Abstract
Мембранные иммунохроматографические полоски бокового потока (ICS) являются полезными инструментами для недорогой самодиагностики и эффективно применяются для обнаружения токсинов, физиологических индексов и клинических биомаркеров. В этом протоколе мы предоставляем подробное описание шагов по разработке быстрого, чувствительного и количественного бокового иммуноанализа (с использованием AuNPs в качестве маркера и mAbs в качестве зонда). Методика описывает получение и характеристику коллоидного золота, синтез конъюгата AuNP-mAb, сборку иммунохроматографической полосы, методологическое исследование анализа. Результаты показали, что конечные полоски могут быть дополнительно использованы для быстрой и удобной самодиагностики малой молекулы, что может обеспечить альтернативный инструмент в быстром и точном анализе физиологических и биологических показателей.
Introduction
Мембранные иммунохроматографические полоски бокового потока (ICS) являются полезными инструментами для недорогого и быстрого обнаружения. Нитроцеллюлозная мембрана в качестве носителя и коллоидное золото в качестве маркеров иммунохроматографических быстродиагностических реагентов являются наиболее часто используемым методом POCT (point of care testing), и объем тестирования проекта шире. Из их первоначального применения в мониторинге во время беременности их применение было расширено для контроля состояния свертываемой крови1,2,травмы миокарда3,ветеринарии4,остатков пестицидов5,инфекционных заболеваний6 и концентраций препарата. Можно оценить больше типов образцов, включая мочу, слюну, цельную кровь, сыворотку и другие жидкости организма7,8,9.
В последние годы были разработаны многочисленные новые анализы для выявления биомаркеров в диагностике расстройств, включая ВЭЖХ, UPLC, LC-MS и ELISA, которые являются чувствительными и точными, достоверными и специфическими. Однако эти методы требуют сложных инструментов, сложной предварительной обработки и трудоемких обработок9. Следовательно, разработка более быстрой и удобной диагностической стратегии в месте оказания медицинской помощи для самостоятельного обнаружения лекарственных активных соединений в режиме реального времени является неотложной10,11.
Популярность АСУ ТП, особенно для распространенных тестов, обусловлена их простотой использования, так как они не требуют профессионалов или сложных инструментальных установок12. Другими словами, люди, не имеющие специальной подготовки, могут оперировать полосками или самотестами13. Результаты теста могут быть получены за 5 минут, что означает, что его можно использовать для осмотра на месте14. Более того, по нашим расчетам, стоимость полосок может быть ниже 115 юаней,а это значит, что тесты недорого продвигать16. Следовательно, ICS является относительно точным, простым и недорогим одноразовым устройством. ICS на основе коллоидного золота17,18 также применяются при быстром выявлении COVID-19.
Принцип ICS можно разделить на сэндвич ICS и конкурентный ICS. Рисунок 1А представляет собой принципиальную схему сэндвич-ICS, которая в основном используется для обнаружения макромолекулярных веществ, таких как белки, включая опухолевые маркеры, воспалительные факторы и хорионический гонадотропин человека (ХГЧ, антиген ранней беременности). В этом методе используют парные антитела, нацеленные на разные эпитопы антигена, а захватное антитело сушат на мембране NC в качестве тестовой линии. Меченое антитело сушат на конъюгированной прокладке, а в качестве контрольной линии используют вторичное антитело.
Рисунок 1B представляет собой принципиальную схему конкурирующих АСУ ТП, которая в основном используется для обнаружения маломолекулярных веществ (MWCO < 2000 Da). Антиген покрытия фиксируют на мембране NC в качестве тестовой линии, а меченое антитело сушат на конъюгированной прокладке. Во время обнаружения образец и меченое антитело протекают через линию обнаружения под капиллярным действием, а покрытый антиген конкурентно связывает свободный антиген в образце и развивает красный цвет на линии обнаружения.
Недавно мы описали процедуру генерации моноклональных антител против натуральных продуктов19. В этой работе мы разработали новый анализ бокового потока на основе подготовленного анти-SSD mA20 для быстрого обнаружения на месте. Результаты показывают, что иммунохроматографический анализ является незаменимым и удобным инструментом для обнаружения соединений, полученных из натурального продукта.
