Ex Vivo Normothermic karaciğer perfüzyon küçük bir hayvan Model

Karaciğer nakli için bekleme listesinde 14,578 hasta var ve yaklaşık 7000 nakli yıl^1,2başına gerçekleştirilir. Bu önemli donör sıkıntısı yanıt olarak, karaciğer bağış ölçütlerini genişletmiştir; Bu marjinal organ veya genişletilmiş ölçüt bağış anılır ve nakli birincil greft disfonksiyon ve gecikmiş graft fonksiyonu^{3daha yüksek oranda ile standart ölçütleri allogrefler daha sonra daha az şey gerçekleştirmek için beklenen, 4,5,6}. Sonuç olarak, NEVLP değerlendirmek ve organ fonksiyon^6,7değiştirmek için bir yöntem olarak tanıttı. Biz NEVLP bir sıçan model tasarlanmış ve Roman molekül katkı maddeleri karaciğer perfusate için test önemli potansiyel uygulamaları – birini göstermek için bu modeli kullanılmıştır.

NEVLP fare (sıçan) ve domuz modelleri yanı sıra atılan insan organları^6,8,9değerlendirilmiştir. NEVLP ilk insan çalışmaların sonuçlarını da son zamanlarda yayımlanan¹⁰olmuştur. Hipotermik makine perfüzyon açıkça böbrek korunması için standart haline gelmiştir, karaciğer hangi makinede perfüzyon gerçekleşmesi gereken sıcaklık hala tartışmalı olsa da. NEVLP ile karşılaştırıldığında hipotermik birçok önerilen avantajları vardır ve subnormothermic perfüzyon. Bunlar sınırlı koruma yaralanma, normal organ fonksiyon fizyolojik koşullar altında organ performansını değerlendirmek için yetenek ve organ onarım, yenileme ve değiştirme^{7,11için bir platform olarak restorasyonu içerir, 12,13,14,15,16,17}.

Domuz NEVLP modelleri kullanarak çok sayıda çalışmalar tamamlanmıştır. Ne zaman insan organlarını veya insan klinik çalışmalar göz önüne alındığında modelleri kullanarak atılan bu modeller nispeten ucuzdur, bizim küçük hayvan NEVLP modeli karşılaştırıldığında çok pahalı olmakla birlikte. Önemli bir bileşeni olan deney perfusate maliyetidir. Biz perfusate nispeten düşük bir maliyetle, 300 mL ile bir 4 h perfüzyon tamamlamak edebiliyoruz. Ayrıca, fareler de dahil olmak üzere küçük hayvanların domuz maliyeti ile karşılaştırıldığında çok düşük maliyetidir.

İle karşılaştırıldığında diğer modellerinde NEVLP sıçan, burada sunulan modeli uygulamak oldukça basit ve geniş bir uygulama yelpazesi vardır. Perfüzyon devre Şekil 1' de görülebilir. Perfusate bir su ceketli kapsayıcı olan perfusate rezervuar (1), içinde başlar. Perfusate su deposu silindir pompa (2) tarafından çekti ve bir windkessel (3) ve oxygenator (4) içine itti. Oxygenator countercurrent gaz ve perfusate akışı için maksimum gaz değişimi sağlamak için ayarlanır. Perfusate sonra bir Isıtma gelirleri (5) iç emin olmak için perfüzyon odası olduğunu fizyolojik sıcaklığında kangal ve hava kabarcıkları orada perfüzyon önlemek için bir kabarcık tuzak (6) öncesi organ (7) ve sonrası organ (8) olmak perfusate izin örnek bağlantı noktaları tatmak. Perfusate sonra karaciğer portal ven kanülü yoluyla girer. Portal ven kanülü değerleri veri toplama yazılımı üzerinde çizelgeleri bir basınç monitör bağlı olduğu. Perfusate sonra karaciğer IVC kanül aracılığıyla çıkar ve basınç ekolayzer bloğu (9) içine akar. Son olarak, perfusate basınç bloğundan silindir pompa ile çekti ve göle boşalttım. Bu model için portal ven sürekli perfüzyon içerir ve hepatik arter ve her biri ayrı ve ek devre gerektirir, bazı diğer modellerinde kullanılan diyaliz pulsatil akışı bırakır ama olmamak daha önce gösterilmiştir gerekli^9,13.

