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Biology

Entrevista: El VIH-1 La escisión del ADN proviral uso de una recombinasa evolucionado

doi: 10.3791/793 Published: June 16, 2008

Summary

Actual del VIH-1 estrategias de actuar para suprimir el ciclo de vida del virus, pero no efectiva erradicación de la infección. Aquí, se demuestra que una recombinasa diseñado de manera eficiente los impuestos especiales integrados de VIH-1 proviral del ADN del genoma de las células infectadas.

Abstract

VIH-1 se integra en el cromosoma huésped de las células infectadas y persiste como un provirus flanqueado por repeticiones terminales largas. Las actuales estrategias de tratamiento dirigidas principalmente a las enzimas del virus o de fusión virus-célula, la supresión del ciclo de vida viral sin la erradicación de la infección. Dado que el provirus integrado no es víctima de estos enfoques, nuevas cepas resistentes del VIH-1 pueden surgir. Aquí, nos informan de que la ingeniería recombinasa Tre (ver evolución molecular de la recombinasa Tre, Buchholz, F., Instituto Max Planck de Biología Celular y Genética de Dresde) de manera eficiente los impuestos especiales del ADN integrado el VIH-1 proviral en el genoma de las células infectadas. Hemos producido loxLTR contiene pseudotipos viral y las células infectadas HeLa examinar si Tre recombinasa puede extirpar el provirus del genoma del VIH-1 las células humanas infectadas. Un virus de partículas de liberación de la línea celular fue clonado y transfectadas con un plásmido que expresa Tre o con un vector de control parental. Actividad recombinasa y la producción de virus fueron monitoreados. Todos los ensayos demostraron la eliminación eficiente de los provirus de las células infectadas sin visibles efectos citotóxicos. Estos resultados sirven como prueba de principio de que es posible desarrollar una recombinasa para dirigirse específicamente a un LTR del VIH-1 y que esta recombinación es capaz de extirpar el provirus VIH-1 del genoma del VIH-1-las células humanas infectadas.

Antes de una recombinación de ingeniería podría entrar en el campo terapéutico, sin embargo, importantes obstáculos que superar. Entre los temas más críticos, los que nos enfrentamos, es una entrega eficiente y segura a las células diana y la ausencia de efectos secundarios.

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Por favor, ver vídeos relacionados con el derecho de los Principios recombinasa específica de sitio (RSS) Tecnología y Evolución Molecular de la recombinasa Tre para obtener más información acerca de recombinación específica de sitio y la ingeniería del sitio de la especificidad de las enzimas recombinasa.

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Hauber, J. Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase. J. Vis. Exp. (16), e793, doi:10.3791/793 (2008).More

Hauber, J. Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase. J. Vis. Exp. (16), e793, doi:10.3791/793 (2008).

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