Рисунок 1 Принципиальная схема иммунохроматографического анализа (А)Сэндвич иммунохроматографические тест-полоски. (B) Косвенные конкурентные иммунные хроматографические тест-полоски. Эта цифра была изменена с Zhang et al.,201821. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все процедуры, выполненные в этом исследовании, были одобрены Комитетом по этике Пекинского университета китайской медицины (номер одобрения 2017BZYYL00120).
1. Получение и характеристика коллоидного золота
ПРИМЕЧАНИЕ: Для коллоидного синтеза золота, поскольку коллоидное золото легко адсорбируется на внутренней стенке сосуда и подвержено осаждению примесями, сосуд для синтеза и хранения коллоидного золота следует тщательно очистить и замочить в кислоте (40 мл дистиллированной воды, 360 мл концентрированной серной кислоты, 20 г дихромата калия) или подвергнуть поверхностной пассивационной обработке. Метод восстановления лимонной кислоты был использован для синтеза коллоидного золота.
- Включите магнитную мешалку и поместите колбу (250 мл) на смеситель.
- Готовят 4% раствор хлорида золота и 1% раствор цитрата натрия соответственно.
- Добавьте 120 мл дистиллированной воды в колбу с круглым дном и нагрейте ее до кипения на термостатической магнитной мешалке.
- Держите кипение и быстро добавляйте 0,5 мл 4% хлорауровой кислоты и 5 мл 1% цитрата натрия.
- Следите за цветом раствора. Бледно-желтый раствор хлораурисовой кислоты становится винно-красным в течение нескольких минут.
- Продолжайте нагревать в течение 10 минут, пока раствор не изменится с бесцветного на прозрачный винно-красный.
- Выключите питание термостатического магнитного смесителя, охладите до комнатной температуры и переместите смесь в чистую бутылку. Храните при 4 °C.
- Определение размера и морфологии AuNPs с помощью ультрафиолетовой спектроскопии и визуализации ТЭМ.
ПРИМЕЧАНИЕ: Различные размеры частиц коллоидного золота для различных применений могут быть получены путем изменения пропорции цитрата натрия и хлораурисовой кислоты.
2. Синтез сопряженных AuNPs-mAb
ПРИМЕЧАНИЕ: Поскольку антитела связываются с коллоидным золотом путем электростатической адсорбции, заряды на поверхности белков и коллоидного золота напрямую влияют на интенсивность связывания; поэтому значение буферного рН является важным фактором, влияющим на стабильность конъюгата антитело-коллоидное золото. SSD и anti-SSD mAbs используются в качестве примеров в этом протоколе.
- Оценка pH связи
- Добавьте 100 мкл раствора NaCl (10% м/об) в восемь пробирок.
- Регулируйте растворы AuNP при рН 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 и 12 с 0,1МК2СО3.
- Добавьте 100 мкл раствора коллоидного золота (рН с поправкой 5-12) в восемь пробирок, содержащих NaCl.
- Дайте растворам постоять в течение нескольких минут после смешивания. Наблюдайте за изменением цвета каждого раствора трубки и записывайте трубку, которая остается красной.
- Выберите значение pH с наименьшим добавлениемK2CO3 и стабильным цветом раствора в качестве оптимального значения pH для получения конъюгатов AuNP-mAb.
ПРИМЕЧАНИЕ: Не используйте рН-метр, так как зонд может быть разрушен AuNPs.
- Оценка количества антител
- Добавьте 100 мкл раствора NaCl (10% м/об) в восемь пробирок.
- Добавьте 100 мкл раствора коллоидного золота с оптимальным рН в каждую пробирку.
- Добавьте растворы моноклональных антител (концентрация белка 0,1 мг/мл-3,2 мг/мл) в вышеупомянутые восемь пробирок.
- Дайте растворам постоять в течение нескольких минут после смешивания. Наблюдайте за изменением цвета каждого раствора трубки и записывайте трубку, которая остается красной.
- Выберите количество антител с наименьшей концентрацией mAb и стабильным цветом раствора в качестве оптимального количества mAb для получения конъюгатов AuNP-mAb.
- Подготовьте буфер повторного суспензии: добавьте 1 M Tris-HCl (pH 8,8), 1% (мас./об.) BSA, 0,5% (v/v) Tween 20 и 1% (v/v) PEG 20000 и хорошо перемешайте.
