Farelerde İmplantla İlişkili Enfeksiyonların Hayvan Modeli

İmplantla ilişkili enfeksiyonların hayvan modelleri, temel araştırma ve klinik uygulamalar arasında köprü kuran temel araçlardır ^1,2. Bu bulgular bilimsel araştırmalar için pratik destek sağlar ve yeni terapötik ve tanısal yaklaşımların geliştirilmesini ve iyileştirilmesini kolaylaştırır, sonuçta hasta sonuçlarını ve yaşam kalitesini iyileştirir 3,4,5,6. Bu modeller, implantla ilişkili enfeksiyonlarla ilişkili patofizyolojik değişikliklerin anlaşılmasına yardımcı olan uzun süreli gözlem için bir platform sunar ^7,8. Örneğin, enfeksiyonun çevre dokular ve kemikler üzerindeki etkilerini gözlemleyerek, araştırmacılar enfeksiyonların doku hasarına, osteolize ve diğer komplikasyonlara nasıl yol açtığını açıklayabilir ve böylece klinik tedavi stratejilerindeki gelişmelere rehberlik edebilir.

Başarılı hayvan modeli çalışmaları, klinik araştırmalar için temel veriler sağlar ve terapötik stratejilerin optimize edilmesine yardımcı olur ^9,10. Bu deneyler sayesinde araştırmacılar, klinik araştırmaları bilgilendirebilecek en etkili dozu, tedavi süresini ve uygulama yolunu belirleyebilir^11,12. Ek olarak, hayvan modelleri, insan denemelerine geçmeden önce gerekli ayarlamaların yapılmasına izin vererek, tedavi sınırlamalarının değerlendirilmesine olanak tanır. Cihazla ilişkili enfeksiyonlar olarak da adlandırılan implantla ilişkili enfeksiyonların hayvan modelleri, bu enfeksiyonlar için mekanizmaların, tespit yöntemlerinin ve tedavi yaklaşımlarının incelenmesinde paha biçilmezdir^13,14. İmplant enfeksiyonları sıklıkla eklem replasmanları veya kırık fiksasyonları gibi cihazların yaygın olarak kullanıldığı ortopedi ve diş hekimliği gibi alanlarda ortaya çıkar 15,16,17,18. İmplantların varlığı nedeniyle, enfeksiyonların ortadan kaldırılması zordur ve sıklıkla kronik iltihaplanma ve doku hasarına yol açar, potansiyel olarak hastanın iyileşmesini engeller ve daha ileri tedavi için implantın çıkarılmasını gerektirir.

Hayvan modellerinin oluşturulmasının amacı, kontrollü koşullar altında implantla ilişkili enfeksiyonların oluşumunu ve ilerlemesini simüle etmek, patofizyolojik süreçlerin derinlemesine araştırılmasına, yeni tanı yöntemlerinin geliştirilmesine ve potansiyel terapötik stratejilerin değerlendirilmesine olanak sağlamaktır 19,20,21,22,23. İdeal bir hayvan modeli, deneylerde tutarlı bir tekrarlanabilirlik ile insan enfeksiyonlarında gözlenen patolojik özellikleri ve bağışıklık tepkilerini yakından taklit etmelidir 24,25,26. Yaygın olarak kullanılan hayvanlar arasında sıçanlar, fareler ve tavşanlar bulunur ve her model implant tipi seçimi, bakteri suşları ve enfeksiyon yöntemleri gibi belirli araştırma hedeflerine göre uyarlanır. Bu modellerle araştırmacılar, implant üzerinde biyofilm oluşumu da dahil olmak üzere enfeksiyon yayılımını, bağışıklık tepkilerini ve patojen kolonizasyon davranışlarını izleyebilir 11,23,27. Ayrıca, bu modeller antibiyotikler, antimikrobiyal kaplamalar ve fotodinamik tedavi gibi antimikrobiyal tedavilerin enfeksiyonu kontrol etmedeki etkinliğini test etmede etkilidir ^4,12,28. Hayvan modellerinde yeni tanı yöntemlerinin ve görüntüleme teknolojilerinin uygulanması, klinik ortamlarda implantla ilişkili enfeksiyonların erken teşhisi ve etkili yönetimi için potansiyeli de artırmaktadır.

