Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

השיטה MODS לאבחון שחפת שחפת עמידים multidrug

Published: August 11, 2008 doi: 10.3791/845
Automatic Translation
1, 2, 3, 4
1The Warren Alpert Medical School of Brown University, 2Laboratorio de Investigacion de Enfermedades Infecciosas, Universidad Peruana Cayetano Heredia, 3Department of International Health, Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health, 4Wellcome Trust Centre for Clinical Tropical Medicine, Imperial College London

Summary

תצפית מיקרוסקופית, רגישות לתרופות (MODS) assay היא בעלות נמוכה, low-tech כלי לגילוי בעל ביצועים גבוהים של שחפת (TB) ו multidrug עמיד שחפת (MDRTB). וידאו זה מתאר את שיטת התקשורת MODS נוזלי תרבות.

Abstract

חולים עם שחפת ריאתית פעילה (TB) 10-15 להדביק אנשים אחרים בשנה, מה שהופך לאבחון שחפת פעילה חיוני הן לרפא את המטופל ומניעת זיהומים חדשים. יתר על כן, את הופעתה של multidrug שחפת עמידים (MDRTB) כלומר זיהוי של עמידות לתרופה הכרחי לעצור התפשטות של זנים עמידים לתרופה. תצפית מיקרוסקופית, רגישות לתרופות (MODS) assay היא בעלות נמוכה, low-tech כלי לגילוי בעל ביצועים גבוהים של שחפת MDRTB. Assay MODS מבוססת על שלושה עקרונות: 1) Mycobacterium tuberculosis (MTB) גדל מהר יותר בתקשורת נוזל מאשר על התקשורת מוצק 2) צמיחה MTB מיקרוסקופי ניתן לאתר מוקדם יותר בכלי התקשורת נוזל מאשר לחכות להופעת מקרוסקופית של מושבות על התקשורת מוצק, כי הצמיחה האופיינית MTB, שמאפשר לו להבחין בין זיהום mycobacteria או פטרייתי או חיידקי טיפוסיות 3) התרופות isoniazid ו ריפמפיצין ניתן לשלב assay MODS כדי לאפשר זיהוי ישיר סימולטני של MDRTB, obviating את הצורך תת לבצע תרופה עקיף רגישות הבדיקה. אבחון הנוכחית מתחרים הם הקשו על ידי רגישות נמוכה למרוח עם כיח, עיכובים ארוכים עד לאבחון עם תרבות התקשורת מוצק, עלות גבוהה להחריד עם נוזל התקשורת השיטות הקיימות התרבות, צריך לעשות תת לבדיקת רגישות עקיף התרופה כדי לזהות MDRTB. לעומת זאת, שיטה שאינה קניינית MODS בעל רגישות גבוהה עבור שחפת MDRTB, היא שיטה התרבות מהירה יחסית, מספק בדיקות סימולטני הרגישות תרופה MDRTB, והוא נגיש מוגבל משאב הגדרות בבית רק תחת $ 3 עבור בדיקת שחפת MDRTB.

Protocol

  1. הכינו פתרונות מניות
    1. פוספט חיץ מניות
      1. מערבבים 950ml של תמיסת נתרן dibasic (9.47g של dibasic סודיום פוספט מומס במים מזוקקים 1000ml) עם 950ml של תמיסת אשלגן זרחתי monobasic (9.07g של פוספט monobasic אשלגן מומס במים מזוקקים 1000ml) ומערבבים; לשמור על הגב של 50 מ"ל כל פתרון כדי להתאים pH במידת הצורך
      2. התאם ל-pH 6.8 ± 0.2: להוסיף נתרן זרחתי פתרון dibasic להעלות pH; להוסיף פתרון פוספט אשלגן monobasic ל-pH נמוך יותר
      3. החיטוי על 121-124 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות לעקר
      4. צלחת aliquot 100μl הפתרון פוספט חיץ על מדיום אגר מזין בצלחת פטרי לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות כדי לאשר עקרות
      5. אחסן במקרר ב 2-8 מעלות עד חודש

