Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Uppskattning av utbytet av föreningar på TLC-plattan via Blue-LED-belysningstekniken

Published: October 6, 2022 doi: 10.3791/64230

Summary

Detta protokoll utvecklade en metod för att uppskatta utbytet av föreningar på TLC-plattan med hjälp av blå-LED-belysningstekniken. Fördelarna med detta tillvägagångssätt är att det är säkert, effektivt, billigt och gör det möjligt för forskaren att mäta flera prover samtidigt.

Abstract

Tunnskiktskromatografi (TLC) är en tillgänglig analytisk teknik som har använts i stor utsträckning inom organisk kemiforskning för att kvantifiera utbytet av okända prover. Den aktuella studien utvecklade en effektiv, billig och säker metod för att uppskatta utbytet av prover på en TLC-platta med hjälp av blå-LED-belysningen. Lovastatin extraherat från Aspergillus terreus var exempelföreningen som användes i den aktuella studien. Regressionsmodeller baserade på lovastatinstandarden användes för att utvärdera utbytet av lovastatin. Tre metoder jämfördes: bioassay, UV-detektion och blå-LED-belysning. Resultatet visade att blå-LED-belysningsmetoden är betydligt mer tidseffektiv än UV-detektion och bioassay-metoder. Dessutom, blå-LED-belysningen var ett relativt säkert alternativ på grund av oro för biologiska faror i bioassay-metoden (t.ex. mikrobiell infektion) och ultraviolett exponering i UV-detektionsmetoden. Jämfört med de dyra metoderna som kräver specialiserade instrument och långsiktig träning innan de arbetar självständigt, såsom GC, HPLC och HPTLC, var användning av blå-LED-belysningen ett ekonomiskt alternativ för att uppskatta utbytet av prover från en TLC-platta.

Introduction

Tunnskiktskromatografi (TLC) används ofta som en kvalitativ och kvantitativ teknik inom organisk kemi 1,2,3. De främsta fördelarna med TLC är att det ger snabb detektering, flexibla provkrav och inte kräver specialutrustning4. Hittills, även om många avancerade tillvägagångssätt har etablerats, är TLC fortfarande den viktigaste metoden för att identifiera okända prover i en blandning. Utmaningen med detta tillvägagångssätt är dock bristen på säker och billig utrustning för att kvantifiera provutbytet, särskilt för att utveckla laboratorier med begränsade budgetar. Den aktuella studien syftade därför till att utveckla en effektiv, säker och billig metod i kombination med TLC för att uppskatta utbytet av proverna.

Till skillnad från högpresterande TLC (HPTLC), högpresterande vätskekromatografi (HPLC) och gaskromatografi (GC) med strikta provkrav, tidskrävande och involvering av flersteg för provberedning1,5, visade TLC flera fördelar. För det första, för provberedning, kan HPLC och GC inte detektera råextraktet eftersom råextraktet kan ansluta kolonnen för HPLC och GC. För det andra, när proverna inte är UV-lämpliga (viktiga för HPLC-analys) eller med låg flyktighet (viktigt för GC-analys), kan TLC appliceras på dessa prover, och användningen av visualiseringsreagens gör de isolerade proverna synliga på tunna lager 6,7,8. För det tredje, för allmänna användare, kräver HPLC och GC i allmänhet en relativt lång tid före träning innan de arbetar självständigt, jämfört med TLC. Dessutom kan kvantitativ TLC-analys, känd som högpresterande TLC (HPTLC), digitalisera informationen på en TLC-platta med en mycket känslig skanner. Kostnaden för HPTLC-systemet är dock relativt dyr. Som sådan är det viktigt att utveckla ett kostnadseffektivt och snabbt tillvägagångssätt för att kvantifiera prover på TLC-plattan.

Liknande metoder har utvecklats för kvantifiering av TLC-avkastning; till exempel rapporterade Johnson9 en teknik som gör det möjligt att kvantifiera proverna på en TLC-platta med hjälp av en flatbäddsskanner ansluten till en dator. År 2001 utvecklade El-Gindy et al.10 den TLC-densitometriska metoden, som användes för att detektera föreningen med optisk densitet, och tekniken tillämpades också av Elkady et al.11. År 2007 presenterade Hess2 den digitalt förbättrade TLC-metoden (DE-TLC) som används för att detektera utbytet av en förening på en TLC-platta med hjälp av en digitalkamera i kombination med UV-ljus. Hess jämförde också kostnadsskillnaderna mellan HPTLC och DE-TLC-metoden och drog slutsatsen att DE-TLC-metoden kunde användas i gymnasie- och högskolelaboratorier på grund av dess överkomliga kostnad2. Kostnaden för TLC-densitometrisk metod var dock fortfarande dyr, och driften av ultraviolett ljus kräver adekvat förutbildning om användarna kan utsättas för ultraviolett strålning. Därför, kompatibel med TLC, är det önskvärt att utveckla en effektiv, säker och billig metod för att kvantifiera provutbytet.

Den aktuella studien beskrev ett protokoll för att detektera provet på en TLC-platta med hjälp av blå-LED-belysningen och utvecklade en regressionsmodell med hög tillförlitlighet (högt R-kvadratvärde) för att mäta bandens dimensioner och sedan bestämma föreningsutbytet. Slutligen konstaterades att den blå LED-belysningsmetoden är en relativt säker (vs. UV-detektionsmetod), billig (vs. GC, HPLC och HPTLC) och effektiv (jämfört med bioassay-metod) metod för avkastningskvantifiering.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Det nuvarande protokollet beskrivs med lovastatin som exempel. Lovastatin extraherades från en vecka gammal Aspergillus terreus.

1. Sammansatt extraktion

OBS: För detaljer om sammansatt extraktion, se figur 1.

  1. Odla Aspergillus terreus på potatisdextrosagar (PDA, se materialtabell) medium vid 30 °C.
  2. Torka kulturen vid 40 °C i 24 timmar. Överför den torkade kulturen till ett 50 ml rör med steriliserad pincett och tillsätt 15 ml etylacetat.
  3. Skaka blandningen kraftigt genom virvel i 1 min och inkubera i 1 timme vid 40 °C med skakning vid 200 rpm.
  4. Sonicate blandningen med hjälp av en 40 kHz ultraljud bad (se tabell över material) vid 40 ° C för 1 h.
  5. Centrifugera blandningen vid 5 000 x g i 1 min vid rumstemperatur och filtrera genom ett 11 μm filterpapper.
  6. Extrahera filtratet med en lika stor volym sterilt vatten i en separatorytratt.
  7. Efter fasseparation, samla det organiska skiktet och förånga sedan i en roterande förångare (se Materialförteckning). Lös upp återstoden i 2 ml etylacetat.

2. Separation av råextraktet med NP-adsorptionskolonn (normalfas)

  1. Packa kolonnen med NP-kiselgel som stationär fas och använd n-hexan:etylacetat:trifluorättiksyra (H:E:T; 80:20:0.1, v/v/v) som mobil fas.
  2. Fyll 2 ml av extraktet (steg 1) på kolonnen och tillsätt det mobila faslösningsmedlet med en flödeshastighet på 1 ml/min för att eluera extraktet.
    OBS: Flödeshastigheten styrdes manuellt med hjälp av en stoppkran.
  3. Kontrollera utflödet med TLC för att bekräfta närvaron av lovastatin och indunsta sedan i en roterande förångare vid 45 °C tills lösningsmedlet avlägsnas. Detta steg tar ca 20-25 min.
  4. Lös upp återstoden i 1 ml etylacetat och blanda sedan med en lika stor volym av 1% trifluorättiksyra.
  5. Centrifugera blandningen vid 5 000 x g i 1 min vid rumstemperatur och samla det organiska skiktet i ett nytt glasrör.

3. Beredning och påfyllning av tunnskiktskromatogramplattor (TLC)

  1. Spot 5 μL prover och lovastatinstandarder (se materialtabell) på TLC-plattans baslinje med hjälp av en kapillärpipett och lämna en kant på 1 cm på sidorna av TLC-plattan.
  2. Torka TLC-plattan i en dragskåp i 5 minuter vid rumstemperatur.
  3. Placera plattan försiktigt med pincett i en mättad glaskammare som innehåller det mobila faslösningsmedlet. Täck kammaren med ett glaslock och låt plattan utvecklas helt.
  4. Ta bort plattan från kammaren när lösningsmedelslinjen når 1 cm från toppen av plattan.