Uzun vadeli hedef, insanlarda implantla ilişkili enfeksiyonların fiziksel ve fizyolojik mikro ortamlarını doğru bir şekilde kopyalayan bir hayvan modeli oluşturmaktır. Bu çaba yüksek karmaşıklık, önemli maliyetler ve devam eden zorluklar içermesine rağmen, implantla ilişkili enfeksiyonlar için oldukça gerçekçi bir hayvan modelinin geliştirilmesi, terapötik ajanlar ve stratejiler için kritik bir erken aşama test platformu sağlar. Bu çalışmada, fare implantı ilişkili enfeksiyon modeli ve fare subkutan enfeksiyon modeli oluşturulmuştur. İlgili göstergeleri karşılaştırarak, hayvan modeli ile klinik periprostetik enfeksiyonlar arasındaki eşleşme derecesi araştırıldı.

Tüm hayvan deney prosedürleri, Hefei Kapsamlı Ulusal Bilim Merkezi, Sağlık ve Tıp Enstitüsü Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır (onay numarası: IHM-AP-2024-080). Kullanılan tüm fareler, 6 haftalık, vücut ağırlıkları 20-30 g olan, spesifik patojen içermeyen (SPF) dereceli erkek C57BL / 6J farelerdi. Ortam, 12 saatlik aydınlık/karanlık döngüsü altında %50-60 bağıl nem ile 22-26 °C'de tutuldu (Işık: 07:00-19:00; Karanlık: 19:00-07:00). Bu çalışmada kullanılan reaktiflerin ve ekipmanın ayrıntıları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Deri altı implant biyofilm enfeksiyonu için bakteri hazırlığı

1. -80 °C stok tüpünden bir döngü (10 μL) Staphylococcus aureus (S. aureus, ATCC 43300) kültürünü çıkarın. Çizgi plakası tekniğini kullanarak süspansiyonu bir kan agar plakasına sürün. 37 °C'de aerobik koşullar altında çalkalamadan 24 saat inkübe edin.
   NOT: Başlangıç ve terminal sektörlerin birleşimsiz kalması koşuluyla, üç sektörlü veya dört sektörlü çizgi plakası yöntemlerine izin verilir. Sektörler arası çizgi, yeni bir aşılama döngüsünün kullanılmasını gerektirir. Düzgün mikrobiyal dağılımı kolaylaştırmak için paralel, eşit uzaklıkta çizgiler uygulanmalıdır. Çapraz kontaminasyonu önlemek için aseptik protokollere sıkı sıkıya bağlı kalmak zorunludur.
2. Tipik S. aureus kolonilerinin morfolojisini ve berrak hemolitik bölgelerin varlığını inceleyin.
   NOT: Tipik koloni morfolojisi, altın sarısı pigmentasyon, yuvarlak bir şekil ve pürüzsüz bir yüzey içerir. β-hemoliz için en az 2 mm çapında net bir bölge pozitif kabul edilir.
3. S. aureus kimliğini doğrulamak için Gram boyama ve mikrobiyal kütle spektrometresi analizi yapın.
   NOT: Gerinim tanımlaması, belirlenmiş seçim kriterleri kullanılarak araştırmacılar tarafından yapılmalıdır.
4. Bağımsız bir tipik koloni seçin (adım 1.2'de açıklandığı gibi). 5 mL steril triptik soya suyu (TSB) içeren 15 mL'lik steril bir santrifüj tüpüne aşılayın. 37 °C'de 12 saat inkübe edin ve 200 rpm'de çalkalayın.
5. Bakteriyel süspansiyonu adım 1.4'ten itibaren TSB ile 1:50 oranında seyreltin. 200 rpm'de çalkalanarak 37 °C'de inkübe edin.
6. Logaritmik büyüme fazını tanımlamak için bir spektrofotometre kullanarak optik yoğunluğu (OD) 600 nm'de izleyin ve kaydedin.
7. Yayılmış plaka yöntemini kullanarak OD600 değerleri ile mililitre başına Koloni Oluşturan Birimler (CFU/mL) arasında bir korelasyon kurun (bkz. adım 4.1.7-4.1.10).
   NOT: Bu deneyde ideal OD600, yaklaşık 4 × 10⁵ CFU/mL'ye karşılık gelen 0.700-0.750'dir. OD600 ve CFU/mL arasındaki ilişkinin belirlenmesi deneysel doğruluğu sağlar.
8. 3 mL bakteriyel süspansiyonu (adım 1.7, 4 × 10⁵ CFU / mL'den) 3 mL soğuk steril fosfat tamponlu salin (PBS) ile seyreltin. 3.000 × g'da 4 °C'de 10 dakika santrifüjleyin ve peleti yeniden süspanse edin. Nihai bakteri konsantrasyonu: 2 × 10⁵ CFU / mL.
   NOT: 1:1 oranı, kültür ortamı safsızlıklarının etkili seyreltmesini hücre bütünlüğünün ve ozmotik stabilitenin korunması ile dengeler. Ozmotik strese bağlı hücre hasarını en aza indirirken verimli yıkama sağlar ve sonraki işlemler için kritik olan santrifüjleme sırasında homojen hücre peleti oluşumunu destekler.
9. Adım 1.8'i iki kez tekrarlayın.
10. Daha fazla deney için bakteri peletini PBS'de yeniden askıya alın.

