Osteosarkom Model Farelerde Geleneksel Çin Tıbbının Kaynatma Formülü için Gavaj Stratejisi
Summary
Protokol, örnek olarak osteosarkom fare modelinde Yiqi Jiedu kaynatma ile kaynatma formülü ve gavaj tekniğinin ayrıntılı bir standardizasyon sürecini sağlar. Hayvanların korunmasını açıklar ve araştırma verilerinin güvenilirliğini artırır, in vivo kaynatma formüllerinin terapötik etkinliğini ve moleküler mekanizmalarını araştırmak için etkili stratejiler sağlar.
Abstract
Kaynatma formülü, geleneksel Çin tıbbında en sık kullanılan dozaj şeklidir ve hastaların spesifik sendromlarına göre hızlı etki, kolay emilim ve bireyselleştirilmiş tedavi ile karakterize edilen trans-oral uygulama ile binlerce yıldır klinik uygulamada uygulanmaktadır. Kaynatma formülünün kalitesi, geleneksel Çin tıbbının klinik etkinliğinden doğrudan sorumludur; Bu nedenle, kaynatma formülünün standardizasyon süreci, öznel faktörlerin neden olduğu kaynatma kalitesindeki farklılıkları önlemek için önemlidir. Bu arada, klinik deneylerin yapılmasının sınırlamaları nedeniyle, fareler gibi insan hastalıkları taşıyan küçük hayvanlar, geleneksel Çin tıbbı için kaynatma formülü de dahil olmak üzere farklı müdahalelerin terapötik etkinliğini ve kapsamlı mekanizmalarını araştırmak için tıbbi araştırmalarda sıklıkla kullanılmaktadır. Sonuç olarak, önemli bir trans-oral uygulama yöntemi olarak, yetenekli gavaj tekniği, her model hayvana eşit miktarda ilaç uygulanmasını sağlayacak ve doğru deneysel sonuçlara yol açacak potansiyel yemek borusu hasarını ve ilaç dökülmesini önlemek için özellikle önemlidir. Ayrıca, hayvan refahını korumak ve kullanılan hayvan sayısını en aza indirmek için standartlaştırılmış kaynatma formülü hazırlama yöntemi ve vasıflı gavaj stratejisi gereklidir. Burada, örnek olarak osteosarkom fare modelinde Yiqi Jiedu kaynatma ile kaynatma formülü ve gavaj tekniğinin ayrıntılı bir standardizasyon sürecini bildirdik. Etkinlik, tümör hacmine göre değerlendirildi. Bu protokol, hayvanların korunmasını en üst düzeye çıkaracak ve araştırma verilerinin güvenilirliğini artıracak, bu nedenle in vivo olarak geleneksel Çin tıbbı için kaynatma formülünün terapötik etkinliğini ve moleküler mekanizmalarını araştırmak için etkili stratejiler sağlayacaktır.
Introduction
Kaynatma formülü, geleneksel Çin tıbbının ve sıvı tıbbi ilaçlarınen yaygın kullanılan dozaj şeklidir 1,2. Geleneksel Çin tıbbının kaynatma formülü, otların ıslatıldıktan sonra suda kaynatılması ve ardından tortuların atılması için süzülmesiyle işlenir.
