Summary
Basit ve spesifik bir yöntem, bir fraksiyonasyonu adım olmadan floresan etiketleme ve hücre yüzey proteinleri gelişmiş algılama gösterilmiştir. Hücre yüzey proteinleri Diferansiyel bereket, iki-boyutlu (2-D) elektroforez ve Ettan ™ Dige teknolojisi kullanılarak analiz edildi.
Abstract
Yüzey proteinleri hücre yeteneğini çevresine tepki ve komşu hücrelerle etkileşim merkezi. Onlar hemen hemen tüm hücre içi sinyal indükleyicileri olduğu bilinmektedir. Ayrıca, çevreye uyum ve ilaç tedavisi önemli bir rol oynar ve genellikle hastalık patogenezi ve patolojisi (1) katılan. Protein-protein etkileşimleri sinyal yolları içsel, ve bu karmaşık biyolojik süreçleri hakkında daha fazla bilgi elde etmek için, duyarlı ve güvenilir yöntemler, hücre yüzey proteinleri çalışmak için ihtiyaç vardır. İki boyutlu (2-D) elektroforez diferansiyel değişiklikleri incelemek için, karmaşık protein örneklerinin biyobelirteçleri ve diğer hedeflere tespiti için yaygın olarak kullanılır. Düşük bolluk (hücresel proteinlerin 1% 2) kısmen Hücre yüzey proteinleri, fraksiyonasyon ya da diğer tip zenginleştirme olmadan 2-D jel tespit etmek zordur. Onlar da sık sık kötü hidrofobik doğa ve yüksek molekül ağırlıklı (2) nedeniyle 2-B jeller temsil edilmektedir. Bu çalışmada, özel etiketleme ve proteinlerin bu önemli grup tespiti için CyDye Dige Fluor minimal boyalar kullanarak sağlam hücreler için yeni bir protokol mevcut. Hücre yüzey proteinleri hücre içi proteinler en az etiketleme ile çok sayıda özel etiketleme gösterdi. Bu protokol, hızlı, basit, kullanımı ve her üç CyDye Dige Fluor minimal boyalar (2, Cy Cy 3 ve Cy 5), hücre yüzey proteinleri etiket için kullanılabilir. Bu özellikler DeCyder 2-D Diferansiyel Analiz Yazılımı kullanarak protein ekspresyonu değişiklikleri Ettan Dige teknolojisi ve analizi ile 2-B Floresan Fark Jel Elektroforez (2-D Dige) kullanarak çoklama için izin verir. Hücre yüzey proteinleri zaman çeşitli uzunluklarda CHO hücreler (bkz. Tablo 1) serum açlık sırasında izledi. Yüksek doğruluk ile bolluk içinde küçük değişiklikler tespit edildi ve sonuçları tanımlanan istatistiksel yöntemler ile desteklenmektedir.
Protocol
Hücre kültürü
- Grow GlutaMAX I% 10 fetal buzağı serumu, 50 U / ml penisilin ve 50 mg / ml streptomisin sülfat (Invitrogen) içeren standart hücre kültürü yöntemleri kullanılarak, F-12 Ham orta Çin hemstırı yumurtalık hücreleri (CHO-K1).
- Serum ücretsiz medya Exchange kültür ortamı. Etiket hücre yüzey proteinleri CyDye Dige Fluor Cy3 veya Cy5 minimal boyalar (bkz. aşağıdaki bölüm Hücre Yüzey Etiketleme,) ile farklı zaman noktalarında.
- Her zaman noktası ve CyDye Dige Fluor Cy2 etiket hücreleri Havuzu eşit sayıda. Için bir iç standart olarak her 2-D jel kullanın.
- Deneylerin çoğunluğu CHO-K1 hücreleri ile yapılabilir, ancak fare embriyo fibroblastlar (3T3 L1) ve fare asit lenfoma lymphoblasts (EL4) (veriler gösterilmemiştir) kullanılabilir.
- DMEM orta son iki hücre tipleri GlutaMAX II ile büyür, ancak, aksi takdirde, CHO-K1 hücreler için kullanılan aynı koşullar kullanabilirsiniz.
Hücre yüzey etiketleme
- Dikkatle sayma ve 5-10 x106 hücreleri hacimde bölünerek, enzimatik olmayan yapışık hücrelere ayırmak. Süspansiyon büyüyen hücreleri için, koparma adım atın.
- Hücre süspansiyonları yaklaşık 5 dakika boyunca 800 xg'de santrifüjleyin. Orta içeren süpernatantlar çıkarın.
