Summary

ייצור ואפיון אורגנואידים מסרטן המעי הגס SW1222 בקו תאים במטריצת פפטיד אולטרה-קצרה להרכבה עצמית

Published: May 03, 2024
doi:

Summary

פרוטוקול זה נועד להעריך פפטידים ביו-פונקציונליים להרכבה עצמית עבור הידבקות תאים, מורפולוגיה אורגנואידית וביטוי גנים על ידי אימונוסטיין. אנו נשתמש בקו תאי סרטן המעי הגס כדי לספק דרך חסכונית להשגת אורגנואידים לבדיקות אינטנסיביות.

Abstract

פפטידים אולטרה-קצרים להרכבה עצמית (SAPs) יכולים ליצור באופן ספונטני ננו-סיבים הדומים למטריצה חוץ-תאית. סיבים אלה מאפשרים היווצרות של הידרוג’לים תואמים ביולוגית, מתכלים ולא אימונוגניים. הוכחנו בעבר כי SAPs, כאשר הם מתפקדים ביולוגית עם מוטיבים שמקורם בחלבון, יכולים לחקות את מאפייני המטריצה החוץ תאיים התומכים בהיווצרות אורגנואידים במעי הגס. הידרוג’לים פפטידים ביו-פונקציונליים אלה שומרים על התכונות המכניות, יכולת הכוונון ויכולת ההדפסה של פפטיד האב המקורי תוך שילוב רמזים המאפשרים אינטראקציות בין מטריצת התא להגביר את הידבקות התא. מאמר זה מציג את הפרוטוקולים הדרושים כדי להעריך ולאפיין את ההשפעות של הידרוג’לים פפטידים ביו-פונקציונליים שונים על הידבקות תאים והיווצרות לומן באמצעות קו תאים סרטני אדנוקרצינומה המסוגל ליצור אורגנואידים של סרטן המעי הגס בצורה חסכונית. פרוטוקולים אלה יסייעו להעריך את ההשפעות של פפטיד הידרוג’ל ביו-פונקציונלי על הידבקות תאים והיווצרות לומינלית באמצעות צביעה חיסונית וניתוח תמונה פלואורסצנטית. קו התאים ששימש במחקר זה שימש בעבר לייצור אורגנואידים במטריצות שמקורן בבעלי חיים.

Introduction

בשנים האחרונות, פפטידים להרכבה עצמית (SAPs) התגלו כביו-חומרים מבטיחים ליישומי הנדסת רקמות. ל-SAPs תכונות ייחודיות, כולל היווצרות ספונטנית של ננו-סיבים, תאימות ביולוגית, מתכלות ביולוגית ואי-אימונוגניות, מה שהופך אותם למועמדים אטרקטיביים לפיתוח פיגומים1. SAPs שימשו בעבר יחד עם סוגים שונים של תאים, ובעיקר, SAPs אולטרה קצרים דווחו הקלו על אנקפסולציה של תאי גזע תוך שמירה על פלוריפוטנטיות שלהם לאורך תקופות ממושכות הכוללות יותר מ -30 מעברים עם שכיחות מינימלית של סטיות כרומוזומליות 2,3,4. לפיכך, התאמת SAPs לשימוש בהם בתרבות אורגנואידים היוותה צעד רציונלי עוקב.

אורגנואידים הם מבנים תלת-ממדיים מורכבים הנובעים מתאים פלוריפוטנטיים בודדים. מבנים אלה יוצרים סוגי תאים שונים, אשר לאחר מכן מתארגנים בעצמם כדי לשכפל את תהליכי ההתפתחות של גדילת עוברים ורקמות במבחנה5. מסגרת חדשנית זו התפתחה לכלי אדיר לחקירות חוץ גופיות, תוך שימור יעיל של התכונות הגנטיות, הפנוטיפיות וההתנהגותיות המאפיינות איברים in vivo 6. עם זאת, מכשול עיקרי במעבר מהספסל למיטה של ממצאים מבוססי אורגנואידים הוא הצורך בשחזור7. שונות זו בתוצאות מיוחסת בעיקר לקושי בהתמיינות מלאה של תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים לשושלות תאים מתמחים, בנוסף להיעדר ארכיטקטורת רקמות אותנטית ולמורכבות האינהרנטית בה נתקלים במודלים אורגנואידים. לאור העלייה בפופולריות של מחקרים מבוססי תאי גזע ואורגנואידים8, חלה עלייה בביקוש לביו-חומרים בעלי תכונות מכניות דינמיות ואתרי הדבקה דמויי אינטגרין או פיגומים עם יכולת פירוק מבוקרת 7,9. ניתן לכוונן תכונות אלה ביעילות באמצעות ניצול אסטרטגי של SAPs ביו-פונקציונליים.

