Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biochemistry

Utveckling av en immunokromatografisk remsa för lateralt flöde för snabb och kvantitativ detektion av små molekylföreningar

Published: November 13, 2021 doi: 10.3791/62754
* These authors contributed equally

Abstract

Membranbaserade laterala flöde immunokromatographic remsor (ICSs) är användbara verktyg för lågkostnads självdiagnos och har effektivt tillämpats på toxin, fysiologiska index och kliniska biomarkör detektion. I detta protokoll ger vi en detaljerad beskrivning av stegen för att utveckla en snabb, känslig och kvantitativ lateral-flow immunoassay (med AuNPs som markör och mAbs som sond). Förfarandet beskriver beredning och karakterisering av kolloidalt guld, syntes av AuNP-mAb konjugat, montering av immunokromatografiska remsan och metodologiska undersökning av analysen. Resultaten visade att de slutliga remsorna kan användas ytterligare för snabb och bekväm självdiagnos av en liten molekyl, vilket kan ge ett alternativt verktyg i snabb och exakt analys av fysiologiska och biologiska index.

Introduction

Membranbaserade laterala flöde immunokromatografiska remsor (ICS) är användbara verktyg för låg kostnad och snabb detektion. Nitrocellulosamembranet som bärare och kolloidalt guld som markörer för immunkromatografi snabba diagnostiska reagenser är den vanligaste POCT-metoden (point of care testing) och projektets testomfång är bredare. Från deras ursprungliga tillämpning i övervakning under graviditeten har deras användning utvidgats för att övervaka blodkoagulationstillstånd1,2, skador på myokardskador3, veterinärmedicin 4 ,bekämpningsmedelsrester5, infektionssjukdomar6 och läkemedelskoncentrationer. Fler typer av prover kan bedömas, inklusive urin, saliv, helblod, serum och andrakroppsvätskor 7,8,9.

Under de senaste åren har många nya analyser utvecklats för att upptäcka biomarkörer vid diagnos av sjukdomar, inklusive HPLC, UPLC, LC-MS och ELISA, som är känsliga och exakta, trovärdiga och specifika. Dessa metoder kräver dock sofistikerad instrumentering, komplex förbearbetning och tidskrävande behandlingar9. Därför är det brådskande10,11.

Populariteten hos ICSs, särskilt för vanliga tester, drivs av deras användarvänlighet, eftersom de inte kräver proffs eller utarbetade instrumentala inställningar12. Med andra ord kan personer som inte har särskild utbildning driva remsor eller självtester13. Resultaten av testet kan erhållas på 5 minuter, vilket innebär att det kan användas för platsinspektioner14. Dessutom, enligt våra beräkningar, kostnaden för remsor kan vara lägre än 1 RMB15, vilket innebär att testerna är billiga att främja16. Därför är ICS en relativt exakt, enkel och billig engångsenhet. ICSs baserade på kolloidalt guld17,18 tillämpas också i snabb COVID-19 upptäckt.

Principen om ICS kan delas in i sandwich ICS och konkurrenskraftiga ICS. Figur 1A är ett schematiskt diagram över smörgås-ICS, som huvudsakligen används för att upptäcka makromolekylära ämnen som proteiner, inklusive tumörmarkörer, inflammatoriska faktorer och humant koriongonotropin (HCG, tidig graviditetsantigen). I denna metod används parade antikroppar riktade mot olika epitoper av antigenet, och fångstantikroppen torkas på NC-membranet som en testlinje. Märkt antikropp torkas på konjugatdynan och sekundär antikropp används som kontrolllinje.

Figur 1B är ett schematiskt diagram över konkurrenskraftig ICS, som huvudsakligen används för att upptäcka små molekylämnen (MWCO < 2000 Da). Beläggningsantigenet är fastsatt på NC-membranet som en testlinje, och den märkta antikroppen torkas på konjugatdynan. Under detektion flödar provet och märkt antikropp genom detektionslinjen under kapillärverkan, och det belagda antigenet binder konkurrenskraftigt fritt antigen i provet och utvecklar en röd färg på detektionslinjen.

Nyligen beskrev vi förfarandet för monoklonal antikroppsgenerering mot naturliga produkter19. I detta arbete utvecklade vi ett nytt lateralt flöde immunoassay baserat på den förberedda anti-SSD mA20 för snabb upptäckt på plats. Resultaten tyder på att immunokromatografianalysen är ett oumbärligt och bekvämt verktyg för att upptäcka naturliga produktbaserade föreningar.