        הערה: כל דגימת כיח דורש 10 מ"ל של תמיסת חיץ פוספט
    2. טיהור מניות
      1. שלב כרכים שווה של פתרון סודיום הידרוקסיד (8.0g של סודיום הידרוקסיד מומס במים מזוקקים 200 מ"ל סטרילי) ו ציטראט פתרון נתרן (סודיום ציטרט 5.8g של מים מזוקקים 200 מ"ל מזוקקים סטריליים)
      2. מערבבים החיטוי על 121-124 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות
      3. אחסן במקרר ב 2-8 מעלות עד חודש

        הערה: כל דגימת כיח דורש 2ml של המניה טיהור
    3. תרבות מניות התקשורת
      1. Into 900ml של מים מזוקקים סטריליים להוסיף 3.1ml של גליצרול 1.25g של casitone ו 5.9g של אבקת בינוני 7H9, לערבב עם תסיסה מתמדת עד נמס לגמרי
      2. החיטוי על 121-124 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות
      3. מגניב ולחלק את המדיום סטרילי לתוך aliquots 4.5ml ב סטרילי 16x 100 מ"מ צינורות זכוכית להכנת המדגם, 10.8ml aliquots להכנת פתרונות אנטיביוטית בקרות פנימיות
      4. לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות כדי לוודא סטריליות (חוסר עכירות)
      5. חנות ב 2-8 ° C עם מכסה סגור היטב עד חודש

        הערה: כל דגימת כיח דורש אחד שפופרת המכילה 4.5ml של המדיום 7H9
    4. מניות פתרונות לאנטיביוטיקה
      1. א Isoniazid מניות (8 מ"ג / מ"ל)
        1. להמיס 20 מ"ג isoniazid לחלוטין במים מזוקקים 2.5ml סטרילית
        2. סינון עם מסנן מזרק 0.2μm עבור ממס מימית
        3. אחסן aliquots 20μl ב סטרילי צינורות צנטריפוגה מיקרו ב -20 מעלות צלזיוס למשך עד 6 חודשים

          הערה: כל aliquot 20μl מאוחסנים מספיקה עד 100 דגימות (כולל בזבוז)
      2. ב ריפמפיצין מניות (8 מ"ג / מ"ל)
      1. ממיסים ריפמפיצין 20mg לחלוטין 1.25ml DMSO
      2. הוסף 1.25ml מים מזוקקים לערבב סטרילית
      3. סינון עם מסנן מזרק 0.2μm עבור ממיס אורגני
      4. אחסן aliquots 20μl צינורות microcentrifuge סטרילי ב -20 מעלות צלזיוס למשך עד 6 חודשים

        הערה: כל aliquot 20μl מאוחסנים מספיקה עד 100 דגימות (כולל בזבוז)
  2. הכינו פתרונות עובד
    1. טיהור עובדים פתרון
      1. ממיסים 0.1g של גבישים NALC בכל 20ml של תמיסת טיהור נדרש

        הערה: כל הצרכים מדגם 2ml של פתרון טיהור

        הערה: מחק כל פתרון NaOH-NALC טיהור כי נותר ללא שימוש לאחר 24 שעות כמו NALC מאבד פעילות mucolytic לאורך זמן
    2. תרבות התקשורת עובדים פתרון
      1. הגדר את:
        1. 1 שפופרת עם המדיום 7H9 למדגם כל כיח להיות מעובד, בתוספת 1 שפופרת נוספת עבור כל צלחת (עבור העמודה שליטה שלילי)
        2. 2 צינורות של המדיום 7H9 עבור שולט חיובית (3 אם זנים monoresistant משמשים)
        3. 1-2 מבחנות עם 7H9 10.8ml להכנת פתרון אנטיביוטי
      2. הוסף 0.5ml OADC כדי 4.5ml של 7H9 בצינור כל המדגם
      3. הוסף OADC 1.2ml לצינורות עם 7H9 10.8ml
      4. מניחים בצד 2 צינורות עם 5 מ"ל 7H9-OADC עבור פקדי חיובית, שפופרת (ים) עם 12ml 7H9-OADC לשמש להכנת פתרון אנטיביוטיקה (אלה אינם דורשים פנטה)
      5. פנטה מחדש ולהוסיף 0.1ml אל צינור כל מדגם של צינורות בקרה שלילית (7H9-OADC-פנטה: הנפח הכולל = 5.1ml)

