Generazione e caratterizzazione dell'infarto miocardico ventricolare destro indotto dalla legatura permanente dell'arteria coronaria destra nei topi
Summary
Ci sono diverse differenze tra i ventricoli destro e sinistro. Tuttavia, la fisiopatologia dell’infarto ventricolare destro (RVI) non è stata chiarita. Nel presente protocollo viene introdotto un metodo riproducibile per la generazione di modelli murini RVI, che può fornire un mezzo per spiegare il meccanismo di RVI.
Abstract
L’infarto ventricolare destro (RVI) è una presentazione comune nella pratica clinica. La RVI grave può portare a disfunzione emodinamica fatale e aritmia. In contrasto con il modello di infarto miocardico di topo (MI) ampiamente utilizzato generato dalla legatura dell’arteria coronaria sinistra, il modello murino RVI è raramente impiegato a causa della difficoltà associata alla generazione del modello. La ricerca sui meccanismi e il trattamento del rimodellamento e della disfunzione del camper indotto da RVI richiede modelli animali per imitare la fisiopatologia della RVI nei pazienti. Questo studio introduce una procedura fattibile per la generazione di modelli RVI in topi C57BL/ 6J. Inoltre, questo modello è stato caratterizzato sulla base di quanto segue: valutazione delle dimensioni dell’infarto a 24 ore dopo l’infarto, valutazione del rimodellamento cardiaco e della funzione con ecocardiografia, valutazione dell’emodinamica del camper e istologia della zona dell’infarto a 4 settimane dopo RVI. Inoltre, è stato eseguito un calco vascolare coronarico per osservare la disposizione arteriosa coronaria in RV. Questo modello murino di RVI faciliterebbe la ricerca sui meccanismi dell’insufficienza cardiaca destra e cercherebbe nuovi bersagli terapeutici del rimodellamento del camper.
Introduction
Il ventricolo destro (RV), a lungo pensato per essere un semplice tubo collegato all’arteria polmonare, è stato erroneamente trascurato per molti anni1. Tuttavia, recentemente c’è stato un crescente interesse per la funzione RV poiché svolge un ruolo essenziale nei disturbi emodinamici 2,3 e può servire come predittore di rischio indipendente di malattie cardiovascolari 4,5,6,7. Le malattie RV includono infarto RV (RVI), ipertensione arteriosa polmonare e malattia valvolare8. In contrasto con l’immenso interesse per l’ipertensione dell’arteria polmonare, RVI è rimasto trascurato 7,9.
La RVI, di solito accompagnata da infarto miocardico inferiore-posteriore10,11, è causata dall’occlusione dell’arteria coronaria destra (RCA). Secondo le indagini cliniche, la RVI grave probabilmente induce disturbi emodinamici e aritmie, come ipotensione, bradicardia e blocco atrioventricolare, associati a una maggiore morbilità e mortalità ospedaliera 12,13,14. La funzione RV potrebbe recuperare spontaneamente in una certa misura anche in assenza di riperfusione15,16. Esistono diverse differenze morfologiche e funzionali tra il ventricolo sinistro (LV) e RV17. Si ritiene che il camper sia più resistente all’ischemia rispetto al LV8, in parte a causa della più ampia formazione di circolazione collaterale dopo RVI. Chiarire le differenze tra infarto LV (LVI) e RVI e identificare i meccanismi sottostanti fornirebbe nuovi bersagli terapeutici per la rigenerazione cardiaca e l’insufficienza cardiaca ischemica. Tuttavia, a causa della difficoltà associata alla generazione di modelli murini RVI, la ricerca di base su RVI è principalmente limitata.
Un grande modello animale di RVI è stato generato legando RCA in suini18, che è più facile da usare a causa del RCA visibile. Rispetto al modello animale di grandi dimensioni, il modello murino presenta i seguenti vantaggi: maggiore accessibilità nella manipolazione genica, costi economici inferiori e periodo sperimentale più breve19,20. Sebbene in precedenza fosse stato riportato un modello RVI murino incentrato sull’influenza di RVI sulla funzione LV, le fasi dettagliate della procedura, le difficoltà e i punti chiave di funzionamento e le caratteristiche del modello come i cambiamenti emodinamici non sono stati completamente introdotti 9,21.
Questo articolo fornisce procedure chirurgiche dettagliate per la generazione di un modello murino di RVI. Inoltre, questo modello è stato caratterizzato da misurazione ecocardiografica, valutazione emodinamica invasiva e analisi istologica. Inoltre, è stato eseguito un calco vascolare coronarico per osservare la disposizione arteriosa coronarica in RV. La tecnica introdotta in questo documento aiuterebbe i principianti a cogliere rapidamente la generazione del modello RVI del topo con mortalità operativa accettabile e approcci di valutazione affidabili. Il modello murino di RVI aiuterebbe a ricercare i meccanismi dell’insufficienza cardiaca destra e a cercare nuovi bersagli terapeutici del rimodellamento del camper.
Protocol
Representative Results
Discussion
Sicard e colleghi francesi hanno riportato per la prima volta un modello murino di RVI nel 2019, che descriveva il processo chirurgico e si concentrava sull’interazione tra LV e RV dopo RVI9. Tuttavia, ad oggi, nessuno studio ha riportato l’utilizzo di questo modello per ulteriori studi. Una procedura più dettagliata sarebbe utile per i ricercatori per utilizzare il modello murino di RVI per l’indagine. In contrasto con il rapporto di Sicard et al.9, abbiamo fornito inform…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato supportato da sovvenzioni della National Natural Science Foundation of China (82073851 to Sun) e della National China Postdoctoral Science Foundation (2021M690074 a Lin).
Materials
| 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride | Sigma | T8877 | For TTC staining |
| Animal Mini Ventilator | Havard | Type 845 | For artificial ventilation |
| Animal ultrasound system VEVO2100 | Visual Sonic | VEVO2100 | Measurement for Doppler flow velocity and AS plaque |
| Batson’s #17 Anatomical Corrosion Kit | Polyscience Inc | 7349 | For vasculature casting |
| buprenorphine | Isoreag | 1134630-70-8 | For reduce the pain of mice after surgery |
| C57BL/6J mice + D29A1A2:D27 | Animal Center of South Medical University | – | For the generation of mouse RVI model |
| Camera | Sangnond | For taking photograph | |
| Cold light illuminator | Olympus | ILD-2 | Light for operation |
| electrocardiograph | ADI Instrument | ADAS1000 | For recording electrocardiogram |
| hair removal cream | Reckitt Benchiser | RQ/B 33 Type 2 | Remove mouse hair |
| Heat pad- thermostatic surgical system (ALC-HTP-S1) | SHANGHAI ALCOTT BIOTECH CO | ALC-HTP-S1 | Heating |
| Hematoxylin-eosin dye | Leagene | DH0003 | Hematoxylin-eosin staining |
| Heparin sodium salt | Macklin | H837056 | For heparization |
| Isoflurane | RWD life science | R510-22 | Inhalant anaesthesia |
| Lab made spatula | Work as a laryngoscope | ||
| Lab made tracheal cannula | For intubation | ||
| Matrx VIP 3000 Isofurane Vaporizer | Midmark Corporation | VIP 3000 | Anesthetization |
| Medical nylon suture (5-0) | Ningbo Medical Needle Co. | 5-0 | For chest close |
| Microsurgical elbow tweezers | RWD life science | F11021-11 | For surgery |
| Microsurgical scissors | NAPOX | MB-54-1 | For arteriotomy |
| Millar Catheter | AD Instruments, Shanghai | 1.0F | Measurement of pressure gradient |
| MS400D ultrasonic probe | Visual Sonic | MS400D | Measurement for Doppler flow velocity and AS plaque |
| needle forceps | Visual Sonic | F31006-12 | For surgery |
| nitroglycerin | BEIJING YIMIN MEDICINE Co | For dilating coronary artery | |
| Ophthalmic scissors | RWD life science | S11022-14 | For surgery |
| Pentobarbital sodium salt | Merck | 25MG | Anesthetization |
| PowerLab Multi-Directional Physiological Recording System | AD Instruments, Shanghai | 4/35 | Pressure recording |
| Precision electronic balance | Denver Instrument | TB-114 | Weighing scale |
| Silk suture (8-0) | Ningbo Medical Needle Co. | 6-0 | coronary artery ligation |
| Small animal microsurgery equipment | Napox | MA-65 | Surgical instruments |
| tissue forceps | Visual Sonic | F-12007-10 | For surgery |
| tissue scissor | Visual Sonic | S13052-12 | Open chest for hemodynamic measurement |
| Transmission Gel | Guang Gong pai | 250ML | preparation for Echocardiography measurement |
| Vascular Clamps | Visual Sonic | R31005-06 | For blocking blood from aorta |
References
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