerne ved strimler ifølge vores beregninger være lavere end 1 RMB15, hvilket betyder, at testene er billige til at fremme16. Derfor er ICS en relativt præcis, enkel og billig engangsenhed. ICSs baseret på kolloid guld17,18 anvendes også i hurtig COVID-19 afsløring.
Princippet om ICS kan opdeles i sandwich ICS og konkurrencedygtige ICS. Figur 1A er et skematisk diagram over sandwich ICS, som hovedsageligt bruges til at opdage makromolekyllære stoffer som proteiner, herunder tumormarkører, inflammatoriske faktorer og human chorionic gonadotropin (HCG, tidlig graviditet antigen). I denne metode anvendes parrede antistoffer rettet mod forskellige epitoper af antigen, og opsamlingsantistoffet tørres på NC-membranen som en testlinje. Mærket antistof tørres på konjugatpuden, og sekundært antistof anvendes som kontrollinje.
Figur 1B er et skematisk diagram over konkurrencedygtige ICS, som hovedsageligt bruges til at detektere små molekylestoffer (MWCO < 2000 Da). Belægningsantigen er fastgjort på NC-membranen som en testlinje, og det mærkede antistof tørres på konjugatpuden. Under påvisning strømmer prøven og mærket antistof gennem detektionslinjen under kapillær handling, og det coatede antigen binder frit antigen i prøven og udvikler en rød farve på detektionslinjen.
For nylig beskrev vi proceduren for monoklonal antistofproduktion mod naturlige produkter19. I dette arbejde udviklede vi en ny lateral flow immunoassay baseret på den forberedte anti-SSD mA20 til hurtig, on-site detektion. Resultaterne tyder på, at immunochromatografianalysen er et uundværligt og praktisk værktøj til påvisning af naturlige produktafledte forbindelser.
Figur 1 Skemat diagram over immunkromatografianalysen (A) Sandwich immunkromatiske teststrimler. (B) Indirekte konkurrencedygtige immunkromatografiske teststrimler. Dette tal er blevet ændret fra Zhang et al., 201821. Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle de procedurer, der blev udført i denne undersøgelse, blev godkendt af Ethics Review Committee på Beijing University of Chinese Medicine (godkendelsesnummer 2017BZYYL00120).
1. Forberedelse og karakterisering af kolloidt guld
BEMÆRK: For kolloid guldsyntese, da kolloidguld let adsorberes på fartøjets indre væg og er tilbøjelig til at blive udfældet af urenheder, skal beholderen til syntese og opbevaring af kolloidguld rengøres grundigt og gennemblødes i syre (40 mL destilleret vand, 360 mL koncentreret svovlsyre, 20 g kaliumdichromat) eller udsættes for overflade passiveringsbehandling. En citronsyre reduktion metode blev brugt til at syntetisere kolloidt guld.
- Tænd for den magnetiske omrører, og anbring kolben (250 gtL) på røremaskinen.
- Forbered 4% guldchloridsyreopløsning og 1% natriumcitratopløsning.
- Tilsæt 120 mL destilleret vand til en rund bundkolbe og varm den til kogning på en termostatisk magnetisk omrører.
- Hold kogning, og tilsæt hurtigt 0,5 mL 4% chloraursyre og 5 mL 1% natriumcitrat.
- Overhold opløsningens farve. Den lysegule chloroaursyreopløsning bliver vinrød inden for få minutter.
- Fortsæt opvarmningen i 10 minutter, indtil opløsningen skifter fra farveløs til gennemsigtig vinrød.
- Sluk for kraften i den termostatiske magnetiske mixer, afkøles til stuetemperatur, og flyt blandingen til en ren flaske. Opbevar den ved 4 °C.
- Bestem størrelsen og morfologien af auNPs ved ultraviolet spektroskopi og TEM-billeddannelse.
BEMÆRK: Forskellige størrelser kolloid guldpartikler til forskellige anvendelser kan opnås ved at ændre andelen af citrat natrium og chloroaursyre.