        הערה: בינוני מלא עם פנטה (7H9-OADC-פנטה) משמש דגימות כיח בקרות שלילי; להשתמש 7H9-OADC ללא פנטה עבור פקדי חיובית להכנת פתרון אנטיביוטי
    3. פתרונות עבודה לאנטיביוטיקה
      1. 1. ראה איור 1 עבור צעדים כדי להפוך את הפתרון עובד אנטיביוטי בצלחת 24-מנוצל היטב

        הערה: לקבלת התוצאות הרגישות מדויק, הריכוזים אנטיביוטי סופי הן קריטיות. ההליך הבא מתאים laboratories מצויד micropipettes. אם micropipettes אינם זמינים, מזרקים טוברקולין ניתן להשתמש בסדרת שונים של דילולים המתואר במדריך למשתמש נספח 3 ב modsperu.org

        הערה: אין להקפיא מחדש או שימוש חוזר לעבוד אנטיביוטיקה או פתרונות מניות כפעילות התרופה עלולים ללכת לאיבוד מחק את כל פתרונות אנטיביוטיקה בשימוש בסוף איור עיבוד יום 1.. ביצוע הפתרונות עובדים אנטיביוטי (מתוך מדריך למשתמש ב modsperu.org)
  3. כיח מדגם צלחת הכנה
    1. טהור
      1. המקום 2ml המדגם כיח לתוך צינור צנטריפוגה 15 מ"ל (אם פחות, לעשות עד 2ml עם חיץ פוספט, אם יותר, להשתמש רק 2ml)
      2. הוסף 2ml NaOH-NALC פתרון
      3. צינור שווי בחוזקה מערבולת למשך 20 שניות, להפוך הצינור כדי להבטיח NaOH-NALC המגעים לפתרון כל משטח הפנים של הצינור ואת המכסה
      4. בואו לעמוד על מינימום של 15 דקות - יכול להאריך על ידי כמה דקות אם המדגם הוא צמיגה במיוחד. כדי למנוע את הטיפול, לא יעלה על 20 דקות
      5. מלאו את הצינור כדי 14ml עם חיץ פוספט (pH 6.8) כדי לנטרל אלקלי לסיים את תהליך טיהור, ומערבבים היטב על ידי צינור היפוך 4 פעמים
      6. צנטריפוגה ב 3000 גרם במשך 15 דקות (ראה נספח 2 במדריך למשתמש ב modsperu.org עבור המשוואה של סיבובים לדקה צורך להגיע 3000 ז)
      7. בזהירות לצקת את supernatant לתוך מיכל פסולת נוזלית עם hypochlorite נתרן 10% או חומר חיטוי מתאים אחר ולשמר את גלולה
    2. הכנת מתלה מדגם גיבוי סופי
      1. שימוש ב-7H9-OADC פנטה (מהצינור המכיל 5.1ml), resuspend המדגם גלולה בהיקף כולל של 2ml בצינור צנטריפוגה עם פיפטה פסטר, ומערבבים היטב
      2. הסר 1ml של השעיה מדגם חנות בתוך שפופרת microcentrifuge ב 2-8 מעלות צלזיוס כגיבוי
      3. מוסיפים את 1ml השני של השעיה מדגם הצינור עם הנותרים 7H9-OADC-פנטה, ומערבבים היטב. זהו הפתרון הסופי מדגם מוכן ציפוי
    3. הצבת השעיות מדגם לתוך צלחת 24 גם
      1. המקום 900μl ההשעיה המדגם הסופי לתוך כל אחד 4 בארות של עמודה בצלחת 24 הבאר