2. Fare ve implant hazırlığı

1. 20 C57BL / 6J vahşi tip fareyi rastgele iki gruba (10 fare / grup) bölün: İmplantla İlişkili Enfeksiyon grubu ve Deri Altı Apse grubu²⁹.
   NOT: Her grup, kafes başına beş fare olacak şekilde, ayrı ayrı havalandırılan iki kafese (IVC) yerleştirilmelidir.
2. Tanımlama için her fareye kuyruk işaretleri uygulayın.
3. Dairesel titanyum plakaları (TA1, 1 cm çapında, 0,5 mm kalınlığında) 121 °C, 0,1 MPa'da 30 dakika boyunca otoklavlayarak sterilize edin.

3. Hayvan cerrahisi

1. Fareleri, anesteziyi indüklemek için yaklaşık 5 dakika boyunca genel hayvan gazı anestezikleri içeren bir izofluran (% 2) gaz indüksiyon odasına yerleştirin (kurumsal olarak onaylanmış protokolleri izleyerek).
2. Uygun anestezik derinliği sağlamak için solunumu izleyin.
   NOT: Solunum, uyanık olduğundan daha düzenli ve daha yavaş olmalı ve cerrahi prosedürler veya ayak parmağını kıstırma gibi zararlı uyaranlara yanıt olarak değişmemelidir.
3. % 2 izofluran ve 2 L / dak oksijen akışının sürekli solunmasını kullanarak nazal koni dağıtım sistemi ile anesteziyi koruyun (Şekil 1A).
   NOT: Stres kaynaklı mücadeleyi önlemek ve hayvan refahı düzenlemelerine uyumu sağlamak için tüm işlemleri anestezi altında gerçekleştirin.
4. Anestezi uygulanmış fareleri biyogüvenlik kabininin hazırlık bölgesine aktarın.
   NOT: Biyogüvenlik kabinini üç bölmeye ayırın: hazırlık, dezenfeksiyon ve çalışma bölgesi. Her bölmeye steril tek kullanımlık paspaslar yerleştirin. Aseptik koşulları korumak için kabin içindeki tüm prosedürleri gerçekleştirin.
5. Sırttaki tüyleri (3 cm × 4 cm'lik alan) tıraş edin ve yaklaşık 1 dakika boyunca tüy dökücü krem uygulayın.
6. Cildi iyot çözeltisi ve% 75 etanol ile üç kez dezenfekte edin (Şekil 1B).
7. Steril cerrahi bıçaklar kullanarak sırt bölgesinde yaklaşık 1 cm'lik bir kesi yapın. Steril titanyum implantları (adım 2.3'te hazırlanan) deri altı cebe yerleştirin (Şekil 1D).
   NOT: Deri altı cebi oluşturmak için steril forseps kullanarak insizyonun distal derisini yükseltin.
8. 100 μL S. aureus bakteri süspansiyonunu (2 × 10⁵ CFU / mL) 1 mL steril bir şırınga kullanarak doğrudan titanyum yüzeye enjekte edin (Şekil 1E).
9. Cildi %75'lik etanol ile dezenfekte edin ve kesiyi kapatmak için 3-0 emilmeyen dikişler uygulayın (Şekil 1F).
10. Deri altı apse grubu için, herhangi bir implant yerleştirmeden insizyonu doğrudan oluşturun, dezenfekte edin ve dikin.
11. Steril 1 mL şırınga kullanarak insizyon yoluyla 100 μL S. aureus süspansiyonu (2 ×^{10 5} CFU / mL) enjekte edin.
    NOT: Hızlı sıvı birikimini azaltmak ve bakteriyel süspansiyon sızıntısını önlemek için uygulama boyunca sürekli yavaş hızlı enjeksiyon sürdürüldü.
12. Hayvanları yeni IVC'lere aktarmadan önce spontan solunum devam edene kadar solunum fonksiyonunu izleyin.
13. Ameliyat sonrası ağrıyı yönetmek için meloksikamı (0.02 mL / 10 g / gün) art arda üç gün boyunca deri altından uygulayın.
14. Tüm farelerin uzuvlarına tam ağırlık verebildiğinden, kısıtlama olmaksızın hareket edebildiğinden ve yiyecek ve suya özgürce erişebildiğinden emin olun.
    NOT: Tedavi edilmemiş fareler veya eski IVC'ler ile çapraz kontaminasyonu önlemek için tedavi edilen tüm fareleri yeni IVC'lerde barındırın.

4. Ameliyat sonrası gözlem ve değerlendirme

1. Periferik dokudaki enfeksiyonların değerlendirilmesi
   1. Her farede dorsal insizyonun durumunu günlük olarak gözlemleyin ve 1, 3, 5, 7, 10 ve 14. günlerde gözlemleri kaydedin.
      NOT: İmplant yerinden çıkması için monitör; tespit edilirse, sonraki taramalı elektron mikroskobu (SEM) analizi için implantı derhal alın.
   2. Fareleri CO₂ asfiksiasyonu ve ardından 3, 7 ve 14. günlerde servikal çıkık yoluyla ötenazi yapın. Daha fazla analiz için implantları ve periferik dokuyu toplayın (Şekil 2).
   3. Sırt kıllarını tıraş edin ve doku toplamadan önce üç kez iyodofor ve% 75 etanol kullanarak cildi dezenfekte edin.
      NOT: Sırt kıllarının tıraş edilmesi ve yara yüzeyinin dezenfekte edilmesi, yüzey bakterilerinden kaynaklanan kontaminasyonu en aza indirir.
   4. Steril cerrahi makas kullanarak cildi, deri altı dokusunu ve kası implant veya yara çevresinde 0,5 cm'lik bir kenar boşluğu içinde eksize edin.
      NOT: Verimi en üst düzeye çıkarmak için doku örneklerini boyut kısıtlaması olmadan toplayın. Tutarlı g/mL birimlerini korumak için her numuneyi eşit kütlede steril PBS ile tartın ve homojenize edin. Bakteriyel kantitasyon (proksimal) ve histopatolojik değerlendirme (distal) için her doku örneğini uzunlamasına ve eşit olarak proksimal ve distal segmentlere bölün.
   5. Toplanan dokuyu steril tüplere yerleştirin. Her tüpe eşit kütlede steril PBS ve üç steril çelik öğütme boncuğu ekleyin.
   6. Dokuları üç döngüde (70 Hz, 60 s öğütme süresi, 20 s duraklama süresi) homojenize edin, ardından 5 dakika girdaplayın.
   7. Homojenatın seri seyreltmelerini (adım 4.1.6'dan itibaren) PBS ile 10¹ ila 10⁵ arasında gerçekleştirin.
   8. Her seyreltilmiş homojenattan 15 μL'yi kanlı agar plakalarının belirlenmiş alanlarına damlatın.
   9. Plakaları 37 °C'de 24 saat çalkalamadan inkübe edin.
      NOT: Her bir kan agar plakasını altı eşit sektöre bölün ve ilgili alanlarına seri seyreltmeler uygulayın.
   10. Bakteri kolonilerini bir dijital kamera kullanarak kaydedin ve manuel olarak sayın.
2. İmplantlar üzerinde S. aureus'un gözlenmesi
   1. 3, 7 ve 14. günlerde implantları steril makas ve cımbız kullanarak hasat edin.
   2. Sabitleme için implantları 4 ° C'de 48 saat boyunca% 2,5 glutaraldehit içine daldırın.
   3. İmplantları steril PBS ile üç kez durulayın, ardından her biri 10 dakika boyunca etanol solüsyonları (%50, %70, %80, %90 ve %100) kullanarak kurutun.
   4. İmplantları -85 °C'de dondurarak kurutucuda dondurarak kurutun ve vakum basıncı 20 Pa'nın altında tutuldu.
   5. İmplantları iletken bant kullanarak bir numune aşamasına monte edin ve 10 nm'lik bir altın tabakası ile kaplayın.
   6. Numuneleri SEM altında yüksek vakumda ve 1,5 kV'da gözlemleyin. Büyütmeyi gerektiği gibi en az ×2500'e ayarlayın.
3. Periferik dokunun patolojik analizi
   1. 3, 7 ve 14. günlerde, cildi dezenfekte ettikten sonra steril makas kullanarak periferik dokuları veya ana organları toplayın.
   2. Toplanan dokuyu fiksasyon için 4 ° C'de 48 saat boyunca% 4 paraformaldehite daldırın.
   3. Dokuyu her biri 15 dakika boyunca dereceli etanol çözeltilerine (%50, %70, %80, %90, %100) batırarak kurutun.
   4. Susuz kalmış dokuyu parafine gömün ve bir mikrotom kullanarak 4 μm'lik dilimler halinde bölün.
   5. Standart protokolleri³⁰ kullanarak bölümleri hematoksilen ve eozin (H & E) veya Giemsa ile boyayın.
   6. Doku hücresi kantitatif analiz sistemini kullanarak lekeli dilimleri gözlemleyin.

