Name: Civciv Ex ovo Kültür ve Ex ovo CAM Testi: Gerçekten Nasıl Çalışır? (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-11-30T14:45:00.000+00:00
Duration: 17 min 23 s
Description: Keşfedin civciv ex ovo kültür ve CAM testi yöntemlerini anjiyogenez ve tümör biyolojisi araştırmaları için. Bu teknik, kanser çalışmalarında canlı model kullanımını kolaylaştırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar cömertçe tümör malzeme temini için mükemmel teknik destek ve Prof. Ruebben J. Kueper ve J. Wittschier teşekkür etmek istiyorum.

Tüm ekipman ve reaktifler steril satın alınacak ya da ısı veya buharla sterilize veya% 70 ETOH ile sterilize edilmiş olması gerekir. Hayvanlar üzerinde yapılan deneylerde, hayvanların bakımı ve kullanımı ile ilgili deneysel prosedürleri ve Kurumsal Hayvan tarafından belirlenen düzenlemelere NIH Rehberi ardından, Avrupa Toplulukları Konsey Direktifi (86/609/EEC) uygun olarak yapıldığını ve bu yazarlar Bakım ve Duisburg-Essen Üniversitesi (Almanya) Komitesi (IACUC) kullanın. Bölüm 1: yumurta Kuluçka <ol><li> Döllenmiş yumurtalar 13 ° C'de bir haftaya kadar saklanabilir. </li><li> Yumurta, yumurta sürekli bir günde 12 kez dönen bir kuluçka makinesi, hareketli bir tepsi ile yatay yatık, 72 saat süreyle inkübe edilir. Nem 60 tutulur -% 62, 37.5 inkübasyon sıcaklığı ° C Not: inkübasyon, kir, tüy ve dışkı başlamadan önce dikkatli bir şekilde, oldukça yumuşak bir yüzey yapısı daha kaba bir ortak, gri zikzak el kağıt havlu, kuru silerek mekanik yumurta kabukları çıkarılır . Etanol veya dezenfektan ile yumurta silme Ancak, ne olursa olsun kullanılan sıvı embriyoların hayatta kalma oranı, önemli ölçüde azalır. </li></ol> Bölüm 2: Ex-ovo kültür <ol><li> 72 saat inkübasyondan sonra, yumurtalar inkübatör kaldırılır. Not: çünkü yumurtalar 72 saat süreyle inkübe edilir, ancak bilinmeyen nedenlerle Auerbach ve al.1 önceki gelişim aşamaları ile anlaşma önemli ölçüde daha düşük sağkalım oranları vardı deneylere göre. Aşamalarında en geç 72 saat henüz CAM kapsamında değildir sarısı çuval incelir ve küçük kanamalara bağlılık alan ve (ii) yumurta sarısı-çuval rüptür (i) önde gelen yumurta kabuğu yapışma eğilimi membran. Bu nedenle sunulan yöntem 72 saatten daha büyük embriyolar için geçerli değildir. </li><li> Embriyo belli bir dereceye kadar rotasyon direnir beri yumurta embriyo bulunduğu üst tarafında, kalem ile işaretlenir. </li><li> Yumurtanın üstüne kalem işareti ile yatay düzenlenen ve 80 mm, yumurtanın uzun eksenine yönelik dikey döşeme bir üçgen manyetik karıştırıcı kenarında çatlak. Not: daha iyi bir duygu, hiç eldiven kullanılmalıdır, ancak% 70 EtOH ile eller dezenfekte edilmelidir. Yumurta kabuğu gibi yumurta zarının açılmış olduğu önemlidir. Yumurta beyazı Sızıntı yumurta zarı perfore olmuştur güvenli bir işaretidir. </li><li> Yumurta, yumurta beyazı daha fazla sızmasını önlemek için Petri kabı alt yakın tutulur. Not: ilk açılış prosedürü sırasında, Petri kabı altındaki beyaz yumurta hala bu sonuç olarak bir vakum içinde üst embriyo sarısı tutan yumurta içinde yumurta içinde geri kalanına bağlı olduğu önemlidir. yumurta. Vakum ya yumurtanın içine hava girişi kontrol parmak basıncı ile veya bağlı yumurta beyazı yani vakum sütun artırır yumurta kaldırma düzenlenir. </li><li> Hafifçe başparmak ve orta parmakları ile yumurtanın çatlak ve ekvator üzerinden çalışan meridyen basınç uygulayarak vakum düzenlenmesi mümkündür. Içerik yumurta, yumurta sarısı ile hafifçe kaldırdı ve kabuğun her iki devreyi de dikkatle ayrılır sonra