SAPs הם רצפים קצרים של חומצות אמינו עם היכולת הטבועה להתארגן באופן ספונטני למבנים מוגדרים היטב10. פפטידים אלה מכילים לעתים קרובות שאריות הידרופוביות והידרופיליות לסירוגין, אשר מניעות את הרכבתם העצמית באמצעות אינטראקציות לא קוולנטיות, כולל קשרי מימן, אינטראקציות אלקטרוסטטיות והשפעות הידרופוביות11,12. תהליך ההרכבה העצמית של פפטידים אלה מונע בעיקר על ידי הצורך למזער את האנרגיה החופשית של המערכת. כאשר הם נמצאים בסביבה מימית, השאריות ההידרופוביות נוטות להתקבץ יחד כדי למזער את חשיפתן למים, בעוד שהשאריות ההידרופיליות מתקשרות עם מולקולות המים שמסביב. תופעה זו מובילה להיווצרות ננו-מבנים שונים. במקרה זה, פפטידים אולטרה-קצרים להרכבה עצמית יוצרים ננו-סיבים בעלי מאפיינים התלויים ברצף הפפטיד ובתנאי הסביבה 2,12,13,14,15,16. הפפטידים האלה מאמצים קונפורמציה של β סיבובים, שבה גדילי פפטידים בודדים מתיישרים במקביל או נגד מקבילים זה לזה, ומיוצבים על-ידי קשרי מימן (איור 1). נוכחותם של יונים חיוביים מאיצה את תהליכי ההרכבה העצמית המובילים להיווצרות ננו-סיבים.

ננו-סיבים פפטידים זוהו כבעלי יכולת מולדת ללכוד כמויות משמעותיות של מים. מאפיין זה מאפשר יצירת הידרוג’ל, אשר לאחר מכן מתבטא כחלל תלת מימדי תואם ביולוגית ומתכלה התורם לשגשוג וצמיחה תאית. ננו-סיבים פפטידים אלה בהרכבה עצמית מחקים באופן מורכב את התכונות הטופוגרפיות הטבועות בסביבת המטריצה החוץ-תאית הטבעית (ECM)1. דמיון זה מעניק לתאים סביבה המחקה את סביבת המחיה הפיזיולוגית שלהם, ומקדם עוד יותר פעילות תאית מיטבית17. יתר על כן, הרבגוניות הטבועה בפפטידים אלה מאפשרת מידה ניכרת של כוונון4. יכולת הסתגלות כזו מאפשרת שינויים בתכונות המטריצה, כגון קשיחות, קינטיקה ג’לציונית ונקבוביות. התאמות אלה מושגות באמצעות שינויים ברצף הפפטידים. כתוצאה מכך, פפטידים להרכבה עצמית (SAPs) התגלו כמרכיבים מרכזיים במדע הביו-חומרים העכשווי, בשימוש נרחב כפיגומים להתחדשות רקמות ולתרבית תאית13,17.

אחד היתרונות הקריטיים של פפטידים בהרכבה עצמית הוא יכולתם להיות מסונתזים ומשתנים בקלות ברמה המולקולרית. יתרון זה מאפשר שילוב של קבוצות פונקציונליות ספציפיות או מוטיבים ביו-אקטיביים ברצף הפפטידים, מה שמאפשר תכנון של פפטידים בעלי תכונות ופונקציות מותאמותאישית 18,19,20 (איור 1B). לדוגמה, ניתן לתכנן SAPs ביו-פונקציונליים כך שיחקו את ה-ECM ויקדמו התמיינות באמצעות פפטיד RGD19,21. פפטיד בן-IKVAV דווח גם כמגביר באופן משמעותי את הביטוי של סמנים ספציפיים לנוירונים בשל המוטיטי הספציפי לליגנד22. ניתן גם להנדס פפטידים אלה כך שיציגו מולקולות ביו-אקטיביות, כגון פפטידים קושרי אינטגרין, כדי לשפר את הישרדות התא23. לבסוף, SAPs ביו-פונקציונליים אחרים פותחו כדי לקדם אנגיוגנזה על ידי הכללת המוטיבים IKVAV ו- YIGSR במבנים שלהם24.

