Summary
O labirinto aquático de Morris é uma ferramenta bem aceita utilizado para documentar o envolvimento do hipocampo em uma tarefa comportamental.
Abstract
O labirinto aquático de Morris é amplamente utilizado para estudar a memória espacial e de aprendizagem. Animais são colocados em uma piscina de água que é colorido opaco com leite desnatado em pó ou tinta não tóxica têmpera, onde devem nadar até uma plataforma escapar escondidos. Porque eles estão na água opaca, os animais não pode ver a plataforma, e não pode contar com cheiro para encontrar a rota de fuga. Em vez disso, eles devem confiar no externo / labirinto extra-pistas. Como os animais se tornam mais familiarizados com a tarefa, eles são capazes de encontrar a plataforma mais rapidamente. Desenvolvido por Richard G. Morris, em 1984, este paradigma tornou-se um dos "padrões ouro" de neurociência comportamental.
Protocol
Configurando o labirinto aquático
- O principal componente do labirinto aquático criado deve ser uma piscina redonda, de cerca de 6 metros de diâmetro e cerca de 3 metros de profundidade. Se você estiver gravando a tarefa com uma câmera de vídeo, certifique-se todos os lados do labirinto estão dentro de campo da câmera de vista.
- Preencha o labirinto de água com água da torneira, que deve ser perto de 26 ° C. Isso pode levar várias horas, por isso deve ser feito com bastante antecedência. Verificar periodicamente a temperatura da água de modo que seja dentro de um grau de 26 ° C.
- Coloque a plataforma de fuga no centro da piscina. Durante o treinamento, deve ser exposta, um centímetro acima da água. Isto ensina o rato que há uma plataforma, e que é o caminho para sair da água. Mais tarde, depois que o animal é treinado e pronto para testes, a plataforma de fuga será logo abaixo da superfície da água, e não serão visíveis porque a água será feito opaco com leite ou tinta não tóxica.
Agora, o labirinto de água está pronta para o treinamento dos animais.
Pré-treinamento para o labirinto de água
- Para a formação labirinto de água, a plataforma deve estar no centro da piscina e expôs uma polegada acima da superfície, de modo que o animal sabe que ele está lá. A água deve ser dentro de um grau de 26 ° C.
- Cada animal será submetido três ensaios consecutivos. Primeiro, coloque o animal na plataforma de 20 segundo.
- O labirinto de água tem 4 posições de partida: norte, sul, leste ou oeste. Levar o animal a uma dessas posições. Menor o animal na água, apoiando-o com a mão e trazendo-a para baixo suavemente na água rabo-final em primeiro lugar. Não se estresse do animal por dunking-lo de cabeça.
- Deixe a nadar animal / pesquisa para a plataforma para um máximo de 60 segundos. Na primeira, o animal pode nadar em torno da borda da piscina à procura de uma saída. Eventualmente, o animal vai aprender a pesquisa para a plataforma e suba.
- Uma vez que o roedor atinge a plataforma, parar o cronómetro, e registrar o tempo. Se não encontrar a plataforma em 60 segundos, em seguida, registrar o tempo para este julgamento como um minuto. Não pegue o animal se não conseguir alcançar a plataforma. Ensinar o animal que ele deve nadar até a plataforma. Portanto, gentilmente orientar o animal para a plataforma com a mão. Deixe o animal sentar-se na plataforma por 15 segundos. Se ele cai ou pula fora, delicadamente guiá-la de volta. Isso irá treinar o animal que ele deve ficar na plataforma a ser resgatada da piscina.
- Repita o mesmo procedimento para mais dois ensaios, a partir de uma direção diferente para cada julgamento.
- Uma vez que o animal tenha completado todos os três ensaios, seque-o com uma toalha. Repita o processo de formação de três julgamento por todos os animais de forma consecutiva. Mantenha as direções o mesmo para todas elas, e registrar seus tempos.
- Agora que os animais são treinados, eles estão prontos para realizar o teste de labirinto aquático.
Testes de labirinto aquático
- Para começar a ensaios experimentais com o labirinto de água, encher o tanque para que a plataforma é uma polegada abaixo da superfície da água. Não uso leite em pó desnatado, ou 125 mililitros de tinta não tóxica tempera branca, para tornar a água opaca.