      2. חזור עם דגימות נוספות עד שכל העמודות של צלחת, למעט טור 3, מלאים (או עד שכל הדגימות מצופה)
      3. המקום 900μl של המדיום 7H9-OADC ללא מדגם של 4 הבארות של טור 3 של כל צלחת מדגם (בקרות פנימיות שליליות)
    4. הוספת אנטיביוטיקה דגימות
      1. בעזרת טפטפת מרובת ערוצים, 4 טיפים למלא בקפידה עם 100μl מבארות עם פתרונות עובד 7H9-OADC ו אנטיביוטי (טור 2 בדילול אנטיביוטי צלחת ראה תרשים 1)
      2. מוסיפים את aliquots 100μl ל 1 בארות טור עם פתרונות לדוגמה 900μl בלי לגעת בצלחת או מדגם
      3. חזור על הפעולה עד שכל העמודות קיבלו את 100μl נוסף בינוני (נקי מסמים בארות) או פתרונות אנטיביוטי (כולל עמודה בקרה שלילית 3)
      4. סגור את הצלחת עם המכסה ומניחים שקית רב סגר (Ziplock) ניילון וסוגרים (תיק לא נפתח שוב מכאן ואילך)
      5. לדגור על 37 ° C (CO 2 העשרה לא הכרחי)
  4. בקרת איכות
    1. בקרות שליליות הן לרוץ על כל צלחת. נוכחותם של צמיחה כלשהי בכל הבארות בטור הביקורת שלילי מעיד צולבות זיהום, ולכן את הצלחת כולה חייבת להיות מושלך לבין דגימות מחדש מצופה.
    2. שולטת חיובית מנוהלות על צלחת נפרדת בסוף היום. אחת מלאה סמים רגישים למתח מנוהלת בעמודה וגם עמידות להתאמץ כדי INH ו RIF מנוהלת בעמודה אחרת. אם קיים חשש לגבי הפעלת הלחץ MDR, הן זן monoresistant INH ו זן RIF monoresistant ניתן להפעיל במקום של זנים רגישים ו - MDR. כל שולטת חיובית צריך הצמיחה מסמים בארות להוכיח כי הצמיחה תמיכה בתקשורת. כדי להדגים כי ריכוזי התרופה נכונים, את המתח רגישים לא צריך לגדול INH או RIF בארות, אבל את המתח MDR צריך לגדול גם לגדול INH ו RIF בארות.
  5. פלייט קריאה
    1. עם כל יום של ציפוי כמו "יום 0," קריאה צלחת מתחיל ביום 5, ואם שלילית על יום 5 הקריאה נעשית כל יום (או לסירוגין, תלוי בעומס העבודה) עד 14 יום ולאחר מכן כל 2-3 ימים מיום 15 -21. פלטות נבחנים עלמיקרוסקופ אור הפוכה במטרה 10x
    2. תרבות חיובית היא זו שבה יש שתי יחידות או יותר להרכיב המושבה (> 2 CFU) הן ללא שימוש בסמים בארות. צמיחה mycobacterial מוקדם נראה כמו פסיקים קטן מעוקל או ספירלות (5-9 ימים). הקמת המושבה בדרך כלל מתקדמת כדי "חבלים" או "הקשרים" (ראו תמונה על ספריה modsperu.org)
    3. ביום תרבות חיובית של 2 נקי מסמים בארות, הסמים המכילים בארות יש לקרוא. כל צמיחה בנוכחות התרופה מציין עמידות לתרופה זו.

