Summary
वर्तमान प्रोटोकॉल चूहों में सबक्लेवियन नस से रक्त एकत्र करने के लिए एक सरल और कुशल विधि का वर्णन करता है। यह संज्ञाहरण के बिना तेजी से, समय पर और आसानी से पहचाने जाने योग्य नमूनाकरण को सक्षम बनाता है और दोहराए जाने वाले नमूना संग्रह के माध्यम से उच्च गुणवत्ता वाला रक्त प्राप्त करता है।
Abstract
चूहों का व्यापक रूप से फार्माकोकाइनेटिक्स (पीके) और टॉक्सिकोकाइनेटिक (टीके) अध्ययनों में उपयोग किया जाता है जिन्हें दवा जोखिम का पता लगाने के लिए विशिष्ट समय बिंदुओं पर एक निश्चित मात्रा में रक्त एकत्र करने की आवश्यकता होती है। चूहे के रक्त नमूना विधि प्लाज्मा की गुणवत्ता निर्धारित करती है और आगे परीक्षण के परिणामों की सटीकता को प्रभावित करती है। इस प्रोटोकॉल में वर्णित सबक्लेवियन नस रक्त संग्रह विधि पीके और टीके परीक्षणों की जरूरतों को पूरा करने के लिए जानवरों की सचेत स्थिति में बार-बार रक्त के नमूने एकत्र करती है। संयम हैंडलिंग के कौशल और सुई चीरा की उचित प्रक्रिया रक्त संग्रह की सफलता दर सुनिश्चित करती है। प्लाज्मा की गुणवत्ता सुनिश्चित करते हुए और साथ ही पशु कल्याण के लिए खानपान करते हुए इसे संचालित करना आसान है। हालांकि, इस विधि के लिए कुशल ऑपरेशन की आवश्यकता होती है, और एक अनुचित जानवरों की कमजोरी, दर्द, लंगड़ापन और यहां तक कि मृत्यु दर का कारण बन सकता है। वर्तमान विधि का उपयोग टीके के साथ स्प्राग डॉवले (एसडी) चूहों में 4 सप्ताह के मौखिक विषाक्तता अध्ययन के लिए परीक्षण सुविधा में किया गया है। 24 घंटे के भीतर एकत्र किए गए रक्त की अधिकतम मात्रा जानवर के कुल रक्त के 20% से अधिक नहीं थी। जानवरों के शरीर का वजन पुरुषों और महिलाओं के लिए 200 ग्राम से अधिक था। डेटा से पता चला है कि जानवरों के शरीर का वजन हर हफ्ते लगातार बढ़ता है, और दोहराए जाने वाले नमूना संग्रह के बाद नैदानिक अवलोकन सामान्य था।
Introduction
मानव उपयोग के लिए फार्मास्यूटिकल्स के पंजीकरण के लिए तकनीकी आवश्यकताओं के सामंजस्य पर अंतर्राष्ट्रीय सम्मेलन (आईसीएच) दिशानिर्देश1 और राष्ट्रीय चिकित्सा उत्पाद प्रशासन (एनएमपीए) दिशानिर्देश2 के अनुसार, टॉक्सिकोकाइनेटिक (टीके) अध्ययन में चूहों के रक्त संग्रह समय बिंदुओं की संख्या को गतिशील दवा जोखिम मूल्यांकन की आवश्यकताओं को पूरा करने की आवश्यकता है। एक चूहे के रक्त की अनुमानित कुल मात्रा शरीर के वजन का 55-70 एमएल /किलोग्राम है। खुराक के बाद संग्रह समय बिंदु आम तौर पर 30 मिनट के भीतर गहन होते हैं और उसके बाद कम हो जाते हैं, औरनियमित परीक्षण में 48 घंटे के भीतर दस से अधिक रक्त के नमूने एकत्र करने की आवश्यकता होती है। उदाहरण के लिए, मौखिक रूप से प्रशासित दवाओं के टीके अध्ययन में रक्त के नमूने 12-समय बिंदुओं (0 मिनट, 5 मिनट, 10 मिनट, 15 मिनट, 30 मिनट, 45 मिनट, 1 घंटे, 2 घंटे, 3 घंटे, 4 घंटे, 8 घंटे और 12 घंटे) पर एकत्र किए जाते हैं। शोधकर्ताओं को टीके परीक्षण 5 के लिए उच्च गुणवत्ता वाले प्लाज्मा प्राप्त करने के लिए चूहों में बार-बार 200-250 μL रक्त एकत्र करना चाहिए।
