Summary
肾小球滤过率（GFR）是评估肾功能的理想标志物。然而，使用菊粉注射液和连续血液和尿液分析的标准测量方法是不切实际的。本文描述了一种经皮测量仔猪GFR的实用方法。
Abstract
肾小球滤过率（GFR）的透皮测量已被用于评估有意识动物的肾功能。这种技术在啮齿动物中已经建立起来，用于研究急性肾损伤和慢性肾脏疾病。然而，使用透皮系统测量GFR尚未在猪中得到验证，猪是一种与人类具有相似肾脏系统的物种。因此，我们研究了脓毒症对麻醉和机械通气新生猪透皮GFR的影响。多种微生物败血症由盲肠结扎和穿刺 （CLP） 诱发。由微型荧光传感器组成的透皮GFR测量系统连接到猪的剃光皮肤上，以确定荧光素 - 异硫氰酸酯（FITC）结合的sinistrin（一种静脉注射的GFR示踪剂）的清除率。我们的结果表明，在CLP后12 h，血清肌酐随着GFR的降低而增加。这项研究首次证明了透皮GFR方法在确定机械通气新生猪肾功能方面的实用性。
Introduction
肾功能的实际和定量评估是肾小球滤过率（GFR）测量，它根据清除原则1来说明肾脏过滤血液的程度。测量GFR的早期方法需要静脉注射外源性化合物，如菊粉或sinistrin，对血浆/尿液水平进行连续测量以检测其清除率2，3。这种方法比较麻烦，需要连续采集血浆和尿液样本4。另一种方法是测量内源性代谢终产物，如肌酐。然而，这很耗时，有时也不准确，因为它不仅被肾小球过滤，而且还被小管分泌5，6。此外，肌酐水平受性别、年龄、饮食和肌肉质量的影响7，8，9。
一种更精确、微创和广泛使用的 GFR 测量方法是使用透皮 GFR 监测仪，用于测量动物的实时 GFR4，10。Sinistrin是一种高度可溶性和自由过滤的外源性肾脏标志物，用荧光素-异硫氰酸酯（FITC）标记。这种偶联化合物通过静脉注射，无需采集血液和尿液样本即可实时评估肾功能11。透皮 GFR 测量已在啮齿动物 12、狗13 和猫14 中得到验证，但在猪中未得到验证。
猪种与人类具有多种解剖学和生理学特征，使其成为研究各种人类疾病的理想动物15。猪在转化生物医学研究中的使用越来越受欢迎，并且比啮齿动物模型更受欢迎，因为它模仿人类生理学和病理生理学16。新生猪对了解儿科患者特有的疾病机制感兴趣17.此外，最近猪到人体器官移植的进展促使人们迫切需要扩大临床前和临床试验的诊断工具18，19，20，21。本文首次为使用透皮装置测量新生猪GFR提供了指南。
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Protocol
这些程序是根据实验动物护理和使用的国家标准编写的，并得到了田纳西大学健康科学中心（UTHSC）机构动物护理和使用委员会（IACUC）的批准。
注意：实验组的仔猪进行盲肠结扎和穿刺，而假手术组仅进行腹部开口而不进行盲肠结扎或穿刺。两组仔猪在手术后麻醉12小时，以使实验组有足够的时间发生败血症和急性肾损伤（AKI）。透皮GFR测量将在手术后8小时进行，总共12小时。
1. 仔猪供应和饲养
- 确定可以提供3-5天新生儿仔猪的当地养猪场。安排在一周初分娩，以便在任何仔猪超过7天之前完成实验。
注意：供应商在周一为本实验提供了三到五头仔猪;到周五，仔猪将接受实验。使用相同性别和接近相似的年龄对于避免混淆因素至关重要。 - 仔猪到达后，确保他们有个人身份证明（例如，耳标和包括体重和年龄的记录）。
- 将仔猪安置在实验室动物护理单元（LACU）中，由有执照的兽医照顾。这些动物被成群结队地饲养在一个宽敞的围栏中，围栏铺有坚固的混凝土地板，很容易用水清洗，以保持良好的卫生条件。
- 添加一件家具，例如一个沉重的球，以丰富环境和刺激。
- 通过控制照明，确保 LACU 提供最佳环境条件，包括以下关键要素：卫生、营养、温度控制、通风和昼夜循环。
- 让兽医每天检查仔猪，包括体重测量，以通知研究者是否有仔猪生病，这可能需要排除在实验之外。
- 让仔猪至少1天适应环境，这有助于最大限度地减少压力。
2.术前准备
- 在开始实验之前准备手术站。这包括加热垫、导管、呼吸机、气管插管、肝素盐水和一袋乳酸林格液。