SAPs ביו-פונקציונליים שדווחו בפרסום מוקדם יותר מראים כי ניתן לשנות עוד יותר הרכבה עצמית על ידי הכללת הפפטיד הנאיבי שממנו נגזר SAPהביו-פונקציונלי 25. תערובות SAP אלה יכולות גם לספק מגוון רחב של פורמולציות SAP הנבדלות זו מזו בפעילות הביוכימית ובתכונות הפיזיקוכימיות שלהן. לדוגמה, הפפטיד האמפיפילי IIFK הוא SAP אולטרה-קצר שיכול לעמוד בביו-פונקציונליזציה עם מוטיבים שונים, כפי שמודגם על-ידי שילוב מוטיב IKVAV (איור 1B). שני הפפטידים יכולים ליצור ננו-סיבים, גם לבד וגם ביחד. כל נוסחה יוצרת הידרוג’לים בעלי תכונות פיזיקליות שונות (איור 2)

עם זאת, בגלל המגוון הרחב של תמורות פוטנציאליות וחלופות המתקבלות מהביו-פונקציונליזציה של SAPs, יש צורך לספק אפשרות מהירה וחסכונית לבדיקת אורגנואידים. מועמד אחד להערכה אורגנואידית אינטנסיבית וחסכונית כזו הוא קו התאים SW1222, הנגזר מאדנוקרצינומה של המעי הגס האנושי26,27. לתאי SW1222 יש מאפיינים המאפשרים את צבירתם למבנים תלת-ממדיים הדומים לאורגנואידים, מה שהופך אותם למודל אידיאלי לחקר התפתחות רקמות ויישומי רפואה רגנרטיבית. תאי SW1222 זוהו כמסוגלים לייצר אורגנואידים בשל ביטוי היתר הפנימי שלהם של הגן LGR5 27. יצירת אורגנואידים מתאי גזע בודדים LGR5+ הוצגה באופן משכנע בעבר, כמו גם הנטייה של תאי SW1222 להשיג מאפיינים מורפולוגיים של אורגנואיד סרטן המעי הגס28.

במאמר שיטות זה אנו מציגים פרוטוקולים מפורטים להערכה ולאפיון ההשפעות של פפטידים ביו-פונקציונליים שונים על הידבקות תאים והיווצרות לומן באמצעות תאי SW1222 (איור 3). על ידי מתן נהלים שלב אחר שלב ושיטות ניתוח הדמיה, אנו מקווים להציע תובנות יקרות ערך לגבי ייצור ביולוגי של אורגנואידים והערכה של מטריצות SAP פשטניות עבור תרבית אורגנואידים.

Protocol

1. חיץ והכנת תמיסה הערה: כל הריכוזים המוצהרים הם ריכוזים סופיים. הוסף סרום בקר עוברי (FBS) ופניצילין-סטרפטומיצין בריכוז סופי של 10% ו -1%, בהתאמה, כדי להכין את המדיום של Dulbecco של Iscove שונה (IMDM). יש לאחסן בחושך ב-4°C למשך עד חודש אחד. ערבבו את MgCl2 (3 מילימול), סוכרו?…

Representative Results

ראשית, הערכנו את התאים שגדלו בצלחת של 24 בארות במשך 7 ימים באמצעות הדמיית שדה בהיר. זיהינו צבירים קטנים של תאים שמתאספים לאורגנואידים במהלך השבוע, כפי שניתן לראות באיור 4. שיטת סריקה מבוקרת יכולה לעקוב אחר ניידות התאים והאורגנואידים בין ימים שונים. באופן כללי, הסתכלנו על האבו…