4. Analys av den blå LED-belysningen

  1. Markera lösningsmedelslinjen med en penna. Torka plattan i dragskåpet i 10 min vid rumstemperatur.
  2. Efter torkning, blötlägg omedelbart plattan i 10%H2S04lösningsmedel och torka sedan i rökhuven i 10 minuter vid rumstemperatur.
  3. Placera plattan på värmepanelen tills de bruna fläckarna visas. Se till att plattan inte är överhettad, eftersom det kan göra visualisering av lovastatin svårt.
  4. Överför plattan till blå-LED-belysningen och skanna med ett kompatibelt freeware (MiBio Fluo) (se materialförteckning).

5. Avkastningsuppskattning enligt regressionsmodellen

  1. Mät bandens dimension med hjälp av ImageJ-programvaran (se Materialförteckning).
  2. Upprätta en regressionsmodell med hjälp av dataanalys och grafprogramvara (se materialförteckning) baserat på de fallande koncentrationerna av lovastatinstandarder, inklusive 1 mg / ml, 0,75 mg / ml, 0,5 mg / ml och 0,25 mg / ml.
  3. Använd regressionsmodellen för att uppskatta utbytet av proverna.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Denna studie presenterade blå-LED-belysningsmetoden för att uppskatta utbytet av föreningar, och denna metod validerades och jämfördes med bioassay och UV-detekterade metoder (tabell 1). Regressionsmodellerna utvecklades baserat på bandens dimensioner och koncentration av standarder för tre metoder för att förutsäga utbytet av prover. För det första, i resultaten av bioassay-metoden, var R-kvadraten mellan dimensionerna av hämningszonen och lovastatinstandarderna 0,99 och provutbytet var 0,56 mg förutsagt av regressionsmodellen (Figur 2). För det andra, i UV-detektionsmetoden, var R-kvadraten mellan lovastatinstandarderna och dimensionen av band på TLC-plattan 0, 97, och utbytet av provet som förutspåddes av regressionsmodellen var 0, 53 mg (Figur 3). I synnerhet var bandets kanter suddiga och relativt låga signalintensitetsband observerades (figur 3A). För det tredje, i den blå-LED-belysningsmetoden, var R-kvadraten mellan lovastatinstandarder och bandens dimension på TLC-plattan 0,98, och provutbytet var 0,54 mg förutsagt av regressionsmodellen (figur 4). Det förutsagda utbytet med hjälp av blå-LED-belysningen var närmare bioassay-metoden (inställd som kontroll). Bandets dimension var proportionell mot mängden lovastatin, och de klara banden erhölls med blå-LED-belysningsmetoden. Dessutom var arbetstiden för bioassay, UV-detekterade, och blå-LED-belysningsmetoder var cirka 24 h, 2 h, respektive 1 h; (Obs: arbetstid betyder den totala tiden som spenderas på avkastningsundersökningen av lovastatin).

Figure 1
Figur 1: Protokollets arbetsflöde. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 2
Figur 2: Bioassay-metoden. (A) Bioassay av lovastatin mot Neurospora crassa (inkuberad i 24 timmar vid 30 °C). I slutet av försöket fotograferades 90 mm agarplattorna under synligt ljus. (B) Koncentrationerna av sex lovastatinstandarder var: nr 1 (1 mg / ml), nr 2 (0,75 mg / ml), nr 3 (0,5 mg / ml) och nr 4 (0,25 mg / ml). Prov nr 5 späddes ut till 0,25× (1:4). Prov nr 6 späddes ut till 0,5× (1:2). Hämningszonens dimension (mm2) mättes av bildbehandlingsprogrammet. (C) En regressionsmodell utvecklades med hjälp av dataanalys och grafprogramvara baserad på standardernas hämningszondimension. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 3
Figur 3: Tunnskiktskromatogram (TLC) platta utsatt för UV-ljus. (A) N-hexan:etylacetat (2:3 v/v) användes som mobil fas i TLC-analysen, och TLC-plattan utsattes för UV-ljus (365 nm) efter blötläggning i utvecklaren (10%H2S04). (B) Koncentrationerna av sex lovastatinstandarder var: nr 1 (1 mg / ml), nr 2 (0,75 mg / ml), nr 3 (0,5 mg / ml) och nr 4 (0,25 mg / ml). Prov nr 5 späddes ut till 0,25× (1:4). Prov nr 6 späddes ut till 0,5× (1:2). Hämningszonens dimension (mm2) mättes av bildbehandlingsprogrammet. (C) En regressionsmodell utvecklades med hjälp av dataanalys och grafprogramvara baserad på dimensionen av lovastatinstandardbanden på TLC-plattan. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 4
Figur 4: Tunnskiktskromatogramplatta (TLC) skannad av den blå LED-belysningen. (A) N-hexan:etylacetat (2:3 v/v) användes som mobilfas i TLC-analysen, och TLC-plattan skannades av blå-LED-belysningen. (B) Koncentrationerna av sex lovastatinstandarder var: nr 1 (1 mg / ml), nr 2 (0,75 mg / ml), nr 3 (0,5 mg / ml) och nr 4 (0,25 mg / ml). Prov nr 5 späddes ut till 0,25× (1:4). Prov nr 6 späddes ut till 0,5× (1:2). Hämningszonens dimension (mm2) mättes av bildbehandlingsprogrammet. (C) En regressionsmodell utvecklades med hjälp av dataanalys och grafprogramvara baserad på dimensionen av lovastatinstandardbanden på TLC-plattan. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Bioassayen Blå-LED-belysning UV-detekterad
Observation av resultat Ögon Blå-LED-belysning och ögon UV-ljus och ögon
Bildupplösning Medium Hög Låg
(oskärpa och svag bild)
Ungefärlig tidskostnad 24 timmar 1 timme 2 timmar
Analysförmåga krävs Medium Låg Medium
Säkerhet Mikrobiell infektion Mycket säker UV-ljus exponering
Regressionsekvation y = 0,0019x + 0,0304 y = 0,0399x - 0,1271 y = 0,0657x - 0,6405
R-kvadraten 0.99 0.98 0.97
Backe 0.0019 0.0399 0.0657
Avlyssna 0.0304 -0.1271 -0.6405
Standardfel för lutning 8.94E-05 3.54E-03 6.28E-03
Standardfel för avlyssning 0.03032 0.07115 0.12375