注意：仔猪的体温调节能力差，容易出现体温过低，从而改变血流动力学22，23。因此，留出足够的时间让加热垫预热至关重要。 - 制备10mg / mL的α-氯蔗糖，将其与60°C的盐水混合，直到混合物澄清。不要使溶液过热，以免药物在冷却时结晶。在给予仔猪之前，用注射器过滤器（尺寸0.22μm）过滤。
- 根据动物体重制定麻醉药物 - 氯胺酮：20毫克/千克和甲苯噻嗪：2.2毫克/千克。使用α-氯蔗糖（5 mL/kg）维持麻醉。
注意：使用α-氯蔗糖是因为与吸入相比易于静脉给药
麻醉剂，因为后者需要麻醉机和适当的清除系统通过气管插管输送。
3. 麻醉
- 在猪栏（仔猪熟悉的环境）中进行诱导麻醉，以避免过度的压力。
- 用后腿轻轻地挑起仔猪，并使用23 G 3/4针将氯胺酮：20 mg / kg和甲苯噻嗪：2.2 mg / kg注入半膜/半腱肌的后腿。
- 等待几分钟，使药物生效。检查足够的麻醉水平，确保动物放松到无法移动，失去睑反射和下颌张力，以便轻松安全地运送到手术站。通过触摸内眼角评估睑反射;没有眨眼表明麻醉充分。
4. 气管切开术
注意：该实验是非生存的，因此进行气管切开术以建立用于机械通气的气道。气管切开术是一种快速简便的手术，与气管插管相反，气管插管在仔猪中具有挑战性，因为它们的头部和上气道解剖结构为24，25。此外，喉痉挛通常在插管期间报告，导致长时间缺氧和高碳酸血症，这可能会影响结果26。
- 将仔猪放在背卧中。通过触诊感觉坚硬的甲状腺软骨的突出来识别环甲软骨。在涂抹无菌窗帘之前，使用聚维酮碘和 70% 乙醇对该区域进行消毒。
- 使用手术刀片，在甲状腺软骨尾端下方做一个 2-3 cm 的腹侧中线切口。
- 使用弯曲的蚊子止血器，钝性解剖上覆的皮下组织和肌肉（胸肌和皮肤大肠杆菌），直到环甲膜和前几个气管环可见。解剖时，要小心，以免损伤任何血管。
- 获得环甲膜和气管环24的清晰视图，然后使用一对长混合器直角钳抬高结构。
- 用一把小剪刀，在环甲膜或第一个气管环上做一个小切口。将切口水平延伸至 ~0.5 cm，以通过 3.0 mm 气管插管。
- 将管子插入 5 厘米标记。在固定插管之前，确保双侧胸部扩张和呼吸音。
- 将脐带缠绕在气管周围以将其固定到位。额外的胶带用于将管子固定到钳口的底部。
- 打开呼吸机，连接气管插管，并滚动特定的旋钮（例如。SIMV 旋钮、窥视旋钮等）以选择以下基线设置。压力控制方式： 同步间歇机械通气 （SIMV）; 峰值吸气压 （PIP） - 15; 呼气末正压 （PEEP） - 5; 率 - 20; I 时间 - 0.6。第一次血气分析后，根据血气结果调整呼吸机设置，以保持足够的氧合和通气。
5.股骨血管插管
- 建立气道和通气，然后转移注意力到股血管进行静脉通路和有创血压监测。股动脉是通过感觉赛多利斯肌和腹股细肌之间的凹槽处的脉搏来识别的，静脉可以在动脉内侧找到。
- 当仔猪躺在背卧位时，使用聚维酮碘和乙醇对腹股沟区域进行消毒，并应用适当大小的窗帘。
- 使用手术刀片创建一个 3-4 cm 的纵向切口，从腹股沟折痕处开始颅骨，沿股骨管远端延伸。
- 分别使用蚊子弯曲的镊子和剪刀进行钝和尖锐的解剖，以解剖到股神经血管束的水平。束可以在格拉西里斯肌肉27的身体深处找到。在 2-3 cm 的过程中圆周解剖股动脉和静脉以允许插管。如有必要，连接小侧枝。
- 在动脉和静脉的近端和远端都系上 3.0 丝带以施加牵引力。将远端丝线绑在静脉和动脉上，结扎血管。
- 从股静脉开始，在丝带上保持远端和近端牵引，然后使用一把微型剪刀进行静脉切开术。
- 接下来，使用静脉拾取导管引入器打开血管，同时插入内径 x 外径为 0.86 mm x 1.32 mm 的预先测量的聚氨酯导管。插入后，系紧近端 3.0 丝缝线以固定导管。用 3 mL 肝素化盐水溶液 （1 U/mL） 冲洗导管。该溶液可以通过将 0.5 mL 肝素添加到 50 mL 生理盐水中来制备。
- 使用上述相同方法插入有创血压导管以创建动脉切开术并通过导管。
注意：保持远端和近端牵引对于在进入动脉时最大限度地减少失血至关重要。 - 固定导管后，用盐水浸泡的纱布覆盖该部位，如有必要，可以使用 3.0 丝缝线缝合皮肤以防止感染。
6.麻醉、液体和血气的维持
