लाइव immobilized खमीर कक्ष के विज़ुअलाइज़ेशन के लिए एक रैपिड तकनीक

Summary

बढ़ रही immobilized खमीर कोशिकाओं के दृश्य के लिए एक तेजी से तकनीक, यहाँ चुप संभोग loci HML और HMR में फ्लोरोसेंट पत्रकारों से लागू

Abstract

हम यहाँ स्थिरीकरण और epifluorescence माइक्रोस्कोपी द्वारा बढ़ती खमीर कोशिकाओं के दृश्य के लिए एक सरल, तेजी से है, और अत्यंत लचीला तकनीक मौजूद है. यह तकनीक समान रूप से स्थैतिक खमीर आबादी या लंबाई में दस घंटों के लिए समय पाठ्यक्रमों प्रयोगों के दृश्य के लिए उपयुक्त है. मेरा माइक्रोस्कोपी एस cerevisiae में मूक संभोग loci में epigenetic इनहेरीटेंस जांच. दो मूक संभोग loci, HML और HMR, जो आम तौर पर व्यक्त कर रहे हैं के रूप में वे heterochromatin में पैक कर रहे हैं नहीं कर रहे हैं. Sir1 उत्परिवर्ती पृष्ठभूमि मुंह बंद करने में कमजोर हो रहा है ऐसी है कि प्रत्येक ठिकाना या तो व्यक्त या खामोश epigenetic राज्य में किया जा सकता है, तो एक पूरे के रूप में जनसंख्या में HML और HMR दोनों के लिए अलग epigenetic राज्यों की कोशिकाओं के एक मिश्रण है. मेरा माइक्रोस्कोपी दिखा दिया है कि वहाँ एक व्यक्ति के सेल में HML और HMR के epigenetic राज्य के बीच कोई संबंध नहीं है. sir1 कोशिकाओं stochastically epigenetic राज्यों स्विच करने के लिए, पहले व्यक्त ठिकाना पर मुंह बंद करने की स्थापना या एक पहले खामोश ठिकाना व्यक्त. मेरा समय बेशक माइक्रोस्कोपी व्यक्तिगत sir1 कोशिकाओं और उनके वंश पर नज़र रखी चार संभव epigenetic स्विच के प्रत्येक आवृत्ति, और इस प्रकार sir1 कोशिकाओं में epigenetic राज्यों में से प्रत्येक की स्थिरता स्कोर. Xu एट अल. Mol. 2006 सेल.

Protocol

1. समय बेशक epifluorescence माइक्रोस्कोपी के लिए immobilized कोशिकाओं. कृपया ध्यान दें कि इस प्रोटोकॉल केवल तभी उपयोगी है अगर अपने खुर्दबीन के उद्देश्य लेंस खुर्दबीन मंच के नीचे हैं.
   
   
2. तरल मीडिया में एकाग्रता में वांछित एक लंबे coverslip पर प्लेस कोशिकाओं (मोटे तौर पर 24x50mm)
   
   
3. एक कृत्रिम मीडिया प्लेट (इन कम autofluorescence है) और कोशिकाओं से अधिक स्थान से इच्छित आकार का एक अगर ब्लॉक कट. अगर कोशिकाओं के साथ संपर्क में चिमटी से संभाला नहीं ब्लॉक की ओर रखें.
   
   
4. कम समय के पाठ्यक्रम (3 घंटे) के लिए, इस सेट अप पर्याप्त है. यदि कोशिकाओं जब खुर्दबीन पर कल्पना बढ़ रहे हैं, कक्षों या अगर ब्लॉक की वृद्धि क्षेत्र की मात्रा में कमी.
   
   
5. लंबे समय के पाठ्यक्रमों के लिए, अगर ब्लॉक के शीर्ष पर ताजा तरल मीडिया की एक बूंद जगह है, और अगर ब्लॉक के शीर्ष पर एक गिलास स्लाइड जगह. इस स्लाइड अगर ब्लॉक के ऊपर के माध्यम से वाष्पीकरण कम कर देता है. अगर वांछित, कवर पर्ची के साथ संपर्क में अगर ब्लॉक के किनारों को आगे नमी कम वेसिलीन के साथ सील किया जा सकता है. मैं इस सेट का इस्तेमाल किया है फिल्मों के लिए 9 घंटे के लिए लंबे समय से जंगली प्रकार दरों पर विभाजित कोशिकाओं के साथ,.

Discussion

यह एक तेजी से तकनीक है कि खमीर कोशिकाओं immobilizes जबकि अभी भी विकास की अनुमति है. हम दस घंटे के लिए खमीर के विकास का पालन किया है, खमीर प्रयोग भर में जंगली प्रकार विभाजन दरों को प्रदर्शित करने के साथ,. ध्यान दें कि इस सेटअप उद्देश्य खुर्दबीन मंच से नीचे लेंस की आवश्यकता है.