Tabell 1: Jämförelse av de tre detektionsmetoder som använts i denna studie.

TLC-densitometrisk metod TLC-bildanalys
El-Gindy
et al.10
Elkady
et al.11
Musharraf
et al.12
Johnson9 Hess2 Blue-LED Illuminator-metod
(Denna studie)
Prov  Acebutolol HCL Ciprofloxacin HCL Metronidazol Danazol Kolesterol Vanillin Nikotinamid Lovastatin
Resultat UV
detektor
TLC
skanner
TLC
skanner
Flatbäddsskanner Digitalkamera
med UV-lampa
Blå-LED-belysning
Våglängd 230 nm 280 nm 280 nm 291 nm NA 254 nm NA
Korrelationskoefficient 0,996a 0,9991a 0,9994a 0,996a 0,998a 0,971b 0,987b 0,99a
0,98b
Regressionsekvation NA y = 5,7853x
+19.9383
y = 1,1104x
+ 6.9755
y = 7,949x + 2460 y = 0,96x NA NA y = 0,0399x
-0.1271
a: Pearson korrelationskoefficient
b: R-kvadrat

Tabell 2: Jämförelse av tidigare metoder och den aktuella studien.

Kompletterande figur 1: Tunnskiktskromatogramplattan (TLC) med ampicillin skannades med blå-LED-belysningsmetoden. (A) Etylacetat: metanol (9:13 v / v) användes som mobilfas i TLC-analysen, och TLC-plattan skannades av den blå LED-belysningen. (B) Koncentrationen av fyra ampicillinstandarder var: nr 1 (100 mg / ml), nr 2 (75 mg / ml), nr 3 (50 mg / ml) och nr 4 (25 mg / ml). Bandens dimension mättes med bildbehandlingsprogrammet. (C) En regressionsmodell utvecklades med hjälp av dataanalys och grafprogramvara baserad på dimensionen av ampicillinstandardbanden på TLC-plattan. Klicka här för att ladda ner den här filen.

Kompletterande figur 2: Tunnskiktskromatogramplatta (TLC) med apramycin skannad med blå-LED-belysningsmetoden. (A) Metanol:vatten (6:5 v/v) användes som mobil fas i TLC-analysen och TLC-plattan skannades av blå-LED-belysningen. (B) Koncentrationen av fyra apramycinstandarder var: nr 1 (50 mg / ml), nr 2 (40 mg / ml), nr 3 (30 mg / ml) och nr 4 (20 mg / ml). Bandens dimension mättes med bildbehandlingsprogrammet. (C) En regressionsmodell utvecklades med hjälp av dataanalys- och grafprogramvara baserad på dimensionen av apramycinstandardbanden på TLC-plattan. Klicka här för att ladda ner den här filen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Den aktuella studien beskrev ett nytt tillvägagångssätt, blå-LED-belysningen, för att kvantifiera föreningar utan att använda dyr och specialiserad utrustning, såsom HPTLC, HPLC och GC-metoden, och metoden jämfördes med bioassay och UV-detekterade metoder för att utvärdera kvantifieringsprestanda. Som ett resultat drogs slutsatsen att blå-LED-belysningsmetoden är ett relativt säkert och effektivt protokoll som används för att kvantifiera utbytet av riktade föreningar på TLC-plattan.