- 在整个实验过程中，使用下颌张力和眼睑反射监测麻醉深度，并根据需要进行静脉注射α-氯蔗糖，以维持动物处于深度麻醉状态。初始负荷剂量为 50 mg/kg，进一步推注时应使用 20 mg/kg。
- 在整个实验过程中以 4 mL/kg/h 的速率注入乳酸林格作为维持液。例如，如果仔猪体重为3 kg，则液体输注速率为12 mL / h。
- 对于床旁气体分析，在肝素化血气注射器中抽取动脉血样，并将样本呈递给分析仪。选择动脉血 气选项，等待~2-3秒，让分析仪呈现抽血针。
- 小心地将针头插入含有血液样本的注射器的末端。等待分析仪吸出所需的样品并取出注射器。允许机器分析血气并显示结果。
- 根据结果，调整呼吸机以保持pH值在7.35--7.45之间，二氧化碳分压（PCO2）保持在35-45 mmHg之间，氧气分压（PaO2）保持在80-150 mmHg之间。这些设置因呼吸机类型而异，但主要涉及使用适当的旋钮增加或减少呼吸频率，以补偿缺氧和/或高碳酸血症。
- 将 3 mL 血液抽入浅绿色管（肝素锂）中。将样品以2000×g 离心15分钟，保持在4°C以提取血浆。完成后，可以立即用床旁化学分析仪分析血浆的血清肌酐水平，或储存在-80°C以供以后分析。
- 使用直肠探头温度计连续监测温度并调整加热垫温度以将仔猪温度保持在 101 至 103 °F 之间。
7.实验组;盲肠结扎和穿孔（CLP）25，28，29
注意：对于实验组中的仔猪，执行CLP以诱导多种微生物败血症28 ，并在手术后监测动物12小时，以留出足够的时间发生严重的败血症。经皮GFR记录在盲肠结扎后8小时开始，以允许4小时的记录。
- 使用手术刀片创建一个5-6厘米的左副正中垂直切口，因为猪的盲肠位于左腰旁窝30。向下解剖腹壁层，避免损伤浅表上腹部血管。
- 一旦腹膜层被切开，使用牵开器来改善对腹膜结构的进入。
- 识别腹部左上象限的螺旋结肠。追踪尾部和背侧螺旋结肠以定位盲肠。可见回肠与盲肠底部的螺旋结肠相连。
- 在回盲部交界处远端结扎盲肠（图1）。
- 使用 18 G 针头，在盲肠中穿刺七次，然后将粪便挤出到腹膜区域。
- 用3.0丝线使用简单的断线或连续缝合线分层闭合腹部。如果有的话，也可以使用吻合器来闭合皮肤层。
8. 假组
- 按照上述步骤7.2-7.4进行操作。识别盲肠后，将其原封不动地放回原处，并同样关闭腹壁。
- 监测假手术组仔猪12小时，以消除由于长时间暴露于麻醉而导致的任何混杂偏倚。
9. 透皮 GFR 设备设置
- 盲肠结扎8小时后，准备开始GFR的透皮测量。
- 使用 MB 服务软件版本 3.0 调整 GFR 设备上的采样率。简而言之，使用USB连接器将透皮GFR设备连接到计算机软件。打开软件，单击 连接，然后将计时调整为 4000 毫秒。单击 写入 以保存设置。
注意：这最多提供了6小时的总采样时间。在猪中，透皮GFR在4小时内完成。对于需要采样长达 12 小时的实验，请选择 8000 ms 选项。 - 将带有透明窗口的双面粘性贴片连接到设备上。将器件安装在一侧，确保发光二极管覆盖在透明窗口上，以便进行示踪检测。
- 剃掉侧胸壁上方的区域。将电池连接到设备，并立即将粘性贴片与设备贴合到位，并确保其牢固（图2）。由于仔猪是深度麻醉的，因此可能不需要胶带将设备固定到位。
注：仅粘性贴片就足以固定。然而，在动物会纵、变得活跃或麻醉可能被破坏的程序中，使用胶带可能很重要。绷带也可能是一种替代方法31。 - 在施用FITC-sinistrin之前，需要3-5分钟的基线记录。
10.FITC-鼻黄肋素制剂及注射液
- 制备FITC-sinistrin与盐水溶液的混合物，最终浓度为50mg / mL。给予仔猪的剂量为20mg / kg。FITC-sinistrin以粉末形式提供。
注意：FITC-sinistrin也可以通过插入耳静脉的外周静脉导管给药。必须通过股静脉导管给予FITC-sininstrin作为推注来达到高峰值水平。 - 将装有药物的注射器连接到三向止动旋塞的一侧，并在止动旋塞的另一侧用盐水冲洗。推动 FITC-sinistruin，然后立即推注 5 mL 盐水，然后关闭仔猪静脉的三向止动旋塞。