चूहों में रक्त संग्रह साइटों में पूंछ रक्त वाहिकाएं, रेट्रो-ऑर्बिटल प्लेक्सस नस, सबमैंडिबुलर नस, हृदय, पेट महाधमनी6, और इतने पर शामिल हैं। उनमें से, चूहों की पुच्छल नस से रक्त संग्रह एक अक्सर इस्तेमाल की जाने वाली विधि है, जिसके लिए अनुभवी और कुशल ऑपरेटरों की आवश्यकता होती है 7,8। रेट्रो-ऑर्बिटल प्लेक्सस नस से रक्त एकत्र करना कम जटिल है; हालांकि, इस विधि की सिफारिश नहीं की जाती है क्योंकि यह चूहों की दृष्टि को नुकसान पहुंचा सकती है9, और हृदय और पेट की महाधमनी से रक्त केवल अंतिम रक्त नमूने10 के लिए उपयुक्त है। एक सचेत चूहे में सबमैंडिबुलर नस से रक्त एकत्र करने की एक और विधि को अधिक जटिलताओं के परिणामस्वरूप दिखाया गया है और अपर्याप्त रक्त नमूने की गुणवत्ता का पता चलाहै। इसलिए, शोधकर्ता नमूनाकरण की कठिनाई को कम करने के लिए जानवर को एनेस्थेटाइज कर सकते हैं। फिर भी, संज्ञाहरण भी प्रयोग की लागत को बढ़ाता है, और अधिक गंभीरता से, यह चूहों की चयापचय स्थिति को प्रभावित करेगा। वर्तमान प्रोटोकॉल संज्ञाहरण के बिना चूहों की उप-लेवियन नसों में रक्त एकत्र करने की एक त्वरित और सीधी विधि का उपयोग करता है, जिससे सटीक स्थिति और द्विपक्षीय वैकल्पिक रक्त संग्रह को समय पर और दोहराए गए तरीके से उच्च गुणवत्ता वाले नमूने प्राप्त करने की अनुमति मिलती है।
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Protocol
वर्णित सभी पशु प्रयोगों को गुआंग्डोंग ल्यूविन फार्मास्युटिकल रिसर्च इंस्टीट्यूट कं, लिमिटेड के संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (आईएसीयूसी) द्वारा अनुमोदित किया गया था। प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए दिशानिर्देशों का पालन करते हुए चूहों कोपाला गया था।
1. जानवरों की तैयारी
नोट: इस अध्ययन में उपयोग किए गए सभी एसडी चूहे जाग रहे थे और उन्हें एनेस्थेटाइज्ड / इच्छामृत्यु नहीं दी गई थी। जानवर की पीठ पर त्वचा को पकड़कर संयम से निपटने के कौशल की आवश्यकता होती है।
- एक चूहे में गर्दन और अग्रभाग के बीच सबक्लेवियन त्रिकोणीय फोसा का सबसे निचला बिंदु ज्ञात कीजिये। सिर की ओर ~ 2-3 मिमी ले जाएं और रक्त संग्रह स्थल पर सुई बिंदु तक पहुंचें (चित्रा 1)। इलेक्ट्रिक शेवर का उपयोग करके बालों को हटा दें।
नोट: प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के आधार पर, सीरम या प्लाज्मा की आवश्यकता हो सकती है। प्लाज्मा को इस प्रोटोकॉल में एक उदाहरण के रूप में लिया जाता है, और यह रक्त संग्रह के संचालन को प्रभावित नहीं करेगा। - पोंछने और कीटाणुरहित करने के लिए 75% अल्कोहल से सना कपास के स्वैब तैयार करें और पोंछने के लिए कपास के स्वैब को सूखा लें।
2. रक्त का नमूना
नोट: कम से कम 2 लोग, जिनमें से दोनों को रक्त संग्रह और चूहे संयम तकनीकों में अनुभव किया जाना चाहिए, इन चरणों को पूरा करना चाहिए।
- चूहे के सिर, गर्दन और स्तन को सीधा रखने के लिए गर्दन के पीछे की त्वचा को एक हाथ से पकड़ें और इंजेक्शन साइट को उजागर करें (वीडियो 1)। इसके स्तर को बनाए रखने के लिए इंजेक्शन साइट के किनारे पर अग्रभाग को सीधा करें।