Tidigare studier har rapporterat flera kvantitativa metoder utan att använda specialiserad kvantitativ utrustning, och alla studier visade att kvantifieringens noggrannhet var nära den för användning av specialutrustning 2,9,10,11,12 (tabell 2). Till exempel jämförde El-Gindy et al.10 noggrannheten i det uppskattade utbytet baserat på HPLC- och TLC-densitometriska metoder, och resultaten visade att det inte fanns några signifikanta skillnader mellan de två metoderna (p-värde < 0,05). Jämfört med den blå-LED-belysningsmetoden i denna studie krävde TLC-densitometrisk metod som utvecklats av El-Gindy et al.10 en speciell våglängdsdetektor, medan den blå-LED-belysningsmetoden krävde en enkel och billig blå-LED-skanner. Under tiden kunde den blå LED-skannern också användas för andra ändamål, såsom gelelektroforesskanning, men den specialiserade TLC-skannern som utvecklats av Elkady et al.11 användes endast för TLC-densitometrisk metod.

Förutom den TLC-densitometriska metoden10,11 utvecklades flatbäddsskannern och digitalkamerametoden för att detektera utbytet av prover. Till exempel etablerade Johnson9 en snabb TLC-detektionsmetod med hjälp av flatbäddsskannern och mätte sedan absorptionen med kommersiell bildprogramvara. Bildprogramvaran som användes i blå-LED-belysningsmetoden var dock gratis och enkel att använda. Hess2 utvecklade programvaran "TLC analyzer" för att uppskatta dimensionen av band på TLC-plattbilder tagna av en digitalkamera, vilket liknade den UV-detekterade metoden i denna studie. Båda metoderna kan dock interagera potentiellt med UV-ljusrisker.

Regressionsmodellerna baserade på dimensionen av standardbanden utvecklades för bioassay, blå-LED-belysning och UV-detekterad metod, och R-kvadratvärdet var 0,99, 0,98 respektive 0,97 (tabell 1). Eftersom hög linjäritet (R-kvadrat) uppnåddes föreslås att regressionsmodellen kan mäta utbytet av prover. X-värdet i regressionsmodellen ersattes av dimensionen av standardbanden, och den uppskattade avkastningen (förutsagt Y-värde i regressionsmodellen) var ungefär 5,6, 5,4 och 5,3, bestämd med bioassay, blue-LED respektive UV-detektionsmetoder. Resultaten indikerade att R-kvadraten och det uppskattade utbytet med hjälp av blå-LED-belysningen var närmare bioassay-metoden (inställd som kontroll) än den UV-detekterade metoden (tabell 1).

För att förstå begränsningarna med detta tillvägagångssätt tillämpades tillvägagångssättet också för att detektera två andra föreningar, inklusive ampicillin och apramycin; resultaten visas i tilläggsfigur 1 och tilläggsfigur 2. Två viktiga steg måste noteras i detta tillvägagångssätt: (1) efter torkning måste plattan visualiseras omedelbart; fördröjd visualisering kan påverka punktdetekteringen; (2) Överexponering av plattan rekommenderas inte eftersom den skannade bilden från plattan har hög bakgrund och gör det svårt att mäta områdena på fläckarna.

Sammanfattningsvis är den blå-LED-belysningsmetoden ett relativt säkert, tidsbesparande, billigt och mindre mödosamt tillvägagångssätt för att påskynda kvantifieringen av utbytet av prover jämfört med andra kvantitativa kromatografiska metoder; Därför är detta tillvägagångssätt ett idealiskt protokoll för användning vid utveckling av laboratorier med begränsade budgetar. Under tiden var TLC-plattbilderna som hämtades från den blå LED-belysningsmetoden mycket tydligare än de från UV-detekteringsmetoden (figur 3A vs. Figur 4A), som också hjälpte till att exakt bestämma dimensionen på banden på TLC-plattan, och också att uppskatta utbytet av proverna.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Alla författare förklarar att de inte har några intressekonflikter.