11. 透皮肾小球滤光监测记录
- 将装置连接到仔猪上4小时。在此期间，使用浓度为20mg / kg的间歇剂量的α-氯蔗糖保持仔猪麻醉，以避免任何运动伪影。
- 在4小时结束时，取出设备并立即断开电池。
12. 毛发球率测量
- 使用供应商提供的 USB 连接器将透皮 GFR 设备连接到计算机。
- 打开读取软件以从设备检索数据。通过单击顺序保存原始数据： 连接、 读取、 重命名和 保存。按照手册中的说明，在分析软件中处理和评估保存的数据。
- 简而言之，打开软件版本 3.0 并导入数据。使用自动标记调整偏移、开始和结束位置。如有必要，请删除伪影，然后单击 “适合”。这给出了一个读数，在几分钟内显示FITC-sinistrin清除率（t1 / 2）。t1/2随后用于计算tGFR32，33，如下所示 ：
注意：与制造商协商，用于猪的转换因子为20（表明体重的20%是细胞外空间），而不是大鼠为21.33（tGFR以mL / min为单位）和小鼠为14，616.8（tGFR以μL / min为单位）。这是因为GFR被精确测量为细胞外液34，35的函数，而细胞外液又取决于体重36。
13.仔猪安乐死
- CLP 12 小时后收集 3 mL 血液以进行进一步的生化分析。
- 通过静脉注射0.2mL / kg的20%戊巴比妥钠和苯妥英钠的预混合混合物对仔猪实施安乐死。
- 在将仔猪带到太平间之前，收获右肾进行组织病理学研究。
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Representative Results
在本节中，我们首次介绍了在新生猪中使用透皮GFR的代表性数据。我们使用盲肠结扎和穿刺模型，该模型先前已被证明可以降低肾功能28。因此，我们假设在我们的CLP猪中，与AKI对应的GFR应该急剧下降，这应该在透皮GFR装置上检测为清除时间增加（t1/2），从而验证其在猪中的使用。纳入7头雄性仔猪，3头假仔猪和4头败血症仔猪。两组的体重相当（图3A）。正如预期的那样，28，12小时败血症增加了C反应蛋白（CRP）的血清水平，CRP是一种菌血症和败血症标志物（图3B）。显示了假仔猪与败血症仔猪中代表性的FITC-sinsinstrin清除率曲线（图4 A，B），通过叠加假和败血症曲线来显示AKI（图4C）。AKI表现为CLP猪曲线下面积增加。当假曲线放置在CLP曲线上时，可以明显看到这一点。假手术组和败血症组中FITC-sinistrin的平均半衰期分别为114和537分钟（图5A）。假手术组的平均GFR为体重的5.1mL / min / 100 gm，而在脓毒症组中，为1.06 mL / min / 100 g体重（图5B）。当探头移位时，排除了另一只动物，这扰乱了间隙曲线和时间。假猪血清肌酐（急性肾损伤的生物标志物）12小时没有变化，但在败血症猪中从~0.6mg/dL增加到1.08mg/dL（图6）。
图1：盲肠结扎手术。（A） 盲肠识别并带到外部。 （B） 在用针刺穿之前，用丝绸领带在底部结扎盲肠。 请点击此处查看此图的大图。
图2：透皮装置与皮肤的附着。（A） 在贴上胶片之前剃掉的皮肤。 （B） 附着在粘性贴剂上的透皮GFR装置。 请点击此处查看此图的大图。
图3：代表性结果。（A ）本研究中使用的仔猪体重和（B）机械通气假和败血症公仔猪的血清C反应蛋白（CRP ）水平（ 未配对t检验）。 请点击此处查看此图的大图。
图4：机械通风假仔猪和化粪公仔猪中代表性的FITC-sinsinstrin清除曲线。（A ） 12 小时假发作， （B） 12 小时败血症。化脓性猪表现为肾功能受损，表现为曲线下面积增加。黑色数据点表示原始数据，蓝线表示三格拟合，绿线表示 95% 置信区间，红线表示过滤后的数据。 （C） 代表性曲线的叠加，以反映化粪池猪与基线的差异程度。脓毒症曲线（红色）显示FITC辛尼斯特林的清除率最小，表明AKI。 请点击此处查看此图的大图。
图5：代表性结果。（A ） FITC-sinstrin 半衰期和 （ B） 机械通气假和败血症公仔猪中的 GFR 图（非配对 t 检验）。 请点击此处查看此图的大图。