- 1 ml buz Hank Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS) pH 8.5 resuspendion pelet yıkayın. 4 800 xg ° C 'de 2 dakika süreyle santrifüj.
- Süpernatantı ve 200 ul buz etiketleme tampon hücre pelet (HBSS pH 8.5, 1 M üre) tekrar süspansiyon haline getirin.
- 600 pmol CyDye Dige Fluor karanlıkta 20 dakika boyunca buz üzerinde minimal boyalar ile sağlam hücreler etiketleyin.
- Lisin 20 ul 10 mM ekleyerek reaksiyon Quench. 10 dakika inkübe edin.
- 500 4 800 xg'de santrifüj ° C 'de 2 dakika süreyle takip ul HBSS pH 7.4, tabanda tarafından yüzey etiketli hücreler iki kez yıkayın.
Hücre parçalama ve ayrıştırma
- 150 ul soğuk lizis tamponu (7 M üre, 2 M tiyoüre,% 4 ahbap, 30 mM Tris, 5 mM magnezyum asetat pH 8.5) yüzey etiketli hücreleri Lyse. Buz üzerinde zaman zaman vorteks ile en az 1 saat bekletin.
- 4 10 000 xg'de lizatları Santrifüj ° C 5 dakika. Yeni bir tüp süpernatantı aktarın. Bu örnek, tüm hücresel proteinleri içeren fraksiyone olmayan bir örnek.
- Buna paralel olarak, membran ve sitozolik fraksiyonları önce 2-B jel elektroforezi (membran fraksiyonasyon kiti kullanılarak, Pierce), yukarıdaki gibi, daha sonra parçalara ayırmak Hücre pelletleri yıkayın. Membran fraksiyonu iç ve hücre yüzey membran proteinleri içerir.
- Karşılaştırma için, standart Ettan Dige prosedürü 3 izleyin ve lyse, etiket, ve hücreler sonunda, damıtmak. D Quant Kiti (GE Healthcare) - 2 kullanarak örneklerinde protein konsantrasyonu belirleyin.
2-D elektroforez
- Rehidrate Immobiline DryStrip jeller, pH 3-11NL Immobiline DryStrip Reswelling tepsisi, bir gecede 450 ul DeStreak rehidratasyon sıvısı (% 0.5 IPG Tampon) 24 cm (24 cm).
- Manifoldu anodik fincan yükleme DryStrip jeller Immobiline ve talimatlara göre II. Ettan IPGphor IEF Sistemi kullanılarak izoelektrik odaklama (IEF) gerçekleştirmek için CyDye etiketli örnekleri (50 mg total protein karşılık gelen) uygulayın.
- IEF sonra, büyük (26 x 20 cm)% 12.5 poliakrilamid jeller (SDS-PAGE) üst üste iki adım yer ve şeritler dengelenmesi. % 0.5 'lik agaroz ile Yerleşimi (Bromophenol Mavi içeren tampon çalışan). 5 W / jel 30 dk Ettan DALTtwelve Büyük Dikey Sistemi kullanarak 2-D elektroforez çalıştırın ve sonra boya ön kadar 15 W / jel, jel alt ulaşır.
Görüntüleme ve veri analizi
- 2-D elektroforez tamamladıktan sonra, bir Typhoon 9410 Değişken Modu Imager kullanarak Cy2, Cy3 veya Cy5 jeller taramak.
- DeCyder 2-D Diferansiyel Analiz Yazılımı 4 kullanılarak membran kesirler, sitozolik kesirler ve fraksiyone olmayan örnekleri spot haritalar karşılaştırın.
Post-boyama
- Görüntüleme sonra, gümüş, standart prosedür 5 göre jeller leke .
Protein tanımlama
- , Hasat büyümeye, fraksiyone olmayan bir örnek için yukarıda açıklandığı gibi hazırlayıcı miktarda (yaklaşık 1 mg toplam 10 x106 CHO hücreler protein) hücreler, yıkama ve lyse. Cy5, bir başak gibi bir hücre yüzeyinde etiketli örnek (bkz. yukarıda) kullanın ve etiketsiz preparatif miktarda protein birlikte uygulanır.
- Yukarıda açıklandığı gibi 2-D elektroforez yürütmek, ancak bu kez, 600 mikrogram Astrum firması etiketsiz hücre anodik bardak uygulaması başak etiketli 50 mikrogram hücre yüzeyi ile birlikte lizat. Doğru noktaya toplama izin vermek için referans işaretleyicileri kullanın ve yereöneriler 3 göre jel döküm önce cam plakalar arasında.
