Summary
Allogeneic त्वचा प्रत्यारोपण परख मेजबान टी सेल प्रतिक्रिया MHC-असमान दाता प्रतिजनों के लिए एक मानक मॉडल है. इस वीडियो लेख प्रत्येक एक BALB/c--> / 6 C57BL त्वचा प्रत्यारोपण प्रदर्शन में शामिल कदम के एक दृश्य ट्यूटोरियल प्रदान करता है.
Abstract
एक सबसे कड़े और कम से कम तकनीकी चुनौतीपूर्ण मॉडल के रूप में, त्वचा प्रत्यारोपण परख मेजबान टी सेल प्रतिक्रिया MHC-असमान दाता प्रतिजनों के लिए एक मानक पद्धति है. इस वीडियो लेख का उद्देश्य के लिए एक कदम दर कदम त्वचा प्रत्यारोपण के दृश्य प्रदर्शन माउस मॉडल का उपयोग के साथ दर्शक प्रदान करना है. , 2) प्रत्यारोपण के लिए प्राप्तकर्ता की तैयारी; 3) त्वचा प्रत्यारोपण; 4) पट्टी हटाने और निगरानी भ्रष्टाचार अस्वीकृति, 5) सहायक संकेत 1) हॉरवेसटिंग दाता त्वचा: प्रोटोकॉल 5 मुख्य घटकों में विभाजित है. एक बार कुशल, प्रक्रिया ही <10 मिनट के लिए प्रदर्शन लेना चाहिए.
Protocol
प्रयोग की दीक्षा से पहले:
- IACUC अनुमोदन प्राप्त करना
- सर्जिकल उपकरणों और क्यू युक्तियाँ जीवाणुरहित
मैं हार्वेस्ट दाता ऊतक
- दाता माउस euthanize (संस्था शराबी के साथ अनुसार)
- शराब के साथ कान के आधार से गीले बालों को पीछे
- फसल काटने वाले दाता त्वचा के आधार पर बंद कान काटने से
- बर्फ पर प्लेट में रखें ऊतक
- भाजित कान: चुटकी चूहे दांत संदंश के साथ कान के आधार पर उदर और पृष्ठीय ऊतक के पक्ष; धीरे अलग ऊतक पुल, नाव पृष्ठीय ऊतक, आंतरिक सतह के नीचे, Pbs में बर्फ पर, collagenous वेंट्रल प्रालंब त्यागें
द्वितीय. प्रत्यारोपण के लिए प्राप्तकर्ता की तैयारी
- Anesthetize माउस को मंजूरी दी प्रक्रिया का उपयोग
- बाद सेशन दर्द से राहत (यानी 0.05-0.1 मिलीग्राम / छ Bupernex आईपी) के लिए एनाल्जेसिक प्रशासन
- पार्श्व स्थिति में रखें माउस
- पैर के अंगूठे चुटकी प्रदर्शन सुनिश्चित जानवर पर्याप्त बेहोश है
- शराब के साथ गीले बाल और दाढ़ी छाती
- शराब झाड़ू के साथ स्वच्छ क्षेत्र पोछो
III. त्वचा प्रत्यारोपण
- चूहे दांत संदंश के साथ तम्बू त्वचा और संदंश नीचे ~ 0.25-0.5 सेमी में कटौती: ~ 1 सेमी चीरा बनाओ
- पीबीएस से दाता की त्वचा, भ्रष्टाचार बिस्तर के ऊपर जगह (भ्रष्टाचार बिस्तर का सामना करना पड़ रहा कान त्वचा की आंतरिक सतह के साथ) निकालें, और बाँझ क्यू की नोक के साथ अतिरिक्त पीबीएस हटायें
- ध्यान से दूर अतिरिक्त दाता त्वचा ट्रिम ताकि प्रत्यारोपण भ्रष्टाचार बिस्तर के भीतर साफ झूठ (यकीन है कि भ्रष्टाचार के किनारों के तहत नहीं कर्ल करवाने और कर रहे हैं कि भ्रष्टाचार प्राप्तकर्ता ट्रंक त्वचा पर हैंगओवर नहीं करता)
- बाँझ पट्टी में लपेटें प्राप्तकर्ता (गैर चिपकने वाला धुंध त्वचा भ्रष्टाचार पर रखा खंड के साथ)
- सुनिश्चित करें कि पट्टी भी तंग नहीं है (पशु साँस लेने का आकलन) और कहा कि हथियारों की स्वतंत्र रूप से मोबाइल हैं
- एक एकल 2-0 रेशम सीवन के साथ सुरक्षित पट्टी
- स्वच्छ पिंजरे में प्लेस जानवर (जानवर जब तक हीटिंग दीपक के तहत पर्याप्त संज्ञाहरण से बरामद किया गया है)
- मॉनिटर प्राप्तकर्ता 1-2/day संकट के संकेत के लिए प्रशासन और एनाल्जेसिक के रूप में दर्द से राहत के लिए आवश्यक
चतुर्थ. पट्टी निकालना (6-7 दिन के बाद प्रत्यारोपण)
- Anesthetize माउस को मंजूरी दी प्रक्रिया का उपयोग
- काटें और रेशम सीवन हटायें
- कुंद अंत कैंची, ध्यान से पट्टी (भ्रष्टाचार को बाधित नहीं करने के लिए सुनिश्चित बनाने) के माध्यम से कटौती का उपयोग करना और धीरे हटायें
- साफ पिंजरे के लिए माउस लौटें
- Scabbing या संकुचन के संकेत के लिए पट्टी हटाने के बाद भ्रष्टाचार ~ 8 बजे की जाँच करें. यदि वर्तमान, भ्रष्टाचार के लिए vascularize में विफल हो सकता है और एक तकनीकी विफलता माना जाना चाहिए.