- Синтез сопряженного AuNP-mAb
- Возьмите 10 мл раствора коллоидного золота и используйте 0,1 M K2CO3, чтобы отрегулировать раствор до оптимального значения рН.
- Медленно добавляйте SSD mAbs в соответствующих концентрациях и встряхивайте при комнатной температуре в течение 30 мин.
- Центрифугировать смесь при 83 х г (1 000 об/мин) в течение 10 мин при 4 °C. Удалите осадок, который содержит примеси или осажденное коллоидное золото.
- Центрифугировать смесь при 8 330 х г (10 000 об/мин) в течение 30 мин при 4 °C. Отбросьте супернатант, и осадок будет коллоидным сопряжением золото-mAb.
- Добавьте буфер повторного суспендения, чтобы диссоциировать осадки.
3. Сборка полосы
ПРИМЕЧАНИЕ: Для последующих проточных иммуноанализов выбор и предварительная обработка мембранного материала будут непосредственно влиять на тест, который должен быть исследован. Иммунохроматографическая полоса состоит из пробоотборника, сопряженной прокладки, нитроцеллюлозной (NC) мембраны, абсорбирующей прокладки и плитыПВХ (рисунок 1). Материал мембраны должен быть проверен и оценен с помощью стереомикроскопии для устранения неоднородности.
- Наклеить мембрану с ЧПУ на плиту ПВХ на 2 см друг от друга от края всасывающего конца доски.
- Добавьте SSD-BSA (2 мг/мл) по каплям на мембрану NC (на 2 см друг от друга от верхнего края) в качестве тестовой линии (шириной 1 мм) и добавьте козлиную антимышью IgG (1,5 мг/мл) по каплям на мембрану NC (2 см от нижнего края) в качестве контрольной линии (шириной 1 мм). Контролируйте количество добавленного белка.
- Прикрепите абсорбивную прокладку к листу ПВХ над мембраной NC и перекрывайте ее мембраной NC на 2 мм.
- Погрузьте стекловолокнистую мембрану в сопряженный раствор AuNPs-mAb. Высушите влажную мембрану в инкубаторе при 37 °C.
- Обрежьте стекловолокнистую мембрану до 5 см в длину и 2 см в ширину и используйте ее в качестве сопряженной прокладки.
- Вставьте предварительно обработанный конъюгатный подушечек под мембрану NC. Длина перекрытия с мембраной NC должна составлять 0,1 см.
ПРИМЕЧАНИЕ: Мембрана из стекловолокна обладает сильной способностью связывать и высвобождать белки. - Обрежьте мембрану fusion 3 до 1,8 см в длину и 3,5 см в ширину и используйте ее в качестве образца.
- Наклейте прокладку для образцов на плиту ПВХ и перекрывайте ее сопряженной прокладкой на 2 мм.
- Нарежьте собранный картон на полосы шириной 3,5 мм с помощью режущего станка и уплотните его с помощью системы периодического ламинирования.
- Наконец, поместите тест-полоски в оболочку, запечатайте их в пакет из алюминиевой фольги, содержащий адсорбцию, и храните их вдали от света. В настоящее время АСУ ТП собраны.
ПРИМЕЧАНИЕ: Вышеуказанная лабораторная процедура. В производстве оборудование для распыления золота и поперечные мембранные инструменты используются для распыления золота и изготовления линий T и C.
4. Количественное определение
- Опустите 50 мкл раствора образца на отверстие для образца, чтобы наблюдать за процессом хроматографии.
ПРИМЕЧАНИЕ: В результате капиллярного действия, приводимого абсорбирующей прокладкой, раствор образца мигрирует на другой конец полосы. Когда раствор образца достигает сопряженной прокладки, SSD (антиген) в образце реагирует с AuNPs-mAb, предварительно загруженным на площадку. Когда раствор мигрирует и достигает Т-линии, AuNPs-mAb без SSD может быть избирательно захвачен SSD-BSA (конъюгат белка-антиген-носитель), показываясь красным цветом на Т-линии. Затем решение мигрирует в линию C, где AuNPs-mAb захватываются козьим антимышиным IgG в области, тем самым показываясь красным цветом на линии C. - Анализируйте полоски с помощью портативного считывателя полос. Машина может обеспечить отношение испытательной линии к управляюще (T/C).