- Derin mor total protein leke 3 total protein boyama takip Cy5, hücre yüzeyinde nokta harita elde etmek için kanal Cy5 jel tarayın.
- DeCyder kullanarak iki nokta haritaları 2-Ge yazılım araya Maç ve Cy 5 etiketli hücre yüzey proteinleri ile ilgili tüm noktalar için bir seçim listesi oluşturmak. Ettan spot taşıma istasyonu kullanılarak hücre yüzey proteinleri Pick jel fişler ayıklamak ve Ettan digester kullanarak trypsinate. MALDI-TOF kütle spektrometresi kullanarak belirleyin.
Tablo 1: Bir Ettan Dige deney Şekil 1'de hücre yüzey proteini etiketleme protokolü göre etiketli serum tükenmiş hücreleri örnekler kullanılarak yapıldı.
| Örnek | Time serum tükenmesi | CyDye ile Etiketli | Jel sayısı |
| 1 | - | Cy 3, Cy 2 | 1 |
| 2 | 30 dakika | Cy 5, Cy 2 | 1 |
| 3 | 2 saat | Cy 3, Cy 2 | 2 |
| 4 | 4 saat | Cy 5, Cy 2 | 2 |
| 5 | 16 saat | Cy 5, Cy 2 | 3 |
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Protein konsantrasyonu
Iki etiketleme iş akışlarının bir bakış Şekil 1'de gösterilmiştir. Hücre yüzey proteini etiketleme protokole göre etiketli hücreleri hala bozulmamış olduğundan, sadece hücre yüzey proteinleri boya maruz kalmaktadır. , Etiketleme ve proteinlerin hücre içinde yanı sıra dış (Şekil 1) etiketli önce standart Ettan Dige protokolde, hücreler parçalanmış. Hücre yüzey proteinleri özellikle quantitated olamaz bu yana boya hücre yüzey proteini etiketleme protokol protein göreceli miktarı bilinmemektedir. Ancak, hücre yüzey proteinleri hücresel proteinlerin 2 çok düşük bir oran teşkil ettiği bilinmektedir. Boya 600 pmol yaklaşık 5-10 x10 6 hücre kullanıldı. Bu çalışmada nonfractionated örnek sadece% 12,5-25, 2-B elektroforez için kullanılan bu yana daha az hücre kullanmak mümkün olabilir.
Şekil 1. Iş akışı protokolleri etiketleme Genel Bakış
2-D Quant kiti kullanılarak farklı fraksiyonları protein konsantrasyonları belirlendi. 10 x10 6 CHO-K1 hücreleri elde edilen toplam protein miktarı fraksiyone olmayan örnek 920 mikrogram, 225 mikrogram / sitozolik hidrofilik fraksiyonunda membran / hidrofobik fraksiyonu ve 770 mikrogram oldu. Bu tutarlar, büyük olasılıkla hücre tipi ve hücre boyutu bağlı olarak değişecektir. Hücre yüzey protokolü etiketli proteinlerin oranı% 2-3 oranında total protein standart Ettan Dige minimum etiketleme, daha yüksek olabilir. Bu nokta şeklinde jeller düşük molekül proteinlerin yuvarlak ve dikey şeritli olduğundan sadece bir boya molekülü, protein molekülü başına yok (Şekil 2 ve 3) bağlı olduğunu görünüyor. Protein başına iki ve daha fazla boya molekülleri protein etiketli yüksek molekül ağırlığı nedeniyle dikey şeritli neden olur. Bu olgu, bu proteinlerin molekül ağırlığı bir değişiklik jel üzerinde yüksek molekül ağırlıklı proteinler ile karşılaştırıldığında daha büyük bir kayma neden çünkü çoğunlukla, düşük molekül ağırlıklı proteinlerin görülebilir.