- सिरिंज को दूसरे हाथ से चूहे के सिर के समानांतर रखें और सिरिंज को 5°-10° की ओर झुकाएं ताकि नोक उदर दिशा की ओर झुक जाए।
- सुई को पूरी तरह से पूर्ववर्ती गुहा में डालें। ट्यूब के भीतर नकारात्मक दबाव बनाए रखने के लिए सिरिंज को वापस खींचें।
- धीरे-धीरे सुई को गहरे से उथले में ले जाएं और उसी रास्ते पर वापस जाएं। जब सिरिंज सुई में रक्त प्रवेश कर जाता है, तो सुई की स्थिति को ठीक करें (वीडियो 2)।
नोट: रक्त तब सिरिंज में एक स्थिर दर से भरा जाएगा, जैसा कि चित्रा 2 ए (फ्रंट व्यू) और चित्रा 2 बी (साइड व्यू) में दिखाया गया है। - संस्था की पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा निर्धारित मानकों के अनुसार अधिकतम रक्त की मात्रा की निगरानी करें। यह जानवर के वजन और स्वास्थ्य पर निर्भर करता है। अन्य आवश्यकताओं की अनुपस्थिति में, 24 घंटे के भीतर जानवर की कुल रक्त मात्रा के 20% से अधिक को ननिकालें, जिसके लिए ~ 3 सप्ताह के उपचार की आवश्यकता होती है।
- जब पर्याप्त रक्त का नमूना एकत्र किया जाता है, तो तुरंत सिरिंज को वापस लें और रक्त उपचार के लिए तैयार करें (चरण 3)।
- रक्तस्राव को रोकने के लिए ~ 1-2 मिनट के लिए चूहे के इंजेक्शन साइट पर दबाव डालें। चूंकि संग्रह स्थल गर्दन के निचले हिस्से में है, इसलिए उस पर दबाकर रक्तस्राव को रोकने के लिए सबक्लेवियन नस की त्वचा को चुटकी लें (चित्रा 3)।
नोट: बार-बार रक्त संग्रह की आवश्यकता होने पर द्विपक्षीय सबक्लेवियन नस से रक्त को वैकल्पिक रूप से एकत्र किया जा सकता है। - चूहे को पिंजरे में वापस करें और उसकी स्थिति का निरीक्षण करें।
3. रक्त के नमूने को संसाधित करना
- सुई को सिरिंज से निकालें और इसे तेज उपकरण कंटेनर में फेंक दें। धीरे-धीरे सिरिंज से रक्त को 1.5 एमएल ट्यूब में स्थानांतरित करें। बुलबुला संरचनाओं, यदि कोई हो, से बचने के लिए दीवार के खिलाफ सिरिंज दबाएं।
नोट: जैसा कि दबाव लाल रक्त कोशिकाओं को टूटने का कारण बन सकता है, हेमोलिसिस14 को रोकने के लिए सुई को हटा दें। - माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब को कवर करें, धीरे से इसे फ्लिक करें, और एंटीकोआगुलेंट के साथ रक्त को अच्छी तरह से मिलाने के लिए इसे कम से कम पांच बार उल्टा करें।
- प्लाज्मा एकत्र करने के बाद 120 मिनट के भीतर कमरे के तापमान पर ~ 10-15 मिनट के लिए 2000 x g पर पूरे रक्त के नमूने को सेंट्रीफ्यूज करें।
- ऊपरी प्लाज्मा को एक रिक्त माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब में स्थानांतरित करने के लिए एक पिपेट गन ( सामग्री की तालिका देखें) का उपयोग करें। निचले पूरे रक्त के साथ पिपेट सिर को न छुएं। लाल रक्त कोशिकाओं से दूषित प्लाज्मा का निपटान या पुन: सेंट्रीफ्यूज करें।
- नमूने का तुरंत उपयोग करें या उन्हें -30 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
नोट: दवा की विशेषताएं भंडारण समय निर्धारित करती हैं। सबक्लेवियन नस से प्राप्त प्लाज्मा नमूने पारभासी और हल्के पीले रंग के होते हैं। हेमोलिसिस प्लाज्मा को लाल कर सकता है।