2. Syntese af AuNPs-mAb Conjugate
BEMÆRK: Da antistoffer binder sig til kolloidt guld ved elektrostatisk adsorption, påvirker afgifter på overfladen af proteiner og kolloidt guld direkte bindingsintensiteten; derfor er buffer pH-værdien en vigtig faktor, der påvirker stabiliteten af den antistofkolloide guldkonjugat. SSD og anti-SSD mAbs bruges som eksempler i denne protokol.
- Evaluering af kobling pH
- Der tilsættes 100 μL NaCl-opløsning (10% m/v) i otte rør.
- Juster AuNP-løsningerne ved pH 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 og 12 med 0,1 M K2CO3.
- Der tilsættes 100 μL kolloid guldopløsning (pH justeret 5-12) til otte rør, der indeholder NaCl.
- Lad opløsningerne stå i flere minutter efter blanding. Overhold farveændringen af hver røropløsning, og optag røret, der forbliver rødt.
- Vælg pH-værdien med mindst tilsætning af K2CO3 og stabil opløsningsfarve som den optimale pH-værdi til forberedelse af AuNP-mAb-konjuger.
BEMÆRK: Brug ikke en pH-måler, da sonden kan blive ødelagt af auNPs.
- Evaluering af antistofmængde
- Der tilsættes 100 μL NaCl-opløsning (10% m/v) til otte rør.
- Tilsæt 100 μL kolloid guldopløsning med optimal pH til hvert rør.
- De monoklonale antistofopløsninger (proteinkoncentration 0,1 mg/mL-3,2 mg/mL) til ovennævnte otte rør tilsættes.
- Lad opløsningerne stå i flere minutter efter blanding. Overhold farveændringen af hver røropløsning, og optag røret, der forbliver rødt.
- Vælg antistofmængden med den laveste koncentration af mAb og stabil opløsningsfarve som den optimale mAb-mængde til forberedelse af AuNP-mAb-konjugates.
- Forbered resuspension buffer: tilsæt 1 M Tris-HCl (pH 8,8), 1% (w / v) BSA, 0,5% (v / v) Mellem 20 og 1% (v / v) PEG 20000 og blend godt.
- Syntese af AuNP-mAb konjugat
- Tag 10 mL kolloid guldopløsning og brug 0,1 M K2CO3 til at justere opløsningen til den optimale pH-værdi.
- Tilsæt langsomt SSD mAbs ved passende koncentrationer og ryst ved stuetemperatur i 30 min.
- Centrifuge blandingen ved 83 x g (1.000 omdr./min) i 10 min ved 4 °C. Fjern bundfaldet, som indeholder urenheder eller udfældet kolloidt guld.
- Centrifuge blandingen ved 8.330 x g (10.000 omdr./min) i 30 min ved 4 °C. Kassér supernatanten, og bundfaldet er den kolloide guld-mAb konjugat.
- Tilføj resuspension buffer til at adskille nedbør.
3. Samling af striben
BEMÆRK: Ved senere flowimmunassays vil udvælgelsen og forbehandlingen af membranmaterialet direkte påvirke testen, som bør undersøges. Den immunokromatiske strimmel består af en prøvepude, en konjugatpude, en nitrocellulosemembran (NC), en absorberende pude og et PVC-bord (figur 1). Membranmaterialet skal kontrolleres og evalueres ved stereomikroskopi for at eliminere inhomogeneitet.
- Sæt NC-membranen på et PVC-bræt 2 cm bortset fra kanten af sugeenden af brættet.
- Tilsættes SSD-BSA (2 mg/mL) dropwise til NC-membranen (2 cm bortset fra den øverste kant) som en testlinje (1 mm bred), og tilsæt ged anti-mus IgG (1,5 mg/mL) dråbevis på NC-membranen (2 cm bortset fra den nederste kant) som en kontrollinje (1 mm bred). Kontroller mængden af protein tilsat.
- Fastgør den absorberende pude til PVC-arket over NC-membranen og overlapper den med NC-membranen med 2 mm.
- Dyk glasfibermembranen ned i AuNPs-mAb konjugatopløsningen. Vådmembranen tørres i en inkubator ved 37 °C.
- Trim glasfibermembranen til 5 cm lang og 2 cm bred og brug den som konjugatpude.
- Indsæt den forbehandlede konjugatpude under NC-membranen. Længden af overlapning med NC-membranen skal være 0,1 cm.
BEMÆRK: Glasfibermembranen har en stærk evne til at binde og frigive proteiner. - Trim fusion 3 membran til 1,8 cm lang og 3,5 cm bred og bruge det som prøve pad.
- Sæt prøveblokken på PVC-brættet, og overlapper den med konjugatpuden med 2 mm.
- Skær det samlede papirbræt i 3,5 mm brede strimler ved hjælp af en skæremaskine, og komprimer det ved hjælp af et batchlamineringssystem.
- Endelig skal du placere teststrimlerne i skallen, forsegle dem i en aluminiumsfoliepose indeholdende tørremiddel og opbevare dem væk fra lys. ICS'erne er nu samlet.
BEMÆRK: Ovenstående er laboratorieproceduren. I produktionen bruges guldsprøjteudstyr og tværmembraninstrumenter til at sprøjte guld og lave T- og C-linjerne.
4. Kvantitativ påvisning
- Drop 50 μL prøveopløsning på prøvehullet for at observere kromatografiprocessen.
BEMÆRK: Som følge af kapillæren, der drives af absorberepuden, migrerer prøveopløsningen til den anden ende af strimlen. Når prøveopløsningen når konjugatpuden, reagerer SSD'en (antigen) i prøven med auNPs-mAb preloaded på puden. Når opløsningen migrerer og når T-linjen, kan AuNPs-mAb uden SSD selektivt fanges af SSD-BSA (antigenbærerproteinkonjugat), der vises som en rød farve på T-linjen. Derefter migrerer løsningen til C-linjen, hvor AuNPs-mAb fanges af ged anti-mus IgG i regionen og viser sig dermed som en rød farve på C-linjen. - Analyser strimlerne med en bærbar striplæser. Maskinen kan levere forholdet mellem testlinjen og kontrollinjen (T/C).
- Vurder specificiteten, følsomheden, repeterbarheden og stabiliteten af ICS-testen.
BEMÆRK: Under kvalitativ registrering angiver en rød linje et positivt resultat (kontrollinje). To røde linjer angiver et negativt resultat (test- og kontrollinjer). Hvis kontrollinjen ikke findes, betragtes testen som ugyldig.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Karakterisering af kolloidt guld
De forberedte kolloide guldopløsninger var claret røde. TEM-analyser blev anvendt til at bestemme morfologien og formen af auNPs (figur 2A-D). Figur 2A og figur 2B viser, at partiklerne er polyhedrale i form og jævnt fordelt. Det blev konstateret, at auNPs' gennemsnitlige diameter var ca. 14 nm (figur 2C). Et TEM -billede (High-Resolution TEM) af auNPs vises i figur 2D og figur 2E. HRTEM-billedet taget fra en individuel AuNP viser et kontinuerligt frynsemønster med en afstand på 0,117 nm. UV-vis absorptionstoppene for de fem guldkolloide opløsninger var 518 nm, 521 nm, 524 nm, 534 nm og 540 nm, hvilket viste, at partikelstørrelsen steg en smule med faldende natriumcitrat (Figur 2F).
