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Biology

マウス皮膚移植

doi: 10.3791/634 Published: January 16, 2008

Summary

同種皮膚移植は、MHC -異種ドナー抗原に対するアッセイ宿主T細胞応答の標準モデルです。このビデオ記事はBALB/c--> C57BL / 6皮膚移植を行うことに関係する各ステップの視覚的なチュートリアルが用意されています。

Abstract

最も厳しいと、少なくとも技術的に困難なモデルの一つとして、皮膚移植は、MHC -異種ドナー抗原に対するアッセイ宿主T細胞応答の標準的な方法です。このビデオ記事の目的は、マウスモデルを用いた皮膚移植のステップバイステップの視覚的なデモンストレーションで視聴者を提供することです。 2)移植のために受信者を準備する、3)皮膚移植、4)包帯の除去および監視の移植片拒絶反応、5)役立つヒント1)収穫ドナーの皮膚:プロトコルは、5つの主要なコンポーネントに分割されています。一度堪能、手順自体は、実行するために<10分を取る必要があります。

Protocol

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前の実験の開始へ:

  • IACUC承認を得る
  • 手術器具を滅菌し、Q -のヒント

I.ハーベストドナー組織

  1. (金融機関のSOPに従った)ドナーマウスを安楽死させる
  2. アルコールと耳の根元から髪をぬらす
  3. ベースで耳をカットすることによって収穫のドナーの皮膚
  4. 氷の上にプレートの組織を配置
  5. スプリットの耳:ラットの歯の鉗子との耳のベースで組織のピンチ腹側と背側の両側を持ち、ゆっくりと組織を離れて引っ張る。float型の背側組織、内部の表面の下、PBSで氷の上に、コラーゲン腹フラップを破棄

II。移植のための受信者を準備する

  1. 承認された手順を使用してマウスを麻酔
  2. 術後鎮痛のために鎮痛剤を投与する(すなわち、0.05〜0.1 mg / gのBupernexのIP)
  3. 横方向の位置に配置してマウス
  4. 動物が十分に鎮静されていることを確認するためにつま先のピンチを実行
  5. 濡れたアルコールと髪とひげをそる胸部
  6. アルコール綿棒できれいな部分を拭いてください

III。皮膚移植

  1. ラット歯鉗子でテントの皮膚と鉗子以下〜0.25〜0.5センチメートルをカット:〜1cmの切開を行う
  2. PBS、移植床の上の場所(移植片のベッドが直面している耳の皮膚の内部表面を持つ)から、ドナーの皮膚を削除し、滅菌綿棒で余分なPBSを除去
  3. その移植は、移植床(片エッジが下に丸まっていないとその移植片は、受信者のトランクの皮膚への二日酔いをしないしていることを確認して)の中できっぱりとあるので、慎重に過剰ドナーの皮膚を切り落とす
  4. 無菌包帯でラップの受信者(皮膚移植の上に置く非粘着ガーゼセグメントで)
  5. その包帯が(動物の呼吸を評価する)あまりにもタイトではないことを確認し、その腕は自由に携帯電話です。
  6. 単一の2から0絹縫合糸による安全な包帯
  7. 清潔なケージでの場所の動物(加熱ランプの下の動物まで、十分に麻酔から回復した)
  8. モニター受信者苦痛の徴候がない1-2/dayと鎮痛のために、必要に応じて鎮痛剤投与

IV。包帯除去(6-7日後に移植)

  1. 承認された手順を使用してマウスを麻酔
  2. 絹の縫合糸を切り取り、削除する
  3. 慎重に包帯(移植片を妨害しないようにして作る)を切って、ゆっくりと除去、平滑末端のはさみの使い方
  4. 清潔なケージにマウスを返す
  5. 痂皮形成や収縮の徴候のための包帯除去後に移植片〜8時間を確認してください。存在する場合、移植片は、血管が発達するために失敗した可能性があると技術的障害を考慮する必要があります。
  6. 拒絶反応の兆候を毎日監視する(通常ドナー組織の〜80%壊死として定義)
  7. 同種皮膚移植は、通常、D8 - 12術後の間に拒否されます。

V.役立つヒント

  1. 耳の付け根にドナーの組織の近くに収穫することになります:1)移植片のサイズを最大化、および2)の分割を容易にする均一な腹側オーバーハングを提供
  2. 常に受信者を剃るための新たなカミソリの刃を使用してください
  3. 鎮痛剤は、IPを与えられている場合は、(移植片を破壊する可能性を最小限に抑える)術後の処理を最小限に抑えるための手順を移植する前に管理
  4. 可能であれば、包帯を適用する前に手袋を外す。手袋は、包帯を固執し、アプリケーションを複雑にする傾向がある
  5. 包帯最後に、単一の縫合糸を配置することで早期の除去を最小限に抑えることができます
  6. タイトとして許可されているように包帯をラップし、縫合糸を配置する前に呼吸を評価する。包帯がきつすぎる場合、動物が呼吸を停止します。包帯が緩すぎる場合は、動物はそれを削除します。

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Discussion

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このビデオの記事で示すように、皮膚の移植モデルでは、同種T細胞応答を監視するための迅速かつ容易な方法です。同種皮膚移植は、アプリケーションの広い範囲を持って、アッセイするために免疫抑制剤と寛容の誘導さまざまなプロトコルの効率性を利用されている、だけでなく、様々なブロッキング抗体の生物学的効果を調査する。

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Acknowledgments

NIHの免疫学研修グラントT32 AI 60573(KRG)とNIHの助成金GM 41514(MDC)

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Micro-dissecting forceps (curved) Sigma-Aldrich F4142
Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight) Fine Science Tools 11053-10 n=2
Strabismus scissors (blunt end) Fine Science Tools 14074-11
Iris forceps (curved) Fine Science Tools 11065-07
Spring scissors (angled) Fine Science Tools 15006-09
Halsey micro needle holder Fine Science Tools 12500-12
10 cm plates Corning 430167
PBS Cellgro 21-040-CV
Bupernex (Buprenorphine hydrochloride) Reckitt Benckiser 517201
Insulin syringes (29 Ga) Monoject 8881 600145
Q-tips Solon Manufacturing Company 362
Single edge razor blades (#9) Smith & Nephew Inc. 67-0238
Silk suture (2-0; PS-2) Ethicon Inc. 583H

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Garrod, K. R., D. Cahalan, M. Murine Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (11), e634, doi:10.3791/634 (2008).More

Garrod, K. R., D. Cahalan, M. Murine Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (11), e634, doi:10.3791/634 (2008).

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