- Оцените специфичность, чувствительность, повторяемость и стабильность теста ICS.
ПРИМЕЧАНИЕ: При качественном обнаружении одна красная линия указывает на положительный результат (контрольная линия). Две красные линии указывают на отрицательный результат (тестовая и контрольная линии). Если управлящая линия отсутствует, тест считается недействительным.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Характеристика коллоидного золота
Приготовленные коллоидные растворы золота были бордово-красного цвета. Анализы ТЕА использовались для определения морфологии и формы AuNPs(рисунок 2A-D). Фиг.2А и Фиг.2В показывают, что частицы имеют многогранную форму и равномерно распределены. Средний диаметр AuNPs оказался приблизительно 14 нм(рисунок 2C). Изображение AuNP с высоким разрешением TEM (HRTEM) показано на рисунках 2D и 2E. Изображение HRTEM, взятое из отдельного AuNP, показывает непрерывный рисунок бахромы с интервалом 0,117 нм. Пики поглощения UV-vis пяти коллоидных растворов золота составляли 518 нм, 521 нм, 524 нм, 534 нм и 540 нм, что показало, что размер частиц несколько увеличивался с уменьшением цитрата натрия(рисунок 2F).
Рисунок 2 Характеристика коллоидного золота. (A) TEM изображение AuNPs (100 000× увеличение). (B)Изображение ТЕА AuNP (увеличение 500 000×). (C)Распределение AuNPs по размерам. Как видно на изображении TEM, диаметры AuNPs варьировались от 10 нм до 18 нм, со средним диаметром приблизительно 14 нм. (D, E) Изображение AuNP с высоким разрешением (HRTEM). Изображение HRTEM, взятое из отдельного AuNP, показывает непрерывный рисунок бахромы с интервалом 0,117 нм. (F)УФ-вис спектры поглощения различных AuNP в диапазоне от 10 нм до 18 нм. Эта цифра была изменена с Zhang et al.,201821. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Оценка щупов
Чувствительность АСУ ТП
Для определения чувствительности ICS использовались иммунохроматографические полоски для обнаружения различных концентраций стандартных образцов SSD (150 000, 60 000, 12 000, 2400, 480 и 96 нг/мл)(рисунок 3A). В качестве контроля использовалась двухдистиллированная вода. В количественном эксперименте полоски сканировались портативным считывателем ICS JY1502GS(рисунок 3B-C). Уравнение линейной регрессии было y = −0,113ln(x) + 1,5451, с коэффициентом корреляции (R2) 0,983(рисунок 3D). Он показал хорошую линейность при 96 нг/мл до 150 мкг/мл. Значение IC50 составило 10,39 мкг/мл. В количественном эксперименте оптимальное время теста было предложено 10 мин.
Рисунок 3 Характеристика бокового иммуноанализа для SSD. (A) Фотографии результатов для стандартных растворов, содержащих различные концентрации SSD, анализируемых с использованием ICS. (B) Фотография соответствующего коллоидного сканирования золота. (C) Диаграммы интенсивности тестовых и контрольных линий, отсканированных коллоидным золотым количественным инструментом. (D)Стандартная кривая icELISA для определения SSD с использованием ICS. Уравнение регрессии y = −0,113ln(x) + 1,5451, с коэффициентом корреляции(R2)0,983. Эта цифра была изменена с Zhang et al.,201821. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Специфика АСУ ТП
Специфичность ICS была проверена путем оценки перекрестной реакционной способности с SSD-подобными соединениями. В таблице 1 показана перекрестная реакционная способность АСУ ТП с соединениями, связанными с SSD. Можно ясно видеть, что ICS имела только низкую перекрестную реакционную способность с SSa и не имела перекрестной реакции с другими соединениями, включая SSc, SSb1 или SSb2(таблица 1),что указывает на то, что полученная ICS имеет высокую специфичность.
| Образцы | a АСУ ТП | bицелиса |
| (%) | (%) | |
| SSd | 100 | 100 |
| ССа | 4.30% | 4.97% |
| ССб1 | <0,09 | <0,09 |
| ССб2 | <0,09 | <0,09 |
| СШО | <0,09 | <0,09 |
Таблица 1. Перекрестная реакционная способность соединений, измеренная ICS и icELISA. Специфика ICS оценивалась ICS(a)и icELISA(b). Эта таблица была изменена с Zhang et al.,201821.