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Representative Results
सबक्लेवियन नस से अच्छे प्लाज्मा नमूने पारभासी हल्के पीले थे (चित्रा 4, बाईं ट्यूब)। अनुचित रक्त संग्रह या हेरफेर के परिणामस्वरूप हेमोलिसिस हुआ (चित्रा 4, दाईं ट्यूब)।
परीक्षण सुविधा के आंकड़ों से पता चला है कि टीके के साथ एसडी चूहों में आंखों की गिरावट के 4 सप्ताह के मौखिक विषाक्तता अध्ययन में, रक्त के नमूने पहले (दिन 1) और अंतिम खुराक दिन (दिन 28) के बीच 9-टाइम पॉइंट (0 घंटे, 0.167 घंटे, 0.5 घंटे, 1 घंटे, 1 घंटे, 2 घंटे, 4 घंटे, 8 घंटे, 12 घंटे और 24 घंटे) पर दो बार एकत्र किए गए थे। टीकेबी, टीकेसी और टीकेडी चूहों के लिए खुराक क्रमशः 10 मिलीग्राम / किग्रा, 30 मिलीग्राम / किग्रा और 100 मिलीग्राम / किग्रा थी, और खुराक की मात्रा 10 मिलीग्राम / किग्रा थी। पहले नमूने की रक्त संग्रह मात्रा ~ 0.2 एमएल थी, जानवर की उम्र ~ 6-7 सप्ताह थी, नर जानवर का शरीर का वजन ~ 268-297 ग्राम था, और मादा का ~ 214-239 ग्राम था। अंतिम नमूने की रक्त की मात्रा ~ 0.3 एमएल थी, जानवर की उम्र ~ 10-11 सप्ताह थी, नर जानवर का शरीर का वजन ~ 376-462 ग्राम था, और मादा जानवर का ~ 254-300 ग्राम था। टीके रक्त संग्रह के दो समय के बीच 28 दिनों का अंतराल था। जानवरों के शरीर का वजन हर हफ्ते लगातार बढ़ गया, और नैदानिक अवलोकन सामान्य था। 250 ग्राम चूहे के रक्त की कुल मात्रा लगभग 16 एमएल15 है, और 24 घंटे के भीतर एकत्र किए गए रक्त की अधिकतम मात्रा जानवर के कुल रक्त के 20% से अधिक नहीं थी। मादा जानवरों के शरीर के वजन के आंकड़े तालिका 1 में दिखाए गए हैं, और नर जानवरों के शरीर के वजन को तालिका 2 में दिखाया गया है।
चित्र 1: रक्त संग्रह साइट के सुई बिंदु का चित्रण। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2: रक्त निष्कर्षण प्रक्रिया। रक्त सुचारू रूप से प्राप्त किया गया था। (ए) सामने का दृश्य। (बी) साइड व्यू। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्र 3: हेमोस्टैटिक विधि का प्रतिनिधित्व। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 4: सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद नमूना उपस्थिति। बाईं ट्यूब ने एक योग्य प्लाज्मा छवि दिखाई। दाईं ट्यूब ने एक हेमोलिसिस नमूना दिखाया। प्लाज्मा गुलाबी या लाल दिख रहा था। रंग जितना गहरा होगा, हेमोलिसिस दर उतनी ही अधिक होगी। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 5: सबक्लेवियन नस की शारीरिक रचना। यह नस क्लैविकल के नीचे स्थित है, और सुई उस तक पहुंच सकती है जो सबक्लेवियन त्रिकोणीय फोसा के माध्यम से 0.5 सेमी से अधिक नहीं होती है। यह कपाल वेना नस बनाने के लिए आंतरिक जुगुलर नस, कशेरुक नस और बाहरी जुगुलर नस को जोड़ता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
तालिका 1: मादा जानवरों का बॉडीवेट डेटा। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.
तालिका 2: नर जानवरों के बॉडीवेट डेटा। कृपया इस तालिका को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.
