Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

Drosophila melanogaster פרוטוקול הזרקת זחלים

Published: October 19, 2021 doi: 10.3791/63144
Automatic Translation
1, 1, 1
1Infection and Innate Immunity Laboratory, Department of Biological Sciences, Institute for Biomedical Sciences, The George Washington University

Summary

זבובים בוגרים של Drosophila melanogaster נוצלו בהרחבה כאורגניזמים מודל כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים שבבסיס התגובות החיסוניות המולדות של המארחים ואסטרטגיות זיהום מיקרוביאליות. כדי לקדם את שלב הזחלים D. melanogaster כמערכת מודל נוספת או חלופית, מתוארת טכניקת הזרקת זחלים.

Abstract

השימוש במודלים לא קונבנציונליים לחקר חסינות מולדת וארסיות פתוגן מספק חלופה בעלת ערך למודלים של יונקים, אשר יכול להיות יקר ולהעלות סוגיות אתיות. דגמים לא קונבנציונליים הם זולים לשמצה, קלים לטיפול ותרבות, ואינם תופסים הרבה מקום. הם נוחים גנטית ובעלי רצפי גנום שלמים, והשימוש בהם אינו מציג שיקולים אתיים. זבוב הפירות Drosophila melanogaster, למשל, סיפק תובנות נהדרות על מגוון רחב של התנהגות, התפתחות, חילוף חומרים, ומחקר חסינות. ליתר דיוק, D. melanogaster זבובים בוגרים וזחלים להחזיק כמה תגובות הגנה מולדות המשותפות עם בעלי חוליות. המנגנונים המסדירים את התגובות החיסוניות נחשפו בעיקר באמצעות מחקרים גנטיים ומולקולריים במודל D. melanogaster . כאן מסופקת טכניקת הזרקת זחלים חדשנית, אשר תקדם עוד יותר חקירות של תהליכים חיסוניים מולדים בזחלי D. melanogaster ולחקור את הפתוגנזה של מגוון רחב של זיהומים מיקרוביאליים.

Introduction

Drosophila melanogaster כבר מנוצל מאוד במחקר ביולוגי וביו-רפואי במשך כמה עשורים, כמו המערך המתוחכם של כלים גנטיים ומולקולריים התפתחו בהתמדה לניתוח של מגוון רחב של מחקרים1,2,3,4. ההיבטים השמורים אבולוציונית של התפתחות, הומאוסטזיס וחסינות מולדת ב- D. melanogaster הפכו אותו לאורגניזם מודל בעל ערך לחקר מחלות אנושיות וחרקים שונות5,6. ראוי לציין, את התפקיד הבסיסי של מודל D. melanogaster לחקר חסינות כבר בא לידי ביטוי במידה רבה במחקרים זבובים למבוגרים. עם זאת, D. melanogaster זחלים מחקרים תרמו גם לידע הנוכחי בעיקר חקר תגובות חיסוניות הסלולר, במיוחד עבור צרעות וזיהומים נמטודות המתרחשים דרך קוטיקל חרק7,8,9,10. זחלי Drosophila melanogaster מחזיקים בשלושה סוגים שונים של תאי דם, הנקראים ביחד המוציטים: פלסמטוציטים, תאי קריסטל ולאמלוציטים11,12,13. תאים אלה יכולים להרכיב מערך של תגובות חיסוניות כאשר זחלי D. melanogaster נגועים בפתוגנים כגון חיידקים, פטריות, וירוסים וטפילים14,15,16. התגובות החיסוניות התאיות כוללות בליעה ישירה (פאגוציטוזיס) של מולקולות קטנות או חיידקים, מלניזציה, אנקפסולציה של פתוגנים גדולים יותר כגון ביצי טפילים, וייצור של מינים חמצן תגובתי (ROS) וסינתיסייזרים תחמוצת החנקן (NOS)17,18,19.