Bu çalışmada açıklanan metodoloji ile bir fare deri altı implantla ilişkili enfeksiyon modeli oluşturulmuştur (Şekil 1). Tüm fareler cerrahi operasyondan sonraki 3 saat içinde iyi durumdaydı, diyetleri, uykuları ve aktiviteleri aynı gün normale döndü.

Ameliyat sonrası, her iki grubun sırtındaki yara alanlarını gözlemlemeye devam ettik ve deney sonuna kadar implant ilişkili enfeksiyon grubundaki deri altı apse aralığının, deri altı apse grubundakinden daha fazla olduğunu bulduk (Şekil 3). Deri altı apse grubu ile karşılaştırıldığında, implantla ilişkili enfeksiyon grubunda 4 gün önce meydana gelen 3. günde rüptür gelişti. 10. günde, her iki fare grubu da yara iyileşmesi belirtileri gösterdi ve deri altı apse grubu 14. günde daha belirgin iyileşme gösterdi. Buna karşılık, bazı farelerin 14 gün içinde titanyum tabakaları döktüğü implantla ilişkili enfeksiyon grubunda yara henüz iyileşmemiştir, bu da daha şiddetli bir enfeksiyon derecesine işaret eder.

İki grup arasındaki enfeksiyon derecesindeki farkı daha görsel olarak ayırt etmek için, her farede enfeksiyon bölgesinden doku topladık. Her iki gruptan enfeksiyon bölgesinin doku homojenat dilüsyonları, kan agar plakaları üzerindeki bakteri yükü açısından analiz edildi (Şekil 4A). Çarpıcı bir şekilde, implantla ilişkili enfeksiyon grubundaki enfekte doku miktarı 7. ve 14. günlerde azalma eğilimi göstermezken, deri altı apse grubundaki enfekte doku bakterilerinin miktarı 3., 7. ve 14. günlerde art arda azalmıştır (Şekil 4B). İmplantla ilişkili enfeksiyon grubundaki farelerden çıkarılan titanyum tabakaların SEM gözlemleri, yukarıdaki bulguları daha da doğruladı, yani farelerde titanyum tabakalar üzerindeki bakteri sayımlarında 14 günlük bir süre boyunca kademeli bir artış oldu (Şekil 5). Giemsa boyaması ayrıca subkutan apse grubundaki enfekte dokuların bakteri sayımlarının 7. günde 3. güne göre önemli ölçüde daha düşük olduğunu ve 14. günde daha da azaldığını ortaya koydu, bu süre zarfında implantla ilişkili enfeksiyon grubunda bakteri sayısında bir azalma belirtisi yoktu (Şekil 6). Bu nedenle, implant ilişkili enfeksiyon modeli, eşdeğer bir enfeksiyon dozu altında deri altı apse modelinden daha şiddetli ve kalıcı enfeksiyon gösterdi.