Скорость восстановления
Как показано в таблице 2,средний коэффициент извлечения составил 102,05% (среднее ± УР, n = 3). Исходя из своей точности и последовательности, этот анализ оказался достаточно надежным для определения ССД в биологических образцах.
| Концентрация SSd | Концентрация SSd, установленная тестовой системой (нг/мл) | Восстановление (%) |
| (нг/мл) | ||
| 100 | 135.72 ± 61.97 | 135.72 ± 61.97 |
| 1000 | 926.59 ± 114.24 | 92.66 ± 11.42 |
| 10000 | 11128.16 ± 745.75 | 111.28 ± 14.12 |
Таблица 2. Скорость восстановления SSD. Данные представляют собой среднюю ± SD из трехдипликатурных образцов при каждой шипоточной концентрации SSD. Процент извлечения рассчитывался следующим образом: возмещение (%) = измеренная сумма/сумма × 100%. Эта таблица была изменена с Zhang et al.,201821.
Анализ стабильности анализа ICS
Чтобы оценить стабильность ICS, тест-полоски, хранящиеся в течение 8 и 16 недель, были протестированы и сопоставлены с вновь подготовленными полосками. Из таблицы 3 видно, что результаты сохраненных и вновь подготовленных полосок для отрицательных и положительных образцов практически не изменились, что указывает на то, что АСУ ТП может храниться при комнатной температуре не менее нескольких месяцев и что она пригодна для крупномасштабного продвижения и применения.
| RSD % | |||
| SSd (нг/мл) | 1 деньв сутки | 4 неделиb | 8 недельc |
| 125 | 2.41 | 3.11 | 3.51 |
| 250 | 2.52 | 4 | 3.52 |
| 500 | 2.44 | 3 | 5.2 |
| 1000 | 3.12 | 2.71 | 4.5 |
Таблица 3. Вариации между ICS, используемыми для анализа SSD. aЗначения указывают на коэффициенты дисперсии для трехциликтных образцов на 3 различных полосах, используемых через 1 день после изготовления. б Значения указывают коэффициенты дисперсии для тройных образцов на 3 различных полосках, используемых после хранения в течение 4 недель. с Значения указывают коэффициенты дисперсии для тройных образцов на 3 различных полосках, используемых после хранения в течение 8 недель. Эта таблица была изменена с Zhang et al.,201821.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
В этой работе мы представляем протокол получения mAbs против малых молекул, полученных из натурального продукта. Основные шаги и вопросы, требующие внимания в процедуре, были изложены, и мы продемонстрировали полезность этого протокола на примере SSD с малыми молекулами. Примеры спектров, изображения ТЕА, количественные результаты и методологические исследования показаны в репрезентативных данных. Следовательно, мы продемонстрировали, что коллоидное производство золота, конъюгация AuNP-mAb и стратегия сборки полос, представленная здесь, приводят к созданию нового иммуноанализа, который можно использовать для быстрого обнаружения молекулы-мишени.
Иммунохроматографические полоски просты в эксплуатации, а реакция очень быстрая. Требуется только 50 мкл образца, и обнаружение завершается в течение 5 минут. Напротив, метод ИФА, который также является иммуноанализом, требует нескольких часов, включая многократные промывки и длительные инкубации. Многократные промывки и длительные инкубационные периоды могут эффективно удалить неспецифическую реакцию матрицы образца для улучшения отношения сигнал/шум и чувствительности за счет увеличения значения сигнала. Это означает, что антиинтерференционная способность и технология оптимизации томографической бумаги являются ключевыми проблемами, которые должны быть решены в данном исследовании. Технологическая оптимизация может быть достигнута несколькими способами. Выберите подходящие материалы для прокладки для отбора проб и сопряженной прокладки. Длина прокладки для образца была увеличена соответствующим образом, чтобы эффективно улучшить способность образца к предварительной обработке. Высокий рН, высокая ионная прочность и высокая буферная способность предварительной обработки материала могут быть использованы, чтобы избежать влияния таких факторов, как реакция антиген-антитело на значение рН биологического образца. Поскольку условная установка «трех высоких» может мешать связыванию антител, ее следует рассматривать комплексно.