לעומת זאת, פחות מחקרים פורסמו על השימוש במודל הזחל D. melanogaster כדי לנתח תגובות חיסוניות הומוריסטיות. זה בעיקר בשל היישום של בדיקות האכלה לזיהום אוראלי של זחלי D. melanogaster ומספר אתגרים הקשורים זחלים microinjecting כולל טיפול מדויק של זחלים ושימוש נכון של microneedle, במיוחד במהלך חדירה20,21. לפיכך, הידע המוגבל של זיהום זחלים וקשיים טכניים (כלומר, תמותה גבוהה) הפכו לעתים קרובות את מודל הזחל D. melanogaster קשה לשימוש. למודל זחל יהיה פוטנציאל לזהות מנגנונים מולקולריים חדשניים שיספקו תובנות נוספות על אינטראקציות מארח-פתוגן ועל אינדוקציה של תגובות חיסוניות מולדות מארח ספציפיות נגד זיהומים פתוגניים.

כאן פרוטוקול פשוט ויעיל שניתן להשתמש בו כדי להזריק D. melanogaster זחלים עם פתוגנים שונים, כגון חיידקים, מתואר בפירוט. בפרט, D. זחלי מלנוגאסטר משמשים לזריקות עם הפתוגן האנושי Photorhabdus asymbiotica והחיידקים הלא פתוגניים Escherichia coli. שיטה זו יכולה לשמש למניפולציה וניתוח של התגובות החיסוניות של D. melanogaster לזיהומים מיקרוביאליים שונים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. גידול זבובים

הערה: מחזור החיים של D. melanogaster מחולק לארבעה שלבים: עובר, זחל, גולם ומבוגר. זמן הייצור עם תנאי גידול אופטימליים במעבדה (כ -25 °C (~ 25 °C (,60% לחות, ומזון מספיק) הוא כ 10 ימים מביצית מופרית למבוגר מעוקל. הנקבות מניחות ~ 100 עוברים ליום, ועובר נמשך כ 24 שעות ביממה. הזחלים עוברים שלושה שלבים התפתחותיים (instars; L1-L3) בתוך ~ 4 ימים (L1 ו- L2: 24 שעות, ו- L3: 48 שעות). זחלי האינסטאר הראשונים מתחילים להיזון מיד על פני המדיום. זחלי אינסטאר שניים מתחפרים לתוך המדיום, בעוד זחלי אינסטאר שלישי לעזוב את המדיום ולשוטט במעלה קירות הבקבוקון, מחפש מקום pupariate עבור 24-48 שעות. קו D. melanogaster המשמש עבור פרוטוקול זה הוא אורגון R (FBsn0000276).

  1. הוסיפו מזון יבש המכיל תזונה מבוססת קמח תירס לבקבוקון פוליסטירן צר (25 מ"מ על 95 מ"מ) לנפח של 1/5 עד 2/5. לאחר מכן להוסיף 9 מ"ל של מים ולאפשר בקבוקון לשבת במשך 1 דקה עד הדיאטה הוא hydrated לחלוטין.
  2. מוסיפים כ -10 גרגירים של שמרי אופה יבשים לבקבוקון ומניחים תערובת של לפחות 20 זבובים בוגרים זכרים ונקבות שזה עתה הופיעו.
  3. דגירה הבקבוקון ב 25 °C (50 °F) על אור 12:12 שעות ביממה: מחזור פוטופריודי כהה.
  4. כדי להבטיח את התקדמות מחזור החיים, בדוק את בקבוקוני הזבוב מדי יום ורשום את שלבי ההתפתחות הראשוניים.

2. בחירת זחלים לזיהום

  1. בחרו זחלים עם מברשת צבע עדינה (שיער הגמלים הוא הטוב ביותר) ברגע שהם מגיעים לשלב האינסטאר השלישי הנודד ביום שבו יבוצע הזיהום (איור 1).
  2. לשטוף את הזחלים שנבחרו עם הפתרון של רינגר (100 mM NaCl, 1.8 מ"מ KCl, 2 מ"מ CaCl2, 1 מ"מ MgCl2, 5 מ"מ HEPES pH 6.9) בצלחת פטרי קטנה (60 מ"מ x 15 מ"מ) עם הסרה מהבקבוקון המקורי שלהם23.
  3. מניחים את הזחלים על נייר סינון (קוטר 150 מ"מ) שנרטב מעט עם כ-5 מ"ל של תמיסת רינגר בצלחת פטרי (100 מ"מ x 15 מ"מ) (איור 2A).
  4. הוסיפו כ-1 מ"ל של התמיסה של רינגר מדי יום לנייר הסינון לפי הצורך כדי למנוע יובש והתייבשות זחלים.