Farelerin enfekte olmuş dokularında H&E boyama yoluyla enflamatuar hücre infiltrasyonunun yoğunluğunun daha ileri analizi, subkutan apse grubunun, 3. güne kıyasla 7. günde daha düşük derecede inflamatuar hücresel infiltrasyon sergilediğini ve 14. günde kayda değer bir azalma gösterdiğini ortaya koymuştur (Şekil 7). İmplant ilişkili enfeksiyon grubundaki inflamatuar hücre infiltrasyonu 14 günlük süre boyunca yüksek olmaya devam etti. Son olarak, implant ilişkili enfeksiyon grubundaki ana organların histopatolojik analizi, modelleme yöntemimizi kullanarak tüm ana organların esasen normal olduğunu ve normal farelere kıyasla sonuçta lezyonların belirgin bir tezahürü olmadığını ortaya koydu (Şekil 8). Bu sonuçlar, modelleme yöntemimizin son derece güvenli ve güvenilir olduğunu ve implantla ilişkili enfeksiyonların incelenmesi için uygun olduğunu göstermiştir.

Şekil 1: İmplant ilişkili enfeksiyon modelinin protokolü. (A) Anestezi, nazal koni iletimli bir inhalasyon anestezi sistemi kullanılarak sürdürüldü; İç: Bir gaz indüksiyon odası aracılığıyla indüksiyon anestezisi. (B) Cerrahi bölge tıraş edilerek ve dezenfekte edilerek cilt hazırlığı yapıldı. (C) Steril bir bıçak kullanılarak enine dorsal bir insizyon yapıldı. (D) İnsizyon yoluyla deri altından steril bir titanyum implant yerleştirildi. (E) Bakteriyel süspansiyon (2 × 105 CFU / mL) enfeksiyonu indüklemek için titanyum yüzeye uygulandı. (F) İnsizyon bölgesi sterilize edildi ve dikildi. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 2: Deney gruplama, numune toplama ve analiz prosedürlerinin şeması. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 3: 1, 3, 5, 7, 10 ve 14. günlerde her iki modelde de insizyon bölgelerinin temsili görüntüleri. Ölçek çubuğu: 1 cm. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 4: Periferik dokudan bakteri yükü analizi. (A) 3, 7 ve 14. günlerde yayılmış plaka kültürlerinden bakteri kolonilerinin temsili görüntüleri. Üst sıra: deri altı apse modeli; Alt sıra: İmplantla ilişkili enfeksiyon modeli. (B) Her iki grupta da zaman içinde bakteri yükündeki kantitatif değişiklikler. (C) Bakteri tayini için kullanılan seri seyreltme yönteminin şeması. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 5: 3, 7 ve 14. günlerde titanyum implant yüzeyinin taramalı elektron mikroskobu (SEM) görüntüleri. Sarı küreler S. aureus'u gösterir; Mavi arka plan titanyum yüzeyi temsil eder. Ölçek çubuğu: 20 μm. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 6: Her iki modelde de 3, 7 ve 14. günlerde periferik dokunun Giemsa boyaması. Kırmızı oklar bakteri kolonilerini gösterir. Ölçek çubuğu: 50 μm. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 7: Her iki modelde de 3, 7 ve 14. günlerde periferik dokunun hematoksilen ve eozin (H&E) boyanması. Ölçek çubuğu: 50 μm. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 8: İmplantla ilişkili enfeksiyon modelinde ve sağlıklı kontrol farelerinde 14. günde ana organların H & E boyaması. Ölçek çubuğu: 50 μm. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Yazarlar, rekabet eden herhangi bir mali çıkarları olmadığını beyan ederler.