वीडियो 1: चूहे के रक्त नमूना प्रक्रिया का टॉप-डाउन दृश्य। कृपया इस वीडियो को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।
वीडियो 2: चूहे के रक्त नमूना प्रक्रिया का साइड व्यू। कृपया इस वीडियो को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।
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Discussion
सबक्लेवियन नसों से रक्त एकत्र करने के कुछ लाभ हैं। (1) चूंकि रक्त संग्रह की साइट आसानी से अलग हो जाती है, और चूहों की विभिन्न मुद्राओं के कारण शिरापरक जाल नियमित नहीं होता है, वर्णित विधि चूहों के स्थिर और आरामदायक आसनों को बनाए रखते हुए शिरापरक जाल की स्थिति को आसानी से स्थानीयकृत कर सकती है। (2) ऑपरेशन तकनीशियनों के कौशल के तेजी से विकास और जानवरों के लिए कम दर्द के लिए आसान और अनुकूल है। (3) जानवर को आरामदायक बनाने के लिए एक ऑपरेटिंग मोड बेचैन व्यवहार को काफी कम कर देता है और रक्त के छींटे को रोकता है। (4) यह उच्च गति (20 सेकंड), उच्च दक्षता, कम लागत और संज्ञाहरण के बिना एक रक्त खींचने की विधि है, जो पशु संज्ञाहरण के जोखिम और पशु कल्याण के संदर्भ में संयम के समय को कम करती है।
इस प्रोटोकॉल में, चूहों को संयम की प्रक्रिया में सहज रखा जाता है, लंबे समय तक स्पर्श को संभालने और उससे बचने पर मध्यम रूप से आराम किया जाता है। ढीली हैंडलिंग चूहों को जल्दी से स्थानांतरित करने की अनुमति देती है और जानवरों या लोगों को आकस्मिक चोट पहुंचा सकती है; इसके विपरीत, यह चूहों में हाइपोक्सिया का कारण बन सकता है। नमूना स्थल पर दबाते समय रक्तस्राव को रोकना आवश्यक है। ऑपरेटर अंधेरे में उन्हें चिकना करने के लिए जानवर को अपनी बाहों में पकड़ते हैं। इसके अलावा, रक्त संग्रह के दौरान नकारात्मक दबाव बहुत अधिक नहीं होना चाहिए; अन्यथा, यह खराब रक्त नमूने का कारण बन जाएगा। चूंकि पीके और टीके अध्ययनों को बार-बार रक्त संग्रह की आवश्यकता होती है, इसलिए रक्त की मात्रा को विभिन्न जानवरों के वजन और स्वास्थ्य स्थितियों के अनुसार नियंत्रित किया जाना चाहिए; इस बीच, एक वैकल्पिक रक्त संग्रह स्थल पशु कल्याण को लाभान्वित करेगा। यदि जानवर छोटे या कमजोर हैं, तो उन्हें परीक्षण द्वारा अनुमत शर्तों के तहत उचित रूप से ग्लूकोज और अन्य पूरक प्रदान किए जाते हैं। सुई इनलेट चिकनी और प्रतिरोध से मुक्त होना चाहिए, और जब एकत्र करने के लिए कोई रक्त नहीं होता है, या कोई प्रतिरोध नहीं होता है, तो सुई को थोड़ा समायोजित दिशा या परिवर्तित पक्षों में फिर से डाला जाना चाहिए। रक्त नमूना प्रक्रिया में, सम्मिलन से दो बार लिए गए रक्त को मिलाने से बचना आवश्यक है। जब पहले इंजेक्शन के लिए रक्त के नमूने की मात्रा अपर्याप्त होती है, तो दूसरे इंजेक्शन की आवश्यकता होती है, सिरिंज को प्रतिस्थापित करने की आवश्यकता होती है, और हेमोलिसिस के मामले में फिर से एकत्र किए गए रक्त के लिए प्रतिस्थापन ट्यूब लिया जाता है। एक बार में रक्त एकत्र करना समाप्त करने की सिफारिश की जाती है। सिरिंज में रक्त को दीवार से जोड़ा जाता है और प्रक्रिया के दौरान बुलबुले से बचने के लिए रक्त संग्रह ट्यूब में इंजेक्ट किया जाता है। समय पर रक्त एकत्र करने के लिए, ऑपरेटर को संग्रह से 2 मिनट पहले पूरी तरह से तैयार होना चाहिए और उससे पहले 1 मिनट इंजेक्ट करना चाहिए। जब जानवर कम सहकारी या संचालित करने के लिए चुनौतीपूर्ण होता है, तो इसे पहले से शांत किया जाना चाहिए। इसलिए, योग्य तकनीशियनों का एक समूह होना चाहिए।
ब्रैकियल प्लेक्सस सबक्लेवियन नस के लंबवत और पीछे होता है, इसलिए अनुचित ऑपरेशन से ब्रैकियल प्लेक्सस की चोट, फोरलिम्ब दर्द, लंगड़ापन, झुकाव और अन्य प्रतिकूल लक्षण हो सकतेहैं। इस तकनीक को गिनी सूअरों पर भी लागू किया जा सकता है और गिनी पिग प्रयोगों में रक्त संग्रह की जरूरतों को पूरा किया जा सकता है, लेकिन इस विधि द्वारा गिनी सूअरों से रक्त खींचने के लिए आगे के शोध की आवश्यकता है।
