Summary

Un modèle de souris de dommages péritonéaux induits par le gluconate de chlorhexidine

Published: April 28, 2022
doi:

Summary

Le présent protocole établit un modèle murin de dialyse péritonéale () de fibrose péritonéale induite par le gluconate de chlorhexidine (CG). Le modèle actuel est simple et facile à utiliser par rapport aux autres modèles animaux de DP.

Abstract

La fibrose péritonéale est une complication importante de la dialyse péritonéale (MP). Pour étudier et résoudre ce problème, un modèle animal approprié de MP est nécessaire. Le présent protocole établit un modèle de fibrose péritonéale induite par le gluconate de chlorhexidine (CG) qui imite l’état d’un patient atteint de la MP. La fibrose péritonéale a été induite par injection intrapéritonéale de 0,1% de CG dans de l’éthanol à 15% pendant 3 semaines (administrée tous les deux jours), pour un total de neuf fois chez des souris mâles C57BL/6. Des tests fonctionnels péritonéaux ont ensuite été effectués le jour 22. Après le sacrifice des souris, le péritoine pariétal de la paroi abdominale et le péritoine viscéral du foie ont été récoltés. Ils étaient plus épais et plus fibrotiques lorsqu’ils étaient analysés au microscope après la coloration trichrome de Masson. Le taux d’ultrafiltration a diminué et le transport de masse de glucose a indiqué une augmentation de la perméabilité péritonéale induite par CG. Le modèle de MP ainsi établi peut avoir des applications dans l’amélioration de la technologie de la MP, l’efficacité de la dialyse et la prolongation de la survie des patients.

Introduction

La dialyse péritonéale (DP) est un type de thérapie de remplacement rénal. Cependant, la MP a des problèmes qui ne peuvent pas être résolus. Par exemple, le traitement à long terme de la MP peut causer des dommages péritonéaux, entraînant éventuellement un échec de l’ultrafiltration et l’arrêt du traitement 1,2,3,4,5,6. La fibrose péritonéale est l’une des complications les plus graves 7,8. La fibrose péritonéale est caractérisée par le dépôt et l’accumulation de matrice extracellulaire dans l’interstitium, ainsi que par la néo-angiogenèse et la vasculopathie du péritoine 9,10.

Les principales causes de ces changements péritonéaux sont la péritonite récurrente et la non-biocompatibilité du dialysat, qui sont hyperosmotiques, hyperglycémiques, faible pH et accumulation de produits de dégradation du glucose11,12. Par conséquent, des modèles expérimentaux animaux appropriés peuvent aider les chercheurs à mieux étudier les changements physiologiques et pathologiques du péritoine pendant le traitement par MP. Par conséquent, l’établissement d’un modèle animal de MP est important pour améliorer la technologie de la MP et l’efficacité de la dialyse et prolonger la survie des patients. Cette étude visait à générer un modèle murin par injection intrapéritonéale (i.p.) de gluconate de chlorhexidine (CG), comme décrit précédemment13,14. Ce modèle de souris est simple, facile à utiliser et réalisable par rapport aux autres modèles animaux.

Protocol

Toutes les expériences sur les souris ont été approuvées par le Centre des animaux de laboratoire de l’hôpital E-DA / Université I-Shou et ont été traitées conformément au « Guide for the Care and Use of Laboratory Animals » (NRC, États-Unis 2011). Des souris mâles C57BL/6, âgées de 7 à 8 semaines, ont été utilisées pour la présente étude. 1. Préparation chimique Préparer l’irritant chimique en diluant le gluconate de chlorhexidine à 0,1 …

Representative Results

Dans la figure 1A,B, le péritoine pariétal de la paroi abdominale était nettement plus épais et plus fibrotique sous la coloration trichrome de Masson17, ce qui indique que dans le groupe exposé à CG, la fibrose péritonéale est plus grave que dans le groupe témoin saline (NS). Dans la figure 2A,B, le péritoine viscéral des surfaces hépatiques était également nettement plus épais et plus fibrotique, prouvant…

Discussion

Dans cette étude, un modèle de MP murine est présenté par injection i.p. de CG, et les résultats ont montré une fibrose péritonéale et une détérioration fonctionnelle dans ce modèle, qui imitait l’état du patient MP.

Le protocole comporte plusieurs étapes critiques. Tout d’abord, pour effectuer une injection intra-électrique de CG ou NS, la peau de la paroi abdominale de la souris doit être ramassée à l’aide d’une pince pour prévenir les dommages aux organes intrapér…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Nous remercions sincèrement Shin-Han Tseng pour la discussion critique et l’exécution partielle de l’étude. Cette étude a été soutenue par EDAHP110003 et NCKUEDA110002 de la Fondation de recherche de l’hôpital E-DA et de l’Université nationale Cheng Kung, Taiwan.

Materials

0.9% Normal Saline Y F CHEMICAL CORP., New Taipei City, Taiwan
10% neutral buffered formalin Taiwan Burnett International Co., Ltd., Taipei City, Taiwan 00002A
Automatic biochemical analyzer Hitachi Ltd., Tokyo, Japan Labospect Series 008 for determining glucose concentration
Chlorhexidine digluconate solution, 20% in H2O Sigma-Aldrich, MO, USA C9394 diluted to 0.1% with 15% ethanol for injection
Ethanol Avantor Performance Materials, LLC, PA, USA BAKR8006-05 diluted to 15% with normal saline for working concentration
Glucose (Dianeal) Baxter International, Inc., IL, USA FNB9896 Commercial dialysis solution (4.25%)
GraphPad Prism 8.0 GraphPad Software, Inc., CA, US
L-type Glu 2 assay FUJIFILM Wako, Japan 461-32403
Xylazine 20 Juily Pharmaceutical Co., Ltd., New Taipei City, Taiwan
Zoletil 50 Virbac Laboratories, Carros, France

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Cite This Article
Chang, M., Wang, H., Chen, L., Gao, J., Hung, S., Chiou, Y., Lee, Y. A Mice Model of Chlorhexidine Gluconate-Induced Peritoneal Damage. J. Vis. Exp. (182), e63903, doi:10.3791/63903 (2022).

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