Figure 1
Figur 1 Schematiskt diagram över immunokromatografianalysen (A)Sandwich immunokromatografiska testremsor. B)Indirekta konkurrenskraftiga immunkromatografiska testremsor. Denna siffra har ändrats från Zhang et al., 201821. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alla procedurer som utfördes i denna studie godkändes av etikgranskningskommittén vid Beijing University of Chinese Medicine (godkännandenummer 2017BZYYL00120).

1. Förberedelse och karakterisering av kolloidalt guld

OBS: För kolloidal guldsyntes, eftersom kolloidalt guld lätt adsorberas på kärlets inre vägg och är benägen att nederbörd av föroreningar, bör kärlet för syntes och lagring av kolloidalt guld rengöras noggrant och blötläggas i syra (40 ml destillerat vatten, 360 ml koncentrerad svavelsyra, 20 g kaliumdikhromat) eller utsättas för ytinandning. En citronsyra minskning metod användes för att syntetisera kolloidalt guld.

  1. Slå på magnetomröraren och placera kolven (250 ml) på blandaren.
  2. Förbered 4% guldkloridsyralösning respektive 1% natriumcitratlösning.
  3. Tillsätt 120 ml destillerat vatten till en rund bottenkolv och värm upp det till kokning på en termostatisk magnetisk omrörare.
  4. Fortsätt koka och tillsätt snabbt 0,5 ml kloroaurisk syra och 5 ml natriumcitrat på 1% natriumcitrat.
  5. Observera lösningens färg. Den blekgula kloroaurisk syralösningen blir röd på några minuter.
  6. Fortsätt uppvärmningen i 10 minuter tills lösningen ändras från färglös till transparent vinröd.
  7. Stäng av kraften hos den termostatiska magnetiska blandaren, svalna till rumstemperatur och flytta blandningen till en ren flaska. Förvara den vid 4 °C.
  8. Bestäm aunps storlek och morfologi genom ultraviolett spektroskopi och TEM-avbildning.
    OBS: Olika storlekar av kolloida guldpartiklar för olika tillämpningar kan erhållas genom att ändra andelen citratnatrium och kloroaurisk syra.

2. Syntes av AuNPs-mAb Conjugate

OBS: Eftersom antikroppar binder till kolloidalt guld genom elektrostatisk adsorption påverkar laddningar på ytan av proteiner och kolloidalt guld direkt bindningsintensiteten. Därför är pH-värdet för buffert en viktig faktor som påverkar stabiliteten hos den antikroppskolloidala guldkonjugaten. SSD och anti-SSD mAbs används som exempel i detta protokoll.

  1. Utvärdering av koppling pH
    1. Tillsätt 100 μL NaCl-lösning (10 % m/v) i åtta rör.
    2. Justera AuNP-lösningarna vid pH 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 och 12 med 0,1 M K2CO3.
    3. Tillsätt 100 μL kolloidal guldlösning (pH justerad 5-12) till åtta rör som innehåller NaCl.
    4. Låt lösningarna stå i flera minuter efter blandning. Observera färgförändringen för varje rörlösning och spela in röret som förblir rött.
    5. Välj pH-värdet med minst tillsats av K2CO3 och stabil lösningsfärg som optimalt pH-värde för att förbereda AuNP-mAb konjugat.
      OBS: Använd inte en pH-mätare eftersom sonden kan förstöras av AuNPs.
  2. Utvärdering av antikroppsmängd
    1. Tillsätt 100 μL NaCl-lösning (10 % m/v) till åtta rör.
    2. Tillsätt 100 μL kolloidal guldlösning med optimalt pH-tal till varje rör.
    3. Tillsätt de monoklonala antikroppslösningarna (proteinkoncentration 0,1 mg/ml-3,2 mg/ml) i ovannämnda åtta rör.
    4. Låt lösningarna stå i flera minuter efter blandning. Observera färgförändringen för varje rörlösning och spela in röret som förblir rött.
    5. Välj antikroppsmängden med den lägsta koncentrationen av mAb och stabil lösningsfärg som optimal mAb-mängd för att förbereda AuNP-mAb konjugat.
  3. Förbered återsuspensionsbufferten: tillsätt 1 M Tris-HCl (pH 8,8), 1% (w/v) BSA, 0,5% (v/v) Tween 20 och 1% (v/v) PEG 20000 och blanda väl.
  4. Syntes av AuNP-mAb konjugat
    1. Ta 10 ml kolloidal guldlösning och använd 0,1 M K2CO3 för att justera lösningen till det optimala pH-värdet.
    2. Tillsätt långsamt SSD mAbs vid lämpliga koncentrationer och skaka vid rumstemperatur i 30 min.
    3. Centrifugera blandningen vid 83 x g (1 000 varv/min) i 10 minuter vid 4 °C. Ta bort fällningen, som innehåller föroreningar eller fällt kolloidalt guld.
    4. Centrifugera blandningen vid 8,330 x g (10 000 varv/min) i 30 minuter vid 4 °C. Kassera supernaten, och fällningen är den kolloidala guld-mAb konjugaten.
    5. Tillsätt återsuspensionsbufferten för att ta avstånd från nederbörden.