hasarsız Petri çanak transfer olabilir. Embriyo ve yumurta sarısı damarları hasarsız sarısı üstüne yatırılmış olmalıdır. Not: kalem işareti üstünde tutulması değilse kabuk çatlama, embriyo zarar olabilir. Yumurta yeteri kadar dikkatli çatlamış veya embriyoların (bkz. yukarıda) 72 saatten daha yaşlı iseniz, sarısı çuval kabuk ve sık sık rüptürlerinin yapışıyor. Kuluçka nem% 60 veya daha düşük yumurta kuluçka sırasında döndürülmez zaman aynı olur. </li><li> Ex ovo kültürlerin bir kuluçka döndü ve 37.5 ° - 38.2 ° C ve% 60 nem tutulur . Inkübatör hermetik kapalı değil (havalandırma ızgarası kısmen açık!) Ve kapak ve çanak arasındaki ayırıcılar ile özel Petri kapları kullanılır CO 2 veya O 2 kaynağı gerekli değildir. Not: embriyoların Hareketli inkübasyon ilk günlerinde minimum düzeyde tutulmalıdır. Yüksek mortalite oranları çok fazla ajitasyon sonuçlanır. Inkübasyon gün 9 itibaren, embriyoların ajitasyon için daha az duyarlıdır. Ölü embriyolar, enfeksiyonları önlemek için hemen çıkarılmalıdır. Hücre kültürü inkübatörler kullanılması durumunda, hermetik kapalı olan, O 2 kaynağı ölmek değil embriyolar için zorunludur. CAM kurumasına ve aşağıdaki inkübasyon sıcaklığı 37 daha düşük ise ° C, embriyoların çok yavaş gelişecektir Nem esastır. </li></ol> Bölüm 3: anjiyogenez deneyleri için maddelerin uygulama <ol><li> Otoklavlı katlanmış filtre kağıtları (50,5 mm çapında) bir delik zımba yumrukladı ve malzeme (taşıyıcı) CAM uygulanan sıvı maddeler için destekleyici olarak kullanılır. Not: Neredeyse her taşıyıcı malzeme (bkz. aşağıda Tablo), gelişmekte olan CAM gemi mimari değişti, kuluçka 10 gün önce uygulanır özellikle, CAM tahriş olmasına neden oldu . Bu hidroksietil selüloz folyo gibi potansiyel atıl maddeler de dahil olmak üzere, süngerler Teflon (PTFE-pledgets), kollajen süngerler, kollajen folyo, steril gazlı bez (pamuklu çubuklar), yuvarlak kapak fişleri, ve silikon halkaları, tüm yalancı pozitif sonuç neden oldu. Filtre kağıdı en az tahrişe neden görünüyordu ve bu nedenle deneylerde kullanıldı. </li><li> CAM tam gelişmiş, 6 adede kadar farklı örnekleri uygulanan olabilir ve bunların etkilerini tek bir CAM mukayese edilebilir. </li><li> Filtreleri ek doz (3 mg yerli angiotropin) ya da tampon (5 ul PBS) kurutma önlemek için her gün yeniden uygulanmalıdır. </li><li> Kontrolleri çevreleyen kan damarlarının desen değişmeden ise uygulamadan sonra 3 gün, kan damarları, filtreler anjiyogenik maddelere karşı yolunuzu. Not: CAM sarısı-çuval için yanlış olmamalıdır. CAM sarısı çuval gelişimi sırasında küçük sapmaların statik ise dinamik bir gelişmekte olan bir yapıdır. Gelişmekte olan günde üç gelişmekte CAM embriyonun kaudal sonunda küçük bir vezikül olarak ilk kez kabul edilebilir. Günde üç ve on gün arasında giderek artan bir oranda sarısı çuval overgrowing katlanmış iki katmanlı bir zar oluşturarak, ilk vezikül genişletir. Uygulama yeri iletilen ışık efektleri aksi halde embriyo mikroskobik gözlem engel olarak embriyo ve CAM (sınır) kat arasında yarım olmalıdır. Alternatif olarak, CAM büyümeye devam ediyor anjiyogenik madde ile filtre içselleştirilmiş. </li></ol> Bölüm 4: CAM üzerine hücre Aşılama Hücre, 4.1.Preparation <ol><li> Konfluent hücrelerin kullanımı ile steril 25 ml plastik pipet pipet yardımı ile bir kültür şişelerinde FALCON tüplerine transfer edilir. </li><li> Hücre sayısını tahmin etmek için, hücre süspansiyonu 15 ul Neubauer odasına aktarılır ve hücreler mikroskop altında elle sayılır. </li><li> Falcon tüpler oda sıcaklığında 1000 rpm'de 3 dakika santrifüj