      הערה: אם הקריאה של סמים המכילים בארות נעשה> 1 שבוע אחרי תרבות חיובית הוא ציין את התרופה ללא בארות, זה לא יכול לייצג את ההתנגדות כמו פריצת דרך צמיחה נתפסת לעתים
    4. דוגמאות שאינן חיוביות על ידי 21 יום נחשבים תרבויות שלילי
    5. עכירות הבארות היא תוצאה של זיהום יתר, בעוד הצמיחה mycobacterial אינו תוצאה של עננות
    6. עם סיום 21 ימי התרבויות עשוי להיות מושלך. תרבויות להישאר שקיות אטום שלהם ממוקמות בתוך שקיות החיטוי ו autoclaved על 121-124 מעלות צלזיוס במשך 45-60 דקות

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Assay MODS מיועד משאב מוגבל הגדרות. בפעם הראשונה, MODS מביא את היכולת לאיתור מהיר תרבות נוזלי של שחפת multidrug שחפת עמידים משאב מוגבל רק על הגדרות תחת 3 דולר הבדיקה. MODS הוא שאינה קניינית, איטרטיבי מתודולוגיה, והקהילה MODS מעוניינת תמיד שיפורים מעבדות אחרות הצליחו לעשות.

החשש הוא חוזר biosafety של תרבות התקשורת נוזלי משחפת בגלל נוזלים יכול להיות שנשפך או aerosolized. אנו מאמינים כי assay MODS הוא biosafe יותר assay כל כך רגישות מעורב בעקיפין בדיקות סמים בגלל בדיקה עקיפה הרגישות תרופה כרוך מניפולציה של תמיסות מרוכזות מאוד של mycobacteria עם הסיכונים הנלווים של שפיכה ו aerosolization, לעומת זאת, MODS פשוט מערבת את הרכבה של דגימת כיח לתוך צלחת, שלאחריו צלחת אטום בתוך שקית ניילון לא נפתח שוב. זו נתמכת על ידי הנתונים מקוריאה (Kim 2007) אשר הראה כי הסיכון בעיסוק עובדי מעבדה אשר מצופה מן דגימות כיח בלי לעשות סמים רגישות הבדיקה לא היה גדול יותר מזה של העובדים עושים למרוח מיקרוסקופיה כיח, לעומת זאת, אלה עושה סמים בדיקת הרגישות היו בסיכון גבוה הרבה יותר בעיסוק לשחפת.

אנו ממליצים כי אף אחד נהלים אלה להתבצע ללא אמצעי זהירות ראויה לעובדים במעבדה. זה כולל N-95 מסיכות להגנה נשימתית אישי, מחלקה 2 ארון בטיחות ביולוגית עם אוויר מותש מסונן דרך מסנני HEPA, ואת מנעול על דלת המעבדה להפסיק את זרימת האוויר תוך מערבולת של דגימות עוברים מניפולציות.

נהלי עבודה סטנדרטיים לעיבוד דגימות extrapulmonary, ספרייה תמונה של Mycobacterium tubercuclosis וזיהום mycobacteria ו חיידקים ופטריות אחרות, מומלץ אבטחת איכות אסטרטגיה, הליך ההסמכה של מעבדות להתחיל להשתמש MODS, וכן גיליון שאלות נפוצות זמינים modsperu.org