Discussion

הפוטנציאל העצום של SAPs במחקר ביו-רפואי מודגש על ידי הגמישות ויכולת ההסתגלות שלהם באמצעות ביו-פונקציונליזציה. עם מערך כה נרחב של תמורות, האתגר מתעורר בבדיקה יעילה ובקביעת התצורות המבטיחות ביותר עבור יישומים ספציפיים, במיוחד במחקר אורגנואידים. פתרון מהיר וחסכוני הוא בעל חשיבות עליונה. קו הת…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה כספית על ידי אוניברסיטת המלך עבדאללה למדע וטכנולוגיה. המחברים מודים למענק קרן הסיד של KAUST ולקרן החדשנות של KAUST שהוענקו על ידי החדשנות והפיתוח הכלכלי של KAUST. המחברים מבקשים להודות למעבדות הליבה של KAUST למדעי הביולוגיה וההדמיה על תמיכתן באפיון ביולוגי ובניתוח מיקרוסקופיה.

Materials

1x PBS Gibco 14190144
6-well plate, tissue culture treated Corning 07-200-83
10x PBS, no calcium, no magnesium Gibco 70011044
16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free Thermo Scientific 28906
24-well plate, tissue culture treated Corning 09-761-146
96-well black plate, tissue culture treated Corning 07-200-565
alamarBlue Cell Viability Reagent Invitrogen DAL1025
Anti-Ezrin antibody, rabbit monoclonal Abcam ab40839 Secondary used: anti-rabbit Dylight 633
Anti-pan Cadherin antibody, rabbit polyclonal Abcam ab16505 Secondary used: anti-rabbit Alexa 488
Anti-ZO1 tight junction antibody, goat polyclonal Abcam ab190085 Secondary used: anti-goat Alexa 488
BSA Sigma-Aldrich A9418
Cellpose 2.0 NA NA Obtained from https://github.com/MouseLand/cellpose
Confocal Laser Scanning Microscope with Airyscan ZEISS LSM 880
DAPI Invitrogen D1306
Donkey anti-Goat IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 Invitrogen A-11055
Glycine Cytiva GE17-1323-01
Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 Invitrogen A-11008
Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Secondary Antibody, DyLight 633 Invitrogen 35562
Heat Inactivated Fetal Bovine Serum (HI FBS) Gibco 16140071
ImageJ 1.54f NIH NA
IMDM Gibco 12440079
LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit, for mammalian cells Invitrogen L3224
Magnesium Chloride, hexahydrate (MgCl2 6 H2O) Sigma-Aldrich M2393
Matrigel for Organoid Culture, phenol-red free Corning 356255 Refered in the manuscript as Matrigel or basement membrane matrix.
Microscope, brightfield
Microscope, EVOS Thermo Scientific EVOS M7000
OriginPro 2023 (64-bit) 10.0.0.154 OriginLab Corp NA
Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL) Gibco 15140122
Peptide P (Ac,Ile,Ile,Phe,Lys,NH2) Lab-made NA Can be custom-made by peptide manufacturers such as Bachem.
Peptide P1 (Ac, Ile, Ile, Phe, Lys, Gly, Gly, Gly, Arg, Gly, Asp, Ser, NH2) Lab-made NA Can be custom-made by peptide manufacturers such as Bachem.
Peptide P2 (Ac, Ile,Ile,Phe,Lys,Gly,Gly,Gly,Ile,Lys,Val,Ala,Val,NH2) Lab-made NA Can be custom-made by peptide manufacturers such as Bachem.
Rhodamine Phalloidin Invitrogen R415
Round Cover Slip, 10 mm diameter VWR 631-0170
Scanning Electron Microscope Thermo Fisher – FEI TENEO VS
Sterile 30 μm strainer Sysmex 04-004-2326
sucrose Sigma-Aldrich S1888
SW1222 cell line ECACC 12022910
Triton x-100 Thermo Scientific 85111
Trypsin-EDTA 0.25% Gibco 25200056
Tween 20 Sigma-Aldrich P1379
UltraPure water Invitrogen 10977015