图6：机械通气假仔猪和败血症公仔猪的血清肌酐。 （单因素方差分析检验）。 请点击此处查看此图的大图。
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Discussion
本文描述了在机械通气、麻醉的新生猪模型中使用微型透皮 GFR 监测仪和 FITC-siniststrin 确定猪肾功能的实际步骤。以前的论文已经在啮齿动物11，12，14中建立了实验性透皮GFR方案，但在猪中不存在方案。
最近，人们一直在探索替代动物模型，以解决顽固性疾病并减轻人类肾脏疾病的负担。不幸的是，由于大小、解剖学和生理学差异，这些方法中的许多都有翻译限制。与人类相比，啮齿动物的肾脏解剖学和病理生理学存在重大差异37。由于人类和猪系统具有相似的解剖学和功能特征，猪模型可能是人类疾病的更现实的病理生理模型38，39。猪现在被广泛用于描述病理生理学和药物开发。随着猪基因组的发表，以及疾病特异性模型的成功转基因生产，猪模型将在转化研究中发挥更关键的作用40，41。
菊粉清除率仍然是最被接受的GFR测定方法，但由于需要连续输注菊粉，膀胱导管插入术以及其耗时和繁琐的性质，因此在大型动物模型中是不切实际的42。在临床前研究中，血清肌酐和血尿素氮 （BUN） 通常用于测量肾功能，但由于肌酐在肾小管中分泌，尿素在脱水时越来越多地被重吸收，因此这些标志物在估计肾功能方面证明很差5，43。至关重要的是，当用作猪肾功能的标志物时，发现肾小管肌酐分泌会导致GFR被高估6。此外，由于它们的身体习惯，与啮齿动物相比，肌酐的升高更有可能在大型动物模型中出现。一项针对小鼠的研究表明，盲肠结扎后 6 小时血清肌酐升高 1.5 倍44。先前，我们发现在CLP28后6小时新生猪的肌酐升高。在这项研究中，我们将动物饲养了更长的时间，在盲肠结扎后~12小时，以便有足够的时间进行显着的AKI和随后的肌酐升高。与我们之前的研究一样，我们证实了通过血清CRP（一种炎症和脓毒症标志物）水平升高来诱导败血症。在这项研究中，正如以前的论文所显示的那样，CLP后脓毒症的严重程度取决于结扎的长度和穿刺次数44。
使用碘海醇测量猪GFR的方案先前已在猪37中得到验证，但相比之下，透皮GFR程序是一个显着的改进。它不那么麻烦，避免了重复的血液或尿液采样，并提供了肾功能的实时窗口以及在同一只动物中进行重复连续测量的可能性45。本研究为猪透皮GFR测定提供了实用指南。
正如其他小组所确定的那样，最关键的步骤是将装置正确固定在动物身上并推注FITC-sinistrin。测量装置必须很好地固定在皮肤表面，以防止走线上的移动伪影。因为猪的毛发比啮齿动物少，所以不需要使用脱毛膏。可能只需要用剪子刮干净剃须。这最大限度地减少了与脱毛相关的FITC-sinistrin半衰期增加，其机制未知12。为了正确固定，需要双面胶贴片和胶带将设备固定到位。最佳的器械放置位置是外侧胸壁和腹腹区域。这些区域与较少的运动伪影相关。
当注射FITC-sinistrin时，必须通过一次流体运动将正确的整个剂量注射到静脉中。当进样中断并重新启动时，它会在间隙曲线上产生多个“迷你峰”。尾静脉通常用于小型啮齿动物，但耳静脉为猪提供了更易于接近和突出的路线。插管可以放置在耳静脉中，以便在有意识的猪中进行多次测量。在采样时间中需要注意的一个重要区别是，与啮齿动物（~1-2小时）相反，猪的持续时间更长（~4小时），这接近FITC-sinistrin从循环中清除所需的时间。据我们所知，这是第一篇详细介绍猪通过FITC-siniststrin清除透皮GFR的论文。因此，没有引用可供参考。通过与制造商协商得出~4h的测量时间。该采样时间与先前在其他非啮齿动物哺乳动物中验证透皮GFR的研究相当14。
在评估仔猪透皮 GFR 时，必须考虑几个因素。众所周知，单隔间模型会显着高估 GFR46;我们使用更准确的三室动力学模型，在血浆、细胞外空间和更深的成分之间提供静脉注射标志物的三向通信46。此外，这些是在非常深的麻醉下~12小时的机械通气仔猪。由于麻醉会影响肾功能47，48，因此在需要长时间镇静或实验性操作需要额外麻醉和GFR监测的手术中，可能值得考虑这一点。最后，也许也是最关键的是，新生仔猪的肾脏系统仍在发育，肾单位未成熟，其功能仅为成年动物的一小部分49。因此，它们表现出较低的GFR和肾功能50。