3. Montering av remsan

OBS: För senare flödesimmunassays kommer valet och förbehandlingen av membranmaterial att direkt påverka testet, som bör undersökas. Den immunokromatografiska remsan består av en provplatta, en konjugatplatta, ett nitrocellulosamembran (NC), en absorberande kudde och en PVC-bräda (figur 1). Membranmaterialet bör kontrolleras och utvärderas med stereomikroskopi för att eliminera inhomogenitet.

  1. Klistra in NC-membranet på en PVC-bräda 2 cm från kanten av brädans sugdel.
  2. Tillsätt SSD-BSA (2 mg/ml) droppevis till NC-membranet (2 cm från den övre kanten) som en testlinje (1 mm bred) och tillsätt get mot mus IgG (1,5 mg/mL) droppe på NC-membranet (2 cm från underkanten) som en kontrolllinje (1 mm bred). Kontrollera mängden protein som tillsätts.
  3. Fäst den absorberande dynan på PVC-arket ovanför NC-membranet och överlappa den med NC-membranet med 2 mm.
  4. Dränk glasfibermembranet i AuNPs-mAb konjugatlösning. Torka det våta membranet i en inkubator vid 37 °C.
  5. Trimma glasfibermembranet till 5 cm långt och 2 cm brett och använd det som konjugatplatta.
  6. Klistra in den förbehandlade konjugatdynan under NC-membranet. Överlappningens längd med NC-membranet ska vara 0,1 cm.
    OBS: Glasfibermembranet har en stark förmåga att binda och frigöra proteiner.
  7. Trimma fusionsmembranet 3 till 1,8 cm långt och 3,5 cm brett och använd det som provplatta.
  8. Klistra in provplattan på PVC-brädan och överlappa den med konjugatdynan med 2 mm.
  9. Skär den monterade pappersbrädan i 3,5 mm breda remsor med en skärmaskin och komprimera den med hjälp av ett batch lamineringssystem.
  10. Slutligen placera testremsorna i skalet, försegla dem i en aluminiumfoliepåse som innehåller torkmedel och lagra dem borta från ljus. ICS är nu monterade.
    OBS: Ovanstående är laboratorieproceduren. I produktionen används guldsprutningsutrustning och tvärmembraninstrument för att spruta guld och göra T- och C-linjerna.

