Summary
Resistenza delle piante alla masticazione insetti erbivori possono essere testati in diversi modi. Qui, ci dimostrano come set-up una scelta e una non-scelta sperimentare con il modello vegetale Arabidopsis thaliana per identificare la resistenza contro il parassita specie Rapae di Pieris.
Abstract
Le larve della farfalla piccolo cavolo bianco sono una piaga in ambito agricolo. Questa specie bruco feed da piante della famiglia del cavolo, che includono molte colture come il cavolo, i broccoli, cavolini di Bruxelles ecc Allevamento degli insetti avviene su piante di cavolo nella serra. Almeno due gabbie sono necessari per l'allevamento di Pieris Rapae. Uno per le larve e l'altro per contenere gli adulti, le farfalle. Al fine di indagare il ruolo di ormoni vegetali e sostanze chimiche tossiche in pianta resistenza a questo parassita degli insetti, dimostriamo due esperimenti. In primo luogo, la determinazione del ruolo di acido jasmonic (JA - un ormone vegetale spesso indicato nella resistenza agli insetti), nella resistenza alla masticazione insetti Rapae di Pieris. Caterpillar crescita può essere confrontato sulle piante wild-type e mutanti compromessa nella produzione di JA. Questo esperimento è considerato "No Choice", perché le larve sono costretti a sopravvivere in un singolo impianto che sintetizza o è carente in JA. In secondo luogo, abbiamo dimostrato un esperimento che indaga il ruolo di glucosinolati, che sono utilizzati come deposizione (deposizione delle uova) segnali. Qui, usiamo Arabidopsis WT e mutanti compromessa nella produzione di glucosinolati in un esperimento di "scelta" in cui è consentito farfalle donne di scegliere di deporre le uova sulle piante di entrambi genotipo. Questo video mostra il setup sperimentale per entrambi i test e risultati rappresentativi.
Protocol
No Choice Experiment:
- Con attenzione allegare la pianta Arabidopsis di interesse in un bicchiere di plastica. In questo caso: Col-0 (WT) e un mutante compromessa la produzione di JA. Assicurati di limitare i danni alle foglie. Per questo io uso il retro di questo pennello.
- Utilizzare un pennello fine per fare una larve appena nati dalla colonia di cavolo.
- Posto con attenzione la larva sulle piante di Arabidopsis.
- Larva di peso al giorno 4, 7, 10. CONSIGLIO: crescere le vostre piante in condizioni di giorno breve (8 ore di luce) per aumentare la crescita vegetativa (1 larva in grado di soddisfare il suo ciclo di vita completo il 1 ° impianto).
Scelta Esperimento:
- Due piante sono selezionate, una per ogni genotipo. Migliore è quello di coltivare piante nello stesso vaso, per limitare gli altri fattori, quali gli effetti cassetto, ecc
- Posizionare le piante in una gabbia farfalla.
- Seleziona una femmina fertile. Io di solito prendere una femmina che è attivamente le uova nella colonia di allevamento.
- Rilasciare la femmina nella gabbia con la scelta di due impianti per 24 ore.
SUGGERIMENTO 1: Per eliminare un effetto di apprendimento, non riutilizzare le femmine per i test di successiva scelta.
SUGGERIMENTO 2: Si può solo confrontare le piante che hanno un fenotipo simile crescita. In alternativa, si potrebbe montare una foglia di ogni genotipo in cima ad una beuta e confrontare le loro attrattiva per una femmina.
Si prega di visitare Annual Reviews di Biologia Vegetale per ulteriori informazioni su questo protocollo e immunità pianta insetti erbivori.
