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Biology

TRE重组酶的分子进化

Published: May 29, 2008 doi: 10.3791/791

Summary

在这里,我们报告TRE重组,通过定向,分子进化的一代。 TRE重组确认的HIV - 1病毒DNA的LTR序列内的一个预先定义的目标序列,切除和消灭前病毒从被感染的人体细胞。尽管还处于起步阶段,定向分子进化将允许创建自定义的酶,将作为分子的外科手术和分子医学工具。

Abstract

在这里,我们报告TRE重组,通过定向,分子进化的一代。 TRE重组确认的HIV - 1病毒DNA的LTR序列内的一个预先定义的目标序列,切除和消灭前病毒从被感染的人体细胞。

我们开始与CRE,一个38 kDa的重组,即承认一个34 bp的双链DNA序列loxP位知名。由于Cre重组可以有效地消除基因组序列,我们制定了一个可以去除5' - LTR和3' - LTR一个集成的HIV - 1病毒DNA序列之间的重组,裁缝。作为第一步,我们发现类似loxP位和重组活动测试的LTR网站内的序列。最初CRE和诱变的Cre库未能重组的HIV - 1病毒DNA的选择loxLTR网站。任何指示的分子进化过程的开始,至少需要剩余的活动,原来的非对称loxLTR序列分割成子集和测试再次重组活动。作为中间体,重组活动子集。通过反复的演进周期,接下来,重组图书馆丰富。随后,丰富图书馆的洗牌和重组。结合不同的突变,证明了协同和重组酶的重组loxLTR1和loxLTR2创建。这是证据,通过中间体的进化策略可以成功。共126演化周期后,个别重组酶功能和结构分析。最活跃的重组 - TRE - 创建19个氨基酸的改变。 TRE重组能够消费的HIV - 1前病毒基因组的HIV - 1感染的HeLa细胞(见“HIV - 1前病毒DNA切除使用一个演进的重组酶”,Hauber J.,海因里希Pette实验病毒学和免疫学研究所,德国汉堡)。虽然还处于起步阶段,定向分子进化将允许创建自定义的酶,将作为“分子手术”和分子医学工具。

Tags

细胞生物学,第15期,HIV - 1,TRE重组,位点特异性重组,分子进化
TRE重组酶的分子进化
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Cite this Article

Buchholz, F. Molecular Evolution ofMore

Buchholz, F. Molecular Evolution of the Tre Recombinase. J. Vis. Exp. (15), e791, doi:10.3791/791 (2008).

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