Kaynatma formülü, özellikle geleneksel Çin tıbbında kanıta dayalı tedavinin özelliklerine uygun olarak, klinik gerekliliklere göre kişiselleştirilebildiğinden, trans-oral uygulama yoluyla bu dozaj formu, spesifik ve yeri doldurulamaz avantajlarla binlerce yıldır klinik uygulamada uygulanmaktadır 3,4. Kaynatma formülünün kalitesi doğrudan klinik etkinlik ile ilgilidir. Bu nedenle, kaynatma formülü, aktif bileşenlerin maksimum düzeyde ekstrakte edilmesini ve korunmasını sağlamak için standartlaştırılmış kaynatma yöntemlerinin ilkelerine göre hazırlanmalıdır3. Bu arada, kaynatmaya hazır ilaçlar, klinik uygulamada kullanılan çiğ Çin bitkilerinin ana şeklidir; Reçete edilen kaynatmaya hazır ilaçların kalite standartları ve üretim yöntemleri Çin Farmakopesi2 hükümlerine uygun olmalıdır. Ayrıca, reçete edilen kaynatmaya hazır ilaçlar, özel bir ilaç kabında ısıtılarak kaynatılmadan önce en az 30 dakika soğuk içme suyuna batırılmalıdır5. Çalışmalar, aktif bileşenlerin çoğunun iki kez kaynatma yoluyla ekstrakte edilebileceğini göstermiştir ve Tıbbi Kurumlarda Geleneksel Çin İlaçlarının Kaynatma Odalarının İdaresi için Uygulama Kuralları da kaynatma işleminin iki kez yapılmasını öngörmektedir 4,6,7. Sert dokulu veya tonikli olanlar gibi özel Çin otları reçete edilirse, kaynatma süresinin uzatılması önerilir. Reçete edilen kaynatmaya hazır ilaçların ıslatıldığı kaptan başlayarak, kaynatma formülü ile doğrudan temas eden kaynatma kapları ve saklama kapları, kimyasal olarak stabil olmalı ve güveç, seramik, cam ve paslanmaz çelik gibi kapaklara sahip olmalıdır. Bununla birlikte, alüminyum ve sıradan plastik ürünler kullanılmamalı, terapötik etkinliği azaltacak ve hatta zararlı etkiler yaratacak olası kimyasal reaksiyonlardan kaçınmak için demir ve diğer aşındırıcı kaplar yasaklanmalıdır 4,6,7.
Klinik deneylerin yapılmasının sınırlamaları nedeniyle, fareler gibi insan hastalıklarını taşıyan küçük hayvanlar, geleneksel Çin tıbbının kaynatma formülü de dahil olmak üzere farklı müdahalelerin terapötik etkinliğini ve kapsamlı mekanizmalarını araştırmak için tıbbi araştırmalarda sıklıkla kullanılır 8,9; Bununla birlikte, insanlardan farklı olarak, kaynatma formülleri her gün hazırlanmalı, birlikte karıştırılmalı ve klinik uygulamada günde 2 kez taze olarak uygulanmalıdır. Hayvanlar, ilaçlarını gerekli dozajla zamanında gönüllü olarak alamazlar ve geleneksel Çin tıbbı ile ilgili hayvan deneylerinin çoğu, şu anda kaynatma formüllerinin gavaj bazlı oral uygulamasıdır. İn vivo hayvan deneyleri için kullanılan kaynatma formülleri önceden hazırlanmalı, aliquoted’lanmalı, -20 °C’de saklanmalı ve kullanımdan hemen önce çözülmelidir 3,4,10. Ayrıca, standart altı hayvan immobilizasyonu ve gavaj iğnesi manipülasyonu, gereksiz yaralanma ve olumsuz duygu riskini artırır. Bu nedenle, trans-oral ilaç dağıtımının önemli bir yöntemi olarak, yetenekli gavaj tekniği, olası özofagus yaralanmasını ve ilaç dökülmesini önlemek için özellikle önemlidir, böylece her model hayvanın doğru deneysel sonuçlar elde etmek için eşit miktarda reçeteli bitkisel ilaç almasını sağlar. Burada, geleneksel Çin tıbbının kaynatma formülü için bir gavaj protokolü sunuyoruz.
Protocol
Representative Results
Discussion
Geleneksel Çin tıbbında reçete edilen bitkilerin klinik etkinliği büyük ölçüde uygulanan doz ve dozaj formu ile ilişkilidir; Bu nedenle, standartlaştırılmış bir kaynatma stratejisinin oluşturulması ve yetenekli bir uygulama süreci, klinik uygulamada ve deneysel sonuçların güvenilirliğinin arttırılmasında gereklidir.
Bu çalışmada, ilk olarak, geleneksel Çin tıbbının klinik uygulamasında kullanılan Çin bitkilerinin standartlaştırılmış kaynatma için ayrı…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Mevcut çalışma, (1) Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81973877 ve 82174408), (2) Çin Ulusal Anahtar Ar-Ge Programı (2020YFE0201600), (3) Şanghay En Öncelikli Araştırma Merkezi inşaat projesi (2022ZZ01009), (4) Hastane TCM Hazırlığının Endüstriyel Dönüşümü için Şanghay İşbirlikçi İnovasyon Merkezi ve (5) Şanghay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Bütçesi kapsamındaki Araştırma Projeleri (2021LK047).
Materials
| 143B cell line | ATCC | CRL-8303 | osteosarcoma cell line |
| Anesthesia machine | Shenzhen RWD Life Technology Co.,Ltd | R500IP | The Equipment of Anesthesia mice |
| Automatic cell counter | Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd | IC1000 | Counting cells |
| BALB/c athymic mice | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | Male | Animal |
| Barbed skullcap herb | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 20230606 | Decoction-ready medicines |
| Basement Membrane Matrix | Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd | 356234, BD, Matrigel | re-suspende cells |
| Centrifuge tube (15 mL) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, Corning | Centrifuge the cells |
| Elbow gavage needle (12-gauge/ 55 mm) | RWD Life Science Co., Ltd. | C21014-12 | Component of gastric perfusion device |
| Gauze | Haishi Hainuo Group Co., Ltd. | LC45 | Decoction filter |
| Ginseng | Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd. | 20220704-2 | Decoction-ready medicines |
| Hedyotis diffusa | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 2023071107 | Decoction-ready medicines |
| isoflurane | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | Anesthesia mice |
| Micro-volume syringe | Shanghai high pigeon industry and trade Co., Ltd | 0-50 μL | Inject precise cells into the tibia |
| Phosphate-buffered saline | Beyotime Biotechnology | ST447 | wash the human osteosarcoma cells |
| Rubber bands | Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd. | XPJ | Fixing gauze on the measuring cup |
| Syringe (1 mL ) | Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd. | SBM0040 | Component of gastric perfusion device |
| Trypsin (0.25%) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 25200056, Gibco | trypsin treatment of cells |
References
- Gao, S. Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction. Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition). (21), 12 (2005).
- Chinese Pharmacopoeia Commission. . Pharmacopoeia of the People’s Republic of China. , (2015).
- An, Y., et al. Interpretation on specification of traditional Chinese medicine decoction. Herald Med. 42 (11), 1648-1652 (2023).
- Chen, S., et al. Research strategies in standard decoction of medicinal slices. China J Chinese Materia Medica. 41 (8), 1367-1375 (2016).
- Luo, F. Effect of soaking traditional Chinese medicine before decoction on active components. Shanghai Yiyao. 40 (9), 63-64 (2019).
- Liu, F., Chen, M. On the standardization of decocting methods of modern decoction. Global Trad Chinese Med. 7 (5), 377-378 (2014).
- Li, X., et al. Influence of decocting times and instrument on the quality of decoction. J Trad Chinese Med. 50 (6), 550-552 (2009).
- Li, X., et al. Herbal decoctosome is a novel form of medicine. Sci China. Life Sci. 62 (3), 333-348 (2019).
- Lan, Y., Hu, Y., Huang, W., Tang, S. Reflections on PK – PD model based on animal experiments for study of Chinese medicine. Lishizen Med Materia Medica Res. 34 (2), 395-397 (2023).
- Li, Y., Bai, M., Song, Y., Guo, H., Miao, M. Research and reflection on standard decoction of Chinese materia medica. Chinese Trad Herbal Drugs. 49 (17), 3977-3980 (2018).
- . Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers Available from: https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/estimating-maximum-safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics-adult-healthy-volunteers (2005)
- Chang, J., et al. Intratibial osteosarcoma cell injection to generate orthotopic osteosarcoma and lung metastasis mouse models. J Vis Exp. (176), 63072 (2021).
- He, C. Laboratory animal science. , (2006).
- Patten, A. R., Fontaine, C. J., Christie, B. R. A comparison of the different animal models of fetal alcohol spectrum disorders and their use in studying complex behaviors. Fronti Pedia. 2, 93 (2014).
- Jones, C. P., Boyd, K. L., Wallace, J. M. Evaluation of mice undergoing serial oral gavage while awake or anesthetized. J Am Assoc Lab Animal Sci. 55 (6), 805-810 (2016).
- Recena Aydos, L., et al. Nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in C57bl/6 models. Nutrients. 11 (12), 3067 (2019).