4. Kvantitativ upptäckt

  1. Släpp 50 μL provlösning på provhålet för att observera kromatografiprocessen.
    OBS: Som ett resultat av kapilläråtgärden som drivs av den absorberande dynan migrerar provlösningen till andra änden av remsan. När provlösningen når konjugatdynan reagerar SSD (antigen) i provet med AuNPs-mAb förinstallerad på dynan. När lösningen migrerar och når T-linjen kan AuNPs-mAb utan SSD selektivt fångas av SSD-BSA (antigenbärarproteinkonjugat), som visas som en röd färg på T-linjen. Sedan migrerar lösningen till C-linjen, där AuNPs-mAb fångas av get antimus IgG i regionen, vilket visas som en röd färg på C-linjen.
  2. Analysera remsorna med en bärbar stripläsare. Maskinen kan ge förhållandet mellan provningsledningen och styrledningen (T/C).
  3. Utvärdera ICS-testets specificitet, känslighet, repeterbarhet och stabilitet.
    OBS: Under kvalitativ detektering indikerar en röd linje ett positivt resultat (kontrolllinje). Två röda linjer indikerar ett negativt resultat (test- och kontrolllinjer). Om kontrolllinjen inte finns anses testet ogiltigt.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Karakterisering av kolloidalt guld
De förberedda kolloidal guldlösningarna var claret röda. TEM-analyser användes för att bestämma aunps morfologi och form (figur 2A-D). Figur 2A och figur 2B visar att partiklarna är polyhedrala i form och jämnt fördelade. AuNPs genomsnittliga diameter konstaterades vara cirka 14 nm (figur 2C). En högupplöst TEM-bild (HRTEM) av AuNPs visas i figur 2D och figur 2E. HRTEM-bilden som är tagen från en enskild AuNP visar ett kontinuerligt fransmönster med ett avstånd på 0,117 nm. UV-vis absorptionstopparna för de fem kolloidala guldlösningarna var 518 nm, 521 nm, 524 nm, 534 nm och 540 nm, vilket visade att partikelstorleken ökade något med minskande natriumcitrat (Figur 2F).

Figure 2
Figur 2 Karakterisering av kolloidalt guld. (A) TEM-bild av AuNPs (100 000× förstoring). B)TEM-bild av AuNPs (500 000× förstoring). c)Storleken på aunp-läkare. Som ses i TEM-bilden varierade aunps diametrar från 10 nm till 18 nm, med en genomsnittlig diameter på cirka 14 nm. (D, E) Högupplöst TEM-bild (HRTEM) av AuNPs. HRTEM-bilden som är tagen från en enskild AuNP visar ett kontinuerligt fransmönster med ett avstånd på 0,117 nm. (F) UV-vis absorptionsspektra av olika AuNPs som sträcker sig från 10 nm till 18 nm. Denna siffra har ändrats från Zhang et al., 201821. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.

Utvärdering av mätstickorna
ICS känslighet
För att fastställa känsligheten hos ICS användes immunokromatografiska remsor för att upptäcka en mängd olika koncentrationer av SSD (150 000, 60 000, 12 000, 2400, 480 och 96 ng/mL) standardprover(figur 3A). Dubbeldestillerat vatten användes som kontroll. I det kvantitativa experimentet skannades remsorna av en JY1502GS bärbar ICS-läsare(figur 3B-C). Den linjära regressionsekvationen var y = −0,113ln(x) + 1,5451, med en korrelationskoefficient (R2) på 0,983 (Figur 3D). Den uppvisade god linjäritet vid 96 ng/ml till 150 μg/ml. IC50-värdet var 10,39 μg/ml. I det kvantitativa experimentet föreslogs den optimala testtiden vara 10 min.

Figure 3
Figur 3 Karakterisering av immunassay i sidled för SSD. A)Fotografier av resultat för standardlösningar som innehåller olika koncentrationer av SSD som analyseras med hjälp av ICS. B)Fotografi av den matchade kolloidala guldskanningen. (C) Intensitetsmönstren för de test- och kontrolllinjer som skannats av det kvantitativa instrumentet för kolloidalt guld. (D) Standardkurva för icELISA för SSD-bestämning med hjälp av ICS. Regressionsekvationen är y = −0,113ln(x) + 1,5451, med en korrelationskoefficient (R2)på 0,983. Denna siffra har ändrats från Zhang et al., 201821. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.

ICS-specifika
ICS specificitet testades genom att utvärdera korsreaktiviteten med SSD-liknande föreningar. Tabell 1 visar ICS kors reaktivitet med SSD-relaterade föreningar. Det kan tydligt ses att ICS endast hade låg kors reaktivitet med SSa och inte hade någon korsreaktion med andra föreningar, inklusive SSc, SSb1 eller SSb2 (Tabell 1), vilket indikerar att den beredda ICS har hög specificitet.

Prover a (på alla) ICS bicELISA (på icELISA)
(%) (%)
Ssd 100 100
Ssa 4.30% 4.97%
SSb1 (SSb1) <0,09 <0,09
SSb2 (SSb2) <0,09 <0,09
Ssc <0,09 <0,09

Tabell 1. Kors reaktivitet hos föreningar mätt med ICS och icELISA.  Ics särdrag utvärderades av ICSaoch icELISAb. Denna tabell har ändrats från Zhang et al., 201821.