References

  1. Susapto, H. H., et al. Ultrashort peptide bioinks support automated printing of large-scale constructs assuring long-term survival of printed tissue constructs. Nano Letters. 21 (7), 2719-2729 (2021).
  2. Loo, Y., et al. A chemically well-defined, self-assembling 3D substrate for long-term culture of human pluripotent stem cells. ACS Applied Bio Materials. 2 (4), 1406-1412 (2019).
  3. Loo, Y., et al. Self-assembled proteins and peptides as scaffolds for tissue regeneration. Advanced Healthcare Materials. 4 (16), 2557-2586 (2015).
  4. Loo, Y., et al. Peptide bioink: self-assembling nanofibrous scaffolds for three-dimensional organotypic cultures. Nano Letters. 15 (10), 6919-6925 (2015).
  5. Ho, B. X., Pek, N. M. Q., Soh, B. -. S. Disease modeling using 3D organoids derived from human induced pluripotent stem cells. International Journal of Molecular Sciences. 19 (4), 936 (2018).
  6. Li, Y., Tang, P., Cai, S., Peng, J., Hua, G. Organoid based personalized medicine: from bench to bedside. Cell Regeneration. 9 (1), 21 (2020).
  7. Kim, S., et al. Tissue extracellular matrix hydrogels as alternatives to Matrigel for culturing gastrointestinal organoids. Nature Communications. 13 (1), 1692 (2022).
  8. Kaushik, G., Ponnusamy, M. P., Batra, S. K. Concise review: current status of three-dimensional organoids as preclinical models. Stem Cells. 36 (9), 1329-1340 (2018).
  9. Gjorevski, N., et al. Designer matrices for intestinal stem cell and organoid culture. Nature. 539 (7630), 560-564 (2016).
  10. Hauser, C. A., et al. Natural tri- to hexapeptides self-assemble in water to amyloid beta-type fiber aggregates by unexpected alpha-helical intermediate structures. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (4), 1361-1366 (2011).
  11. Lakshmanan, A., Zhang, S., Hauser, C. A. E. Short self-assembling peptides as building blocks for modern nanodevices. Trends in Biotechnology. 30 (3), 155-165 (2012).
  12. Rauf, S., et al. Self-assembling tetrameric peptides allow in situ 3D bioprinting under physiological conditions. Journal of Materials Chemistry B. 9 (4), 1069-1081 (2021).
  13. Bilalis, P., et al. Dipeptide-based photoreactive instant glue for environmental and biomedical applications. ACS Applied Materials & Interfaces. 15 (40), 46710-46720 (2023).
  14. Abdelrahman, S., et al. The impact of mechanical cues on the metabolomic and transcriptomic profiles of human dermal fibroblasts cultured in ultrashort self-assembling peptide 3D scaffolds. ACS Nano. 17 (15), 14508-14531 (2023).
  15. Moretti, M., et al. Selectively positioned catechol moiety supports ultrashort self-assembling peptide hydrogel adhesion for coral restoration. Langmuir. 39 (49), 17903-17920 (2023).
  16. Alhattab, D. M., et al. Fabrication of a three-dimensional bone marrow niche-like acute myeloid Leukemia disease model by an automated and controlled process using a robotic multicellular bioprinting system. Biomaterials Research. 27 (1), 111 (2023).
  17. Abdelrahman, S., et al. The impact of mechanical cues on the metabolomic and transcriptomic profiles of human dermal fibroblasts cultured in ultrashort self-assembling peptide 3D scaffolds. ACS Nano. 17 (15), 14508-14531 (2023).
  18. Habibi, N., Kamaly, N., Memić, A., Shafiee, H. Self-assembled peptide-based nanostructures: smart nanomaterials toward targeted drug delivery. Nano Today. 11 (1), 41-60 (2016).
  19. Yan, Y., et al. Enhanced osteogenesis of bone marrow-derived mesenchymal stem cells by a functionalized silk fibroin hydrogel for bone defect repair. Advanced Healthcare Materials. 8 (3), 1801043 (2018).
  20. Kisiday, J., et al. Self-assembling peptide hydrogel fosters chondrocyte extracellular matrix production and cell division: implications for cartilage tissue repair. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (15), 9996-10001 (2002).
  21. Hogrebe, N. J., et al. Independent control of matrix adhesiveness and stiffness within a 3D self-assembling peptide hydrogel. Acta Biomaterialia. 70, 110-119 (2018).