如前所述，猪透皮 GFR 不是血液中辛黄链淀粉浓度的绝对量度。它只是对荧光随时间衰减的估计12。使用转换因子试图通过以毫升/分钟表示GFR来缓解这种情况。然而，由于转换因子依赖于细胞外空间，而细胞外空间又依赖于体重34，35，36，因此，如果不控制体重，或者如果细胞外空间没有准确定义51，52，则可能存在广泛的变化。
此外，皮肤色素沉着似乎会影响经皮FITC-siniststrin清除率12，31。在我们的研究中，我们发现色素沉着的猪表现出信号减弱。在一个例子中，我们没有在一头颜色较深的猪身上检测到信号。然而，由于色素动物12的背景信号趋于降低，我们发现GFR值在很大程度上是可比的。一种解决方案是在放置设备时选择皮肤颜色较浅的区域。由于这些猪主要用于疾病的手术模型，涉及多种形式的照明和热源，因此必须通过从周围皮肤吸收的反射光 来 考虑GFR迹线上的潜在运动伪影12。一种解决方案可能是在记录期间尽量减少红外光或用箔纸覆盖设备。
综上所述，本研究提供了一种简单可靠的方法，用于使用FITC-sinistrin清除率的透皮测量新生猪肾小球滤过率。此外，我们的数据支持该系统在评估急性肾损伤情况下的肾功能方面的效用。
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Disclosures
没有。
Acknowledgments
这项研究得到了美国国立卫生研究院授予Adebiyi博士的R01 DK120595和R01 DK127625的支持。本文内容完全由作者负责，并不一定代表美国国立卫生研究院的官方观点。感谢MediBeacon GmbH现场总监Daniel Schock-Kusch博士的建议。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Alpha - Chloralose | Sigma-Aldrich | C0128-25G | Used for maintanining anesthesia |
| Black braided silk 3-0 | Surgical Specialties | SP117 | Silk tie for blood vessel traction and ligation |
| Centrifugation machine AccuSpin 8C | Fischer Scientific | 75-008-821 | Used to extract plasma from whole blood sample |
| Endotracheal Tube 3.0 uncuffed | Progressive Medical International | 1109021995 | Inserted through tracheostomy |
| FITC-Sinistrin 1.0 g | MediBeacon Inc. | FTCF S001 | Store at room temp and protect from light |
| GEM Premier 3000 Blood gas analyzer | Instrumentation Laboratory | 5700 | For bedside blood gas analysis |
| Heating Pad medium size 20 in x 29 in | Adroit Medical Systems | V029 | Connects to heat therapy pump |
| HTP-Heat Therapy Pump | Adroit Medical Systems | HTP | Allows you to set temperature as needed. |
| IDEXX Catalyst One | IDEXX Laboratories | 89-92525-00 | Plasma creatinine analysis |