Återvinningsgrad
Som visas i tabell 2var den genomsnittliga återvinningsgraden 102,05% (medelvärde ± SD, n = 3). På grundval av dess noggrannhet och konsekvens var denna analys tillräckligt tillförlitlig för bestämning av SSD i biologiska prover.

SSd-koncentration SSd-koncentration som fastställts av testsystemet (ng/ml) Återhämtning (%)
(ng/ml)
100 135.72 ± 61.97 135.72 ± 61.97
1000 926.59 ± 114.24 92.66 ± 11.42
10000 11128.16 ± 745.75 111.28 ± 14.12

Tabell 2. Återställningshastighet för SSD.   Data är det genomsnittliga ± SD från tre exemplar vid varje spikad koncentration av SSD. Återvinningsprocenten beräknades på följande sätt: återvinning (%) = uppmätt belopp/belopp × 100 %. Denna tabell har ändrats från Zhang et al., 201821.

Stabilitetsanalys av ICS-analysen
För att utvärdera ICS stabilitet testades testremsorna som lagrats i 8 och 16 veckor och jämfördes med de nyberedda remsorna. Tabell 3 visar att resultaten av de lagrade och nytillrivna remsorna för de negativa och positiva proverna i stort sett var oförändrade, vilket tyder på att ICS kan lagras vid rumstemperatur i minst flera månader och att det är lämpligt för storskalig marknadsföring och tillämpning.

RSD %
SSd (ng/ml) 1 dagom dagen 4 veckorb 8 veckorc
125 2.41 3.11 3.51
250 2.52 4 3.52
500 2.44 3 5.2
1000 3.12 2.71 4.5

Tabell 3. Variationer bland ICS som används för analys av SSD.   aVärdena anger varianskoefficienter för tre exemplar på 3 olika remsor som används 1 dag efter tillverkningen. b Värdena anger varianskoefficienter för tre exemplar på 3 olika remsor som använts efter att ha lagrats i 4 veckor. c (på) Värdena anger varianskoefficienter för tre exemplar på 3 olika remsor som använts efter att ha lagrats i 8 veckor. Denna tabell har ändrats från Zhang et al., 201821.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

I detta arbete presenterar vi ett protokoll för beredning av mAbs mot naturliga produktbaserade små molekyler. De väsentliga stegen och de frågor som behöver uppmärksammas i förfarandet har beskrivits, och vi har visat nyttan av detta protokoll med hjälp av den lilla molekylen SSD som exempel. Exempel på spektra, TEM-bilder, kvantitativa resultat och metodologiska undersökningar visas i representativa data. Därför har vi visat att den kolloidala guldproduktionen, AuNP-mAb konjugation och remsmonteringsstrategi som presenteras här resulterar i skapandet av en ny immunoassay som kan användas för att snabbt upptäcka målmolekylen.

Immunokromatografiska remsor är lätta att använda, och reaktionen är mycket snabb. Endast 50 μL prov behövs och detektion är klar inom 5 minuter. Elisa-metoden, som också är en immunoassay, kräver däremot flera timmar, inklusive flera tvättar och långa inkubationer. Flera tvättar och långa inkubationsperioder kan effektivt ta bort provmatrisens ospecificerade reaktion för att förbättra signal-till-brusförhållandet och känsligheten genom att öka signalvärdet. Detta innebär att anti-interferens förmåga och optimering teknik av tomographic papper är de viktigaste problemen som ska lösas i denna studie. Tekniska optimeringar kan uppnås på flera sätt. Välj lämpliga material för provplattan och konjugatplattan. Provplattans längd ökades på lämpligt sätt för att effektivt förbättra provets förbehandlingsförmåga. Hög pH, hög jonisk styrka och hög buffringskapacitet hos materialförbehandling kan användas för att undvika att påverka faktorer som antigenantikroppssvaret på pH-värdet för det biologiska provet. Eftersom den villkorliga inställningen av "tre hög" kan störa bindningen av antikroppar, bör den övervägas omfattande.

Dessutom är det också viktigt att notera att en monoklonal antikropp (mAb) är sonden på remsan. Därför är denna procedur associerad med mAb: s känslighet. MAb vi ansökte om har beretts i vårt tidigare arbete17, och mAb-produktion kan refereras i vår tidigare publikation19.

