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Biology

Fluoro गोल्ड के अनुप्रयोग द्वारा रेटिना नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं के प्रतिगामी सुपीरियर Colliculus के भूतल पर लेबल

Published: June 17, 2008 doi: 10.3791/819

Summary

इस वीडियो बेहतर colliculus (एससी) की सतह पर fluoro सोने (FG) लागू करने के द्वारा RGC के प्रतिगामी लेबलिंग की विधि का वर्णन करता है. खोपड़ी तकनीक ड्रिलिंग शामिल है, aspirating प्रांतस्था, और अनुसूचित जाति के पूरे पृष्ठीय सतह पर जेलाटीन स्पंज लागू.

Abstract

रेटिना नाड़ीग्रन्थि सेल गिनती (RGC) विशेष रूप से मोतियाबिंद में रेटिना अध: पतन का मूल्यांकन आवश्यक है. विश्वसनीय RGC लेबलिंग किसी भी उपचार के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए मौलिक है. चूहे में, RGCs के 98% के बारे में contralateral बेहतर colliculus (एससी) (फोरेस्टर और पीटर्स, 1967) के लिए परियोजना के लिए जाना जाता है. अनुसूचित जाति के सतह पर fluoro सोने (FG) लागू लगभग सभी RGCs लेबल, ताकि हम मोतियाबिंद में यह सबसे कमजोर रेटिना न्यूरॉन पर ध्यान केंद्रित कर सकते हैं. FG रेटिना नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं के अक्षतंतु टर्मिनलों द्वारा लिया जाता है और द्विपक्षीय रेटिना में अपनी somas retrogradely पहुँचाया. Transected ऑप्टिक तंत्रिका के स्टंप पर 2 दिनों के लिए FG रखकर RGC के प्रतिगामी लेबलिंग के साथ तुलना करते हैं, तो RGC अस्तित्व के हस्तक्षेप कम से कम है. Cresyl वायलेट धुंधला के साथ तुलना है कि दाग RGCs, amacrine कोशिकाओं और रेटिना नाड़ीग्रन्थि सेल परत में रक्त वाहिका के endothelium, इस लेबलिंग विधि अधिक RGC के लिए विशिष्ट है. इस वीडियो FG अनुसूचित जाति के सतह पर लागू करने के द्वारा RGC के प्रतिगामी लेबलिंग की विधि का वर्णन करता है. शल्यचिकित्सा की प्रक्रियाओं में शामिल ड्रिलिंग खोपड़ी, प्रांतस्था aspirating करने के लिए अनुसूचित जाति बेनकाब और अनुसूचित जाति के पूरे पृष्ठीय सतह पर जेलाटीन स्पंज आवेदन कर रहे हैं दिखाया. भारी intracranial और अनुसूचित जाति के खून बह रहा आकांक्षा से बचने के लिए उपयोगी सुझाव दिया गया है.

Protocol

  1. (80mg/kg) ketamine और xylazine (8mg/kg) (2:01 पर मात्रा अनुपात) के अंतर peritoneal इंजेक्शन द्वारा चूहा चतनाशून्य करना. बाँझ आंख स्नेहक मरहम लागू करने के लिए सर्जरी के दौरान corneas के सूखने से रोकने के लिए.
  2. सिर फर (आँख से कान के स्तर) दाढ़ी और सिर मंच पर एक सिर से सिर दबाना और छेनी पट्टी में अपनी incisors सेट ठीक है.
  3. कीटाणुरहित 10% povidone आयोडीन 70% शराब के बाद समाधान के साथ आपरेशन क्षेत्र.
  4. त्वचा और खोपड़ी और sutures (बाण के समान, राज्याभिषेक और अनुप्रस्थ sutures) (चित्रा 1) का पर्दाफाश करने के लिए मांसपेशियों को काटें. चीरा क्षेत्र के लिए एक दिखावा (2 मिलीग्राम / किग्रा से अधिक नहीं) के रूप में एनाल्जेसिक bupivicaine लागू करें.
  5. बाण के समान सीवन के प्रत्येक पक्ष पर एक खोपड़ी छेद ड्रिल (Ø 2x2 मिमी, दोनों बाण के समान और अनुप्रस्थ sutures से 0.5 मिमी). Meninges का टूटना और sutures के नीचे झूठ बोल साइनस से बचें.

    जिंदा चूहे खोपड़ी पर पहचान.
    चित्रा 1. जिंदा चूहे खोपड़ी पर पहचान.