- A temperatura de iluminação e de água deve ser o mesmo que no processo de formação. Cada animal será submetido 12 estudos, que serão três ensaios para cada direção de partida. Cada processo irá durar 60 segundos. Antes de começar, escolher a ordem das direções de partida. Não use a direção começar a mesma duas vezes seguidas, e também não repita a mesma ordem para qualquer uma das direções
- Frente para a parede da piscina, o manipulador animal vai colocar o animal na água, e então passo para trás a partir da piscina e se sentar em um local designado, enquanto o animal executa a tarefa de labirinto. Um sistema de rastreamento de comportamento animal, como o sistema SMART (Instruments San Diego) pode ser usado para monitorar o caminho, assim como outras variáveis. Filmando cada ensaio é menos caro, e perfeitamente adequado alternativa.
- Monitorar o animal até atingir a plataforma, e gravar o tempo que levou. Se o animal não alcançar a plataforma em 60 segundos, o handler irá guiá-lo para a plataforma, como em treinamento. De qualquer maneira, deixe o animal sentar-se por 10 segundos, e depois seca-lo e devolver o animal para uma gaiola de exploração.
- Continue com cada animal para todos os 12 ensaios, com o tratador de animais retornando ao mesmo local designado durante cada ensaio. A ordem dos testes devem ser: um teste para todos os animais, ensaio 2 para todos os animais, ensaio de 3 para todos os animais, etc Deve haver um intervalo inter-julgamento de pelo menos 2 minutos. Periodicamente, limpe a piscina, certifique-se a plataforma está em vigor, e verificar que a temperatura da água é a mesma.
- Depois de todos os animais tenham completado 12 testes, cada um irá realizar um ensaio sonda, em which a plataforma é removida do pool. O julgamento da sonda é realizada para verificar a compreensão do animal do local da plataforma, e observar a estratégia que o animal segue quando se descobre a plataforma não está lá. O manipulador irá liberar o animal a partir do norte. Registrar o número de vezes que o animal atravessa o centro da piscina durante os 30 segundos.
- Quando todos os ensaios da sonda são completos, secar os animais e drenar a piscina.
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Discussion
A tarefa de labirinto aquático de Morris foi desenvolvimento pela 5. Esta tarefa pode ser alterada de várias maneiras para investigar a memória de trabalho de memória de referência, ea estratégia a tarefa 6. O procedimento descrito aqui contém duas variáveis críticas que representam um desvio de outras versões do labirinto de água: pré-treinamento e testes em um único dia.
Pré-treinamento - o hipocampo está envolvida na memória espacial / relacional 7-8. O labirinto de água, especificamente três testes de memória espacial. No entanto, existem inúmeros outros componentes da tarefa que não envolvem memória espacial: o estresse envolvido com a tarefa, a compreensão das regras da tarefa (que para "escape", o animal deve encontrar uma plataforma escondida, e permanecer na que, a fim de ser "resgatado"), eo entendimento de que há um meio de escapar da tarefa 9. Desamparo aprendido também envolve um tanque de água, mas as regras (não há meio de escapar) são bastante diferentes 10. Os três ensaios pré-treinamento "ensinar" os animais sobre estas propriedades da tarefa. Eles aprendem que eles serão colocados em uma piscina de água morna e nadar em torno de um minuto, mas depois de ser removido. Eles são ensinados a encontrar a plataforma (porque é visível) e que permanecer nele irá conduzir à sua "fuga" do labirinto. E eles são ensinados que a tarefa tem um fim. Portanto, esta aprendizagem hipocampo-independente não confundir a análise da água de dados de teste labirinto.
Testes em um único dia - Na maioria das vezes, testes de labirinto de água ocorre através de dois a quatro dias 3. Desta forma, a aquisição e retenção pode ser avaliado. No entanto, em algumas populações, esta não é uma opção viável. Tal é o caso quando se investiga os mamíferos do sexo feminino. Roedores fêmeas, os seres humanos, primatas, etc, todos têm mudanças cíclicas nos níveis de hormônio esteróide 11-12. Esses hormônios têm efeitos profundos no hipocampo-dependente o desempenho da tarefa, a anatomia do hipocampo e da função das células do hipocampo 13-14. Testes em vários dias seria semelhante ao teste de um único animal em várias condições de baixa estradiol e progesterona, estradiol e progesterona elevados e intermediários progesterona estradiol e. Para eliminar este confundir, o teste ocorre em um único dia.
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Acknowledgments
JLN foi apoiada por 68.347 MH.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| SMART System | San Diego Instruments | This system is not a requirement – there are many other behavioral systems on the market. |
References
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