  22. Wu, F. J., Lin, H. C. Synthesis, self-assembly, and cell responses of aromatic IKVAV peptide amphiphiles. Molecules. 27 (13), 4115 (2022).
  23. Cringoli, M. C., et al. Bioadhesive supramolecular hydrogel from unprotected, short d,l-peptides with Phe-Phe and Leu-Asp-Val motifs. Chemical Communications. 56 (20), 3015-3018 (2020).
  24. Pulat, G. O., Gökmen, O., Çevik, Z. B. Y., Karaman, O. Role of functionalized self-assembled peptide hydrogels in in vitro vasculogenesis. Soft Matter. 17 (27), 6616-6626 (2021).
  25. Pérez-Pedroza, R., et al. Fabrication of lumen-forming colorectal cancer organoids using a newly designed laminin-derived bioink. International Journal of Bioprinting. 9 (1), 633 (2022).
  26. Ashley, N., Yeung, T. M., Bodmer, W. F. Stem cell differentiation and lumen formation in colorectal cancer cell lines and primary tumors. Cancer Research. 73 (18), 5798-5809 (2013).
  27. Yeung, T. M., Gandhi, S. C., Wilding, J. L., Muschel, R., Bodmer, W. F. Cancer stem cells from colorectal cancer-derived cell lines. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (8), 3722-3727 (2010).
  28. Sato, T., et al. Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).
  29. Pachitariu, M., Stringer, C. Cellpose 2.0: how to train your own model. Nature Methods. 19 (12), 1634-1641 (2022).
  30. Stringer, C., Wang, T., Michaelos, M., Pachitariu, M. Cellpose: a generalist algorithm for cellular segmentation. Nature Methods. 18 (1), 100-106 (2021).
  31. Adan, A., Kiraz, Y., Baran, Y. Cell proliferation and cytotoxicity assays. Current Pharmaceutical Biotechnology. 17 (14), 1213-1221 (2016).
  32. Humphries, M. J. Cell-substrate adhesion assays. Current Protocols in Cell Biology. , (2001).
  33. Munevar, S., Wang, Y. -. l., Dembo, M. Distinct roles of frontal and rear cell-substrate adhesions in fibroblast migration. Molecular Biology of the Cell. 12 (12), 3947-3954 (2001).
  34. Djomehri, S., Burman, B., González, M. E., Takayama, S., Kleer, C. G. A reproducible scaffold-free 3D organoid model to study neoplastic progression in breast cancer. Journal of Cell Communication and Signaling. 13 (1), 129-143 (2018).
  35. Puschhof, J., et al. Intestinal organoid cocultures with microbes. Nature Protocols. 16 (10), 4633-4649 (2021).
  36. Matthews, J. M., et al. OrganoID: A versatile deep learning platform for tracking and analysis of single-organoid dynamics. PLOS Computational Biology. 18 (11), 1010584 (2022).
  37. Herpers, B., et al. Functional patient-derived organoid screenings identify MCLA-158 as a therapeutic EGFR × LGR5 bispecific antibody with efficacy in epithelial tumors. Nature Cancer. 3 (4), 418-436 (2022).
  38. Borten, M. A., Bajikar, S. S., Sasaki, N., Clevers, H., Janes, K. A. Automated brightfield morphometry of 3D organoid populations by OrganoSeg. Scientific Reports. 8 (1), 5319 (2018).
  39. Bergdorf, K. N., et al. Immunofluorescent staining of cancer spheroids and fine-needle aspiration-derived organoids. STAR Protocols. 2 (2), 100578-100578 (2021).
  40. Yang, Z., Xu, H., Zhao, X. Designer self-assembling peptide hydrogels to engineer 3D cell microenvironments for cell constructs formation and precise oncology remodeling in ovarian cancer. Advanced Science. 7 (9), 1903718 (2020).
  41. Yadav, N., et al. Ultrashort peptide-based hydrogel for the healing of critical bone defects in rabbits. ACS Applied Materials & Interfaces. 14 (48), 54111-54126 (2022).
  42. Alshehri, S., Susapto, H. H., Hauser, C. A. E. Scaffolds from self-assembling tetrapeptides support 3D spreading, osteogenic differentiation, and angiogenesis of mesenchymal stem cells. Biomacromolecules. 22 (5), 2094-2106 (2021).

Play Video

Cite This Article
Perez-Pedroza, R., Moretti, M., Hauser, C. A. E. Fabrication and Characterization of Colorectal Cancer Organoids from SW1222 Cell Line in Ultrashort Self-Assembling Peptide Matrix. J. Vis. Exp. (207), e66060, doi:10.3791/66060 (2024).

View Video