  6. वसंत कैंची द्वारा meninges खोलने के कट, फाड़ से बचें.
  7. मस्तिष्क सामग्री है कि बेहतर colliculus के पृष्ठीय वैक्यूम पंप और तीन चेक अंक मनाया जा सकता है है द्वारा ध्यान से सतह पर स्थित है Aspirate:
    1. मस्तिष्क ऊतक ग्रे से ग्रे सफेद में परिवर्तन का रंग
    2. aspirating जब बेरंग मस्तिष्कमेरु द्रव बाहर आ बंद
    3. ध्यान से सबसे कम चूषण क्षैतिज स्तर पर पीले बेहतर colliculus dura द्वारा कवर बेनकाब विस्तार
  8. अनुसूचित जाति पर मस्तिष्क सामग्री Aspirate जब तक अनुसूचित जाति के चार किनारों सीधे खुर्दबीन के नीचे देखा जा सकता है है. हटा प्रमस्तिष्क प्रांतस्था के भाग न्यूनतम करने के लिए रखा जाना चाहिए के अवांछनीय दुष्प्रभावों (जैसे, मोटर शिथिलता) से बचने के. साइनस छू नहीं सावधान रहो.
  9. ठीक बाँझ कपास पट्टी के साथ छेद में द्रव अवशोषित करने के लिए संभव के रूप में अनुसूचित जाति के रूप में सतह सूखी. फिर, जेलाटीन स्पंज की एक पतली परत जगह पूर्व 6% अनुसूचित जाति की सतह पर Fluoro गोल्ड (FG रेटिना नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं के अक्षतंतु टर्मिनलों द्वारा लिया जाता है और द्विपक्षीय रेटिना में अपनी somas retrogradely पहुँचाया) के साथ भिगो है.
  10. Gelfoam साथ छेद भरें और सिवनी क्लिप के साथ त्वचा घाव बंद.
  11. जानवरों को गर्म रखने के गरमागरम दीपक के नीचे उबरने की अनुमति दी गई. एनाल्जेसिक (100mcg/kg) buprenorphine, मौखिक रूप से पीने के पानी में अनुसूचित जाति लेबलिंग के बाद 5 दिनों के लिए लागू किया जाता है.

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Discussion

  1. रेटिना नाड़ीग्रन्थि सेल गिनती के लिए इस शल्य चिकित्सा पद्धति का उपयोग क्यों करें?

    चूहे में रेटिना नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं के बारे में 98% (RGC) contralateral बेहतर colliculus (एससी) के लिए परियोजना के लिए जाना जाता है. अनुसूचित जाति के सतह पर fluoro सोने लागू लगभग सभी RGCs का लेबल, ताकि हम मोतियाबिंद में यह सबसे कमजोर रेटिना न्यूरॉन पर ध्यान केंद्रित कर सकते हैं. Transected ऑप्टिक तंत्रिका के स्टंप पर 2 दिनों के लिए FG रखकर RGC के प्रतिगामी लेबलिंग के साथ तुलना करते हैं, तो RGC अस्तित्व के हस्तक्षेप कम से कम है. Cresyl वायलेट धुंधला हो जाना है कि दाग amacrine सेल, रेटिना नाड़ीग्रन्थि सेल परत में रक्त वाहिका के RGC और endothelia सेल, इस पद्धति अधिक RGC के लिए विशिष्ट है के साथ तुलना.

  2. कैसे अत्यधिक रक्तस्राव से बचने के लिए?

    सबसे पहले, सुनिश्चित करें कि चूहे ठीक से मांसपेशियों टोन और कॉर्निया पलटा जाँच करके anaesthetized है. अपर्याप्त संज्ञाहरण व्यापक रक्तस्राव का कारण होगा. दूसरा, से बचने के संचालन कि सिवनी भी बंद ड्रिलिंग या साइनस दीवार में meninges की फाड़ के रूप में साइनस नुकसान होगा. तीसरा, dura अनुसूचित जाति बरकरार पर अल्पज्ञता नाक क्षेत्र में विशेष रूप से झूठ बोल रही रखने के लिए सावधान रहना.

  3. कब तक यह जब तक RGCs लेबल रहे हैं ले करता है?

    अनुसूचित जाति लेबलिंग के बाद चार दिन, RGC लेबल किया जा सकता है. मैं आम तौर पर बेहतर परिणामों के लिए सात दिनों के लिए प्रतीक्षा करें.

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Acknowledgments

लेखकों के लिए अमेरिकी स्वास्थ्य सहायक फाउंडेशन के राष्ट्रीय रोग कार्यक्रम से समर्थन के लिए धन्यवाद देना चाहूंगा.

References

  1. Ahmed, A. K. M. F., Dong, K., Sugioka, K., Yamadori, T. Retrograde double labeling of retinal ganglion cells in the newborn and adult albino rat. Neurosci. Protocols. 1, 1-11 (1996).
  2. Chan, H. C., Chang, R. C. C., Ip, A. K. C., Chiu, K., Yuen, W. H., Zee, S. Y., So, K. F. Neuroprotective effects of Lycium barbarum Lynn on protecting retinal ganglion cells in an ocular hypertension model of glaucoma. Experimental Neurology. 203, 269-273 (2007).
  3. Forrester, J., Peters, A. Nerve fibers in the optic nerve of rat. Nature. 214, 245-247 (1967).
  4. Ji, J. Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. W., Hugon, J., So, K. F. CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway. European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).
  5. Li, R. S., Chen, B. Y., Tay, D. K., Chan, H. H. L., Pu, M. L., So, K. F. Melanopsin-Expressing Retinal Ganglion Cells Are More Injury-Resistant in a Chronic Ocular Hypertension Model. Investigative. Ophthalmology & Visual Science. 47, 2951-2958 (2006).

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तंत्रिका विज्ञान 16 अंक प्रतिगामी लेबलिंग रेटिनल नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं नेत्र विज्ञान अनुसंधान बेहतर colliculus प्रयोगात्मक मोतियाबिंद
Fluoro गोल्ड के अनुप्रयोग द्वारा रेटिना नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं के प्रतिगामी सुपीरियर Colliculus के भूतल पर लेबल
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Cite this Article

Chiu, K., Lau, W., Yeung, S., Chang, More

Chiu, K., Lau, W., Yeung, S., Chang, R. C., So, K. Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells by Application of Fluoro-Gold on the Surface of Superior Colliculus. J. Vis. Exp. (16), e819, doi:10.3791/819 (2008).

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