Более того, также важно отметить, что моноклональное антитело (mAb) является зондом на полосе. Поэтому эта процедура связана с чувствительностью mAb. MAb, который мы применили, был подготовлен в нашей предыдущей работе17,а на производство mAb можно ссылаться в нашей предыдущей публикации19.
Иммунохроматографические полоски на основе коллоидного золота являются широко используемыми полосками, потому что они недороги и предлагают удобное обнаружение. Однако этот метод имеет свои ограничения и проблемы стабильности. Сила сигнала AuNPs ниже, чем у флуоресцентных красителей, коллоидного углерода и других маркеров, что означает, что чувствительность ограничена. При воздействии воздуха AuNPs изменяются с винно-красного на фиолетовый, что вызовет изменение значения серого и повлияет на количественное обнаружение. Таким образом, появились различные модифицированные иммунохроматографические полоски, а также мы подготовили флуоресцентные полоски22 с метками квантовых точек и иммунохроматографические полоски23 на основеIgY, которые имеют аналогичные процедуры для производства.
Мембранные иммуноанализы широко используются при клинических показателях, инфекционных заболеваниях, остатках пестицидов и мониторинге концентрации лекарств. В этом протоколе мы сосредоточились на подготовке метода на основе AuNP для маломолекулярных натуральных продуктов. Эта процедура выступает в качестве шаблона для разработки различных целевых иммунологических анализов, которые могут быть эффективно использованы в качестве аналитических инструментов для оценки и контроля качества натуральных продуктов.
Данная работа содержит подробный протокол разработки боковых иммунологических анализов на основе иммунных хроматографических полосок для использования в быстром, чувствительном и количественном обнаружении малых молекул. Эта процедура включает в себя получение коллоидного золота, синтез конъюгатов AuNP-mAb, сборку полосы и методологическое исследование.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторам нечего раскрывать.
Acknowledgments
Эта работа была поддержана Специальными фондами фундаментальных исследований высших учебных заведений, связанных с центральными департаментами. Мы ценим поддержку Группы фундаментальных исследований классических рецептов Пекинского университета китайской медицины.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Chloroauric acid solution (HAuCl4) | Tianjin Fu Chen Chemical Reagents Factory | JY-SJ102 | |
| bovine serum albumin | AMRESCO | 332 | |
| centrifuge tube 15 mL | Corning | 430645 | |
| centrifuge tube 50 mL | Corning | 430828 | |
| ELISA plates, 96 well | NUNC | 655101 | |
| Filter paper | Sinopharm | H5072 | |
| Glass fibre membranes | Jieyi | XQ-Y6 | |
| goat-anti-mouse IgG antibody | applygen | C1308 | |
| Nitrocellulose membranes | Millipore | millipore 180 | |
| ovalbumin | Beijing BIODEE | 5008-25g | |
| PEG20000 | Sigma Aldrich | RNBC6325 | |
| Pipette 10mL | COSTAR | 4488 | |
| Pipette 25mL | FALCON | 357525 | |
| semi-rigid PVC sheets | Jieyi | JY-C104 | |
| Sodium citrate | Beijing Chemical Works | C1034 | |
| sodium periodate | Sinopharm Chemical | BW-G0008 | |
| Sulfo-GMBS | Perbio Science Germany | 22324 | |
| TipOne Tips 1,000 µL | Starlab | S1111-2021 | |
| Tris-HCl | Solarbio | 77-86-1 | |
| TWEEN 20 | Solarbio | 9005-64-5 |
References
- Huang, X., et al. Membrane-based lateral flow immunochromatographic strip with nanoparticles as reporters for detection: A review. Biosensors and Bioelectronics. 75, 166-180 (2016).
- Chang, H. -F., Wang, J. -Q., Wang, B., Deng, A. -P. An immune chromatographic assay for rapid and simultaneous detection of levonorgestrel and methylprednisolone in water samples. Chinese Chemical Letters. 24 (10), 937-940 (2013).