एक सबक्लेवियन नस की शारीरिक रचना चित्रा 5 में दिखाया गया है। सबक्लेवियन नस क्लैविकल के नीचे स्थित है, और सुई 0.5 सेमी से बड़े सबक्लेवियन त्रिकोणीय फोसा से गुजरते हुए उस तक पहुंच सकती है। इसलिए विधि जोखिम भरा है और एक योग्य पेशेवर की मांग करता है। एक अयोग्य पेशेवर के परिणामस्वरूप पशु अति सक्रियता, नियंत्रण करने में कठिनाई, खराब रक्त परिसंचरण, पशु कमजोरी, या यहां तक कि एक सीरियल रक्त संग्रह के बाद मृत्यु दर भी होगी। गलत सर्जरी छाती या धमनी को भी नुकसान पहुंचाएगी। नतीजतन, एक सफल प्रयोग प्राप्त करने के लिए एक योग्य पेशेवर को शामिल करना महत्वपूर्ण है।
अंत में, यह प्रोटोकॉल चूहों की उप-क्ष्लेवियन नस से रक्त एकत्र करने के लिए एक वैकल्पिक विधि प्रस्तुत करता है, जो पीके और टीके अध्ययनों के लिए तकनीकी सहायता प्रदान करता है।
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Disclosures
लाइमी वांग, जियानमिन गुओ, ज़ियाओमन झोंग, याली शेंग, किवेन लाई, हुई सोंग, और वेई यांग को गुआंग्डोंग ल्यूविन फार्मास्युटिकल रिसर्च इंस्टीट्यूट कं, लिमिटेड में वित्तीय हित है, जिसने हालांकि, इस काम का समर्थन नहीं किया। अन्य लेखक कोई प्रतिस्पर्धी हितों की घोषणा नहीं करते हैं।
Acknowledgments
इस शोध को गुआंग्डोंग प्रांतीय कुंजी प्रयोगशाला ऑफ ड्रग गैर-नैदानिक मूल्यांकन और अनुसंधान (संख्या 2018 बी 030323024) और गुआंग्डोंग कुंजी अनुसंधान और विकास योजना (संख्या 2019 बी 02020202001), गुआंगज़ौ मौलिक और अनुप्रयोग फाउंडेशन अनुसंधान परियोजना (संख्या 202002030249 और संख्या 202002030156) के प्रमुख कार्यक्रम "नई दवा निर्माण" द्वारा वित्त पोषित किया गया था।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1.0 mL syringe (with needle, 26 G, 0.45 mm x 15.5 mm) | Jiangxi Hongda Medical Equipment Group LTD.(Nanchang, Jiangxi Province, China) | 20210629 | |
| 75% alcohol | Shandong Lierkang Medical Technology Co., Ltd. (Dezhou, Shandong Province, China) | 210717 | |
| Animal source | Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd. | grade: SPF | laboratory animal production license number: SCXK (Hunan) 2019-0004, laboratory animal quality certificate number: 4307272101972847 |
| Cotton swab | Caoxian Hualu Sanitary Materials Co., Ltd.(Heze, Shandong Province, China) | 20210301 | Need to be sterilized. |
| Electric shaver | Shenzhen Codos Electric Appliance Co. , Ltd.(Shenzhen, Guangdong Province, China) | CP-6800 | |
| EP tube, 1.5 mL | Genetimes ExCell Technology,Inc.(Shanghai, China) | ||
| Heparin sodium (2 mL:12500 IU) | Tianjin biochem pharmaceutical Co.,Ltd(Tianjing, China) | 51200702 | Prepare 1250 IU/mL heparin sodium solution. Add heparin sodium solution into the EP tube in advance and make it evenly distributed on the wall of the EP tube, and dry it at 60°C for use. |
| Labtip (volume range 5-200 μL) | Thermo Fisher Scientific Oy | 94300120 | |
| Low speed refrigerated centrifuge | Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development Co., Ltd.(Changsha, Hunan Province, China) | L535R | |
| Pipette gun (20-200 μL) | BRAND | 12N92305 | |
| Rats (SD) | Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd. (Changsha, Hunan Province, China) | ||
| Sharp tool container | Taizhou Huangyan Yikang Plastic Factory (Taizhou, Zhejiang Province, China) | ||
| Eye drop | This reagent is not a commodity and the manufacturer requires it to be tested. In the principle of confidentiality, the manufacturer and model cannot be provided. |
References
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