Hücre yüzey protein özel etiketleme
İki hücre aynı örnekleri yüzey CyDye Dige Fluor Cy3 ile etiketlenir. Biri parçalanmış doğrudan ve 2-B elektroforezi için kullanılır oldu. Diğer örnek parçalanmış ve membran ve sitozolik kesirler içine fraksiyone. Tüm floresan etiket membran fraksiyon ortaya çıktı; sitozolik kesir etiketli proteinler (Şekil 2) yoksun. Sitozolik protein örneği ile aynı jel gümüş boyanan ve sonucu jel proteinlerin olduğunu gösterdi, ancak hücre yüzey proteini etiketleme protokolünü kullanarak etiketli değildi. Bu sonuçlar, bu yeni etiketleme protokol için özel hücre yüzey proteinleri olduğunu düşündürmektedir. CyDye Dige Fluor minimum boya hücre veya hücre zarından geçiş girmek için görünmüyor. Hücreleri etiketleme önce buz üzerinde tutulur ve bu zar boyunca herhangi bir taşıma azaltabilir. CyDye Dige Fluor minimal boya maruz kalma süresi protein etiketlenmesi için değil, hücre içine giriş için yeterli olduğu, ayrıca nispeten kısa (20 dakika). Hücre içinde etiketleme olmadığı için başka bir olası açıklama, boya zarından geçer bile, hücre içinde meydana etkin bir etiketleme reaksiyonu (optimum pH 8.5), pH (<pH 7.4) çok düşük olmasıdır. Etiketleme reaksiyon hücreleri parçalanmış sonra daha da herhangi bir protein etiketleme engeller hücreleri, yıkama söndürülür. Bu yöntem, in vitro insan hücre hatlarının yanı sıra in vivo 7 karmaşık bir biyolojik sistem başarıyla tatbik edilmiştir.
Şekil 2. Hücre yüzey proteini etiketleme özgüllüğü.
CHO-K1 hücreleri cellsurface proteinler Cy3 ve fraksiyone etiketlenir. Farklı fraksiyonları (A) 2-D elektroforezi ile ayrılmış ve Cy3 floresan tarandı. Aynı jeller sonra gümüş vitray (B).
Damıtma
Nonfractionated örnek (Şekil 2) ile karşılaştırıldığında, membran fraksiyone örnek spot desen sadece çok küçük farklar vardır. Iki nokta haritalar fraksiyone olmayan bir örnek de mevcut DeCyder 2-D Diferansiyel Analiz Yazılımı ve membran fraksiyonunda tespit edilen bütün noktalar kullanılarak karşılaştırıldı. Fraksiyonu, bu nedenle hücre yüzey proteinleri tespit geliştirmek için gerekli değildir ancak hücrelerin içindeki proteinlerin etiketleme eksikliği doğrulamak için kullanılabilir.
Protokolleri arasında karşılaştırma
Yeni hücre yüzeyi pro avantajları değerlendirmek için mümkünprotein etiketleme protokol, standart Ettan Dige protokolü ile bir karşılaştırma yapıldı. Aynı balon yetiştirilen CHO-K1 hücrelerden iki özdeş örnekleri sırasıyla iki farklı protokoller, (Şekil 1) ile paralel olarak etiketlenir. Aynı jel üzerinde bir hücre yüzeyi Cy5 etiketli örnek Cy3 etiketli hücre lizat olarak çalıştırıldı. Jel üzerinde yeşil noktalar (Cy3) (Şekil 3A) membran fraksiyonasyon standart Ettan Dige yordamı kullanarak etiketli proteinlerin temsil eder. Bu lekeler, muhtemelen, hücre yüzey proteinleri yanı sıra hücre içinde membranlar (ER, Golgi, mitokondri ve çekirdek) proteinler de dahil olmak üzere zarı proteinleri vardır. Düşük bol hücre yüzey proteinleri tespit etmek için en yüksek olasılık vermelidir beri bir zar fraksiyonasyon adım takip Standart Ettan Dige etiketleme prosedürü, karşılaştırma için seçilen oldu. Jel (Şekil 3A) kırmızı lekeler (Cy 5) standart etiketleme prosedürü (yeşil noktalar) ile görünmez yeni hücre yüzeyinde protein etiketleme protokolü kullanarak etiketli spesifik proteinlerin hücre yüzeyine. Ayrıca, sarı lekeler ya da prosedür (Şekil 3A) Her iki örnekte meydana gelen örtüşen proteinler temsil eder. Bir diğer kullanışlı bir uygulama, bu hücre içi membranlarda hücre yüzey proteinleri ayırmak için her iki etiketleme protokolleri birleştirmek olacaktır. Ayrıca, hücre yüzeyinde / membran protein düzeyleri, çeşitli uyaranlara sonra göreceli değişiklikler hakkında bilgi aynı anda hem etiketleme teknikleri kullanılarak takip edilebilir.
Şekil 3.