3. הכנה חיידקית

  1. תרבות P. חיידקי אסימביוטיקה על לוריא ברטאני (LB) אגר מדיה ב 28 °C (60 °F) עבור 48 שעות.
  2. השתמש בארון ברמת בטיחות ביולוגית 2 כדי להעביר מושבה אחת של P. asymbiotica כדי לחסן תרבית נוזלית ב 10 מ"ל של מדיה LB.
  3. דגירה על תרבית נוזלית P. אסימביוטיקה בן לילה ב 28 °C (50 °F) בשייקר סיבובי להגדיר 220 סל"ד.
  4. תרבות E. coli חיידקים באופן דומה, אבל לבצע את הצמיחה הראשונית על אגר מדיה ודגרה תרבות נוזלית ב 37 °C (50 °F) לילה.
  5. צנטריפוגה כל תרבית חיידקים לילה במשך 3 דקות ב 13,000 x g ו 4 °C (60 °F).
  6. להשליך את supernatant ולשטוף את כדורי חיידקים וכתוצאה מכך שלוש פעמים עם 10 מ"ל של PBS סטרילי.
  7. צנטריפוגה הכדורים שוב במשך 3 דקות ב 13,000 x g ו 4 °C (60 °F).
  8. לדלל כל גלולה עם PBS סטרילי כדי להתאים את ריכוזי החיידקים לצפיפות האופטית (600 ננומטר) של 0.25 עבור P. אסימביוטיקה ו 0.015 עבור E. coli, אשר תואמים 100-300 מושבה להרכיב יחידות לכל זחל של כל הכנה חיידקית, באמצעות ספקטרופוטומטר.

4. הכנת מזרק

  1. הכן נימים באמצעות צינורות נימי זכוכית בגודל 3.5 אינץ' ומושך מיקרופיפט. הגדר את המכשיר כדלקמן: חום: 580; משיכה: 143; מהירות: 25; עיכוב: 1; לחץ: 500.
  2. השתמשו במלקחיים בינוניים משוננים ישרים כדי לפתוח את נימי הזכוכית במידה שתאפשר את אספקת הטיפולים הניסיוניים תוך גרימת נזק מינימלי לזחלים (איור 2B). כדי לייעל הליך זה תוך כדי תרגול זריקות, השתמש בפתרון Trypan Blue (לדלל את המניה 0.4% עם PBS ל 0.2%) כדי לעקוב בקלות אחר דליפה בעת הזרקה ואת ההישרדות של הזחלים הכחולים.
  3. מלא את הנימים בשמן מינרלי באמצעות מזרק פלסטיק, חד פעמי 20 מ"ל עם מחט hypodermic (22 גרם, 25 מ"מ אורך).
  4. הגדירו את מזרק הננו-ליטר ופלטו את השמן מהנימיל (איור 2C).
  5. מלא את הנימים עם ההכנה החיידקית הרצויה להזרקה. קח את הפתרון מטיפה (~ 20 μL) כי הוא ממוקם על parafilm. בפרוטוקול זה, 50.2 nL של שתי מניות חיידקים הוזרקו.