Roman bir terapötik molekül eklenmesi için perfusate keşfetmek için enzim katalaz seçtik. Katalaz ROS¹⁸etkilerini azaltmak için iç hücreleri savunma mekanizmasının bir parçası olduğu bir endojen ROS çöpçü var. Katalaz ifade hepatik iskemi reperfüzyon hasarı¹⁹' artar. Katalaz deneysel ilavesi iskemi-reperfüzyon göz, beyin ve akciğer^{20,21,22,23,24}azaltmak için kanıtlanmıştır. Pegylation endotel hücreleri²⁵katalaz endotel ve katalaz alımını yardım için hedef göstermiştir. PEG-kedi sistemik hepatik iskemi-reperfüzyon hasarı azaltmada sınırlı etkinliği ile idare edilmiştir; Ancak, PEG-kedi bir izole organ perfüzyon devre için geliştirilmiş yol açacak ekleme^26,27,28sonuç olan. Burada, bizim temel perfusate PEG-kedi ekleyin ve onun yeteneğini göstermek karaciğer koruma yaralanma azaltmak.

Tüm yordamları kurumsal hayvan bakım kurallarına göre gerçekleştirilen ve Ulusal Araştırma Konseyi insana ilişkin bakım ve laboratuvar kullanım hayvanlar (IACUC) Kılavuzu ve Ohio Devlet Üniversitesi IACUC Komitesi tarafından onay uğramıştır.

1. ilk kurulum

1. Aşağıdakileri birleştirerek perfüzyon çözüm hazırlamak: 86 mL % 25 albümin, Williams ın medya 184 mL, 30 mL penisilin/streptomisin (10 U/mL penisilin ve 0.01 mg/mL streptomisin), insülin (50 U/L), heparin (0.01 U/mL), L-glutamine (0.292 g/L) ve hidrokortizon (0,010 g/L) 300 mL toplam hacmiyle. Temel perfusate ve PEG-kedi grubu için PEG-kedi 625 U/mL ekleyin.
   1. Tris (hydroxymethyl) aminomethane (THAM) pH 7.4 için kullanarak perfusate çözüm tampon. Bir arteryel kan gazı makine perfusate pH onaylamak için kullanın.
2. Devre (resim 1) ayarlayın.
   1. Sıcak su banyosu açın ve 37 ° C'ye ayarlayın Isınmak organ odası izin.
   2. Karışık ve tamponlu perfusate rezervuar dökün ve dolaşımı başlar.
      Not: Bu adımda belirtilen perfusate adım 1.1.1 hazırlanmıştır.
   3. Satır içi oxygenator aracılığıyla akış sayaç için oxygenating gaz (%95 oksijen ve % 5 karbon dioksit) açın.
   4. Veri toplama yazılımı açın ve "deneme süresi için kaydetmek Başlat".
3. Cerrahi mikroskop ve ameliyathane (Şekil 2) ayarlayın.
   1. Isınma kurulu, elektrokoter ve anestezi ve izleme donanımları hayati (kalp hızı ve oksijen doygunluk) de dahil olmak üzere tüm ekipmanları açın.
      Not: Mikroskop ayarları kullanılan mikroskobunun göre değişir ve kullanıcının konfor için ayarlanabilir.
   2. İnhalasyon (molekül ağırlığı 184.5 g/mol) için sıvı isoflurane 10 mL ile 10 mL anestezi şırıngaya doldur ve anestezi birimine yerleştirin.
   3. 0.5 mL şırınga heparin (50 U), cerrahi aletler, pozisyon, 4-0 ile 7-0 ipek sütür, steril pamuk temizleme bezi ve 4 cm x 4 dokuma olmayan cm gazlı bez sünger uygun şekilde (Şekil 2).
4. İsoflurane odası hazırlamak.