(A) 2-D jel görüntüleri CHO-K1 Cy5 hücre yüzey etiketli örneği (kırmızı lekeler, protokolü 1, Şekil 1) ve bir membran fraksiyone Cy3 örnek (yeşil noktalar, protokol 2, Şekil 1) göre etiketli standart Ettan Dige protokolü aynı 2-D jel çalıştırın. (B) DeCyder 2-D 2-D jel standart Ettan Dige protokolü kullanarak görünmez bir hücre yüzey etiketli proteini gösteren Diferansiyel Analiz Yazılımı kez.
Hücre yüzey proteinleri tanımlanması
Nokta desen etiketli bir hücre yüzeyinde bir örnek ve total protein etiketli örnek arasında çok farklı olduğundan, başak eşleme ve preparatif nokta harita hücre yüzeyinde noktalar belirlenmesini sağlamak için etiketli bir hücre yüzeyi için gerekli idi. Tüm hücre yüzey proteinleri tutuklandılar. Hücre yüzey proteinleri düşük bolluk nedeniyle tespit etmek zor olabilir. Bazı noktalar gerçek protein miktarı hücre yüzey proteinleri, görsel zenginleştirilmiş ve fiziksel olarak bu protokolü kullanarak zenginleştirilmiş olduğundan, tanımlama için yetersiz olabilir. Total protein preparatif miktarda düşük bol hücre yüzey proteinleri başarılı kimlik kolaylaştırmak için, 2-B elektroforezde uygulama öncesi membran proteinlerinin zenginleştirilmiş olabilir. Bu CHO hücreler, hücre içi zarı proteinleri ve hücre yüzey proteinleri hücrelerin toplam proteinin yaklaşık% 20 oluşturmaktadır. Bu hücre tipi, protein miktarı noktalar potansiyel membran proteinlerinin zenginleştirme faktörü 5 artış olabilir. Ayrıca, IPG şeritler dar degrade pH aralıklarının kullanılması büyük miktarda protein uygulanması sağlayacaktır. Bu çalışmada, membran proteinlerinin için zenginleştirme ve geniş bir IPG şeridi ile, sadece 600 mg total protein kullanılır. Biz hala% 82 daha önce membran ilişkili proteinler olarak bilinen hücre yüzey proteinleri, çok sayıda tespit edebilmek.
Çoğullama
Üç boyalar 6, serum tükenmiş CHO hücreler örnek bir dizi farklı zaman noktalarında (Tablo 1) toplanmış ve hücre yüzey proteinleri etiketli kullanarak bir Ettan Dige deneyde hücre yüzeyinde protein etiketleme protokol test etmek için. Örnekler 2-D elektroforezi ile ayrıldı. Bir hücre yüzeyi Dige deney için bir iç standart hazırlanması basittir. Bu durumda, Cy 2 etiketli hücre yüzey örnekleri (her zaman noktalarında) toplandı ve her 2-D jel uygulanan internal standart olarak kullanılır. Her üç CyDye Dige Fluor minimal boyalar etiketli hücre yüzeyinde benzer proteinler (veriler gösterilmemiştir). Birçok hücre yüzey proteinleri için serum açlık sırasında ifade değişiklikler DeCyder 2-Ge yazılım (Şekil 4) kullanılarak tespit edildi.
Şekil 4.
CHO-K1 hücreler açlık sırasında iki hücre yüzey proteinleri ifade değiştirin. Nokta haritalar DeCyder 2-D Diferansiyel Analiz yazılımı kullanılarak analiz edildi.
Sonuçlar
Hücre yüzeyinde protein etiketlenmesi için yeni Ettan Dige protokol u hızlı, basitse ve hücre yüzey proteinleri etiketlenmesi için son derece özel. Birçok yeni hücre yüzey proteinleri hücre yüzey proteini etiketleme protokolü kullanarak sadece saptanabilir. CHO hücreler için 80'den fazla yeni hücre yüzey proteinleri DeCyder 2-D Diferansiyel Analiz Yazılımı kullanarak tespit edildi. Belirlenen etiketli hücre yüzeyinde lekeler% 80 fazla membran ilişkili proteinlerin.
