Rahim İçi Kanser Hücresi Enjeksiyonu: İntra-peritoneal Over Kanseri Fare Modeli Oluşturmak için Kanser Hücreleri Verme Tekniği

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Atimik Çıplak Farelerde İnsan Yumurtalık Kanseri Hücrelerinin Rahim İçi Enjeksiyonu

NOT: Aşağıdaki prosedür ikinci bir kişiden yardım gerektirir. Ek olarak, bu hayatta kalma ameliyatı olduğu için steril cerrahi aletler kullanın. Bu sağkalım cerrahisi prosedürü yaklaşık 10 ila 15 dakika sürmelidir.

%
1. 2 izofluran kullanarak fareyi uyuşturun. Tipik olarak 7 ila 8 haftalık atimik çıplak fareler kullanılır.
2. Ayak pedini parmaklar veya forseps kullanarak sıkıştırarak hayvanın tamamen uyuşturulduğunu doğrulayın. Ameliyata başlamadan önce hayvan ağrıya tamamen tepkisiz olmalıdır.
3. Anestezi uygulanmış fareyi sağ yan tarafı yukarı bakacak şekilde, başı araştırmacıdan uzakta olacak şekilde steril bir gazlı bez üzerine yerleştirin.
4. Anestezi altındayken kuruluğu önlemek için pamuk uçlu bir aplikatör ile gözlere merhem sürün.
5. Kafayı hemen bir izofluran buharlaştırıcıya bağlı bir burun konisi sistemine yerleştirin (Şekil 1A). Bu, cerrahi prosedür boyunca anesteziyi sağlar.
6. Karnın sol (veya sağ) tarafını alkol pedleri (Şekil 1B) ve ardından iyot kullanarak dezenfekte edin, ardından cerrahi bölgenin üzerine steril bir cerrahi örtü yerleştirin.
7. Steril cerrahi makas ve forseps kullanarak, farenin sol alt kadranında 1-2 cm'lik bir cilt kesisi yapın (Şekil 1C).
8. Kası kaldırın ve zartona ulaşmak için bir kesi yapın.
9. Karın boşluğunu ortaya çıkarmak için eğik kası inceleyin.
10. Sol uterus boynuzunu bulun ve tanımlayın (Şekil 1D).
11. Steril bir kanama durdurucu kullanarak, boynuzun hem ön hem de arka tarafını klempleyin (Şekil 1E). Ön klempi fallop tüpünün hemen altına ve arka klempi serviksin hemen üzerine yerleştirin.
12. İkinci kişinin hücre süspansiyonunu enjekte etmesini sağlayın. Hücre içeren iğneyi boynuza dik olarak 45°'lik bir açıyla yerleştirin (Şek. 1F). Rahim boynuzunun lümenine çok yavaş bir şekilde 50 μl hücre süspansiyonu enjekte edin.
13. İğneyi çıkarın ve ön kelepçeyi serbest bırakın.
14. Posterior kelepçeyi serbest bırakın ve karın boşluğundaki uterus boynuzunu değiştirin.
15. Sentetik, emilebilir bir sütür kullanarak peritonu kapatın ve bir doku yapıştırıcısı kullanarak cildi kapatın.
16. Fareyi burun konisinden çıkarın ve tekrar kafese yerleştirin. Gerekirse, ameliyattan sonra temiz bir kafes sağlamak için yatak takımlarını değiştirin. Gözetimsiz ayrılmadan önce tüm hayvanların uyanık ve aktif olduğundan emin olun.
17. Ameliyat sonrası ilk 48 saat boyunca 0.11 mg / ml içme suyunda İbuprofen sağlayın. Daha sonra normal içme suyu ile değiştirin.
    NOT: Atimik çıplak fareler kullanılıyorsa ve cilt dikişler yerine doku yapıştırıcısı kullanılarak kapatılırsa, ameliyattan sonra fareleri ayırmak gerekli değildir. SCID fareleri daha agresiftir ve ayrılmaları gerekebilir.
18. Açık yara nedeniyle olası enfeksiyon için insizyon bölgesini yakından izleyin.

Şekil 1: Yumurtalık kanseri hücrelerinin rahim içi enjeksiyonu. (A) anestezi sürekli olarak bir burun konisi aracılığıyla uygulanır; (BE) rahim boynuzunu bulmak ve klemplemek için deri kesilir; (F) kanser hücreleri uterusun lümenine yavaşça enjekte edilir.