5. הזרקת זחלים

  1. מרדים D. melanogaster זחלים באמצעות פחמן דו חמצני במשך ~ 2 דקות לפני ההליך.
  2. מעבירים בעדינות את הזחלים המרדים לנייר סינון שנרטב בתמיסה של רינגר כהכנה להזרקה תחת סטריאומיקרוסקופ. הזחלים יהיו רדומים או פסיביים בשלב זה.
  3. כדי להזריק זחלים, הפעילו לחץ איתן על הצד הגבי של הקצה האחורי (הצריחיות של קנה הנשימה ניכרות בקצה האחורי לעומת חלקי פה שחורים בקצה הקדמי) באמצעות מלקחיים (איור 2D).
  4. הכנס את המחט אופקית לכיוון הקצה האחורי של הזחלים, ליד הציפורן. זריקה מוצלחת לא תגרום לדליפה של התמיסה המוזרקת מהזחלים (איור 3).
  5. הסר את המלקחיים ששימשו להפעלת לחץ על זנב הזחלים לפני משיכת המחט. אם לא הוסר תחילה, המלקחיים יכולים להכריח המולימפה ו/או את המעי לצאת מהזחלים מאתר הפצע.
  6. להדביק את המספר המתאים של זחלים עבור המחקר המבוצע. בפרוטוקול המסוים הזה, 20 זחלים לכל מצב ניסיוני הוזרקו.
  7. באמצעות מלקחיים, מעבירים בעדינות את הזחלים המוזרקים לנייר סינון לח נפרד בצלחת פטרי (10 זחלים למנה) או בקבוקון מזון (בהתאם למטרת הניסוי) כדי לאפשר התאוששות.
  8. מניחים את מנות פטרי או בקבוקוני מזון באינקובטור ב 25 °C (50 °F). אם הזחלים נשמרים בצלחת פטרי, הוסיפו את הפתרון של רינגר לפי הצורך כדי למנוע ייבוש.

6. רישום הישרדות/תמותה

  1. רשום את מספר הזחלים המתים והחיים של ד. מלנוגסטר על פי נקודות הזמן הניסיוניות שנקבעו. זחלים חיים ימשיכו להתפתח לגולם ולמבוגרים.
  2. השתמש בתוכניות סטטיסטיות, כגון פריזמה, כדי להזין את נתוני ההישרדות /התמותה הגולמיים, לנתח אותם באמצעות מבחן דרגת היומן (Mantel-Cox) ולייצג את התוצאות במספרים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

כאשר מבוצעים כראוי, זריקות של D. melanogaster זחלים להראות אפקט ספציפי חיידק. נתוני ההישרדות נאספו במספר נקודות זמן בעקבות זיהומים של P. asymbiotica (זן ATCC43943), E. coli (זן K12) ו- PBS (איור 4). בעוד D. melanogaster זחלים רגישים P. א-סימביוטיקה, אשר פוגע הישרדות במהירות, זחלים מוזרק עם E. coli או פקדי PBS להפגין הישרדות ממושכת24,25,26. במיוחד, בהשוואה לזחלים נגועים P. א-סימביוטיקה, אשר מציגים שיעור הישרדות של 57% 24 שעות לאחר הזרקה, זחלים מוזרקים עם E. coli להראות שיעור הישרדות 85% באותה נקודת זמן.

Figure 1
איור 1: בחירת זחלי דרוסופילה מלנוגסטר להזרקה. מחזור החיים של Drosophila melanogaster, מן הפריית הביציות לחיים הבוגרים, לוקח בערך 10 ימים. במהלך צמיחת הזחלים, זחלים להאכיל עד מוכן גור ולשנות למבוגרים. לצורך ניסויי הזרקה, נבחרים זחלי אינסטאר שלישיים, העוזבים את המדיום התרבותי ומשוטטים על קירות הבקבוקון. לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 2
איור 2: תיאור של הליך הזרקת זחלים של דרוסופילה מלנוגאסטר . (א) נבחרים זחלי אינסטאר שלישיים נודדים, נשטפים בתמיסה של רינגר ומונחים על נייר סינון בצלחת פטרי כהכנה להזרקה. (ב) באמצעות מלקחיים, נימי הזכוכית שבורים כדי לאפשר את אספקת הטיפולים הניסיוניים. (ג) מזרק הננו-ליטר הניתן לתכנות מוגדר כהכנה להזרקה תחת סטריאומיקרוסקופ. (D) כדי להזריק זחלים, מופעל לחץ על הצד הגבי של זנב הזחלים באמצעות מלקחיים. לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 3
איור 3: איור של העברת תאי חיידקים לזחלי דרוסופילה מלנוגסטר באמצעות מיקרו-חדירה. הצד הגבי של הקצה האחורי מיוצב באמצעות מלקחיים. לאחר מכן, הנימים מוכנסים אופקית לכיוון הקצה האחורי של הזחלים, ליד הציפורן. לאחר הזריקה, המלקחיים מוסרים לפני משיכת הנימים בזהירות כדי למנוע דליפת המוליפה מאתר הפצע. לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 4
איור 4: הישרדותם של זחלי דרוסופילה מלנוגסטר בעקבות הזרקת חיידקים פתוגניים ולא פתוגניים. אורגון R זחלים של D. melanogaster הוזרקו עם 50.2 nL של פוטוגרבדוס אסימביוטיקה (ATCC43943), Escherichia coli (K12), או PBS. בעוד פקדי PBS ו- E. coli לא הראו משמעות ביחסי ההישרדות, זריקות P. אסימביוטיקה נפגעו הישרדות זבוב במהירות. כל עקומת הישרדות מורכבת ממדידות משלושה ניסויים עצמאיים, שכל אחד מהם כולל 20 זחלים (*** p < 0.001). לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Drosophila melanogaster הוא בין המודלים החשובים ביותר, מניפולציה ניסיונית המשמשים לחקירות של חסינות מולדת ופתוגנזה של זיהומים מיקרוביאליים שונים. הסיבה לכך היא מחזור החיים הפשוט והמהיר שלה, תחזוקה פשוטה במעבדה, גנטיקה אבולוציונית מבוססת היטב וארגז כלים גנטי מגוון. שיטות קודמות של D. melanogaster זחלים זריקות, כגון באמצעות מכשיר מיקרופלואידי היברידי או micromanipulator Narishige, דורשים ציוד מיוחד מאוד והוא יכול להיות יקר 21,27. בפרוטוקול הנוכחי, כדי להרחיב את השימוש D. melanogaster, טכניקת הזרקה פשוטה המייצגת שיטה יעילה ומהירה כדי לספק חיידקים לתוך hemocoel של D. melanogaster זחלים מתואר. החלק המהותי של הטכניקה המתוארת כאן הוא הזרקה בפועל של הפתוגן הרצוי או חומרים נוזליים אחרים באמצעות מיקרו-מגנט. בנוסף לתיאור פעולה חיונית זו, אנו מתארים גם שיטות אביזר כגון גידול חיידקים פולחן וטיפול בחומרים.

היתרון העיקרי של שיטה זו הוא כי המחט מוחזקת בערך במקביל לזחל, ואת האחיזה נעשית עם מעט מאוד לחץ על הזחל, ובכך להפחית את האפשרות של דליפת המולימפה, פגיעה קטלנית, או משלוח לקוי של החומר הרצוי. המחט מוכנסת לאחר מכן לכיוון הקצה האחורי של הזחל כדי להשלים את הזריקה. הדרך המדויקת של החזקת הזחל, אופן החדרת המחט, המהירות שבה מוזרק החומר הרצוי, וכיוון הנסיגה של המחט הם כל העניינים שניתן לשפר בצורה הטובה ביותר על ידי תרגול. הצעד המאתגר ביותר להתגבר עליו הוא הוצאת המחט מהזחל ללא כל דליפה של איברים חיוניים. עם זאת, עם דיוק וניסיון, הקושי נתקל במהלך שלב זה הופך פחות.

טכניקה זו היא גם כלי מצוין ביישומים מרובים להצגת מגוון רחב של חומרים באופן אחיד שניתן לחזור עליו מספר פעמים, ובכך לאפשר תוצאות עקביות. התמותה המהירה שנצפתה בזחלים נגועים ב- P. asymbiotica משקפת את היכולת הגבוהה של זן חיידקי זה לחרקים24,25,26. P. אסימביוטיקה מתועד היטב להבעת גנים virulence במהלך זיהום המגבירים את הישרדות החיידקים ואת הפתוגניות נגד פונדקאי חרקים על ידי עיכוב נדידת המוציטים ו phagocytosis24,25. כמו כן צפוי, זחלים עמידים זריקות עם זני חיידקים שאינם פתוגניים של E. coli, כמו גם זריקות עם PBS, ובכך לאשר תוצאות קודמות בתחום מחקר זה26. לפיכך, microinjection מושגת ללא כל השפעה שלילית על הכדאיות של בעלי חיים, ומאפשר את השימוש בו במחקרים מולקולריים ואימונולוגיים לחקור את הפתוגנזה של מגוון רחב של זיהומים מיקרוביאליים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים מצהירים שאין אינטרסים מתחרים.

Acknowledgments

אנו מודים לחברי המחלקה למדעי הביולוגיה באוניברסיטת ג'ורג' וושינגטון (GWU) על הקריאה הביקורתית של כתב היד. GT נתמכה באמצעות מלגת קיץ של הרלן מ- GWU. כל הדמויות הגרפיות נעשו באמצעות BioRender.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Fly Food B (Bloomington Recipe) LabExpress 7001-NV Food B, in narrow vials, 100 vials/tray
100 x 15, Mono Petri Dishes Fully Stackable VWR 25384-342 Diameter 100 x 15 mm
60 x 15, Mono Petri dishes Fully Stackable VWR 25384-092 Diameter 60 x 15 mm
Glass capillaries VWR 53440-186
Grade 1 qualitative filter paper standard grade, circle VWR 28450-150 Diameter 150 mm
Lab culture Class II Type A2 Biosafety Safety Cabinet ESCO LA2-4A2-E
LB Agar Fisher Scientific BP1425-500 LB agar miller powder 500 g
LB Broth Fisher Scientific BP1426-500 LB broth miller powder 500 g
Mineral oil Alfa Aesar, Thermo Fisher Scientific 31911-A1
NanoDrop 2000/2000c Spectrophotometer Thermo Fisher Scientific ND-2000C
Nanoject III Programmable Nanoliter Injector Drummond 3-000-207
Narrow Drosophila Vials, Polystyrene Genesee Scientific 32-109
Needles, hypodermic VWR 89219-316 22 G, 25 mm
Next Generation Micropipette Puller World Precision Instruments SU-P1000
PBS VWR 97062-732 Buffer PBS tablets biotech grade 200tab
Prism GraphPad Version 8
Syringes - plastic, disposable VWR 76124-652 20 mL
Trypan Blue Sigma-Aldrich T8154