Figur 2 Karakterisering af kolloidt guld. (A) TEM-billede af AUNPs (100.000× forstørrelse). (B) TEM billede af auNPs (500.000× forstørrelse). (C) Størrelsen fordeling af auNPs. Som det ses i TEM-billedet, varierede auNPs diametre fra 10 nm til 18 nm med en gennemsnitlig diameter på ca. 14 nm. (D, E) TEM-billede (High-Resolution TEM) af auNPs. HRTEM-billedet taget fra en individuel AuNP viser et kontinuerligt frynsemønster med en afstand på 0,117 nm. (F) UV-vis absorptionsspektre af forskellige auNPs spænder fra 10 nm til 18 nm. Dette tal er blevet ændret fra Zhang et al., 201821. Klik her for at se en større version af dette tal.
Evaluering af oliepind
Følsomheden af ICS
For at bestemme følsomheden af ICS blev immunkromatiske strimler brugt til at detektere en række forskellige koncentrationer af SSD-standardprøver (150.000, 60.000, 12.000, 2400, 480 og 96 ng/mL) (figur 3A). Dobbeltdestilleret vand blev brugt som kontrol. I det kvantitative eksperiment blev strimlerne scannet af en JY1502GS bærbarICS-læser(Figur 3B-C ). Den lineære regressionsligning var y = −0,113ln(x) + 1,5451 med en korrelationskoefficient (R2) på 0,983 (figur 3D). Den viste god linearitet ved 96 ng/mL til 150 μg/mL. IC50-værdien var 10,39 μg/mL. I det kvantitative eksperiment blev den optimale testtid foreslået at være 10 min.
Figur 3 Karakterisering af lateral-flow immunoassay til SSD. (A) Fotografier af resultater for standardopløsninger, der indeholder forskellige koncentrationer af SSD-analyseret ved hjælp af ICS. (B) Fotografi af den matchede kolloide guldscanning. (C) Test- og kontrollinjernes intensitetsmønstre, der scannes af det kolloide guld kvantitative instrument. (D) Standardkurve for icELISA til SSD-bestemmelse ved hjælp af ICS. Regressionsligningen er y = −0,113ln(x) + 1,5451 med en korrelationskoefficient (R2) på 0,983. Dette tal er blevet ændret fra Zhang et al., 201821. Klik her for at se en større version af dette tal.
ICS's specificitet
ICS's specificitet blev testet ved at evaluere krydsreaktiviteten med SSD-lignende forbindelser. Tabel 1 viser ICS's krydsreaktivitet med SSD-relaterede forbindelser. Det kan tydeligt ses, at ICS kun havde lav krydsreaktivitet med SSa og ikke havde nogen krydsreaktion med andre forbindelser, herunder SSc, SSb1 eller SSb2 (tabel 1), hvilket indikerer, at den forberedte ICS har høj specificitet.
| Prøver | en ICS | bicELISA |
| (%) | (%) | |
| Ssd | 100 | 100 |
| Ssa | 4.30% | 4.97% |
| SSb1 | <0.09 | <0.09 |
| SSb2 | <0.09 | <0.09 |
| Ssc | <0.09 | <0.09 |
Tabel 1. Krydsreaktivitet af forbindelser målt ved ICS og icELISA. ICS's specificitet blev evalueret af ICS (a) og icELISA (b). Denne tabel er ændret fra Zhang et al., 201821.
Inddrivelse sats
Som vist i tabel 2var den gennemsnitlige inddrivelsesprocent 102,05 % (gennemsnit ± SD, n = 3). På grundlag af dens nøjagtighed og konsistens var denne analyse tilstrækkelig pålidelig til bestemmelse af SSD i biologiske prøver.
| SSd-koncentration | SSd-koncentration, der er etableret ved testsystemet (ng/mL) | Recovery (%) |
| (ng/mL) | ||
| 100 | 135.72 ± 61.97 | 135.72 ± 61.97 |
| 1000 | 926,59 ± 114,24 | 92.66 ± 11.42 |
| 10000 | 11128,16 ± 745,75 | 111.28 ± 14.12 |
Tabel 2. Gendannelseshastighed for SSD. Data er den gennemsnitlige ± SD fra tredelt prøver på hver spiked koncentration af SSD. Procentdelen af inddrivelsen blev beregnet som følger: inddrivelse (%) = målt beløb/beløb × 100%. Denne tabel er ændret fra Zhang et al., 201821.
