Ретроградная Маркировка ганглиозных клеток сетчатки путем применения фтор-Gold на поверхности верхний бугорок

Summary

Это видео описывает метод ретроградной маркировки РГК путем применения фтор-золото (FG) на поверхности верхний бугорок (SC). Техника включает бурение черепа, аспирационных коре, и применение желатина губкой по всей поверхности спины SC.

Abstract

Ганглиозных клеток сетчатки (РГК) в расчете имеет важное значение для оценки дегенерации сетчатки особенно при глаукоме. Надежная маркировка РГК имеет основополагающее значение для оценки влияния какого-либо лечения. У крысы, около 98% РГК, как известно, проект по контралатеральной верхний бугорок (SC) (Forrester и Peters, 1967). Применение фтор-золото (FG) на поверхности SC может маркировать почти все РГК, так что мы можем сосредоточиться на этой наиболее уязвимой сетчатки нейрона при глаукоме. Ф. занимают аксонов терминалов ганглиозных клеток сетчатки и на двусторонней основе транспортируется ретроградно ее РРОС в сетчатке. Сравните с ретроградной маркировки РГК, поставив FG на культю перерезана зрительного нерва в течение 2 дней, вмешательство РГК выживания сведена к минимуму. Сравните с крезиловый окрашивания фиолетовые пятна, которые РГК, amacrine клеток и эндотелия кровеносных сосудов в сетчатке глаза слой ганглиозных клеток, эта маркировка метод является более конкретным, чтобы РГК. Это видео описывает метод ретроградной маркировки РГК, применяя FG на поверхности SC. Хирургические процедуры включают в себя бурение черепа; аспирационных коры подвергать SC и применения желатина губкой по всей спинной поверхности КА показано на рисунке. Полезные советы как избежать массивного кровотечения и внутричерепного стремление СК получили.

Protocol

1. Анестезировать крыс внутри-перитонеального инъекции кетамина (80mg/kg) и ксилазина (8mg/kg) (объемное соотношение 2:1). Применить стерильных мазей смазки глаз, чтобы предотвратить высыхание роговицы во время операции.
2. Бритье головы меха (от глаза до уровня ушей) и зафиксировать голову на голову стадии зажим и установите его резцов в баре резца.
3. Disinfected рабочей зоне с 10% раствором повидон йод затем 70% спирта.
4. Вырезать кожи и мышц подвергать черепа и швы (сагиттальной, корональной и поперечных швов) (рис. 1). Применить болеутоляющее, bupivicaine как всплеск области разреза (не более 2 мг / кг).
5. Дрель черепе отверстие (диаметром 2х2 мм, 0,5 мм с обеих сагиттального и поперечного швов) с каждой стороны сагиттального шва. Избегайте разрыва оболочек мозга и синусов лежа под швами.
   
   
   Рисунок 1. Клейма на живые череп крысы.
   
   
6. Разрежьте мозговых оболочек к весне ножницами, не порвать.
7. Аспирируйте мозговой содержания, которое кроется за спинной поверхности верхний бугорок тщательно вакуумный насос и три контрольно-пропускных пунктов могут наблюдаться:
   1. Цвет ткани мозга меняется от серого до белого до серого
   2. остановить аспирационных когда бесцветный спинномозговой жидкости выходить
   3. Внимательно увеличить низкий уровень всасывания горизонтально, чтобы разоблачить желтоватый верхний бугорок покрыты оболочкой
8. Аспирируйте мозга контента через SC до четырех краев SC можно наблюдать прямо под микроскопом. Часть коры головного мозга удалены должны быть сведены к минимуму, чтобы избежать нежелательных побочных эффектов (например, двигательные нарушения). Будьте осторожны и не прикасайтесь пазухи.
9. Собрать жидкость в отверстие с мелкой полосой стерильные хлопковые, чтобы сделать поверхность SC как можно более сухой. Затем поместите тонким слоем желатина губки предварительно пропитанной 6% фтор-Gold на поверхности SC (FG занимают аксонов терминалов ганглиозных клеток сетчатки и на двусторонней основе транспортируется ретроградно ее РРОС в сетчатке).
10. Заполните отверстие gelfoam и закрыть рану кожи с шовным клипов.
11. Животных было позволено восстановить под лампой накаливания, чтобы согреться. Болеутоляющие, бупренорфин (100mcg/kg), применяется перорально в питьевой воде в течение 5 дней после маркировки SC.

Discussion

1. Почему использовать это хирургический метод для сетчатки количества клеток ганглия?
   
   У крысы около 98% от ганглиозных клеток сетчатки (РГК), как известно, проект по контралатеральной верхний бугорок (SC). Применение фтор-золота на поверхности SC может маркировать почти все РГК, так что мы можем сосредоточиться на этой наиболее уязвимой сетчатки нейрона при глаукоме. Сравните с ретроградной маркировки РГК, поставив FG на культю перерезана зрительного нерва в течение 2 дней, вмешательство РГК выживания сведена к минимуму. Сравните с крезиловый окрашивания фиолетовые пятна, которые amacrine клетки, РГК и эндотелий ячейки кровеносных сосудов в сетчатке глаза слоя клеток ганглия, этот метод является более конкретным, чтобы РГК.
   
   
2. Как избежать чрезмерного кровотечения?
   
   Во-первых, убедитесь, что крыса правильно наркозом, проверяя мышечный тонус и роговицы рефлекс. Недостаточное анестезии вызовет обширные кровотечения. Во-вторых, избежать операции, которые могут повредить синуса, таких как бурение слишком близко к швом или разрыв мозговых оболочек в стену пазухи. В-третьих, будьте осторожны, чтобы сохранить оболочки лежал на поверхностно SC нетронутыми особенно в области носа.
   
   
3. Сколько времени это займет, пока РГК помечены?
   
   Через четыре дня после маркировки SC, РГК могут быть помечены. Я обычно ждать семь дней для лучшего результата.