Summary

Fare Ortotopik Karaciğer Transplantasyonunda Cuff Tekniği ile Vasküler Rekonstrüksiyon

Published: December 01, 2023
doi:

Summary

Bu protokol, fare ortotopik karaciğer transplantasyonunda manşet tekniği kullanılarak damar rekonstrüksiyonu için teknik bilgi sağlar.

Abstract

Fare ortotopik karaciğer transplantasyonu, karaciğer iskemisi ve reperfüzyon hasarının altında yatan mekanizmaları araştırmak için etkili bir metodolojidir. Bununla birlikte, teknik zorluklar, bu değerli deneysel modelin kullanılmasının ve bu becerilerin gelecek nesillere aktarılmasının önünde bir engel teşkil etmektedir. Bu prosedürün en zorlu yönü, portal ven (PV), infrahepatik inferior vena kava (IHIVC) ve suprahepatik inferior vena kava dahil olmak üzere vasküler rekonstrüksiyondur. Sütürler yerine plastik manşetlerin kullanılması, daha düzgün PV ve IHIVC rekonstrüksiyonuna izin verir. Greft damarının ucuna intravenöz bir kateterden yapılmış bir manşet takılarak ve manşetin alıcı damara yerleştirilmesiyle damarlar yeniden yapılandırılır. En önemli iki husus, geminin iç lümenini düzgün bir şekilde görselleştirmek ve aşırı güç kullanımından kaçınmaktır. Amacımız, alıcı cerrahisinde manşet tekniği kullanılarak yapılan vasküler rekonstrüksiyonlara teknik bir bakış sağlamaktır. Manşet tekniği için bu teknik ipuçlarının, mikro cerrahların vasküler rekonstrüksiyonu kolaylaştırmasına ve araştırmalarını ilerletmesine yardımcı olması bekleniyor.

Introduction

Fare ortotopik karaciğer nakli (MOLT) ilk olarak 1991 yılında bildirilen etkili bir deneysel yöntemdir1. Genetik olarak modifiye edilmiş fareler ve çeşitli araştırma reaktifleri kullanan bu deneysel model, sıcak ve soğuk iskemi ve reperfüzyon yaralanmalarının araştırılmasında çok önemli bir rol oynamıştır. Bununla birlikte, modelin yüksek teknik karmaşıklığı, karaciğer nakli için temel tıbbın geliştirilmesini engellemiştir2. MOLT üç ana adımı içerir: (1) karaciğerin donör fareden alınması, (2) arka masa cerrahisi ve (3) karaciğerin alıcıya implantasyonu. Bu alıcı prosedürler arasında vasküler anastomoz en büyük zorluğu oluşturmaktadır. Suprahepatik inferior vena kava anastomozu tipik olarak elle dikilerektamamlanırken, infrahepatik inferior vena kava (IHIVC) ve portal ven (PV) elle dikilen dikişler yerine plastik manşetler kullanılarak daha verimli bir şekilde yeniden yapılandırılabilir.

Anhepatik dönem, alıcının doğal karaciğerinin çıkarılması ile greft implantasyonu arasındaki süreyi ifade eder. Tutarlı sonuçlar elde etmek için, anhepatik süreyi 20 dakikadan daha az bir süre ile sınırlamak zorunludur. Sonuç olarak, bu modeli kullanan çalışmalar belirli kurumlarla sınırlandırılmıştır 3,4,5,6,7,8,9. MOLT’un çeşitli aşamaları arasında, anhepatik zamanı en aza indirmek ve başarılı bir transplantasyon sağlamak için düzgün PV ve IHIVC rekonstrüksiyonu elde etmek çok önemlidir.

PV ve IVC rekonstrüksiyonu genellikle vasküler manşetler kullanılarak gerçekleştirilir, çünkü manşet tekniği elle dikilen sütürlere kıyasla vasküler anastomozu basitleştirir 2,5,8. Vasküler manşetin hazırlanması ve manşetin güvenli bir şekilde takılmasında yer alan teknik, alıcı vasküler rekonstrüksiyonun karmaşıklığını önemli ölçüde etkiler. Amacımız, manşet yöntemiyle ilgili çok sayıda teknik ipucu için ayrıntılı görsel rehberlik sağlamak ve böylece öğrenme eğrisini azaltmaktır. Bu video klipler, alıcı cerrahisi sırasında manşetin damarlara nasıl takılacağının ve PV ve IHIVC’nin nasıl yeniden yapılandırılacağının net bir şekilde anlaşılmasını sağlayacaktır.

Protocol

Deney protokolü, Kyoto Üniversitesi Hayvan Deneyleri Komitesi tarafından onaylandı. Çalışmada, ticari bir kaynaktan elde edilen, 10 haftadan büyük ve 25 g ile 30 g arasında ağırlığa sahip C57BL / 6 fareleri kullanıldı (bkz. Tüm hayvanlar% 2.5 izofluran ile uyuşturuldu (kurumsal olarak onaylanmış protokoller izlenerek), belirli patojen içermeyen koşullar altında tutuldu ve tüm deneysel prosedürler Kyoto Üniversitesi’nin Hayvan Deneyleri Yönetmeliğine uygun olarak yürütüldü….

Representative Results

PV rekonstrüksiyonu, portal venin klempini açtıktan sonra kıvrımlılık olmadığında ve karaciğer düzgün bir şekilde perfüze edildiğinde başarılıdır. Anhepatik süre 20 dakikanın altında olmalıdır, çünkü 25 dakikayı aşan anhepatik zamanlar fare ölüm riskini artırır. Greftten kan yetersizliği yoksa IHIVC rekonstrüksiyonu başarılı kabul edilir. Greftin organ koruma solüsyonu kullanılarak 1 saat soğuk sıcaklıklarda saklanması, reperfüzyondan 6 saat sonra …

Discussion

Vasküler rekonstrüksiyonu öğrenmek, başarılı MOLT’a ulaşmanın en zorlu yönüdür. Manşetin kalitesi, farelerin küçük boyutu göz önüne alındığında, rekonstrüksiyonun zorluğunu önemli ölçüde etkiler5. Bu makale, manşet hazırlığı, takılması ve rekonstrüksiyonu için ayrıntılı bir protokol sağlar.

Manşet hazırlığı ve bağlantı 2,5 ile ilgili önceki raporlardan büyük fa…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu çalışma, 2022 JST temel araştırması (Japon Organ Nakli Derneği) tarafından desteklenmiştir.

Materials

16 G intravenous catheter TERUMO SR-FF2032 IHIVC cuff
20 G intravenous catheter TERUMO SR-FF1651 PV cuff
8-0 braid silk Natsume Seisakusho CR9-80B2 8-0 silk
Belzer UW Cold Storage Solution  Astellas Organ preservation fluid
Bulldog clamp B BRAUN FB329R Bulldog clamp
C57BL/6 mice   Oriental Bio Service
Isoflurane inhalation solution Viatris Anesthesic
Micro Blunted Tips 0.1 mm x 0.06 mm  F.S.T 11253-20 Straight microforceps
Micro Serrefine Clamp Applicator with Lock F.S.T 18056-14 Vessel clip applicator
Micro Serrefines  F.S.T 18055-4 Vessel clip
No.11 Spare Blades FEATHER Safety Razor 11 Blades
Ophthalmic scissor, round handle B BRAUN FD103R Microscissor
Plastic rectangular-shaped container   Daiso 10 cm long, 15 cm wide and 6 cm high
SuperGrip Tips F.S.T 00649-11  Curved microforceps
SZX7 Olympus SZX7 Microscope

References

  1. Qian, S. G., Fung, J. J., Demetris, A. V., Ildstad, S. T., Starzl, T. E. Orthotopic liver transplantation in the mouse. Transplantation. 52 (3), 562-564 (1991).
  2. Yokota, S., et al. Orthotopic mouse liver transplantation to study liver biology and allograft tolerance. Nat Protoc. 11 (7), 1163-1174 (2016).
  3. Shen, X. D., et al. Inflammatory responses in a new mouse model of prolonged hepatic cold ischemia followed by arterialized orthotopic liver transplantation. Liver Transpl. 11 (10), 1273-1281 (2005).
  4. Kageyama, S., et al. Ischemia-reperfusion injury in allogeneic liver transplantation: A role of CD4 T cells in early allograft injury. Transplantation. 105 (9), 1989-1997 (2021).
  5. Li, T., Hu, Z., Wang, L., Lv, G. Y. Details determining the success in establishing a mouse orthotopic liver transplantation model. World J Gastroenterol. 26 (27), 3889-3898 (2020).
  6. Tian, Y., Rüdiger, H. A., Jochum, W., Clavien, P. A. Comparison of arterialized and nonarterialized orthotopic liver transplantation in mice: Prowess or relevant model. Transplantation. 74 (9), 1242-1246 (2002).
  7. Steger, U., Sawitzki, B., Gassel, A. M., Gassel, H. J., Wood, K. J. Impact of hepatic rearterialization on reperfusion injury and outcome after mouse liver transplantation. Transplantation. 76 (2), 327-332 (2003).
  8. Chen, J., et al. A review of various techniques of mouse liver transplantation. Transplant Proc. 45 (6), 2517-2521 (2013).
  9. Kojima, H., et al. T cell carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1-T cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 3 cross talk alleviates liver transplant injury in mice and humans. Gastroenterology. 165 (5), 1233-1248 (2023).
  10. Yokota, S., Yoshida, O., Ono, Y., Geller, D. A., Thomson, A. W. Liver transplantation in the mouse: Insights into liver immunobiology, tissue injury, and allograft tolerance. Liver Transpl. 22 (4), 536-546 (2016).

Play Video

Cite This Article
Tanaka, K., Uchida, Y., Kageyama, S., Nakamura, K., Hirao, H., Kadono, K., Kawamoto, H., Saga, K., Kidoguchi, Y., Watanabe, T., Hatano, E. Vascular Reconstruction with the Cuff Technique in Mouse Orthotopic Liver Transplantation. J. Vis. Exp. (202), e66215, doi:10.3791/66215 (2023).

View Video