Stabilitetsanalyse af ICS-analysen
For at vurdere stabiliteten af ICS blev test strimlerne, der var opbevaret i 8 og 16 uger, testet og sammenlignet med de nyforberedte strimler. Tabel 3 viser, at resultaterne af de lagrede og nyforberedte strimler til de negative og positive prøver stort set var uændrede, hvilket indikerer, at ICS kan opbevares ved stuetemperatur i mindst flere måneder, og at den er egnet til storstilet forfremmelse og anvendelse.
| RSD % | |||
| SSd (ng/mL) | 1 dagom | 4 ugerb | 8 ugerc |
| 125 | 2.41 | 3.11 | 3.51 |
| 250 | 2.52 | 4 | 3.52 |
| 500 | 2.44 | 3 | 5.2 |
| 1000 | 3.12 | 2.71 | 4.5 |
Tabel 3. Variationer blandt ICS bruges til analyse af SSD. aVærdierne angiver varianskoefficienter for tredelte prøver på 3 forskellige strimler, der anvendes 1 dag efter fremstillingen. b Værdierne angiver varianskoefficienter for tredelte prøver på 3 forskellige strimler, der anvendes efter at have været opbevaret i 4 uger. c Værdierne angiver varianskoefficienter for tredelte prøver på 3 forskellige strimler, der anvendes efter at være blevet opbevaret i 8 uger. Denne tabel er ændret fra Zhang et al., 201821.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I dette arbejde præsenterer vi en protokol til fremstilling af mAbs mod naturlige produkt-afledte små molekyler. De væsentlige trin og de spørgsmål, der kræver opmærksomhed i proceduren, er blevet skitseret, og vi har vist nytten af denne protokol ved hjælp af det lille molekyle SSD som et eksempel. Eksempelspektre, TEM-billeder, kvantitative resultater og metodiske undersøgelser er vist i repræsentative data. Derfor har vi vist, at den kolloide guldproduktion, AuNP-mAb-bøjnings- og stripassemblystrategi, der præsenteres her, resulterer i oprettelsen af en ny immunoassay, der kan bruges til hurtigt at opdage målmolekylet.
Immunkromatiske strimler er nemme at betjene, og reaktionen er meget hurtig. Der kræves kun 50 μL prøver, og detektionen er fuldført inden for 5 minutter. I modsætning hertil kræver ELISA-metoden, som også er en immunoassay, flere timer, herunder flere vaske og lange inkubationer. Flere vaske og lange inkubationsperioder kan effektivt fjerne prøvematrixens uspecifikke reaktion for at forbedre signal-til-støj-forholdet og følsomheden ved at øge signalværdien. Det betyder, at anti-interferens evne og optimering teknologi tomografisk papir er de vigtigste problemer, der skal løses i denne undersøgelse. Teknologiske optimeringer kan opnås på flere måder. Vælg egnede materialer til prøvepuden og konjugatpuden. Prøvepudens længde blev forøget korrekt for effektivt at forbedre prøvens forbehandlingsevne. Høj pH, høj ionisk styrke og høj bufferkapacitet af materialeforbehandling kan bruges til at undgå at påvirke faktorer som antigen-antistofresponsen af pH-værdien af den biologiske prøve. Da den betingede indstilling af "tre høj" kan forstyrre bindingen af antistoffer, bør det overvejes omfattende.
Desuden er det også vigtigt at bemærke, at et monoklonalt antistof (mAb) er sonden på strimlen. Derfor er denne procedure forbundet med følsomheden af mAb. Den mAb vi ansøgte blev udarbejdet i vores tidligere arbejde17,og mAb produktion kan refereres i vores tidligere publikation19.
