Decellularized kıkırdak elde edilen iskele osteokondral doku yeniden oluşturmak için kılavuz kıkırdak onarım için bir iskele ve bir araç olarak kullanılabilir. Bu yazıda ayrıntılı decellularization işlemini açıklar ve bu iskele tüp bebek ayarları’nda kullanmak için öneriler sunar.
Osteokondral kusurları işlevsel olarak ses kemik ve kıkırdak doku yeniden oluşturmak için yeterli iç onarım kapasitesi değildir. Bu ölçüde, kıkırdak araştırma rejeneratif iskele geliştirilmesi üzerinde odaklanmıştır. Bu makale tamamen doğal kıkırdak hücre dışı matriks, at bir donörün geliyor türetilir iskele gelişimi anlatılmaktadır. İskele potansiyel uygulamalar allogrefler kıkırdak onarım, mühendislik ve doku oluşumu çalışmaya tüp bebek modelleri sağlayarak osteokondral doku için bir iskele olarak hizmet için üreten içerir. Doku decellularizing tarafından donör hücreleri kaldırılır, ancak birçok doğal biyoaktif sopasıyla korunabilmesi için düşünce. Sentetik üretilen bir iskele ile karşılaştırıldığında doğal bir iskele kullanmanın ana avantajı yok daha fazla functionalization polimerlerin sürücü osteokondral doku rejenerasyonu için gerekli olmasıdır. Kıkırdak kaynaklı matris iskele içinde vivo ve tüp bebek ayarlarında kemik ve kıkırdak doku rejenerasyonu için kullanılabilir.
Travmatik olaylardan kaynaklanan diz eklem kıkırdak kusur rahatsızlık için yol açabilir ve her şeyden önce genç ve aktif nüfus1,2,3hayatlarını üzerinde büyük bir etkisi olabilir. Ayrıca, Genç yaşta kıkırdak hasarı daha hızlı başlangıçlı osteoartrit hayatı4sonraki bölümlerinde yer alan neden olabilir. Şu anda, sadece Hurda tedavi Genelleştirilmiş osteoartrit diz eklem replasmanı cerrahidir. Kıkırdak hypocellular, aneural ve avasküler doku olduğu için yeniden üretim kapasitesini ciddi sınırlıdır. Bu nedenle, rejeneratif tıp yaklaşımları sonra yardımcı olmak ve yerel doku Yenileyici kapasiteli uyarmak için aranır. Bu amaçla, iskele tasarlanmış ve farklılaşma ve doku rejenerasyonu kışkırtırız endüktif bir malzeme olarak ya da ya da bir hücre taşıyıcı olarak vücudun doğal hücreleri5tarafından kullanılabilir.
Decellularized iskele rejeneratif tıp6içinde yaygın olarak inceledik. Bu bir başarı, örneğin, cilt7, karın yapıları8ve tendon9rejenerasyon yardım elde etti. Decellularized iskele kullanmanın avantajı doğal kökenlerine ve hem çekmek ve hücre farklılaşması doku onarım6,10için gerekli uygun lineage içine neden biyoaktif ipuçlarını korumak için kendi kapasitesi var. Ayrıca, hücre dışı matriks (ECM) doğal bir biomaterial ve decellularization hücresel veya genetik içeriği kaldırarak potansiyel bir bağışıklık yanıtı engeller olduğundan, biyouyumluluk ve biodegradability ile ilgili konular üstesinden vardır.
Kıkırdak kaynaklı matris (CDM) iskele büyük chondrogenic ile mezenkimal stromal hücre11numaralı seribaşı zaman tüp bebek deneylerde potansiyel göstermiştir. Buna ek olarak, bu iskele ektopik konumlardaki içinde vivo ayarları12formu kemik doku ile endochondral ossifikasyon potansiyeline göstermiştir. CDM iskele oluşumu rehber olarak her ikisi de kemik ve kıkırdak doku, bu iskele osteokondral defekt tamir yanı sıra kıkırdak onarım için potansiyel tutabilir.
Bu makalede, Yang sayfasından uyarlanmış bir protokol et al. (2010)13 üzerinden atlar decellularized CDM iskele imalatı için diz kıkırdak. Bu iskele kollajen tip II ve hücreleri yoksun zengindir ve herhangi bir glikozaminoglikan (GAG) decellularization sonra içermez. Tüp bebek ve içinde vivo deneyler (osteo) kıkırdak defekt tamir bu iskele kullanarak yapılabilir.
Eklem kıkırdak ECM çok yoğun ve farklı enzimatik tedavi için oldukça esnek. Bu makalede açıklanan multi-step decellularization iletişim kuralı böyle direnç giderir ve başarılı bir şekilde decellularized matrisler oluşturur. Bunu başarmak için birkaç gün içinde işlem yayılmıştır. Birçok decellularization süreçleri doku18farklı türleri için önerilen ve kıkırdak decellularization için uygun bir protokol bu makalede. Bu protokol için bu, ancak, tüm hücreleri ka…
The authors have nothing to disclose.
Yazarlar W. önyükleme için iskele imalatı yardım kabul etmek istiyorum. K.E.M. su bükücüler Alexandre Suerman Stipendium Üniversitesi Tıp Merkezi tarafından desteklenmektedir. R. Levato ve J. Malda Hollandalı Artrit Vakfı tarafından desteklenmektedir (CO-14-1-001 ve LLP-12, sırasıyla vermek).
Cadaveric joint | This can be obtained as rest material from the local butcher or veterinary center. | ||
Sterile phosphate-buffered saline (PBS) | |||
Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140 | |
Amphotericin B | Thermo Fischer Scientific | 15290026 | |
Liquid nitrogen | |||
Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red | Thermo Fischer Scientific | 25200072 | |
Tris-HCl pH 7.5 | |||
Deoxyribonuclease I from bovine pancreas | Sigma-Aldrich | DN25 | |
Ribonuclease A from bovine pancreas | Sigma-Aldrich | R6513 | |
Triton X-100 (octoxynol-1) | Sigma-Aldrich | X100 | |
Papain | Sigma-Aldrich | P3125 | |
Trisodium citrate dihydrate | Sigma-Aldrich | S4641 | |
Alginate | Sigma-Aldrich | 180947 | |
Formalin | |||
CaCl2 | |||
Ethanol | |||
Xylene | |||
Paraffin | |||
Ethylene oxide sterilization | Synergy Health, Venlo, the Netherlands | ||
Multipotent Stromal cells/chondrocytes from equine donors | MSCs and chondrocytes can be isolated from donor joints that are rest material, coming from the local butcher or veterinary center. | ||
MEM alpha | Thermo Fischer Scientific | 22561 | |
L-ascorbic acid 2-phosphate | Sigma-Aldrich | A8960 | |
DMEM | Thermo Fischer Scientific | 41965 | |
Heat inactivated bovine serum albumin | Sigma-Aldrich | 10735086001 | |
Fibroblast growth factor-2 (FGF-2) | R & D Systems | 233-FB | |
DNA quantification kit (Quant-iT PicoGreen dsDNA Reagent) | Thermo Fischer Scientific | P7581 | |
1,9-Dimethyl-Methylene Blue zinc chloride double salt | Sigma-Aldrich | 341088 | |
Freeze-dryer | SALMENKIPP | ALPHA 1-2 LD plus | |
Analytical mill | IKA | A 11 basic | |
mortar/pestle | Haldenwanger 55/0A | ||
Roller plate | CAT | RM5 | |
Centrifuge (for 50 mL tubes) | Eppendorf | 5810R | |
Capsule (cylindric mold) | TAAB | 8 mm flat | |
Superlight S UV | Lumatec | 2001AV | |
Incubator | |||
Microtome | |||
Sieve (mesh size 0.71 mm) | VWR | 34111229 | |
Scalpel | |||
Scalpel holder | |||
Small laddle |