Kolloidalt guldbaserade immunokromatografiska remsor används ofta remsor eftersom de är billiga och erbjuder bekväm upptäckt. Denna metod har dock sina egna begränsningar och stabilitetsproblem. Signalstyrkan hos AuNPs är lägre än för fluorescerande färgämnen, kolloidalt kol och andra markörer, vilket innebär att känsligheten är begränsad. När aunp:erna utsätts för luft ändras de från vinrött till lila, vilket kommer att orsaka en förändring i det grå värdet och påverka den kvantitativa detektionen. Därför har olika modifierade immunokromatografiska remsor dykt upp, och vi förberedde också kvantprickmärkta fluoresceranderemsor 22 och IgY-baserade immunokromatografiskaremsor 23, som har liknande procedurer för produktion.

Membranbaserade immunoassays har använts i stor utsträckning i kliniska indikatorer, infektionssjukdomar, bekämpningsmedelsrester och övervakning av läkemedelskoncentration. I detta protokoll fokuserade vi på beredning av en AuNP-baserad metod för naturliga produkter med små molekyler. Detta förfarande fungerar som en mall för utveckling av olika mål immunoassays som effektivt kan användas som analysverktyg för utvärdering och kvalitetskontroll av naturliga produkter.

Detta arbete ger ett detaljerat protokoll för utveckling av lateral-flow immunoassays baserat på immunkromatografiska remsor för användning i snabb, känslig och kvantitativ detektion av små molekyler. Detta förfarande omfattar beredning av kolloidalt guld, syntes av AuNP-mAb konjugat, montering av remsan och metodologiska undersökning.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna har inget att avslöja.

Acknowledgments

Detta arbete stöddes av de särskilda fonderna för grundforskningsfonder vid institutioner för högre lärande som är anslutna till centrala avdelningar. Vi uppskattar stödet från Classical Prescription Basic Research Team vid Beijing University of Chinese Medicine.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Chloroauric acid solution (HAuCl4) Tianjin Fu Chen Chemical Reagents Factory JY-SJ102
bovine serum albumin AMRESCO 332
centrifuge tube 15 mL Corning 430645
centrifuge tube 50 mL Corning 430828
ELISA plates, 96 well NUNC 655101
Filter paper Sinopharm H5072
Glass fibre membranes Jieyi XQ-Y6
goat-anti-mouse IgG antibody applygen C1308
Nitrocellulose membranes Millipore millipore 180
ovalbumin Beijing BIODEE 5008-25g
PEG20000 Sigma Aldrich RNBC6325
Pipette 10mL COSTAR 4488
Pipette 25mL FALCON 357525
semi-rigid PVC sheets Jieyi JY-C104
Sodium citrate Beijing Chemical Works C1034
sodium periodate Sinopharm Chemical BW-G0008
Sulfo-GMBS Perbio Science Germany 22324
TipOne Tips 1,000 µL Starlab S1111-2021
Tris-HCl Solarbio 77-86-1
TWEEN 20 Solarbio 9005-64-5