Kolloide guldbaserede immunkromatiske strimler er meget udbredte strimler, fordi de er billige og tilbyder praktisk detektion. Denne metode har imidlertid sine egne begrænsninger og stabilitetsspørgsmål. Signalstyrken af auNPs er lavere end for fluorescerende farvestoffer, kolloidt kulstof og andre markører, hvilket betyder, at følsomheden er begrænset. Når de udsættes for luft, skifter auNPs fra vin rød til lilla, hvilket vil medføre en ændring i den grå værdi og påvirke den kvantitative detektion. Derfor er der opstået forskellige modificerede immunkromatiske strimler, og vi har også forberedt kvante prikmærkede fluorescerende strimler22 og IgY-baserede immunkromatiske strimler23, som har lignende procedurer for produktion.
Membranbaserede immunoassays har været meget udbredt i kliniske indikatorer, infektionssygdomme, pesticidrester og overvågning af lægemiddelkoncentration. I denne protokol fokuserede vi på udarbejdelse af en AuNP-baseret metode til naturlige produkter af små molekyler. Denne procedure fungerer som en skabelon for udvikling af forskellige mål immunoassays, der effektivt kan udnyttes som analytiske værktøjer til evaluering og kvalitetskontrol af naturlige produkter.
Dette arbejde giver en detaljeret protokol til udvikling af lateral-flow immunoassays baseret på immunkromatografiske strimler til brug i hurtig, følsom og kvantitativ påvisning af små molekyler. Denne procedure omfatter fremstilling af kolloidt guld, syntese af AuNP-mAb konjugates, samling af strimlen, og metodologisk undersøgelse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har intet at afsløre.
Acknowledgments
Dette arbejde blev støttet af de særlige fonde for grundforskningsfonde for højere læreanstalter, der er tilknyttet centrale afdelinger. Vi sætter pris på støtte fra klassisk recept grundforskning Team af Beijing University of Chinese Medicine.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Chloroauric acid solution (HAuCl4) | Tianjin Fu Chen Chemical Reagents Factory | JY-SJ102 | |
| bovine serum albumin | AMRESCO | 332 | |
| centrifuge tube 15 mL | Corning | 430645 | |
| centrifuge tube 50 mL | Corning | 430828 | |
| ELISA plates, 96 well | NUNC | 655101 | |
| Filter paper | Sinopharm | H5072 | |
| Glass fibre membranes | Jieyi | XQ-Y6 | |
| goat-anti-mouse IgG antibody | applygen | C1308 | |
| Nitrocellulose membranes | Millipore | millipore 180 | |
| ovalbumin | Beijing BIODEE | 5008-25g | |
| PEG20000 | Sigma Aldrich | RNBC6325 | |
| Pipette 10mL | COSTAR | 4488 | |
| Pipette 25mL | FALCON | 357525 | |
| semi-rigid PVC sheets | Jieyi | JY-C104 | |
| Sodium citrate | Beijing Chemical Works | C1034 | |
| sodium periodate | Sinopharm Chemical | BW-G0008 | |
| Sulfo-GMBS | Perbio Science Germany | 22324 | |
| TipOne Tips 1,000 µL | Starlab | S1111-2021 | |
| Tris-HCl | Solarbio | 77-86-1 | |
| TWEEN 20 | Solarbio | 9005-64-5 |
References
- Huang, X., et al. Membrane-based lateral flow immunochromatographic strip with nanoparticles as reporters for detection: A review. Biosensors and Bioelectronics. 75, 166-180 (2016).
- Chang, H. -F., Wang, J. -Q., Wang, B., Deng, A. -P. An immune chromatographic assay for rapid and simultaneous detection of levonorgestrel and methylprednisolone in water samples. Chinese Chemical Letters. 24 (10), 937-940 (2013).
- Lai, J. J., Stayton, P. S. Improving lateral-flow immunoassay (LFIA) diagnostics via biomarker enrichment for mHealth. Methods in Molecular Biology. 1256, 71-84 (2015).
