上丘表面上应用氟金逆行标记视网膜神经节细胞

Summary

该视频描述了应用表面上丘（SC）的氟金（FG）逆行标记研资局的方法。技术涉及的颅骨钻，吸皮层，整个SC背水面和应用明胶海绵。

Abstract

视网膜神经节细胞计数（研资局）是必不可少的评估，尤其是在青光眼视网膜变性。可靠的研资局的标签，是为任何治疗效果评估的基本。在大鼠的视网膜神经节细胞中，约98％是已知的项目对侧上丘（SC）（Forrester和彼得斯，1967年）。 SC的表面上应用氟金（FG）的标签，几乎所有的视网膜神经节细胞，使我们能够在这个最脆弱的视网膜神经集中在青光眼。 FG是采取了由视网膜神经节细胞的轴突终端和双边运输逆行其胞体在视网膜上。切断视神经断端2天FG逆行标记与研资局的比较，研资局生存的干扰降至最低。甲酚紫染色比较污渍的视网膜神经节细胞，无长突细胞在视网膜神经节细胞层血管的内皮细胞，这种标记方法是更具体的研资局。本视频介绍了SC的表面FG申请研资局逆行标记的方法。手术过程包括钻颅骨;吸皮质揭露SC和应用在整个SC的背水面明胶海绵显示。已获得有用的技巧，避免大量的颅​​内出血和SC的愿望。

Protocol

1. 麻醉大鼠腹腔注射氯胺酮（80mg/kg）和甲苯噻嗪（8mg/kg）（体积比为2:1）。应用无菌眼润滑剂油膏，以防止在手术过程中角膜干燥。
2. 剃的头皮毛（从眼睛到耳朵齐平）和固定头头部头部舞台上钳，并设置其门牙，门齿栏。
3. 消毒其次70％的酒精与10％的碘伏解决方案的操作面积。
4. 切开皮肤和肌肉，暴露颅骨和缝合线（矢状面，冠状和横向缝线）（图1）。作为一个切口面积飞溅（不超过2毫克/公斤），应用镇痛，布比卡因。
5. 钻一个颅骨矢状缝两侧的孔（直径为2 × 2毫米，0.5毫米从矢状和横向缝合）。避免破裂的脑膜和窦躺在下面的缝线。
   
   
   图1。活着大鼠颅骨上的标志 。
   
   
6. 弹簧剪刀剖开脑膜，避免撕裂。
7. 吸脑的内容，在于通过真空泵和可观察到3个检查站，仔细背水面上丘：
   1. 脑组织的变化，从灰色到白色至灰色的颜色
   2. 停止吸气时无色脑脊液出来
   3. 仔细放大吸水平最低水平暴露硬脑膜所涵盖的黄丘
8. 吸过SC的大脑的内容，直到4 SC的边缘，可直接在显微镜下观察。删除的脑皮层的部分应保持在最低限度，以避免不良的副作用（例如，运动功能障碍）。小心不要触摸窦。
9. 优良的无菌棉条纹与吸收液的SC表面尽可能干燥孔。然后，将预先浸泡6％氟金表面上的SC（FG是采取了由视网膜神经节细胞的轴突终端和双边运输逆行其胞体在视网膜）的明胶海绵薄薄的一层。
10. 用明胶海绵填充孔和关闭的皮肤伤口缝合剪辑。
11. 这些动物被允许恢复在白炽灯下，要注意保暖。镇痛，丁丙诺啡（100mcg/kg），是应用在饮水中口服，5天之后，资深大律师标签。

Discussion

1. 为什么要使用这种手术方法对视网膜神经节细胞计数？
   
   在大鼠视网膜神经节细胞中，约98％（研资局）是众所周知的对侧上丘（SC）的项目。 SC的表面上应用氟金标签几乎所有的视网膜神经节细胞，使我们能够在这个最脆弱的视网膜神经集中在青光眼。切断视神经断端2天FG逆行标记与研资局的比较，研资局生存的干扰降至最低。比较甲酚紫染色法的无长​​突细胞的污渍，研资局与血管内皮细胞在视网膜神经节细胞层，这种方法是更具体的研资局。
   
   
2. 如何避免失血过多？
   
   首先，确保正确检查肌张力和角膜反射麻醉大鼠。麻醉不足会引起广泛出血。二，避免行动，那将会伤害，如钻井太近，缝合或脑膜撕裂成窦壁窦。第三，要小心，保持硬脑膜躺在SC上的完整的表面，特别是在鼻腔地区。
   
   
3. 直到被标记的视网膜神经节细胞，需要多久？
   
   4天之后SC标签，研资局可以贴上标签。我通常等待更好的结果七天。