Summary
Allogen hud transplantation är en standardmodell till T-analysen värdcellen svar på MHC-disparata givare antigener. Denna video-artikeln ger en visuell handledning för varje steg involverade i att utföra en BALB/c--> C57BL / 6 hudtransplantation.
Abstract
Som en av de hårdaste och minst tekniskt utmanande modeller är hud transplantation en standardmetod till T-analysen värdcellen svar på MHC-olika givare antigener. Syftet med denna video-artikel är att ge betraktaren med en steg-för-steg visuell demonstration av hud transplantation med musen modellen. Protokollet är uppdelat i fem delar: 1) skörd givare huden, 2) förbereda mottagaren för transplantation, 3) hudtransplantation, 4) bandage borttagning och övervakning avstötning, 5) tips. När skickliga, bör förfarandet själv ta <10 min att utföra.
Protocol
Före inledandet av experiment:
- Skaffa IACUC godkännande
- Sterilisera kirurgiska instrument och Q-tips
I. Harvest Donor Tissue
- Euthanize givare mus (i enlighet med institutionens SOP)
- Vått hår tillbaka från basen på örat med alkohol
- Harvest givare huden genom att skära örat av vid basen
- Placera vävnad i platta på is
- Split öra: nypa ventrala och dorsala sidor av vävnaden vid basen av örat med rått-tanden tång, dra försiktigt isär vävnaden, flyta rygg vävnad, inre yta ner i PBS på is, släng kollagen ventrala flik
II. Förbered Mottagare för transplantation
- Bedöva mus med godkända proceduren
- Administrera smärtstillande för postoperativa smärtlindring (dvs. 0,05-0,1 mg / g Bupernex IP)
- Placera musen i lateral position
- Utför tå nypa för att se djuret är tillräckligt sövd
- Blöt håret med alkohol och rakar bröstkorgen
- Torka området rent med alkohol kompress
III. Hudtransplantation
- Gör ~ 1 cm snitt: tält huden med råtta-tand pincett och skär ~ 0,25-0,5 cm under tång
- Ta bort donator hud från PBS, placera ovanpå transplantat sängen (med insidan av örat huden mot graft säng), och ta bort överflödigt PBS med sterila tops
- Trimma försiktigt bort överflödigt donatorn huden så att transplantera ligger blankt i transplantat säng (se till att transplantat kanterna inte är böjda under och att transplantat inte baksmälla på mottagarens bål hud)
- Wrap mottagaren i sterilt förband (med den icke-vidhäftande kompress segmentet placeras över hudtransplantation)
- Se till att bandaget inte sitter för hårt (bedöma djurets andning) och att armarna är fritt rörliga
- Säkra bandaget med en 2-0 siden sutur
- Placera djur i ren bur (under uppvärmning lampan förrän djuret har tillräckligt återhämtat sig från narkos)
- Övervaka mottagaren 1-2/day efter tecken på stress och administrera smärtstillande som behövs för smärtlindring
IV. Bandage borttagning (6-7 dagar efter transplantationen)
- Bedöva mus med godkända proceduren
- Klipp ut och ta bort silke sutur
- Använda trubbiga änden sax, försiktigt skära genom bandage (se till att inte störa graft) och ta försiktigt bort
- Återgå musen för att rengöra buren
- Kontrollera graft ~ 8 timmar efter bandage bort efter tecken på krustor eller kontraktion. Om det finns kan transplantat har misslyckats med att vascularize och bör betraktas som ett tekniskt fel.
- Övervaka dagligen för tecken på avstötning (vanligtvis definierat som ~ 80% nekros av givare vävnad)
- Allogen hud transplantationer vanligtvis avvisa mellan D8-12 postoperativa
V. Nyttiga tips
- Skörd givare vävnad nära basen på örat kommer att: 1) maximera transplantat storlek, och 2) ger en ojämn ventrala överhäng som kommer att underlätta delning
- Använd alltid en ny rakblad för rakning mottagare
- Om smärtstillande ska ges ip, administrera före transplantationen för att minimera postoperativa hantering (minimera risken för att störa transplantat)
- Om möjligt, ta bort handskarna innan bandaget. Handskar tenderar att hålla bandaget och komplicera tillämpningen
- Placera en enda sutur vid bandaget slutet minimerar förtida borttagande
- Vira bandaget så hårt tillåtet och bedöma andas innan du placerar sutur. Om bandaget är för hårt, kommer djuret slutar andas. Om bandaget är för lös, kommer djur ta bort det.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Såsom visats i denna video-artikeln är hudtransplantation modell en snabb och enkel metod för att övervaka allogen T-cell svar. Allogen hud transplantation har ett brett användningsområde och har utnyttjats till analys effektiviteten i en mängd olika immunsuppressiva medel och tolerans protokoll induktion, samt att undersöka de biologiska effekterna av olika blockering antikroppar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
NIH immunologi utbildningsstipendium T32 AI 60.573 (KRG) och NIH ge GM 41.514 (MDC)
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Micro-dissecting forceps (curved) | Sigma-Aldrich | F4142 | |
| Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight) | Fine Science Tools | 11053-10 | n=2 |
| Strabismus scissors (blunt end) | Fine Science Tools | 14074-11 | |
| Iris forceps (curved) | Fine Science Tools | 11065-07 | |
| Spring scissors (angled) | Fine Science Tools | 15006-09 | |
| Halsey micro needle holder | Fine Science Tools | 12500-12 | |
| 10 cm plates | Corning | 430167 | |
| PBS | Cellgro | 21-040-CV | |
| Bupernex (Buprenorphine hydrochloride) | Reckitt Benckiser | 517201 | |
| Insulin syringes (29 Ga) | Monoject | 8881 600145 | |
| Q-tips | Solon Manufacturing Company | 362 | |
| Single edge razor blades (#9) | Smith & Nephew Inc. | 67-0238 | |
| Silk suture (2-0; PS-2) | Ethicon Inc. | 583H |