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Huang, X., et al. Membrane-based lateral flow immunochromatographic strip with nanoparticles as reporters for detection: A review. Biosensors and Bioelectronics. 75, 166-180 (2016).
  2. Chang, H. -F., Wang, J. -Q., Wang, B., Deng, A. -P. An immune chromatographic assay for rapid and simultaneous detection of levonorgestrel and methylprednisolone in water samples. Chinese Chemical Letters. 24 (10), 937-940 (2013).
  3. Lai, J. J., Stayton, P. S. Improving lateral-flow immunoassay (LFIA) diagnostics via biomarker enrichment for mHealth. Methods in Molecular Biology. 1256, 71-84 (2015).
  4. Zhang, M. Z., et al. Development of a colloidal gold-based lateral-flow immunoassay for the rapid simultaneous detection of clenbuterol and ractopamine in swine urine. Analytical & Bioanalytical Chemistry. 395 (8), 2591-2599 (2009).
  5. Kranthi, K. R., et al. Development of a colloidal-gold based lateral-flow immunoassay kit for 'quality-control' assessment of pyrethroid and endosulfan formulations in a novel single strip format. Crop Protection. 28 (5), 428-434 (2009).
  6. Qian, K., et al. Development and evaluation of an immunochromatographic strip for rapid detection of capsid protein antigen p27 of avian leukosis virus. Journal of Virological Methods. (221), 115-118 (2015).
  7. Lateral flow immunoassay devices for testing saliva and other liquid samples and methods of use of same. US Patent. Guo, H., et al. , US20040184954A1 (2003).
  8. Miočević, O., et al. Quantitative Lateral Flow Assays for Salivary Biomarker Assessment: A Review. Frontiers in Public Health. 5, 1-13 (2017).
  9. Lisa, M., et al. Gold nanoparticles based dipstick immunoassay for the rapid detection of dichlorodiphenyltrichloroethane: an organochlorine pesticide. Biosensors and Bioelectronics. 25 (1), 224-227 (2009).
  10. Zhang, Z., et al. Monoclonal Antibody-Europium Conjugate-Based Lateral Flow Time-Resolved Fluoroimmunoassay for Quantitative Determination of T-2 Toxin in Cereals and Feed. Analytical Methods. 7 (6), 2822-2829 (2015).
  11. Shen, H., et al. Facile synthesis of high-quality CuInZnxS2+x core/shell nanocrystals and their application for detection of C-reactive protein. Journal of Materials Chemistry. 22 (35), 18623-18630 (2012).
  12. Xiang, T., et al. A novel double antibody sandwich-lateral flow immunoassay for the rapid and simple detection of hepatitis C virus. International Journal of Molecular Medicine. 30 (5), 1041-1047 (2012).
  13. Yang, Q., et al. Quantum dot-based immunochromatography test strip for rapid, quantitative and sensitive detection of alpha fetoprotein. Biosensors & Bioelectronics. 30 (1), 145 (2011).
  14. Song, L. W., et al. Rapid fluorescent lateral-flow immunoassay for hepatitis B virus genotyping. Analytical Chemistry. 87, 5173-5180 (2015).
  15. Zhang, Y., et al. Quantum dot-based lateral-flow immunoassay for rapid detection of rhein using specific egg yolk antibodies. Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology. 1, (2017).
  16. Qu, H., et al. Rapid Lateral-Flow Immunoassay for the Quantum Dot-based Detection of GsRerarin. Biosensors and Bioelectronics. 81, 358-362 (2016).
  17. Li, Z., et al. Development and Clinical Application of a Rapid IgM-IgG Combined Antibody Test for SARS-CoV-2 Infection Diagnosis. Journal of Medical Virology. 92 (9), (2020).
  18. Xiaomei, L., Jing, W., Ya, Z. The clinical application value analysis of the 2019-coronary virus disease was analyzed by the whole blood Sars-COV 2 specific antibody detection. Natural Science Edition. 42, (2020).
  19. Zhang, Y., et al. Generation of Monoclonal Antibodies Against Natural Products. Journal of Visualized Experiments. , e57116 (2019).
  20. Sai, J., et al. Development of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay and Immunoaffinity Column Chromatography for Saikosaponin d Using an Anti-Saikosaponin d Monoclonal Antibody. Planta Medica. 82, 432-439 (2016).
  21. Yue, Z., et al. A Highly Sensitive Immunochromatographic Strip Test for Rapid and Quantitative Detection of Saikosaponin d. Molecules. 23 (2), 338 (2018).
  22. Qu, H., et al. Rapid Lateral-Flow Immunoassay for the Quantum Dot-based Detection of Puerarin. Biosensors and Bioelectronics. 81, 358-362 (2016).
  23. Zhang, Y., et al. Quantum dot-based lateral-flow immunoassay for rapid detection of rhein using specific egg yolk antibodies. Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology. 1, (2017).

Tags

Biokemi utgåva 177 immunassay i sidled kolloidalt guld monoklonal antikropp artificiellt antigen liten molekylär förening remsa
Utveckling av en immunokromatografisk remsa för lateralt flöde för snabb och kvantitativ detektion av små molekylföreningar
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Zhang, Y., Cao, P., Lu, F., Cheng,More

Zhang, Y., Cao, P., Lu, F., Cheng, J., Qu, H. Development of a Lateral Flow Immunochromatographic Strip for Rapid and Quantitative Detection of Small Molecule Compounds. J. Vis. Exp. (177), e62754, doi:10.3791/62754 (2021).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter