Meme Yağ Yastığına Ortotopik Enjeksiyon: Farelerde Meme Kanseri Oluşumu

Hayvan deneyleri, Çin Deney Hayvanları İdaresi Mevzuatının Hükmü ve Genel Tavsiyesine uygun olarak yürütülmüş ve Başkent Tıp Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi Kurumu tarafından onaylanmıştır (Ref no. AEEI-2014-052). 6 ila 8 haftalık dişi Balb / c fareleri kullanıldı.

1. Hücrelerin ve Hayvanların Hazırlanması

1. Ameliyattan bir gün önce, ameliyat bölgesini ortaya çıkarmak için dördüncü meme uçlarının etrafındaki kılları tıraş edin.
   1. Farenin serbestçe hareket etmeyeceğinden emin olmak için fareyi arkada sıkıca tutmak için bir elinizi kullanın, karnını operatöre gösterecek şekilde fareyi yukarı çevirin ve ardından elektronik bir tıraş makinesiyle dördüncü meme uçlarının etrafındaki kürkü tıraş etmek için başka bir elinizi kullanın.
   2. Meme uçlarının etrafına 30 - 60 saniye boyunca ince bir tabaka tüy dökücü krem sürün, kremayı damıtılmış suyla temizleyin ve ardından fareyi yumuşak kağıtla kurulayın.
2. Ameliyat günü murin meme kanseri hücrelerini (4T1-luc2) toplayın, hücre sayısını sayın ve steril mikrosantrifüj tüplerde fosfat tamponlu salin (PBS) içinde hücre yoğunluğunu 2 x 10⁵ hücre/mL olarak ayarlayın ve buz üzerinde tutun. Her fare için 1 mL'lik bir şırıngada 1 x 10⁴ hücre/50 μL hazırlanır.

2. Ortotopik Enjeksiyon

1. Farelerin anestezisi
   1. Anesteziyi indükleyin. Fareleri kapalı şeffaf bir kaba koyun ve fareleri yaklaşık 5 dakika boyunca uyuşturmak için% 2 izofluran gazını açın, hepsi uzanıp uykuya dalana kadar.
   2. Anesteziyi koruyun. Fareleri kaptan bireysel anestezi maskelerine aktarın, kuruluğu önlemek için gözlerine biraz veteriner merhemi sürün, fareleri meme uçları operatöre açıkta kalacak şekilde sırtüstü tutun ve enjeksiyon yapılana kadar birkaç dakika izofluran gazı solumaya devam etmelerine izin verin.
   3. Anestezinin başarısını, ayak parmağını sıkıştırma geri çekilme refleksinin olmamasıyla onaylayın.
   4. Göz kuruluğunu önlemek için farelerin gözlerine oftalmik merhem sürün.
      NOTE Kap boyutuna ve mevcut bireysel anestezi maskelerinin sayısına göre, bir grup fare birlikte uyuşturulabilir ve bireysel anestezi altında tek tek enjekte edilebilir.
2. Enjeksiyonun performansı
   1. Şırınganın takip etmesi için yükseltilmiş bir "tünel" oluşturmak için dördüncü meme ucunun etrafındaki cildi cımbızla çadır kurmak için bir elinizi kullanın. Diğer elinizi kullanarak şırıngayı, meme başından 5-10 mm mesafede deri altından cilde girmek için iğne yukarı doğru çevrilmiş halde tutun; Ardından, iğne ucu meme ucuna yaklaşana kadar "tüneli" takip edin, iğne ucunu, iğne gözü meme ucunun altına gelene kadar dikkatlice meme yağ yastığına doğru hareket ettirin, cımbızı atın ve hücreleri yavaşça enjekte edin.
   2. İğneyi biraz çevirin ve şırıngayı yavaşça geri çekin; sıvı sızıntısı olmadığından emin olmak için iğne yarasını 10 - 20 saniye boyunca bastırmak için pamuklu bir bez kullanın.
   3. Başarılı bir enjeksiyonu doğrulamak için dördüncü meme ucunu gözlemleyin: meme başı merkez olarak görülen bir beyaz şeffaf düz küre görülebilir (Şekil 1).
3. Farelerin iyileşmesine ve çok hızlı hareket etmesine izin vermemek için fareleri bir dakika daha anestezi altında tutun, bu da enjeksiyon yarasının açılmasına ve tümör hücrelerinin dışarı sızmasına neden olur.

Şekil 1: Dişi Balb/c farelerinin meme yağ yastığına ortotopik enjeksiyondan önceki ve sonraki resimler. Operasyon yapıldı ve fareler izofluran anestezisi altındayken resimler çekildi. A, enjeksiyondan önce, B, enjeksiyondan sonra.