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

ברצוננו להודות שון Fitzwater וכרמן Giannina לונה קולומבו עבור קטע וידאו צמיחה שחפת זמן לשגות. אנו מודים מרטי רופר על המשוב יסודי מעולה שלה במהלך העריכה עריכה משותפת המדריך למשתמש, שממנו פרוטוקול הנוכחי נלקח בעיקר מילה במילה. הפקת וידאו זה מומן על ידי NIH / פוגארטי המרכז הבינלאומי http://www.fic.nih.gov/ דוד AJ מור תרם כמו עמית מחקר Wellcome Trust קליניים ברפואה Reader טרופי ועל מחלות זיהומיות באימפריאל קולג' בלונדון (Fellowship פרס מספר 078067/Z/05). מארק פ בריידי תרמו כמו עמית NIH / פוגארטי מרכז המחקר הבינלאומי.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Refrigerator/ freezer Equipment to store pre-prepared broth and antibiotic stocks
Vortex Equipment to aid sputum decontamination
Centrifuge Equipment for sputum concentration; capable of reaching 3000 g; d–s not need to be refrigerated, but MUST be biosafe (buckets can be sealed)
Incubator (37 degree C) Equipment for culture; need not be CO2 enriched
Inverted light microscope Microscope to read MODS plates
Autoclave Equipment to sterilize media, PBS and used plates
Balance Equipment to weigh isoniazid, rifampicin and NALC
Middlebrook 7H9 broth (Difco) Reagent Fisher Scientific DF0713-17-9 500gr/bottle; culture media base
Casitone (pancreatic digest casein) Reagent Fisher Scientific DF0259‐17‐9 500gr/bottle; culture media base
Glycerol (glycerin) lyophilized Reagent Sigma-Aldrich G‐33‐500 500ml/bottle; culture media base
PANTA (Antibiotic mixture lyophilized BD) Reagent Fisher Scientific B4345114 6 bottles/pack; antibiotic media supplement
OADC (Middlebrook OADC enrichment BD) Reagent Fisher Scientific B11886 10 x 20ml/pack; nutritional media supplement
Dimethyl sulphoxide (Hibri-Max) Reagent Sigma-Aldrich D-2650 100ml/bottle; to prepare rifampicin stock
Antibiotic stocks: isoniazid Reagent Sigma-Aldrich I-3377 50gr/bottle; direct susceptibility testing
Antibiotic stocks: rifampicin Reagent Sigma-Aldrich R-3501 1gr/bottle; direct susceptibility testing
Sodium hydroxide (pellets) Reagent Sigma-Aldrich 221465 500gr/bottle; sputum decontamination
Sodium citrate (trisodium salt dihydrate) Reagent Sigma-Aldrich S-4641 500gr/bottle; sputum decontamination
N-acetyl-L-cysteine Reagent Sigma-Aldrich A-7250 50gr/bottle; sputum decontamination
Potassium Phosphate Monobasic crystal. KH2PO4 Reagent Sigma-Aldrich P0662 500gr/bottle; sputum decontamination
Sodium Phosphate Dibasic, anhydrous. Na2HPO4 Reagent Sigma-Aldrich S0876 500gr/bottle; sputum decontamination
Sodium hypochlorite Reagent household bleach to discard contaminated waste
15ml centrifuge tubes (polypropylene 15ml Falcon 35‐2096) Consumable Fisher Scientific 14‐959‐49B 500ea/case; for sputum decontamination and concentration
24 well plates (Plates Tissue 24 wells BD Falcon 35‐3047) Consumable Fisher Scientific 08-772-1 50 plates/case; for culture and reading
Sealable polythene bags 6 X 6 “ (ziplock) Consumable for biosecurity to contain 24 well plate
Glass tubes with lid (16 x 100mm and 18 x 145mm) Consumable VWR international 47729-583 500 tubes/case; to store aliquots of prepared broth
Screw cap microcentrifuge tubes (1.5ml) Consumable Fisher Scientific 05‐669‐22 1000ea/case; to store aliquots of antibiotic stocks
0.22μm filters (aqueous solvents) Syringe filter Millex blue Consumable Fisher Scientific SLGL 025 OS 50 units/case; to filter antibiotic stocks
0.22μm filters (organic solvents) Syringe filter Millex yellow Consumable Fisher Scientific SLGV 033 RS 50 units/case; to filter antibiotic stocks
Disposable Pasteur pipettes borosilicate glass 9″ Consumable Fisher Scientific 13‐678‐20C 720ea/case; to mix PANTA with media mix
Aerosol barrier tips 1000‐1300μl Consumable Fisher Scientific 02‐707‐51 1000ea/pk; to dispense media into plate
USA Scientific Tips One 1‐200μl yellow tips Consumable Fisher Scientific 1111‐0006 1000 tips/bag; to dilute antibiotic stocks

