Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

השתלת עור Murine

doi: 10.3791/634 Published: January 16, 2008

Summary

השתלה אלוגנאית העור הוא מודל סטנדרטי לארח assay T התגובות התא MHC-אנטיגנים שונים התורם. זה וידאו המאמר מספק הדרכה ויזואלית של כל צעד מעורב בביצוע BALB/c--> השתלת C57BL / 6 העור.

Abstract

בתור אחד המודלים המחמירים ביותר והפחות מאתגר מבחינה טכנית, השתלת עור היא שיטה רגילה לארח assay T התגובות התא MHC-אנטיגנים שונים התורם. מטרת מאמר-video זה היא לספק את הצופה עם הפגנה צעד אחר צעד ויזואלית של השתלת עור באמצעות מודל העכבר. הפרוטוקול מחולק 5 מרכיבים עיקריים: 1) התורם קצירת העור; 2) הכנת הנמען להשתלה; 3) להשתלת עור; 4) הסרת התחבושת דחיית שתל ניטור: 5) עצות מועילות. בקיאים פעם, את ההליך עצמו צריך לקחת <10 דקות לבצע.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

לפני תחילת הניסוי:

  • לקבל אישור IACUC
  • לעקר כלי ניתוח ו-Q-טיפים

I. רקמות התורם קציר

  1. להרדים עכבר התורם (בהתאם SOP של המוסד)
  2. שיער רטוב חזרה מהבסיס של האוזן עם אלכוהול
  3. התורם קציר העור על ידי חיתוך האוזן את בבסיס
  4. מניחים בצלחת רקמה על הקרח
  5. האוזן פיצול: הצדדים קמצוץ הגחון ועל הגב של רקמת בבסיס של האוזן עם עכברוש שיניים מלקחיים, משוך בעדינות בנפרד רקמות; רקמות לצוף הגב, משטח פנימי למטה, PBS על קרח; להשליך דש הגחון collagenous

השנייה. הכן מקבל עבור להשתלות

  1. עכבר הרדימי באמצעות הליך אישור
  2. ניהול כאבים להקלה על כאב לאחר הניתוח (כלומר 0.05-0.1 מ"ג / g ip Bupernex)
  3. המקום העכבר במצב לרוחב
  4. בצע קמצוץ הבוהן כדי להבטיח חיים הוא מסומם מספיק
  5. שיער רטוב עם אלכוהול לגלח החזה
  6. נגב אזור נקי עם ספוגית אלכוהול

ג. עור להשתלות

  1. ודא ~ 1 ס"מ חתך: עור אוהל עם עכברוש שיניים מלקחיים ולחתוך ~ 0.25-0.5 ס"מ מתחת מלקחיים
  2. הסרת העור תורם PBS, במקום על גבי המיטה שתל (עם המשטח הפנימי של העור אוזן מול המיטה שתל), ולהסיר PBS עם עודף סטרילי Q-קצה
  3. בזהירות לחתוך עור עודף תורם כל כך השתלת שנמצאת ביובש בתוך המיטה שתל (מוודא קצוות השתל אינם מכורבלת מתחת שתל שאינו הנגאובר על העור גזע של הנמען)
  4. גלישת הנמען תחבושת סטרילית (עם קטע שאינו דבק גזה הניח על שתל העור)
  5. ודא תחבושת כי הוא לא חזק מדי (להעריך נשימה של החיה) והזרועות, כי הם ניידים בחופשיות
  6. תחבושת Secure עם תפר 2-0 יחיד משי
  7. חיה מקום בכלוב נקי (תחת מנורת חימום עד שהחיה התאוששה מספיק מן ההרדמה)
  8. צג הנמען 1-2/day סימנים של מצוקה ולנהל משכך כאבים לפי הצורך להקלה על הכאב

IV. הסרת תחבושת (6-7 ימים לאחר ההשתלה)

  1. עכבר הרדימי באמצעות הליך אישור
  2. גזור להסיר תפר משי
  3. בעזרת מספריים סוף בוטה, לחתוך בזהירות באמצעות תחבושת (כדי לוודא שלא לשבש את השתל) בעדינות להסיר
  4. חזור העכבר לכלוב נקי
  5. בדוק ~ שתל 8 שעות לאחר הסרת התחבושת סימנים של scabbing או התכווצות. אם כיום, שתל עשוי נכשלו vascularize ואת צריכה להיחשב כשל טכני.
  6. מעקב יומי אחר סימנים של דחייה (בדרך כלל מגדירים נמק ~ 80% של רקמת התורם)
  7. השתלות עור allogeneic בדרך כלל דוחים בין D8-12 מנותחות

ו 'עצות שימושיות

  1. מסיק רקמות התורם קרוב לבסיס של האוזן יהיה: 1) למקסם את גודל השתל, ו 2) לספק הסככה הגחון אחיד שיאפשר פיצול
  2. השתמש תמיד סכין גילוח חדש גילוח הנמען
  3. אם כאבים תינתן ip, לנהל הליך לפני ההשתלה כדי לצמצם מנותחות טיפול (למזער סיכוי לשבש את השתל)
  4. במידת האפשר, להסיר את הכפפות לפני החלת את התחבושת. כפפות נוטים לתקוע את התחבושת לסבך את הבקשה
  5. הנחת תפר בודד בסוף תחבושת יהיה למזער מוקדמת הסרת
  6. לעטוף כמו תחבושת הדוקה כפי שמותר להעריך נשימה לפני הנחת תפר. אם תחבושת הדוקה מדי, בעלי חיים יפסיק לנשום. אם תחבושת רופפת מדי, בעלי חיים תסיר אותו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

כפי שמודגם במאמר-video זה, המודל השתלת עור היא שיטה מהירה וקלה לניטור allogeneic T התגובות התא. השתלה אלוגנאית העור יש מגוון רחב של יישומים נוצל עד assay את היעילות של מגוון רחב של סוכני מדכאות חיסון ואינדוקציה סובלנות פרוטוקולים, וכן כדי לחקור את ההשפעות הביולוגיות של נוגדנים חסימה שונים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

NIH אימונולוגיה הדרכה גרנט T32 AI 60,573 (KRG) ו-NIH מענק GM 41,514 (MDC)

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Micro-dissecting forceps (curved) Sigma-Aldrich F4142
Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight) Fine Science Tools 11053-10 n=2
Strabismus scissors (blunt end) Fine Science Tools 14074-11
Iris forceps (curved) Fine Science Tools 11065-07
Spring scissors (angled) Fine Science Tools 15006-09
Halsey micro needle holder Fine Science Tools 12500-12
10 cm plates Corning 430167
PBS Cellgro 21-040-CV
Bupernex (Buprenorphine hydrochloride) Reckitt Benckiser 517201
Insulin syringes (29 Ga) Monoject 8881 600145
Q-tips Solon Manufacturing Company 362
Single edge razor blades (#9) Smith & Nephew Inc. 67-0238
Silk suture (2-0; PS-2) Ethicon Inc. 583H

DOWNLOAD MATERIALS LIST

השתלת עור Murine
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Garrod, K. R., D. Cahalan, M. Murine Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (11), e634, doi:10.3791/634 (2008).More

Garrod, K. R., D. Cahalan, M. Murine Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (11), e634, doi:10.3791/634 (2008).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter