Summary
De komst van site-specific recombinase (SSR) technologie en het Cre / lox systeem heeft geleid tot tal van ontwikkelingen in de moleculaire biologie, en heeft zichzelf bewezen als een waardevol instrument voor de beoordeling van gen-functie in transgene dieren. Dit interview bespreekt het mechanisme van de site van de specifieke recombinatie door cyclisatie recombinase (Cre) en hoe het gebruik van dit enzym heeft geleid tot de ontwikkeling van voorwaardelijke mutagenese, hetgeen aanzienlijke voordelen ten opzichte van de traditionele knock-out strategieën heeft.
Abstract
Site-specific recombinase (SSR) technologie maakt de manipulatie van gen structuur te verkennen genfunctie en is uitgegroeid tot een integraal instrument van de moleculaire biologie. Site-specifieke recombinasen zijn eiwitten die zich binden aan verschillende DNA-doelsequenties. De Cre / lox systeem werd het eerst beschreven in bacteriofagen in de jaren 1980. Cre-recombinase is een type I topoisomerase die site-specifieke recombinatie van DNA katalyseert tussen de twee loxP (locus van de X-over P1) sites. De Cre / lox systeem vereist geen co-factoren. LoxP sequenties bevatten verschillende bindingsplaatsen voor Cre recombinases dat een directionele kernsequentie waar recombinatie en herschikking plaats omringen. Wanneer de cellen loxP sites bevatten en die de Cre recombinase, een recombinatie gebeurtenis plaatsvindt. Dubbelstrengs DNA wordt geknipt op beide loxP sites door het Cre recombinase, herschikt, en geligeerd ("schaar en lijm"). Producten van de recombinatie gebeurtenis is afhankelijk van de relatieve oriëntatie van de asymmetrische sequenties.
SSR-technologie wordt vaak gebruikt als een instrument om genfunctie te verkennen. Hier is het gen van belang wordt geflankeerd door Cre doelsites loxP ("floxed"). Dieren worden vervolgens gekruist met dieren uiting van de Cre recombinase onder de controle van een weefsel-specifieke promotor. In weefsels die het Cre recombinase uitdrukken bindt aan doelsequenties en accijnzen van de floxed gen. Gecontroleerde gendeletie maakt het onderzoek naar gen-functie in specifieke weefsels en op verschillende tijdstippen. Analyse van de genen functie gebruik SSR-technologie --- voorwaardelijke mutagenese - heeft belangrijke voordelen ten opzichte van de traditionele knock-outs, waar gendeletie is vaak dodelijk.
