Быстрая Техника для визуализации живых иммобилизованных клеток дрожжей

Summary

Быстрый метод для визуализации растущего иммобилизованных клеток дрожжей, здесь применяется к флуоресцентным журналистам на молчание спаривания локусов HML и HMR

Abstract

Мы приведем здесь простой, быстрый и очень гибкий метод для иммобилизации и визуализации растущего дрожжевых клеток путем epifluorescence микроскопии. Техника одинаково хорошо подходит для визуализации статических популяций дрожжей, или время курсы экспериментов до десяти часов в длину. Мой микроскопии расследует эпигенетической наследственности на молчание локуса спаривания в CEREVISIAE С.. Есть два молчание локуса спаривания, HML и HMR, которые обычно не выражены, как они упакованы в гетерохроматин. В sir1 мутант глушителей фоне ослабленной, что каждый локус может быть как в явной или замолчать эпигенетические состояния, так и в популяции в целом есть смесь клеток разных эпигенетические состояния для обоих HML и HMR. Мой микроскопия показала, что нет никакой связи между эпигенетические состояния HML и HMR в отдельной клетки. sir1 клетки стохастически переключатель эпигенетические состояния, установление глушителей на ранее высказанные очага или выражения ранее замолчать локуса. Мое время курс микроскопии гусеничных отдельных sir1 клетки и их потомство, чтобы выиграть частоты каждого из четырех возможных эпигенетические выключатели, и, следовательно, стабильность каждого из эпигенетических государств в sir1 клеток. См. также Xu и соавт., Мол. Сотовые 2006 года.

Protocol

1. Иммобилизованные клетки на время микроскопии epifluorescence конечно. Пожалуйста, обратите внимание, что этот протокол используется только если объективы вашего микроскопа ниже столик микроскопа.
   
   
2. Место клеток в нужной концентрации в жидких средах на длинном покровное (примерно 24x50mm)
   
   
3. Вырезать агар блок нужного размера из пластмассовая панель СМИ (эти имеют более низкие аутофлюоресценция) и поместите на клетки. Место стороне агара блок не обрабатывается пинцетом в контакт с клетками.
   
   
4. За короткое время курсы (до 3 часов), это создать достаточно. Если клетки двигаются, когда визуализируется на микроскоп, уменьшение объема клетки или увеличить площадь агар блока.
   
   
5. Для более длительных курсов время, место капля свежей жидкой среды в верхней части агар блок, и поместите стекло в верхней части агар блока. На этом слайде уменьшает испарение через верх агар блока. При желании, по краям блока агар в контакте с покровным стеклом могут быть запечатаны с вазелином для дальнейшего снижения влажности. Я использовал этот создан для просмотра фильмов до 9 часов в длину, с делением клетки на дикие ставки типа.

Discussion

Это быстрый метод, который парализует клетки дрожжей то же время позволяя роста. Мы проследили рост дрожжей на срок до десяти часов, с дрожжами отображения дикие ставки разделения типа в течение всего эксперимента. Заметим, что эта установка требует объектива должны быть ниже столик микроскопа.