- अस्वीकृति का संकेत (आमतौर पर ~ 80% परिगलन दाता ऊतक के के रूप में परिभाषित) के लिए दैनिक मॉनिटर
- Allogeneic त्वचा प्रत्यारोपण के बाद सेशन d8-12 के बीच आमतौर पर अस्वीकार कर देंगे
वी. सहायक संकेत
- दाता ऊतक कान के आधार पर फसल काटने वाले करीब होगा: 1) भ्रष्टाचार के आकार को अधिकतम करने के लिए, और 2) एक असमान उदर की अधिकता है कि बंटवारे की सुविधा होगी प्रदान
- हमेशा प्राप्तकर्ता शेविंग के लिए एक नई धार का उपयोग करें
- यदि एनाल्जेसिक आईपी दिया जाना है, पूर्व प्रशासन के लिए प्रक्रिया प्रत्यारोपण के बाद सेशन से निपटने के कम से कम (भ्रष्टाचार में खलल न डालें का मौका कम से कम)
- यदि संभव हो तो, पट्टी लागू करने से पहले दस्ताने हटा दें. दस्ताने पट्टी छड़ी और आवेदन जटिल होते हैं
- पट्टी के अंत में एक ही सिवनी रखकर समय से पहले हटाने कम से कम होगा
- लपेटें पट्टी के रूप में तंग रूप में अनुमति दी है और सिवनी रखने से पहले साँस लेने का आकलन. यदि पट्टी भी तंग है, पशु श्वास बंद हो जाएगा. यदि पट्टी भी ढीला है, पशु इसे हटा देगा.
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Discussion
जैसा कि इस वीडियो लेख में प्रदर्शन, त्वचा प्रत्यारोपण मॉडल allogeneic टी सेल प्रतिक्रिया की निगरानी के लिए एक त्वरित और आसान तरीका है. Allogeneic त्वचा प्रत्यारोपण के आवेदनों की एक विस्तृत श्रृंखला है और परख करने के लिए immunosuppressive एजेंटों और सहिष्णुता प्रेरण प्रोटोकॉल, के रूप में अच्छी तरह से जांच करने के लिए विभिन्न अवरुद्ध एंटीबॉडी का जैविक प्रभाव की एक किस्म की दक्षता का उपयोग किया गया है.
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Acknowledgments
NIH इम्यूनोलॉजी प्रशिक्षण अनुदान T32 60573 एअर इंडिया (KRG) और NIH अनुदान जीएम 41,514 (एमडीसी)
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Micro-dissecting forceps (curved) | Sigma-Aldrich | F4142 | |
| Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight) | Fine Science Tools | 11053-10 | n=2 |
| Strabismus scissors (blunt end) | Fine Science Tools | 14074-11 | |
| Iris forceps (curved) | Fine Science Tools | 11065-07 | |
| Spring scissors (angled) | Fine Science Tools | 15006-09 | |
| Halsey micro needle holder | Fine Science Tools | 12500-12 | |
| 10 cm plates | Corning | 430167 | |
| PBS | Cellgro | 21-040-CV | |
| Bupernex (Buprenorphine hydrochloride) | Reckitt Benckiser | 517201 | |
| Insulin syringes (29 Ga) | Monoject | 8881 600145 | |
| Q-tips | Solon Manufacturing Company | 362 | |
| Single edge razor blades (#9) | Smith & Nephew Inc. | 67-0238 | |
| Silk suture (2-0; PS-2) | Ethicon Inc. | 583H |
