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Biology

Entrevista: HIV-1 DNA proviral Excisão Usando um Recombinase Evolved

doi: 10.3791/793 Published: June 16, 2008

Summary

Atuais estratégias de HIV-1 agem para suprimir o ciclo de vida viral, mas não efetivamente erradicar a infecção. Aqui, demonstramos que uma recombinase engenharia podem eficientemente consumo DNA integrado HIV-1 proviral do genoma das células infectadas.

Abstract

HIV-1 se integra ao cromossomo anfitrião de células infectadas e persiste como um provírus flanqueada por repetições terminais longas. Estratégias de tratamento atuais visam principalmente as enzimas do vírus ou vírus de células-fusion, suprimindo o ciclo de vida viral sem erradicar a infecção. Desde o provírus integrado não é visado por essas abordagens, novas cepas resistentes de HIV-1 podem surgir. Aqui, nós relatamos que a engenharia recombinase Tre (ver a evolução molecular do recombinase Tre, Buchholz, F., Instituto Max Planck de Biologia Celular e Genética, Dresden) eficientemente excises integrada DNA proviral do HIV-1 a partir do genoma de células infectadas. Produzimos loxLTR contendo pseudotipos viral e células HeLa infectadas examinar se Tre recombinase pode extirpar o provírus do genoma do HIV-1 células humanas infectadas. Um vírus de linha de células de partículas de liberação foi clonado e transfectadas com um plasmídeo expressando Tre ou com um vector de controlo parental. Atividade recombinase e produção de vírus foram monitorados. Todos os ensaios demonstraram a eliminação eficiente do provírus das células infectadas sem visíveis efeitos citotóxicos. Estes resultados servem como prova de princípio de que é possível evoluir um recombinase visar especificamente uma LTR do HIV-1 e que esta recombinase é capaz de extirpar o provírus HIV-1 a partir do genoma do HIV-1-infected células humanas.

Antes de uma recombinase engenharia poderia entrar na arena terapêutica, no entanto, obstáculos significativos precisam ser superados. Entre as questões mais críticas, que enfrentamos, são uma entrega eficiente e segura para células-alvo ea ausência de efeitos colaterais.

Protocol

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Por favor, veja vídeos relacionados intitulado Princípios do site-specific Recombinase Tecnologia (SSR) e Evolução Molecular do Recombinase Tre para obter mais informações sobre recombinação sítio-específico e de engenharia do site-especificidade de enzimas recombinase.

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Hauber, J. Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase. J. Vis. Exp. (16), e793, doi:10.3791/793 (2008).More

Hauber, J. Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase. J. Vis. Exp. (16), e793, doi:10.3791/793 (2008).

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