Summary
Stratégies pathogènes mycobactériens restent mal compris. Le taux de croissance lente de la plupart des espèces, la nature impénétrable de la paroi cellulaire, et les dangers de travailler avec des agents pathogènes font mycobactéries difficiles à étudier et sont largement responsables de notre mauvaise compréhension de ces organismes. Dans cette vidéo, nous allons démontrer la technique d'électroporation, qui consiste à soumettre les cellules à une impulsion brève électrique élevée pour permettre l'entrée de l'ADN. C'est la méthode la plus largement utilisée pour introduire de l'ADN dans les cellules mycobactériennes.
Abstract
De transformation à haut rendement est une limitation majeure dans l'étude des mycobactéries. Le genre Mycobacterium peut être difficile à transformer, ce qui est principalement causée par la paroi cellulaire épaisse et cireuse, mais elle est aggravée par le fait que la plupart des techniques moléculaires ont été élaborés pour les espèces lointainement liés tels que Escherichia coli et Bacillus subtilis. En dépit de ces obstacles, les plasmides mycobactériennes ont été identifiés et transformation de l'ADN de plusieurs espèces de mycobactéries ont été décrits. La méthode la plus efficace pour introduire l'ADN dans des mycobactéries est l'électroporation. De nombreux paramètres contribuent à la transformation réussie, telles que la espèce / souche, la nature de l'ADN transformant, le marqueur de sélection utilisé, le milieu de croissance, et les conditions pour l'impulsion de l'électroporation. Méthodes optimisées pour la transformation de deux lente et rapide aux petits planteurs sont détaillées ici. Efficacités de transformation pour les différentes espèces de mycobactéries et avec divers marqueurs de sélection sont signalés.