2. anestezi indüksiyon

1. Aşağıdaki kişisel koruyucu donanımları (PPE): cerrahi maske, cerrahi eldiven, tek kullanımlık elbisesi.
2. Tartmak iri fare.
   Not: 250-350 g arasında Sprague-Dawley rat kullanın.
3. Oksijen kompresör ve isoflurane açın. Rat, isoflurane odasına tartılır sonra yerleştirin ve kapağı güvenli. 2 L/dak oksijen ile teslim % 6 isoflurane kullanarak anestezi neden.
   Not: kullanılan belirli anestezi sistemde kullanılan tam isoflurane doz bağlı olacaktır.
4. Hayvanın karın saç. klip için elektronik makası kullanın
5. Hayvan isoflurane odasında değiştirin.
6. Ameliyat odasında bulunan anestezi birimi açın.
7. Anestezi tamamen indüklenen zaman fareyi isoflurane odasından kaldırın. Bir ayak çimdik kullanarak anestezi derinliği onaylayın.

3. satın alma prosedürü

1. 16 G portal kol düğmesi (Şekil 3) hazırlayın.
   1. 16 G angiocatheter ile başlar. 7 mm bölüm hortumunun kesmek. 3.5 mm. deşmek orta nokta itibariyle ölçerek 7 mm bölüm orta noktasını belirlemek ve tüp ön yarısı kaldırın.
   2. Şimdi düz bu bölümü ezmek için bir hemostat kullanın. Daha hafif bir dudak oluşturmak için angiocatheter diğer ucundaki eritmek için kullanın. İpucu doğrudan alevin içine koymayın veya tutuşturmak olacak.
2. Safra kanalını kanül hazırlayın.
   1. 27 G angiocath alın ve sadece kateter bırakarak enjeksiyon bağlantı noktası kesti. Bu 27 G cannular boru 10 cm bölümüne bağlanın.
3. Pozisyonu burnu fareyle anestezi burun konisi ve onun dört ekstremite immobilize. Hayati belirtileri sol arka ekstremite için monitör ekleyerek izlemek. Uygun anestezi derinliği onaylamak için bir ayak çimdik gerçekleştirin. Anestezi % 4 isoflurane devam (tartmak hayvanlar için > 250 g).
4. Hayvanın karın % 70 izopropil alkol ile sprey. Kurumasını sağlar. Steril örtü üzerinde hayvan yer.
5. Keskin makas ve deri (Şekil 4) yoluyla uzanan pubis kullanarak bir ensizyon xiphoid üzerinden yapmak. Yavaşça Karın zarını girin ve kas deşmek. Bu kesi aşağı yönü mesane ve bu kesi üstün yönüyle karaciğer zarar görmesini önlemek için dikkat ediniz.
6. Belgili tanımlık kesme bir haç karaciğer alt kenarlığını düzeyde oluşturmak için sağ ve sol yanal için genişletmek.
7. Anestezi % 2 aşağı çevirmek (tartı hayvanlar için > 250 g).
8. Xiphoid bir eğri sivrisinek kelepçe ve kaburga kaburga ekartör (Şekil 5) kullanarak kullanarak işlemi geri çek.
9. Falciform, frenik, kesme ve gastrohepatic bağ keskin makas ile kesme.
10. Bulun ve frenik damar kökenli sızıntı önlemek mümkün olduğunca yakın 7-0 dikiş ile kravat-off.
11. Steril ıslatılmış pamuk uç aplikatör kullanarak fare içini ve barsak % 0,9 normal salin ile ıslatılmış gazlı bez şal. İnce bağırsak damarlara germek değil için dikkat ediniz.
12. İnferior vena kava (IVC aşırı doku kaldırmak için) üzerinde incelemek. Bifurkasyon için sadece üstün IVC arkasında incelemek ve bir 4-0 ipek sütür daha sonra kullanmak (Şekil 6) döngüsü geçirin.
13. Şu adrenal ven maruz sağlamak için sağ böbrek geri çek. Superior gazlı bez ile karaciğer sağ lob geri çek. 7-0 ipek sütür ile Şu adrenal ven IVC gibi mümkün olduğunca yakın bağlayın ve kravat (Şekil 7) distal genelinde dağlamak.
14. Dikkatlice splenik ven incelemek, iki 7-0 ipek sütür kullanarak bağla ve arasında iki dikiş kesti.
15. Bağlayın ve gerekirse ek damarlar için portal ven üzerinde ek uzunluğu 7-0 ipek sütür kullanarak ligate.
    Not: Bazen aşağı karaciğer arasındaki şu adrenal ven infrahepatic IVC küçük dalları vardır.
16. İncelemek gastroduodenal arter, gastroduodenal arter 7-0 ipek sütür ile bağlayın ve gastroduodenal arter ligate.
17. Hepatik arter teşrih ve çevresinde (Şekil 8) 7-0 ipek sütür kravat yerleştirin.
18. Safra kanalını incelemek.
    1. Safra kanalını uzunluğunu denetleyin. Safra kanalını distal uçta bir 7-0 ipek sütür kullanarak bağlayın. 7-0 ipek sütür safra kanalını çevresinde bir döngü mümkün olduğunca proksimale yer.
    2. Küçük makas ile kesme kanalının yarı çapı bir delik ve bir 27 G kateter proksimale safra kanalını yerleştirin. Kateter Roma Peep kravat dikiş (Şekil 9) kullanarak yerde bağla.
19. 0.5 mL heparin (50 U) penis ven veya IVC 27 G iğne kullanarak hayvanın enjekte.
    Not: 27 G insülin şırınga de bunun yerine kullanılabilir.
20. Kelepçe ve 4-0 ipek sütür daha önce yerleştirilmiş kullanarak IVC kravat.
21. Daha önce yerleştirilmiş kullanarak hepatik arter 7-0 ipek sütür bağla.
22. Portal ven mikrocerrahi klipi kullanarak kelepçe. Portal ven 22 G angiocatheter kullanarak cannulate. Floş portal ven ile soğuk % 0,9 normal salin ile 1 mL heparin (100 U) karaciğer kadar 60 mL (Şekil 10) blanches.
    Not: karaciğer hemen beyazlatmak değil Eğer bu Steril Pamuklu tıp uygulayıcıları ile masaj.
23. Suprahepatic IVC ortaya çıkarmak ve yüksek mümkün olduğunca göğsünden kesti.
24. Bir hepatectomy aşağıdaki gibi yapın. Diyafram kesmek, hepatik arter kesmek, IVC kesmek, portal ven kesmek, herhangi bir ek bağ kesilmiş ve karaciğer çıkar. Karaciğer buz soğuk % 0,9 normal salin (Şekil 11) yerleştirin.
25. Yeri 16 G vasküler manşet portal ven (Şekil 12). Karaciğer ex vivo normothermic karaciğer perfüzyon devre üzerinde yerleştirin.