| Invasive blood pressure catheter 3.5Fr | Millar | SPR-524 | Inserted in femoral artery |
| IV adminstration set with flow regulator | True Care | TCRTCBINF033G | Used to connect IV fluid bag to vein catheter |
| Ketamine | Covetrus | 68317 | Used for induction of Anesthesia |
| MediBeacon analysis software version 3.0 | MediBeacon Inc. | N/A | Software program used for analysing data to obtain sinistrin clearance half life and curve |
| Millex-GV Syringe Filter Unit 0.22 µm | Millipore Sigma | SLGVR33RS | Syringe filter for chloralose injection |
| Neonate/Infant Ventilator | Sechrist Millennium | 20409 | Connected to air supply to provide ventilation through endotracheal tube |
| Phenobarbital Sodium + Phenytoin Sodium (Euthasol) | Covetrus | 72934 | Used for euthanasia |
| Ringer Lactate 500 mL bag | Baxter | 2B2323Q | Maintanence fluid infusion |
| Sterile Gloves | Henry Schein | 104-5920 | Used by operator during surgery |
| Sterile Gown | Halyard Health | 95021 | Used by operator during surgery |
| Steril Towel | Medline | 42131704 | Used as drape to maintaine sterile field when operating |
| Suture 3-0 silk reverse cutting needle | Ethicon | NC1842168 | Used for suturing abdominal wall layers |
| Transdermal Mini GFR Monitor | MediBeacon Inc. | TDM004 | Battery and USB connector included in package |
| Transdermal monitor adhesive patch | MediBeacon Inc. | PTC-SM001 | Doubl sided adhesive patch for GFR probe |
| Umbilical Tape 1/8 in x 20 yds | Fisher Scientific | NC9303017 | To secure endotracheal tube |
| Venous Catheter size PE/5 | Micro medical tubing | BB31695 | For femoral vein cannulation |
| Xylazine | Covetrus | 61035 | Used for induction of anesthesia |
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