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Arias, M. Clinical evaluation of the microscopic-observation drug-susceptibility assay for detection of tuberculosis. Clin Infect Dis. 44, 674-674 (2007).
  2. Caviedes, L. Rapid, efficient detection and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis in sputum by microscopic observation of broth cultures. The Tuberculosis Working Group in Peru. J Clin Microbiol. 38, 1203-1203 (2000).
  3. Caviedes, L., Moore, D. A. Introducing MODS: a low-cost, low-tech tool for high-performance detection of tuberculosis and multidrug resistant tuberculosis. Indian J Med Microbiol. 25, 87-87 (2007).
  4. Caws, M. Evaluation of the MODS culture technique for the diagnosis of tuberculous meningitis. PLoS ONE. 2, e1173-e1173 (2007).
  5. Ejigu, G. S. Microscopic-observation drug susceptibility assay provides rapid and reliable identification of MDR-TB. Int J Tuberc Lung Dis. 12, 332-332 (2008).
  6. Kim, S. J. Risk of occupational tuberculosis in National Tuberculosis Programme laboratories in Korea. Int J Tuberc Lung Dis. 11, 138-138 (2007).
  7. Mello, F. C. Clinical evaluation of the microscopic observation drug susceptibility assay for detection of Mycobacterium tuberculosis resistance to isoniazid or rifampin. J Clin Microbiol. 45, 3387-3387 (2007).
  8. Moore, D. A. Future prospects for the MODS assay in multidrug-resistant tuberculosis diagnosis. Future Microbiol. 2, 97-97 (2007).
  9. Moore, D. A. Infrequent MODS TB culture cross-contamination in a high-burden resource-poor setting. Diagn Microbiol Infect Dis. 56, 35-35 (2006).
  10. Moore, D. A. Microscopic-observation drug-susceptibility assay for the diagnosis of TB. N Engl J Med. 355, 1539-1539 (2006).
  11. Moore, D. A. Microscopic observation drug susceptibility assay, a rapid, reliable diagnostic test for multidrug-resistant tuberculosis suitable for use in resource-poor settings. J Clin Microbiol. 42, 4432-4432 (2004).
  12. Moore, D. A., Roper, M. H. Diagnosis of smear-negative tuberculosis in people with HIV/AIDS. Lancet. 370, 1033-1033 (2007).
  13. Oberhelman, R. A. Improved recovery of Mycobacterium tuberculosis from children using the microscopic observation drug susceptibility method. Pediatrics. 118, e100-e100 (2006).
  14. Palomino, J. C., Martin, A., Portaels, F. MODS assay for the diagnosis of TB. N Engl J Med. 356, 188-189 (2007).
  15. Park, W. G., Bishai, W. R., Chaisson, R. E., Dorman, S. E. Performance of the microscopic observation drug susceptibility assay in drug susceptibility testing for Mycobacterium tuberculosis. J Clin Microbiol. 40, 4750-4750 (2002).
  16. Shiferaw, G. Evaluation of microscopic observation drug susceptibility assay for detection of multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis. J Clin Microbiol. 45, 1093-1093 (2007).
  17. Tovar, M. Improved diagnosis of pleural tuberculosis using the microscopic- observation drug-susceptibility technique. Clin Infect Dis. 46, 909-909 (2008).
  18. Vargas, D. Diagnosis of sputum-scarce HIV-associated pulmonary tuberculosis in Lima, Peru. Lancet. 365, 150-150 (2005).

Tags

מיקרוביולוגיה גיליון 18 שחפת שחפת שחפת עמידים multidrug MDRTB תרבות אבחון
השיטה MODS לאבחון שחפת שחפת עמידים multidrug
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Brady, M. F., Coronel, J., Gilman,… More

Brady, M. F., Coronel, J., Gilman, R. H., Moore, D. A. The MODS method for diagnosis of tuberculosis and multidrug resistant tuberculosis. J. Vis. Exp. (18), e845, doi:10.3791/845 (2008).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter