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Biology

माउस ऊतक के रैपिड जीनोटाइपिंग सिग्मा निकालें - एन Amp ऊतक पीसीआर किट का उपयोग

doi: 10.3791/636 Published: January 22, 2008

Summary

एक माउस पूंछ नमूना की पूरी जीनोटाइपिंग, ऊतक पाचन और पीसीआर readout सहित एक और एक आधे घंटे सिग्मा SYBR ग्रीन निकालें-N-amp ऊतक पीसीआर किट का उपयोग कर में किया जाता है.

Abstract

पीसीआर और एक electrophoretic जेल पर प्रवर्धन और पता लगाने के माध्यम से डीएनए के जीनोमिक पता लगाने के एक मानक तरीका है कि एक ऊतक का नमूना के जीनोटाइप निर्धारित किया जाता है है. पीसीआर तैयार डीएनए के लिए ऊतकों की परम्परागत तैयारी अक्सर दिन के लिए कई घंटे लग, ऊतक नमूने पर निर्भर करता है. नमूना इस प्रकार के जीनोटाइप कई दिनों के लिए विलंबित किया जा सकता है है, जो प्रयोगों के कई अलग अलग प्रकार के लिए एक विकल्प नहीं है. यहाँ हम एक माउस पूंछ नमूना की पूरी जीनोटाइपिंग का प्रदर्शन ऊतक पाचन और पीसीआर readout एक में, और एक आधे घंटे का उपयोग सिग्मा SYBR निकालें-N-amp ऊतक पीसीआर किट ग्रीन सहित. सबसे पहले, हम ऊतक नमूने से डीएनए के निष्कर्षण पंद्रह मिनट प्रदर्शित करता है. फिर, हम नमूने के पीसीआर प्रवर्धन, जो एक सकारात्मक नमूने के पहचान के लिए अनुमति देता है के रूप में यह परिलक्षित किया जा रहा है की वास्तविक समय पढ़ने के लिए बाहर प्रदर्शित करता है. साथ में, तेजी से निष्कर्षण और वास्तविक समय readout पीसीआर के विश्वसनीय पद्धति के माध्यम से ऊतकों की एक किस्म के विभिन्न प्रकार के जीनोटाइप का एक त्वरित पहचान के लिए अनुमति देते हैं.

Protocol

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
SYBR Green Extract-N-Amp Tissue PCR Kit Reagent Kit Sigma-Aldrich XNATG Includes: Extraction Solution Neutralization Solution B Tissue Preparation Solution Extract-N-Amp SYBR Green PCR ReadyMix

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माउस ऊतक के रैपिड जीनोटाइपिंग सिग्मा निकालें - एन Amp ऊतक पीसीआर किट का उपयोग
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Doan, L., Monuki, E. S. Rapid Genotyping of Mouse Tissue Using Sigma's Extract-N-Amp Tissue PCR Kit. J. Vis. Exp. (11), e636, doi:10.3791/636 (2008).More

Doan, L., Monuki, E. S. Rapid Genotyping of Mouse Tissue Using Sigma's Extract-N-Amp Tissue PCR Kit. J. Vis. Exp. (11), e636, doi:10.3791/636 (2008).

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