4. Ex Vivo Normothermic karaciğer perfüzyon

Not: burada kullanılan perfusate Protokolü adım 1.1.1 hazırlanmıştır.

1. Portal ven kanülü kelepçeli portal ven (Şekil 13) yerleştirin.
2. Portal ven kanülü yerleştirme sırasında başlatmak için 2 mL/dk devre üzerinden perfusate akışını korumak. İzlemek için herhangi bir sivri portal ven basıncında monitör; Bu gemi tıkandı haline ve kanül yeniden konumlandırma gereklidir gösterebilir.
3. 7-0 ipek dikiş kullanarak perfusate dönüş akışını IVC kanül içinde dikiş.
4. Bir kez her iki kanüller yerdesiniz, 10-16 cmH₂O dizi fizyolojik bir basınç gelinceye kadar debi 1 mL/dk dönüm başlar.
5. 1 mL örnek öncesi ve sonrası limanlarda 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ve perfüzyon 240 min al. 1 mL örnek iki 0.5 mL örnek bölün.
   Not: 0.5 mL bu protokolü adım 4.5.1 kullanılan ve 0.5 mL kullanılan protokol adım 4.5.2.
   1. Ek bu Örneğin kriyojenik tüpler 0.5 mL sıvı azot dondur.
   2. Perfusate kalan 0.5 mL kullanarak bir arteryel kan gazı analizi yap.
   3. Kan gazı analizi her zaman noktası çalıştırdıktan sonra (0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ve 240 min) pH seviyeleri incelemek ve pH 7.4 dönmek için gerektiği gibi perfusate tampon.
6. Perfüzyon 4 h sonucunda, karaciğer perfüzyon devre bağlantısını kesin. Karaciğer 0.5 g parçalara bölün. Ek kriyojenik tüpler karaciğer dokusunda sıvı azot dondur.

5. sonrası deneme Analizi

1. Alanin aminotransferaz (ALT) düzey, 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ve 240 min bir ticari Renkölçer tahlil kit kullanarak perfusate belirler.
   1. Kısacası, perfusate tepki mix reaktifler 60 dk. optik yoğunluk değerleri 570 ölçü için 37 ° C'de ile kuluçkaya Mikroplaka Okuyucu kullanarak nm.
2. Karaciğer dokusu 0.5 g 100 µL lizis arabelleği ile homojenize ve dokusu adenozin trifosfat (ATP), glutatyon (GSH) ve malondialdehit (MDA) için lysate analiz.
   1. Kısacası, bir ticari tahlil kit kullanarak karaciğer doku örnekleri ATP düzeylerini ölçmek. Örnek ile reaksiyon tampon mix ve 30 dk. ölçü 570, optik yoğunluk için oda sıcaklığında kuluçkaya Mikroplaka Okuyucu kullanarak nm.
   2. Bir ticari tahlil kit kullanarak karaciğer doku örnekleri GSH düzeyleri ölçmek. Doku örnekleri tahlil kokteyl ile karıştırın. 405-414 nm optik yoğunluk değerlerinde ölçmek.
   3. Bir ticari tahlil kit kullanarak karaciğer doku örnekleri MDA düzeyleri ölçmek. TBA ve ısı ile 95 ° C 60 dk. santrifüj kontrollerimiz örnekleri karıştırın ve süpernatant bir 96-şey tabağa aktarın. 532, optik yoğunluk ölçmek nm.
3. Karaciğer dokusu 0.5 g 100 µL lizis arabelleği ile homojenize ve doku bir ticari tahlil kit kullanarak göreli caspase-3/7 etkinlik için lysate analiz.
   1. Doku lysate ile caspase-3-7 reaktif tahlil tampon mix ve 30 dk için oda sıcaklığında kuluçkaya.
   2. Her şey Mikroplaka Okuyucu kullanarak floresans düzeyini ölçmek.
4. Apoptotik hücre bir ticari in situ ölüm algılama kit kullanarak karaciğer doku örneklerinde düzeyini belirler.
   1. 0,5 g doku ile 10 U/mL İndinavir K 10 min için kesitler ve 60 dk. gerçekleştir floresan mikroskop kullanarak analiz için 37 ° C'de tepki karışımı ile kuluçkaya önceden tedavi.

Bir örnek boyutu grubu başına üç sıçan kullanıldı. ALT 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ve perfüzyon 240 min ölçüldü. Kullandığımız öğrencinin t-testleri temel perfusate ve temel perfusate artı, her zaman bir noktada PEG-kedi gruplar arasında karşılaştırılması. Temel perfusate ve temel perfusate artı PEG-kedi grupları karşılaştıran, işte önemli ölçüde daha az (p < 0,05) ALT taban perfusate artı PEG-kedi grubu 150, 180, 210 ve 240 min (Şekil 14A).

Karaciğer doku doku hasarı hem temel perfusate ve temel perfusate artı PEG-kedi grupları analiz için tedarik. Kullandığımız öğrencinin t-testleri temel perfusate ve temel perfusate artı PEG-kedi gruplar arasında karşılaştırılması. Doku ATP temel perfusate artı PEG-kedi grubu ile karşılaştırıldığında temel perfusate yalnız grup yapılmaktadır (Şekil 14B, p < 0,05). Doku MDA üretim temel perfusate artı PEG-kedi grubu daha temel perfusate grubunda daha yüksek (Şekil 14C, p < 0,05). Toplam GSH temel perfusate artı PEG-kedi grubu ile karşılaştırıldığında temel perfusate yalnız grup yapılmaktadır (Şekil 14D, p < 0,05).

Apoptozis analiz etmek için karaciğer dokusu caspase 3/7 aktivite grupları arasında karşılaştırıldı. Floresans her kuyuya ölçüldü. Kullandığımız öğrencinin t-testleri temel perfusate ve temel perfusate artı PEG-kedi gruplar arasında karşılaştırılması. Caspase 3/7 etkinliğini önemli ölçüde temel perfusate artı PEG-kedi grubu ile karşılaştırıldığında temel perfusate yalnız grup azalmıştır (Şekil 15A, p < 0,05). Terminal deoksinükleotidil transferaz (TdT) dUTP Nick uç etiketleme (tünel) boyama apoptosis gruplar arasında karşılaştırmak için kullanıldı. Apoptotik hücre yüzdesi daha az temel perfusate artı PEG-kedi grubu ile karşılaştırıldığında temel perfusate yalnız grubu (Şekil 15B, p < 0,05).

Şekil 1: perfüzyon devre. Bileşenleri devre olarak etiketlenmiştir. Perfusate bir su ceketli kapsayıcı olan perfusate rezervuar (1), içinde başlar. Perfusate su deposu silindir pompa (2) tarafından çekti ve bir windkessel (3) ve oxygenator (4) içine itti. Oxygenator countercurrent gaz ve perfusate akışı için maksimum gaz değişimi sağlamak için ayarlanır. Perfusate sonra fizyolojik sıcaklık ve hava kabarcıkları perfüzyon önlemek için bir kabarcık tuzak (6) olduğundan emin olmak için perfüzyon odası içinde Isıtma Bobin (5) devam eder. Orada ön organ (7) ve sonrası organ (8) tatmak perfusate izin örnek bağlantı noktaları. Perfusate sonra karaciğer portal ven kanülü yoluyla girer. Portal ven kanülü basınç ekolayzer (9) düzenleyen bir basınç monitör için eklenir. Son olarak, perfusate basınç bloğundan silindir pompa ile çekti ve göle boşalttım. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 2: ameliyathane ve cerrahi alet set-up. Cerrahi mikroskop (1) uygun yükseklik ve büyütme Kullanıcı için ayarlanmalıdır. Isoflurane anestezi makinesi (2) önceden yüklenmiş. Hayvanın burun burun konisi (3) yerleştirilir. Cerrahi aletler nerede kolayca erişilen (4) olabilir koydu. Elektrokoter (5) yakın olması yararlı olur. Dikiş (6) adet hızlı bir şekilde gerektiğinde elde edilebilir önceden kesilmiş olmalı ve ekstra (7) kullanılabilir olmalıdır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 3: 16 G portal ven manşet hazırlayın. 16 G angiocatheter ile başlar. 7 mm bölüm hortumunun kesmek. 3.5 mm. deşmek burada ölçerek 7 mm bölüm orta noktasını belirlemek ve tüp ön yarısı kaldırın. Şimdi düz bu bölümü ezmek için bir hemostat kullanın. Daha hafif bir dudak oluşturmak için angiocatheter diğer ucunu yazmak için kullanın. İpucu doğrudan alevin içine koymayın veya tutuşturmak olacak. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 4: ensizyon. Makas ve cilt ve kas uzanan keskin (1) için pubis (2) kullanarak bir ensizyon xiphoid üzerinden yapmak. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 5: yeterli retraksiyon edinmek. Xiphoid (1) bir eğri sivrisinek kelepçe (2) ve kaburga kaburga ekartör (3, 4) yerleştirerek kullanarak işlemi geri çek. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 6: Inferior vena kava (IVC) diseksiyon. Karaciğer maruz sağ böbrek kadar (1) ve portal ven (2) çevirin. IVC (3) teşrih ve 7-0 dikiş ileride kullanmak üzere bir döngü yerleştirin. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 7: Şu adrenal ven ligasyonu. Pozlama sağlamak için sağ böbrek (1) Şu adrenal ven geri çek. Şu adrenal ven kravat ve kesti. Nemli gazlı bez (2) Bu manevra sırasında karaciğeri korumak için kullanılabilir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 8: hepatik arter diseksiyonu. Çevresinde incelemek ve bir kravat (1) yakın nerede portal ven (2) altında geçer hepatik arter etrafında yer. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 9: safra kanalını cannulation. Cannulate (1) 27 G angiocatheter kullanarak safra kanalını (2) bağlı 27 G tüp (3). Bu perfüzyon sırasında safra toplamak için yardımcı olacaktır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 10: karaciğer floş. (1) ile 60 karaciğer floş cc soğuk % 0,9 normal salin ile 100 U (1 mL) heparin 16 G angiocatheter (2) kullanarak. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 11: hepatectomy sonra. Bir hepatectomy gerçekleştirmek ve karaciğer soğuk salin yerleştirin. Safra kanalını kanül çıkarmak değil için dikkat ediniz. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 12: Portal ven kıvırmak. Portal ven bulun. Birkaç milimetre dudak damarın pensi üzerinde bırakarak ven tutmak için büyük kelepçe (1) kullanın. Mikrocerrahi forseps (2, 3) portal ven 16 G vasküler eline kelepçe (4) eklemenizi sağlar. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 13: Portal ven manşet ve üstün IVC cannulation. Portal ven manşet (1) ve üstün IVC (2) cannulate. Büyük safra kanalını kanül (3) çıkarmak değil için özen göstermelidir. Ayrıca, üstün IVC twist değil için dikkat ediniz. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 14: temel salt perfusate ve temel perfusate doku hasarı analizini ve ayrıca PEG-kedi grupları (N = 3/Grup). Hata çubukları standart sapmayı temsil eder. (A)alanin aminotransferaz (ALT) düzeyleri. ALT düzeyleri temel perfusate ve temel perfusate artı pegile-katalaz (PEG-CAT) grubu arasında karşılaştırma, işte önemli ölçüde daha az ALT taban perfusate artı PEG-kedi grubu 150, 180, 210 ve 240 min (p < 0,05). (B) adenozin trifosfat düzeyleri. Dokusu adenozin trifosfat (ATP) tutulan temel perfusate artı PEG-kedi grubu ile karşılaştırıldığında temel perfusate yalnız grup (p <0,05). (C) malondialdehit seviyeleri. Doku malondialdehit (MDA) üretim temel perfusate artı PEG-kedi grubu daha temel perfusate grubunda daha yüksek (p < 0,05). (D) glutatyon düzeyleri. Toplam glutatyon (GSH) temel perfusate artı PEG-kedi grubu ile karşılaştırıldığında temel perfusate yalnız grup yapılmaktadır (p < 0,05). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Şekil 15: apoptosis temel salt perfusate ve temel perfusate Analizi ve ayrıca PEG-kedi grupları (N = 3/Grup). Hata çubukları standart sapmayı temsil eder. (A)Caspase-3/7 Activity.Caspase 3/7 etkinlik önemli ölçüde azalmıştır temel perfusate artı PEG-kedi grubu ile karşılaştırıldığında temel perfusate yalnız grup (p < 0,05). (B) Terminal deoksinükleotidil Nick uç etiketleme (tünel) dUTP transferaz (TdT) boyama. Görüntüleri bir 4 X floresan mikroskop kullanarak alındı. Apoptotik hücre yüzdesi daha az temel perfusate artı PEG-kedi grubu ile karşılaştırıldığında temel perfusate (p < 0,05). Yeşil: apoptotik hücreler. Mavi: nükleer. Ölçek çubukları 1000 µm. tünel hücreleri sayısal 4 rasgele mikroskobik alanları hücrelerden sayarak olumlu =. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Tüm yazarlar onlar hiçbir ilgili açıklamalar var rapor.