İntratorasik Enjeksiyon: Yetişkin Zebra Balığı Kalbine Bileşik Teslimat

1. Balığın intratorasik enjeksiyon için hazırlanması

1. Bir ağ ile yetişkin bir zebra balığı (Danio rerio) yakalayın ve anestezik solüsyona aktarın.
2. 1-2 dakika sonra, balık yüzmeyi bıraktığında ve operkulumun hareketi azaldığında, herhangi bir temasa tepki vermediğinden emin olmak için balığa plastik bir kaşıkla dokunun.
3. Balıkları kaşıkla hızlı ve dikkatli bir şekilde, ventral tarafı yukarı bakacak şekilde ıslak süngerin oluğuna aktarın. Balığın başı, operatörün baskın elinden uzağa bakmalıdır.

2. Perikard içine mikroenjeksiyon

1. Stereomikroskop altında, atan kalbin balık derisi altındaki hareketini dikkatlice gözlemleyin. Atan kalbin üzerindeki ve ventral kıkırdaklı plakalar tarafından tanımlanan üçgenin ortasındaki enjeksiyon noktasını görsel olarak belirleyin (Şekil 1D). Kılcal damarın ucunu gövde eksenine göre 30−45° derecelik açıyla yerleştirin (Şekil 1E). Mikrokapillerin ucu ile perikard içine cilde nazikçe nüfuz edin (Şekil 1C). En uygun giriş noktası karın bölgesine baştan daha yakındır.
   not: Kılcal damarı vücuda ve kalbe çok derine sokmayın, çünkü bu organın yaralanmasına neden olur. Kalbin delinmesi durumunda, iğne genellikle kanla dolar. Böyle bir durumda, kılcal damarı çıkarın ve balığı deneyden çıkarın.
2. İğne perikardın içine girdikten sonra, mikroenjektör cihazının pedalına basarak enjeksiyonu tamamlayın.
   not: Göğüs boşluğuna hava enjekte etmemeye dikkat edin.
3. Enjeksiyondan sonra, kılcal damarı torakstan yavaşça çekin ve balığı hemen geri kazanım için sistem suyu ile bir tanka aktarın.
4. Anesteziden tamamen iyileşene kadar balıkları izleyin.
5. İstenilen zaman noktasında kalbi toplayın ve daha fazla analiz için hazırlayın.
   not: Balığın 30 saniye içinde operkulumun hareketine devam etmemesi durumunda, plastik bir pipetle solungaçlara su sıkarak balığı yeniden canlandırın.

Şekil 1: Yetişkin zebra balıklarında intratorasik (IT) enjeksiyon. (A) Filamentli (6 inç, 1.0 mm çapında) çekilmiş bir mikroenjeksiyon kılcal damarının fotoğrafı ve kullanılan iğne çektirme programının değerleri. (B) % 10 fenol kırmızısı içeren 2,5 μL çözelti ile doldurulmuş filamentli (6 ", 1,0 mm çapında) çekilmiş bir mikroenjeksiyon kılcal damarının fotoğrafı. İğnenin çekilen ucu en fazla 7 mm uzunluğundadır. (C) IT enjeksiyon prosedürünün şematik gösterimi. (D) IT enjeksiyon prosedürünün fotoğrafları. Bu rakam Bise ve ark. C ve D panellerindeki sayılar, prosedürün aynı adımlarına karşılık gelir: (1) balık, nemlendirilmiş bir sünger üzerine ventral tarafı yukarı bakacak şekilde yerleştirilir. Delinme bölgesi (üçgendeki kırmızı nokta) göğsün merkezinde, solungaçların yakınında bulunur. (2) İğnenin perikard içine girmesi. Kırmızı nokta delinme bölgesini gösterir. (3) Enjeksiyon, kırmızı çözeltinin perikard boşluğuna yayılması gözlemlenerek izlenir. (E) BT enjeksiyonu şeması. Kalp delinmesini önlemek için enjeksiyon kılcal damarı ile vücut ekseni arasındaki açı 30 ° ile 45 ° arasında olmalıdır. (F) Belirtilen hacimlerde IT enjeksiyonundan 1 saat sonra balık toraksının fotoğrafları. Beyaz oklar, iç kanamayı gösterebilecek yeniden oluşan dokuyu işaret