Acknowledgments

Denna studie stöddes av ministeriet för vetenskap och teknik, Taiwan (MOST 108-2320-B-110-007-MY3).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
American bacteriological Agar Condalab 1802.00
Aspergillus terreus  ATCC 20542
Blue-LED illuminator MICROTEK Bio-1000F
Centrifuge Thermo Scientific  HERAEUS Megafuge 8
Compact UV lamp UVP UVGL-25
Ethyl Acetate MACRON MA-H078-10
Filter Paper 125mm ADVANTEC 60311102
ImageJ NIH Freeware https://imagej.nih.gov/ij/download.html
Lovastatin standard ACROS A0404262
MiBio Fluo  MICROTEK V1.04
n-Hexane C-ECHO HH3102-000000-72EC
OriginPro OriginLab 9.1 https://www.originlab.com/origin
Potato dextrose broth H STBIO MEDIA 110533
Rotary evaporator EYELA SB-1000
Sulfuric acid Fluka 30743-2.5L-GL
TLC silica gel 60 F254 MERCK 1.05554.0001
Trifluoroacetic acid Alfa Aesar 10229873
Ultrasonic vibration machine DELTA DC600

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Pyka, A. Detection progress of selected drugs in TLC. BioMed Research International. 2014, 732078 (2014).
  2. Hess, A. V. I. Digitally enhanced thin-layer chromatography: An inexpensive, new technique for qualitative and quantitative analysis. Journal of Chemical Education. 84 (5), 842-847 (2007).
  3. Ullah, Q., Mohammad, A. Vitamins determination by TLC/HPTLC-a mini-review. Journal of Planar Chromatography - Modern TLC. 33 (5), 429-437 (2020).
  4. Chen, Z., Tao, H., Liao, L., Zhang, Z., Wang, Z. Quick identification of xanthine oxidase inhibitor and antioxidant from Erycibe obtusifolia by a drug discovery platform composed of multiple mass spectrometric platforms and thin-layer chromatography bioautography. Journal of Separation Science. 37 (16), 2253-2259 (2014).
  5. Duncan, J. D. Chiral separations: A comparison of HPLC and TLC. Journal of Liquid Chromatography. 13 (14), 2737-2755 (1990).
  6. Sherma, J. Thin-layer chromatography in food and agricultural analysis. Journal of Chromatography A. 880 (1-2), 129-147 (2000).
  7. Bocheńska, P., Pyka, A., Bocheńska, P., Bocheńska, B. Determination of acetylsalicylic acid in pharmaceutical drugs by TLC with densitometric detection in UV. Journal of Liquid Chromatography. 35 (10), 1346-1363 (2012).
  8. Poole, C. F. Planar chromatography at the turn of the century. Journal of Chromatography A. 856 (1-2), 399-427 (1999).
  9. Rapid Johnson, M. E. simple quantitation in thin-layer chromatography using a flatbed scanner. Journal of Chemical Education. 77 (3), 368-372 (2000).
  10. El-Gindy, A., Ashour, A., Abdel-Fattah, L., Shabana, M. M. First derivative spectrophotometric, TLC-densitometric, and HPLC determination of acebutolol HCL in presence of its acid-induced degradation product. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 24 (4), 527-534 (2001).
  11. Elkady, E. F., Mahrouse, M. A. Reversed-phase ion-pair HPLC and TLC-densitometric methods for the simultaneous determination of ciprofloxacin hydrochloride and metronidazole in tablets. Chromatographia. 73 (3-4), 297-305 (2011).
  12. Musharraf, S. G., Ul Arfeen,, Shoaib, Q., M, Development and validation of TLC-densitometric method for the quantification of a steroidal drug, danazol in its pharmaceutical formulations. Journal of Planar Chromatography - Modern TLC. 25 (4), 331-337 (2012).

Tags

Biologi utgåva 188
Uppskattning av utbytet av föreningar på TLC-plattan <em>via</em> Blue-LED-belysningstekniken
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Chou, K. R., Tsai, H. Estimating the More

Chou, K. R., Tsai, H. Estimating the Yield of Compounds on the TLC Plate via the Blue-LED Illumination Technique. J. Vis. Exp. (188), e64230, doi:10.3791/64230 (2022).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter