Summary
Bu video floro-altın (FG) üstün colliculus (SC) yüzeyine uygulanarak RGC retrograd etiketleme yöntem açıklanır. Tekniği, kafatası delme, korteks aspire ve SC tüm dorsal yüzey üzerinde jelatin sünger uygulayarak içerir.
Abstract
Retina ganglion hücre (RGC) sayma özellikle glokom retina dejenerasyonu değerlendirmek için esastır. Güvenilir RGC etiketleme, herhangi bir tedavi etkilerini değerlendirmek için esastır. Sıçan, RGCs yaklaşık% 98'i kontralateral üstün colliculus (SC) (Forrester ve Peters, 1967) proje için bilinir. Glokomda bu en hassas retina nöron odaklanmak böylece SC yüzeyinde floro-altın (FG) uygulanması, hemen hemen tüm RGCs etiketleyebilirsiniz. FG retina ganglion hücrelerinin akson terminalleri tarafından alınan ve bilateral retina somas retrograd taşınır. 2 gün boyunca transeksiyon optik sinir güdük FG koyarak RGC retrograd etiketleme ile karşılaştırın, RGC hayatta kalma müdahalenin en aza indirilmiştir. Lekeleri RGCs, amacrine retina ganglion hücre tabakasının kan damarı hücreleri ve endotel, bu etiketleme yöntemi RGC daha özel olduğunu cresyl violet boyama ile karşılaştırın. Bu video FG SC yüzeyine uygulanarak RGC retrograd etiketleme yöntemi açıklanmıştır. SC maruz korteks aspire ve SC tüm dorsal yüzey üzerinde jelatin sünger uygulayarak gösterilir; cerrahi işlemler kafatası delme. SC büyük intrakranial kanama ve aspirasyon önlemek için yararlı ipuçları verilmiştir.
Protocol
- Ketamin (80mg/kg) ve xylazine (8mg/kg) (2:1 hacim oranı)-periton içi enjeksiyon yoluyla sıçan uyuşturan. Ameliyat sırasında korneanın kurumasını önlemek için steril göz kayganlaştırıcı merhem uygulayın.
- Tıraş baş kürk (göz kulak seviyesi) ve kesici bar kesiciler kelepçe ve set bir kafa kafa sahnede baş düzeltmek.
- % 70 alkol% 10 povidon iyot çözeltisi ile dezenfekte operasyon alanı.
- Kafatası ve dikişler (sagital, koronal ve transvers sütür) (Şekil 1) maruz cilt ve kasların kesin. Analjezik, bupivakain kesi bölgesine sıçrama (2 mg / kg aşmayacak şekilde) uygulayın.
- Sagital sütürün her iki tarafta bir kafatası deliği (ø 2x2 mm, sagital ve transvers sütür hem de 0.5 mm) Matkap. Meninksler ve dikişlerle altında yatan sinüs rüptürü kaçının.
Şekil 1. Canlı sıçan kafatası özellikleridir.
- Kes, yaylı makas meninksler açmak yırtılmasını önlemek.
- Vakum pompası ve üç kontrol noktaları görülebilir tarafından dikkatle üstün colliculus dorsal yüzey üzerinde yatıyor serebral içerik aspire:
- , gri, beyaz, gri beyin dokusu değişiklikleri renkli
- renksiz beyin omurilik sıvısı geldiğinde aspire durdurmak
- sarımsı üstün colliculus dura kapsadığı ortaya çıkarmak için dikkatli bir şekilde yatay olarak düşük Emiş düzeyi Ayrıntı
- SC dört kenarları doğrudan mikroskop altında görülebilir kadar SC üzerinde beyin içeriği aspire edin. Kaldırılır serebral korteks kısmını, istenmeyen yan etkileri (örneğin, motor disfonksiyon) önlemek için minimum tutulmalıdır. Sinüs dokunmamaya özen gösterin.
- Mümkün olduğunca SC yüzey kuru yapmak için ince steril pamuk şerit ile delik sıvı emerler. Sonra ince bir tabaka jelatin sünger yerleştirmek önceden ıslatılır SC yüzey üzerinde% 6 Fluoro-Altın (FG retina ganglion hücrelerinin akson terminalleri tarafından alınan ve bilateral retina somas retrograd taşınır).
- Gelfoam ile delik doldurun ve dikiş klipler ile deri yara yakın.
- Hayvanların sıcak tutmak için akkor lamba altında kurtarmak için izin verildi. Analjezik, buprenorfin (100mcg/kg), SC etiketleme sonra 5 gün boyunca içme suyu sözlü olarak uygulanır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
- Neden retina ganglion hücre sayımı için bu cerrahi yöntem kullanılır?
Sıçan retina ganglion hücrelerinin yaklaşık% 98 (RGC) kontralateral üstün colliculus (SC) proje olduğu bilinmektedir. Glokomda bu en hassas retina nöron odaklanmak böylece floro-altın SC yüzey üzerine uygulanması, RGCs hemen hemen tüm etiketleyebilirsiniz. 2 gün boyunca transeksiyon optik sinir güdük FG koyarak RGC retrograd etiketleme ile karşılaştırın, RGC hayatta kalma müdahalenin en aza indirilmiştir. Kan damarlarının retina ganglion hücre tabakası lekeleri amacrine hücre, RGC ve endotelin hücre, bu yöntem, RGC daha özel olduğunu cresyl violet boyama ile karşılaştırın. - Aşırı kanama önlemek için?
İlk olarak, sıçan, kas tonusu ve kornea refleksi kontrol ederek düzgün bir şekilde anestezi olduğundan emin olun. Yetersiz anestezi geniş kanamaya neden olur. İkincisi, çok yakın dikiş delme veya sinüs duvarının içine meninksler yırtılması gibi sinüs zarar verecek işlemleri kaçının. Üçüncü olarak, dura, özellikle nazal bölgede yüzeysel yalan SC sağlam tutmak için dikkatli olun. - RGCs etiketli kadar ne kadar sürer?
Dört gün sonra SC etiketleme RGC, etiketli olabilir. Ben normalde daha iyi sonuçlar için yedi gün boyunca bekleyin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Yazarlar, Amerikan Sağlık Yardımcısı Vakfı Ulusal Glokom Programı desteği için teşekkür etmek istiyorum.
References
- Ahmed, A. K. M. F., Dong, K., Sugioka, K., Yamadori, T. Retrograde double labeling of retinal ganglion cells in the newborn and adult albino rat. Neurosci. Protocols. 1, 1-11 (1996).
- Chan, H. C., Chang, R. C. C., Ip, A. K. C., Chiu, K., Yuen, W. H., Zee, S. Y., So, K. F. Neuroprotective effects of Lycium barbarum Lynn on protecting retinal ganglion cells in an ocular hypertension model of glaucoma. Experimental Neurology. 203, 269-273 (2007).
- Forrester, J., Peters, A. Nerve fibers in the optic nerve of rat. Nature. 214, 245-247 (1967).
- Ji, J. Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. W., Hugon, J., So, K. F. CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway. European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).
- Li, R. S., Chen, B. Y., Tay, D. K., Chan, H. H. L., Pu, M. L., So, K. F. Melanopsin-Expressing Retinal Ganglion Cells Are More Injury-Resistant in a Chronic Ocular Hypertension Model. Investigative. Ophthalmology & Visual Science. 47, 2951-2958 (2006).
