Summary
השתלה אלוגנאית העור הוא מודל סטנדרטי לארח assay T התגובות התא MHC-אנטיגנים שונים התורם. זה וידאו המאמר מספק הדרכה ויזואלית של כל צעד מעורב בביצוע BALB/c--> השתלת C57BL / 6 העור.
Abstract
בתור אחד המודלים המחמירים ביותר והפחות מאתגר מבחינה טכנית, השתלת עור היא שיטה רגילה לארח assay T התגובות התא MHC-אנטיגנים שונים התורם. מטרת מאמר-video זה היא לספק את הצופה עם הפגנה צעד אחר צעד ויזואלית של השתלת עור באמצעות מודל העכבר. הפרוטוקול מחולק 5 מרכיבים עיקריים: 1) התורם קצירת העור; 2) הכנת הנמען להשתלה; 3) להשתלת עור; 4) הסרת התחבושת דחיית שתל ניטור: 5) עצות מועילות. בקיאים פעם, את ההליך עצמו צריך לקחת <10 דקות לבצע.
Protocol
לפני תחילת הניסוי:
- לקבל אישור IACUC
- לעקר כלי ניתוח ו-Q-טיפים
I. רקמות התורם קציר
- להרדים עכבר התורם (בהתאם SOP של המוסד)
- שיער רטוב חזרה מהבסיס של האוזן עם אלכוהול
- התורם קציר העור על ידי חיתוך האוזן את בבסיס
- מניחים בצלחת רקמה על הקרח
- האוזן פיצול: הצדדים קמצוץ הגחון ועל הגב של רקמת בבסיס של האוזן עם עכברוש שיניים מלקחיים, משוך בעדינות בנפרד רקמות; רקמות לצוף הגב, משטח פנימי למטה, PBS על קרח; להשליך דש הגחון collagenous
השנייה. הכן מקבל עבור להשתלות
- עכבר הרדימי באמצעות הליך אישור
- ניהול כאבים להקלה על כאב לאחר הניתוח (כלומר 0.05-0.1 מ"ג / g ip Bupernex)
- המקום העכבר במצב לרוחב
- בצע קמצוץ הבוהן כדי להבטיח חיים הוא מסומם מספיק
- שיער רטוב עם אלכוהול לגלח החזה
- נגב אזור נקי עם ספוגית אלכוהול
ג. עור להשתלות
- ודא ~ 1 ס"מ חתך: עור אוהל עם עכברוש שיניים מלקחיים ולחתוך ~ 0.25-0.5 ס"מ מתחת מלקחיים
- הסרת העור תורם PBS, במקום על גבי המיטה שתל (עם המשטח הפנימי של העור אוזן מול המיטה שתל), ולהסיר PBS עם עודף סטרילי Q-קצה
- בזהירות לחתוך עור עודף תורם כל כך השתלת שנמצאת ביובש בתוך המיטה שתל (מוודא קצוות השתל אינם מכורבלת מתחת שתל שאינו הנגאובר על העור גזע של הנמען)
- גלישת הנמען תחבושת סטרילית (עם קטע שאינו דבק גזה הניח על שתל העור)
- ודא תחבושת כי הוא לא חזק מדי (להעריך נשימה של החיה) והזרועות, כי הם ניידים בחופשיות
- תחבושת Secure עם תפר 2-0 יחיד משי
- חיה מקום בכלוב נקי (תחת מנורת חימום עד שהחיה התאוששה מספיק מן ההרדמה)
- צג הנמען 1-2/day סימנים של מצוקה ולנהל משכך כאבים לפי הצורך להקלה על הכאב
IV. הסרת תחבושת (6-7 ימים לאחר ההשתלה)
- עכבר הרדימי באמצעות הליך אישור
- גזור להסיר תפר משי
- בעזרת מספריים סוף בוטה, לחתוך בזהירות באמצעות תחבושת (כדי לוודא שלא לשבש את השתל) בעדינות להסיר
- חזור העכבר לכלוב נקי
- בדוק ~ שתל 8 שעות לאחר הסרת התחבושת סימנים של scabbing או התכווצות. אם כיום, שתל עשוי נכשלו vascularize ואת צריכה להיחשב כשל טכני.
- מעקב יומי אחר סימנים של דחייה (בדרך כלל מגדירים נמק ~ 80% של רקמת התורם)
- השתלות עור allogeneic בדרך כלל דוחים בין D8-12 מנותחות
ו 'עצות שימושיות
- מסיק רקמות התורם קרוב לבסיס של האוזן יהיה: 1) למקסם את גודל השתל, ו 2) לספק הסככה הגחון אחיד שיאפשר פיצול
- השתמש תמיד סכין גילוח חדש גילוח הנמען
- אם כאבים תינתן ip, לנהל הליך לפני ההשתלה כדי לצמצם מנותחות טיפול (למזער סיכוי לשבש את השתל)
- במידת האפשר, להסיר את הכפפות לפני החלת את התחבושת. כפפות נוטים לתקוע את התחבושת לסבך את הבקשה
- הנחת תפר בודד בסוף תחבושת יהיה למזער מוקדמת הסרת
- לעטוף כמו תחבושת הדוקה כפי שמותר להעריך נשימה לפני הנחת תפר. אם תחבושת הדוקה מדי, בעלי חיים יפסיק לנשום. אם תחבושת רופפת מדי, בעלי חיים תסיר אותו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
כפי שמודגם במאמר-video זה, המודל השתלת עור היא שיטה מהירה וקלה לניטור allogeneic T התגובות התא. השתלה אלוגנאית העור יש מגוון רחב של יישומים נוצל עד assay את היעילות של מגוון רחב של סוכני מדכאות חיסון ואינדוקציה סובלנות פרוטוקולים, וכן כדי לחקור את ההשפעות הביולוגיות של נוגדנים חסימה שונים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
NIH אימונולוגיה הדרכה גרנט T32 AI 60,573 (KRG) ו-NIH מענק GM 41,514 (MDC)
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Micro-dissecting forceps (curved) | Sigma-Aldrich | F4142 | |
| Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight) | Fine Science Tools | 11053-10 | n=2 |
| Strabismus scissors (blunt end) | Fine Science Tools | 14074-11 | |
| Iris forceps (curved) | Fine Science Tools | 11065-07 | |
| Spring scissors (angled) | Fine Science Tools | 15006-09 | |
| Halsey micro needle holder | Fine Science Tools | 12500-12 | |
| 10 cm plates | Corning | 430167 | |
| PBS | Cellgro | 21-040-CV | |
| Bupernex (Buprenorphine hydrochloride) | Reckitt Benckiser | 517201 | |
| Insulin syringes (29 Ga) | Monoject | 8881 600145 | |
| Q-tips | Solon Manufacturing Company | 362 | |
| Single edge razor blades (#9) | Smith & Nephew Inc. | 67-0238 | |
| Silk suture (2-0; PS-2) | Ethicon Inc. | 583H |