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Takehana, A., et al. Overexpression of a pattern-recognition receptor, peptidoglycan-recognition protein-LE, activates imd/relish-mediated antibacterial defense and the prophenoloxidase cascade in Drosophila larvae. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (21), 13705-13710 (2002).
  2. Senger, K., Harris, K., Levine, M. GATA factors participate in tissue-specific immune responses in Drosophila larvae. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (43), 15957-15962 (2006).
  3. Kenmoku, H., Hori, A., Kuraishi, T., Kurata, S. A novel mode of induction of the humoral innate immune response in Drosophila larvae. Disease Models & Mech.anisms. 10, 271-281 (2017).
  4. Kenney, E., Hawdon, J. M., O'Halloran, D., Eleftherianos, I. Heterorhabditis bacteriophora excreted-secreted products enable infection by Photorhabdus luminescens through suppression of the Imd pathway. Frontiers in Immunology. 10, 2372 (2019).
  5. Cherry, S., Silverman, N. Host-pathogen interactions in Drosophila: New tricks from an old friend. Nature Immunology. 7 (9), 911-917 (2006).
  6. Younes, S., Al-Sulaiti, A., Nasser, E., Najjar, H., Kamareddine, L. Drosophila as a model organism in host-pathogen interaction studies. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 10, 214 (2020).
  7. Kenney, E., Hawdon, J. M., O'Halloran, D. M., Eleftherianos, I. Secreted virulence factors from Heterorhabditis bacteriophora highlight its utility as a model parasite among Clade V nematodes. International Journal for Parasitology. 51 (5), 321-325 (2021).
  8. Castillo, J. C., Reynolds, S. E., Eleftherianos, I. Insect immune responses to nematode parasites. Trends in Parasitology. 27 (12), 537-547 (2011).
  9. Leitão, A. B., Bian, X., Day, J. P., Pitton, S., Demir, E., Jiggins, F. M. Independent effects on cellular and humoral immune responses underlie genotype-by-genotype interactions between Drosophila and parasitoids. PLoS Pathogens. 15 (10), 1008084 (2019).
  10. Ramroop, J. R., Heavner, M. E., Razzak, Z. H., Govind, S. A. Parasitoid wasp of Drosophila employs preemptive and reactive strategies to deplete its host's blood cells. PLoS Pathogens. 17 (5), 1009615 (2021).
  11. Vlisidou, I., Wood, W. Drosophila blood cells and their role in immune responses. The FEBS Journal. 282 (8), 1368-1382 (2015).
  12. Harnish, J. M., Link, N., Yamamoto, S. Drosophila as a model for infectious diseases. International Journal of Molecular Sciences. 22 (5), 2724 (2017).
  13. Lemaitre, B., Hoffmann, J. The host defense of Drosophila melanogaster. Annual Reviews of Immunology. 25, 697-743 (2007).
  14. Garriga, A., Mastore, M., Morton, A., Pino, F. G., Brivio, M. F. Immune response of Drosophila suzukii larvae to infection with the nematobacterial complex Steinernema carpocapsae-Xenorhabdus nematophila. Insects. 11 (4), 210 (2020).
  15. Trienens, M., Kraaijeveld, K., Wertheim, B. Defensive repertoire of Drosophila larvae in response to toxic fungi. Molecular Ecology. 26 (19), 5043-5057 (2017).
  16. Tafesh-Edwards, G., Eleftherianos, I. Drosophila immunity against natural and nonnatural viral pathogens. Virology. 540, 165-171 (2020).
  17. Gold, K. S., Brückner, K. Macrophages and cellular immunity in Drosophila melanogaster. Seminars in Immunology. 27 (6), 357-368 (2015).
  18. Dudzic, J. P., Kondo, S., Ueda, R., Bergman, C. M., Lemaitre, B. Drosophila innate immunity: regional and functional specialization of prophenoloxidases. BMC Biology. 13, 81 (2015).
  19. Honti, V., Csordás, G., Kurucz, É, Márkus, R., Andó, I. The cell-mediated immunity of Drosophilamelanogaster: hemocyte lineages, immune compartments, microanatomy and regulation. Developmental and Comparative Immunology. 42 (1), 47-56 (2014).
  20. Siva-Jothy, J. A., Prakash, A., Vasanthakrishnan, R. B., Monteith, K. M., Vale, P. F. Oral bacterial infection and shedding in Drosophila melanogaster. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (135), e57676 (2021).
  21. Zabihihesari, A., Hilliker, A. J., Rezai, P. Localized microinjection of intact Drosophila melanogaster larva to investigate the effect of serotonin on heart rate. Lab on a Chip. 20 (2), 343-355 (2020).
  22. Flatt, T. Life-history evolution and the genetics of fitness components in Drosophila melanogaster. Genetics. 214 (1), 3-48 (2020).
  23. Ciche, T. A., Sternberg, P. W. Postembryonic RNAi in Heterorhabditis bacteriophora: a nematode insect parasite and host for insect pathogenic symbionts. BMC Developmental Biology. 7, 101 (2007).
  24. Joyce, S. A., Watson, R. J., Clarke, D. J. The regulation of pathogenicity and mutualism in Photorhabdus. Current Opinion in Microbiology. 9 (2), 127-132 (2006).
  25. Yang, G., Waterfield, N. R. The role of TcdB and TccC subunits in secretion of the Photorhabdus Tcd toxin complex. PLoS Pathogens. 9 (10), 1003644 (2013).
  26. Shokal, U., et al. Effects of co-occurring Wolbachia and Spiroplasma endosymbionts on the Drosophila immune response against insect pathogenic and non-pathogenic bacteria. BMC Microbiology. 16, 16 (2016).
  27. Tomoyasu, Y., Denell, R. E. Larval RNAi in Tribolium (Coleoptera) for analyzing adult development. Development Genes and Evolution. 214 (11), 575-578 (2004).

Tags

אימונולוגיה וזיהום גיליון 176 Drosophila melanogaster חסינות מולדת זיהום מיקרו-הזרקה אינטראקציות מארח-פתוגן מודל בעלי חיים
<em>Drosophila melanogaster</em> פרוטוקול הזרקת זחלים
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Tafesh-Edwards, G., Kenney, E.,… More

Tafesh-Edwards, G., Kenney, E., Eleftherianos, I. Drosophila melanogaster Larva Injection Protocol. J. Vis. Exp. (176), e63144, doi:10.3791/63144 (2021).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter