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Biology

Interview: HIV-1 Provirus-DNA Excision Mit einem Evolved Rekombinase

doi: 10.3791/793 Published: June 16, 2008

Summary

Aktuelle HIV-1-Strategien handeln, um den viralen Lebenszyklus zu unterdrücken, aber nicht effektiv beseitigen Infektion. Hier zeigen wir, dass ein technisch Rekombinase effizient Verbrauchsteuern integrierte HIV-1 Provirus-DNA aus dem Genom der infizierten Zellen.

Abstract

HIV-1 integriert sich in das Host-Chromosom von infizierten Zellen und weiterhin als Provirus durch long terminal repeats flankiert. Aktuelle Behandlungsstrategien in erster Linie Ziel-Virus-Enzyme oder Virus-Zell-Fusion, die Unterdrückung der viralen Lebenszyklus ohne Beseitigung der Infektion. Da die integrierte Provirus wird durch diese Ansätze, neue resistente Stämme von HIV-1 gezielten entstehen kann. Hier berichten wir, dass die gentechnisch Rekombinase Tre (siehe Molekulare Evolution der Tre-Rekombinase, Buchholz, F., Max-Planck-Institut für Molekulare Zellbiologie und Genetik, Dresden) effizient Verbrauchsteuern integrierte HIV-1 Provirus-DNA aus dem Genom der infizierten Zellen. Wir produzierten loxLTR mit viralen Pseudotypen und infizierten HeLa-Zellen zu untersuchen, ob Tre-Rekombinase kann Verbrauchsteuern das Provirus aus dem Genom des HIV-1 infizierten menschlichen Zellen. Ein Virus-Partikel-Releasing-Zelllinie wurde kloniert und transfiziert mit einem Plasmid, das Tre oder mit einer Kindersicherung Vektor. Rekombinase-Aktivität und Virus-Produktion überwacht wurden. Alle Assays demonstriert die effiziente Löschung der Provirus aus infizierten Zellen ohne sichtbare zytotoxische Wirkung. Diese Ergebnisse dienen als proof of principle, dass es möglich ist, eine Rekombinase entwickeln, um gezielt eine HIV-1 LTR und dass diese Rekombinase ist in der Lage Auslösen der HIV-1-Provirus aus dem Genom des HIV-1-infizierten menschlichen Zellen.

Bevor ein technisch-Rekombinase die therapeutische Arena betreten konnten, müssen jedoch erhebliche Hindernisse zu überwinden. Zu den wichtigsten Themen, mit denen wir konfrontiert sind eine effiziente und sichere Lieferung an Zielzellen und das Fehlen von Nebenwirkungen.

Protocol

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Bitte lesen Sie related videos mit dem Titel Principles of ortsspezifische Rekombinase (SSR)-Technologie und Molekulare Evolution der Tre-Rekombinase für weitere Informationen über ortsspezifische Rekombination und Technik der Website-Spezifität der Rekombinase Enzyme.

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Hauber, J. Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase. J. Vis. Exp. (16), e793, doi:10.3791/793 (2008).More

Hauber, J. Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase. J. Vis. Exp. (16), e793, doi:10.3791/793 (2008).

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