- Lai, J. J., Stayton, P. S. Improving lateral-flow immunoassay (LFIA) diagnostics via biomarker enrichment for mHealth. Methods in Molecular Biology. 1256, 71-84 (2015).
- Zhang, M. Z., et al. Development of a colloidal gold-based lateral-flow immunoassay for the rapid simultaneous detection of clenbuterol and ractopamine in swine urine. Analytical & Bioanalytical Chemistry. 395 (8), 2591-2599 (2009).
- Kranthi, K. R., et al. Development of a colloidal-gold based lateral-flow immunoassay kit for 'quality-control' assessment of pyrethroid and endosulfan formulations in a novel single strip format. Crop Protection. 28 (5), 428-434 (2009).
- Qian, K., et al. Development and evaluation of an immunochromatographic strip for rapid detection of capsid protein antigen p27 of avian leukosis virus. Journal of Virological Methods. (221), 115-118 (2015).
- Lateral flow immunoassay devices for testing saliva and other liquid samples and methods of use of same. US Patent. Guo, H., et al. , US20040184954A1 (2003).
- Miočević, O., et al. Quantitative Lateral Flow Assays for Salivary Biomarker Assessment: A Review. Frontiers in Public Health. 5, 1-13 (2017).
- Lisa, M., et al. Gold nanoparticles based dipstick immunoassay for the rapid detection of dichlorodiphenyltrichloroethane: an organochlorine pesticide. Biosensors and Bioelectronics. 25 (1), 224-227 (2009).
- Zhang, Z., et al. Monoclonal Antibody-Europium Conjugate-Based Lateral Flow Time-Resolved Fluoroimmunoassay for Quantitative Determination of T-2 Toxin in Cereals and Feed. Analytical Methods. 7 (6), 2822-2829 (2015).
- Shen, H., et al. Facile synthesis of high-quality CuInZnxS2+x core/shell nanocrystals and their application for detection of C-reactive protein. Journal of Materials Chemistry. 22 (35), 18623-18630 (2012).
- Xiang, T., et al. A novel double antibody sandwich-lateral flow immunoassay for the rapid and simple detection of hepatitis C virus. International Journal of Molecular Medicine. 30 (5), 1041-1047 (2012).
- Yang, Q., et al. Quantum dot-based immunochromatography test strip for rapid, quantitative and sensitive detection of alpha fetoprotein. Biosensors & Bioelectronics. 30 (1), 145 (2011).
- Song, L. W., et al. Rapid fluorescent lateral-flow immunoassay for hepatitis B virus genotyping. Analytical Chemistry. 87, 5173-5180 (2015).
- Zhang, Y., et al. Quantum dot-based lateral-flow immunoassay for rapid detection of rhein using specific egg yolk antibodies. Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology. 1, (2017).
- Qu, H., et al. Rapid Lateral-Flow Immunoassay for the Quantum Dot-based Detection of GsRerarin. Biosensors and Bioelectronics. 81, 358-362 (2016).
- Li, Z., et al. Development and Clinical Application of a Rapid IgM-IgG Combined Antibody Test for SARS-CoV-2 Infection Diagnosis. Journal of Medical Virology. 92 (9), (2020).
- Xiaomei, L., Jing, W., Ya, Z. The clinical application value analysis of the 2019-coronary virus disease was analyzed by the whole blood Sars-COV 2 specific antibody detection. Natural Science Edition. 42, (2020).
- Zhang, Y., et al. Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products. Journal of Visualized Experiments. , e57116 (2019).
- Sai, J., et al. Development of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay and Immunoaffinity Column Chromatography for Saikosaponin d Using an Anti-Saikosaponin d Monoclonal Antibody. Planta Medica. 82, 432-439 (2016).
- Yue, Z., et al. A Highly Sensitive Immunochromatographic Strip Test for Rapid and Quantitative Detection of Saikosaponin d. Molecules. 23 (2), 338 (2018).
- Qu, H., et al. Rapid Lateral-Flow Immunoassay for the Quantum Dot-based Detection of Puerarin. Biosensors and Bioelectronics. 81, 358-362 (2016).
- Zhang, Y., et al. Quantum dot-based lateral-flow immunoassay for rapid detection of rhein using specific egg yolk antibodies. Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology. 1, (2017).