Çoğullama üç CyDye Dige Fluor minimal boyalar kullanılarak elde ve DeCyder 2-Ge yazılım kombinasyonu, bu yeni protokol hücre yüzey proteinleri, 2-D Dige teknolojisi ile elde edilen tüm avantajları ile çalışmak için güçlü bir araçtır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Biz onların işbirliği için, Viyana, Avusturya Üniversitesi Klinik Patoloji Enstitüsü Profesör Dontscho Kerjaschki, Corina Mayrhofer ve Sigurd Krieger teşekkür ederim.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| CyDye DIGE Kit, 2 nmol | Reagent | GE Healthcare | 28-9345-30 | |
| 2-D Quant Kit | Reagent | GE Healthcare | 80-6484-51 | |
| IPG Buffer pH 3-11NL | Reagent | GE Healthcare | 17-6004-40 | |
| Immobiline DryStrip pH 3-11NL, 24 cm | Reagent | GE Healthcare | 17-6003-77 | |
| IPGbox | Tool | GE Healthcare | 28-9334-65 | |
| IPGbox kit | Tool | GE Healthcare | 28-9334-92 | |
| DeStreak Rehydration solution | Reagent | GE Healthcare | 17-6003-19 | |
| Immobiline DryStrip Cover Fluid | Reagent | GE Healthcare | 17-1335-01 | |
| Ettan IPGphor 3 IEF Unit | Instrument | GE Healthcare | 11-0033-64 | |
| Ettan IPGphor Manifold | Instrument component | GE Healthcare | 80-6498-38 | |
| Ettan DALTtwelve Gel Caster | Tool | GE Healthcare | 80-6467-22 | |
| Ettan DALTtwelve Separation Unit and Power Supply/Control Unit | Instrument | GE Healthcare | 80-6466-46 | 230 V unit: 80-6466-27 |
| Typhoon 9410 Variable Mode Imager | Instrument | GE Healthcare | 63-0055-81 | |
| Ettan Spot Picker | Instrument | GE Healthcare | 18-1145-28 | |
| Ettan Digester | Instrument | GE Healthcare | 18-1142-68 | |
| Ettan Spotter | Instrument | GE Healthcare | 18-1142-67 | |
| Ettan MALDI-TOF | Instrument | GE Healthcare | 18-1142-33 | |
| DeCyder 2-D Differential Analysis Software | Other | GE Healthcare | 28-4012-01 | |
| ImageQuant Analysis Software | Other | GE Healthcare | 28-9236-62 | |
| Urea | Reagent | GE Healthcare | 17-1319-01 | |
| CHAPS | Reagent | GE Healthcare | 17-1314-01 | |
| PlusOne Dithiothreitol (DTT) | Reagent | GE Healthcare | 17-1318-01 | |
| Bromophenol Blue | Reagent | GE Healthcare | 17-1329-01 | |
| Tris | Reagent | GE Healthcare | 17-1321-01 | |
| Sodium Dodecylsulfate (SDS) | Reagent | GE Healthcare | 17-1313-01 | |
| PlusOne Glycerol 87% | Reagent | GE Healthcare | 17-1325-01 | |
| PlusOne ReadySol IEF 40% T, 3% C | Reagent | GE Healthcare | 17-1310-01 | |
| PlusOne TEMED | Reagent | GE Healthcare | 17-1312-01 | |
| PlusOne Ammonium Persulfate | Reagent | GE Healthcare | 17-1311-01 | |
| PlusOne Glycine | Reagent | GE Healthcare | 17-1323-01 | |
| 2-D Sample Prep for membrane proteins | Reagent | Pierce, Thermo Scientific | 89864 | |
| Streptomycin sulphate | Reagent | Invitrogen | 15140-122 |
References
- Jang, J. H., Hanash, S. M. Profiling of the cell surface proteome. Proteomics. 3, 1947-1954 (2003).
- Shin, B. K. Global profiling of the cell surface proteome of cancer cells uncovers an abundance of proteins with chaperone function. J Biol Chem. 9, 7607-7616 (2003).
- Ettan DIGE System User Manual. GE Healthcare user manual 18-1164-40. , (2006).
- DeCyder 2-D Differential Analysis Software v 6.0. GE Healthcare data file 11-0011-98 Edition AA. , (2004).
- 2-D Electrophoresis using immobilized pH gradients, principles and methods. GE Healthcare handbook 80-6429-60 Edition AB. , (2002).
- CyDye DIGE fluors and labeling kits. GE Healthcare data file 18-1164-84 Edition AB. , (2003).
- Mayrhofer, C., Krieger, S., Allmaier, G., Kerjaschki, D. DIGE compatible labeling of surface proteins on vital cells in vitro and in vivo. Proteomics. 2, 579-5785 (2006).
- Selective labeling of cell-surface proteins using CyDye DIGE Fluor minimal dyes. GE Healthcare Application Note 11-0033-92 Edition AB. , (2005).
