ERRATUM NOTICE
Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …
Summary
В этом видео, мы демонстрируем альтернативный метод для обнаружения и titering от вирусов с помощью ферментативного технику обнаружения антигена известный как иммунопероксидазного анализа. Здесь мы покажем вам, как собирать вирусную образцы, подготовить клетки для тестирования, и, наконец, иммунопероксидазного методом с использованием серийных разведений для определения вирусного титра.
Abstract
Расчет инфекционные вирусные титры представляет базовых и основных экспериментальных подхода для вирусологов. Классическая доска анализы не могут быть использованы для вирусов, которые не наносят существенного цитопатический эффект, который в случае штаммов 229E и OC43 от человека коронавирус (HCoV). Альтернативного анализа косвенных иммунопероксидазного (IPA) является описанное здесь для обнаружения и титрования этих вирусов. Чувствительные клетки инокулируют с серийным логарифмической разведения образцов в 96-луночного планшета. После вирусного роста, вирусные обнаружения АПИ дает инфекционным титром вируса, выраженное в "тканевой культуры инфекционная доза" (TCID50). Это означает разведение вируссодержащих образца при которой половина серии скважин лаборатории содержат репликации вируса. Этот метод является надежным методом для титрования HCoV в биологических образцах (клетки, ткани или жидкости).
Protocol
Полный текст протокола для этого экспериментальный подход доступен в протоколах Springer .
Tags
Микробиологии выпуск 14 М. протоколы прав коронавирус HCoV-229E HCoV-OC43 клеток и тканей образца титрования иммунопероксидазного анализа TCID50Erratum
Formal Correction: Erratum: Titration of Human Coronaviruses Using an Immunoperoxidase Assay
Posted by JoVE Editors on 04/01/2012.
Citeable Link.
A correction was made to: Titration of Human Coronaviruses Using an Immunoperoxidase Assay. A revised abstract was republished due to a publisher error.
Revised Abstract:
Determination of infectious viral titers is a basic and essential experimental approach for virologists. Classical plaque assays cannot be used for viruses that do not cause significant cytopathic effects, which is the case for prototype strains 229E and OC43 of human coronavirus (HCoV). Therefore, an alternative indirect immunoperoxidase assay (IPA) was developed for the detection and titration of these viruses and is described herein. Susceptible cells are inoculated with serial logarithmic dilutions of virus-containing samples in a 96-well plate format. After viral growth, viral detection by IPA yields the infectious virus titer, expressed as 'Tissue Culture Infectious Dose 50 percent' (TCID50). This represents the dilution of a virus-containing sample at which half of a series of laboratory wells contain infectious replicating virus. This technique provides a reliable method for the titration of HCoV-229E and HCoV-OC43 in biological samples such as cells, tissues and fluids. This article is based on work first reported in Methods in Molecular Biology (2008) volume 454, pages 93-102.
Original Abstract:
Calculation of infectious viral titers represents a basic and essential experimental approach for virologists. Classical plaque assays cannot be used for viruses that do not cause significant cytopathic effects, which is the case for strains 229E and OC43 of human coronavirus (HCoV). An alternative indirect immunoperoxidase assay (IPA) is herein described for the detection and titration of these viruses. Susceptible cells are inoculated with serial logarithmic dilutions of samples in a 96-well plate. After viral growth, viral detection by IPA yields the infectious virus titer, expressed as "Tissue Culture Infectious Dose" (TCID50). This represents the dilution of a virus-containing sample at which half of a series of laboratory wells contain replicating virus. This technique is a reliable method for the titration of HCoV in biological samples (cells, tissues or fluids).