- Zhang, M. Z., et al. Development of a colloidal gold-based lateral-flow immunoassay for the rapid simultaneous detection of clenbuterol and ractopamine in swine urine. Analytical & Bioanalytical Chemistry. 395 (8), 2591-2599 (2009).
- Kranthi, K. R., et al. Development of a colloidal-gold based lateral-flow immunoassay kit for 'quality-control' assessment of pyrethroid and endosulfan formulations in a novel single strip format. Crop Protection. 28 (5), 428-434 (2009).
- Qian, K., et al. Development and evaluation of an immunochromatographic strip for rapid detection of capsid protein antigen p27 of avian leukosis virus. Journal of Virological Methods. (221), 115-118 (2015).
- Lateral flow immunoassay devices for testing saliva and other liquid samples and methods of use of same. US Patent. Guo, H., et al. , US20040184954A1 (2003).
- Miočević, O., et al. Quantitative Lateral Flow Assays for Salivary Biomarker Assessment: A Review. Frontiers in Public Health. 5, 1-13 (2017).
- Lisa, M., et al. Gold nanoparticles based dipstick immunoassay for the rapid detection of dichlorodiphenyltrichloroethane: an organochlorine pesticide. Biosensors and Bioelectronics. 25 (1), 224-227 (2009).
- Zhang, Z., et al. Monoclonal Antibody-Europium Conjugate-Based Lateral Flow Time-Resolved Fluoroimmunoassay for Quantitative Determination of T-2 Toxin in Cereals and Feed. Analytical Methods. 7 (6), 2822-2829 (2015).
- Shen, H., et al. Facile synthesis of high-quality CuInZnxS2+x core/shell nanocrystals and their application for detection of C-reactive protein. Journal of Materials Chemistry. 22 (35), 18623-18630 (2012).
- Xiang, T., et al. A novel double antibody sandwich-lateral flow immunoassay for the rapid and simple detection of hepatitis C virus. International Journal of Molecular Medicine. 30 (5), 1041-1047 (2012).
- Yang, Q., et al. Quantum dot-based immunochromatography test strip for rapid, quantitative and sensitive detection of alpha fetoprotein. Biosensors & Bioelectronics. 30 (1), 145 (2011).
- Song, L. W., et al. Rapid fluorescent lateral-flow immunoassay for hepatitis B virus genotyping. Analytical Chemistry. 87, 5173-5180 (2015).
- Zhang, Y., et al. Quantum dot-based lateral-flow immunoassay for rapid detection of rhein using specific egg yolk antibodies. Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology. 1, (2017).
- Qu, H., et al. Rapid Lateral-Flow Immunoassay for the Quantum Dot-based Detection of GsRerarin. Biosensors and Bioelectronics. 81, 358-362 (2016).
- Li, Z., et al. Development and Clinical Application of a Rapid IgM-IgG Combined Antibody Test for SARS-CoV-2 Infection Diagnosis. Journal of Medical Virology. 92 (9), (2020).
- Xiaomei, L., Jing, W., Ya, Z. The clinical application value analysis of the 2019-coronary virus disease was analyzed by the whole blood Sars-COV 2 specific antibody detection. Natural Science Edition. 42, (2020).
- Zhang, Y., et al. Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products. Journal of Visualized Experiments. , e57116 (2019).
- Sai, J., et al. Development of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay and Immunoaffinity Column Chromatography for Saikosaponin d Using an Anti-Saikosaponin d Monoclonal Antibody. Planta Medica. 82, 432-439 (2016).
- Yue, Z., et al. A Highly Sensitive Immunochromatographic Strip Test for Rapid and Quantitative Detection of Saikosaponin d. Molecules. 23 (2), 338 (2018).
- Qu, H., et al. Rapid Lateral-Flow Immunoassay for the Quantum Dot-based Detection of Puerarin. Biosensors and Bioelectronics. 81, 358-362 (2016).
- Zhang, Y., et al. Quantum dot-based lateral-flow immunoassay for rapid detection of rhein using specific egg yolk antibodies. Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology. 1, (2017).