ve süpernatantı atılır. </li><li> Üreticilerin protokole göre, örneğin PKH26 (Sigma), kırmızı floresan bir canlı hücre zarı etiketleme kiti ile boyandı canlı hücre izleme için, hücreler PBS ile istenen konsantrasyona (2x10 7 hücre / ml) seyreltilir. Enjeksiyon için istenilen konsantrasyon (10 7 hücre / ml) ya da aşılama (3x10 6 hücre / ml); Hücreler hücre kültürü orta (tercihen DMEM Dulbecco'nun modifiye kartal orta) yeniden askıya alınır. Zaten edebiyat 15-17 ve tecrübemizi yayınlanan yoğunluklarına göre farklı hücre konsantrasyonları enjeksiyonları karşı aşılama için uygulanır. </li></ol> 4.2 CAM üzerine hücrelerinin Aşılama <ol><li> Yüzükler (~ 1mm kalınlığında) keskin bir neşter bir 1ml pipet ya da periferik venöz kateter (PVL) tüp kesme ve E6-E14 civciv embriyo kültür ex ovo CAM uygulanır. Not: birkaç kez "gördüm" için çalışın ancak bir pipet veya kateter tüp yoluyla kesmek için ortaya çıkan yüzük keskin kenarlardan kaçınmak için, yeni çok keskin bir neşter kullanılarak kesilmiş . Mikroskop altında mikro çatlaklardan kaynaklanan keskin kenarlar için halkaları kontrol edin. </li><li> 3x10 6 hücre / ml hücreler 20 ul halkalar boyutuna bağlı olarak bir halka içine ya da birden fazla yüzük bölünmüş birimler olarak toplam pipetlenir . Not: Bazı durumlarda, nazik kazıma tarafından CAM travmatize hücreleri 17 ve greft capillarisation (aşağıya bakın) aşılama kolaylaştırmak için bir ön koşul, örneğin . Bununla birlikte, CAM travmatize tasarlanmamıştır ya da tümör hücrelerinin invaziv potansiyeli çalışmaları için, örneğin contraindicative, yüzük aşılama için kullanılmamalıdır olmamalı, ancak hücreleri doğrudan halkalar veya yüzük uygulama olarak uygulanmalıdır kendilerini mikro lezyon neden olabilir . Yüzük kullanılması halinde, bu ağırlığı en aza indirmek ve CAM girinti önlemek için mümkün olduğunca ince kesilmelidir. </li></ol> Bölüm 5: hücre intravitreal enjeksiyon <ol><li> Hamilton mikrolitrelik şırınga steril PBS sonunda% 70 EtOH ve birkaç kez durulanır. </li><li> Mikro şırınga hazırlanan lekeli ya da boyasız hücre süspansiyonu (bkz. Bölüm 4.1) ile doldurulur. Not: enjeksiyon yerinde iğne ile penetrasyon üzerinde dikkatle embriyo (brain!) CAM veya komşu yapılara kan damarlarının zarar değil, seçilecek. Enjeksiyon diseksiyonu binoküler altında yapılmalıdır. </li><li> Mikroskop kontrolü altında, Dikkatli, fakat hızlı bir şırınga iğnesi ile CAM ve göz katmanları nüfuz ve sürekli maksimum 20 ul hücre süspansiyonu (tercihen PBS içinde seyreltilmesi) civciv embriyo kültür ex ovo Vitreusa 10 enjekte. Not: CAM iğne ile nüfuz mümkün değilse, bu iki forseps ile yavaşça onu parçalamasını, az veya hiç kan damarları ile bir yerinde kaldırılmış olabilir . </li><li> Iğne enjekte edilen hücre süspansiyonu bir sızıntı kaybını önlemek için, göz içine 1-2 saniye kalmalıdır. </li></ol> Bölüm 6: tavuk bacak tomurcukları Diseksiyon <ol><li> Yumurta inkübatör kaldırılır inkübasyon 3 ila 4 gün sonra (E3/E4 = Hamburger Hamilton (HH) stage18-23) </li><li> Yumurta, üçgen bir manyetik karıştırıcı kenarı kırık ve Petri kabı (detaylar: Bölüm 2) aktarılır ve embriyo yaylı makas kullanılarak bir daire keserek bağlı sarısı damarlarından disseke edilir. </li><li> , Soğuk, steril PBS ile küçük bir tahliye kaşık kullanımı ile dolu bir taze Petri kabı embriyo transfer ve tür ajitasyon ile yıkanır. </li><li> Embriyo dikkatle ince forseps ile onları parçalamasını, steril PBS ile dolu ve çevresindeki membranlar kurtulmuş küçük bir Petri kabı aktarılır. </li><li> Ekstremite tomurcukları, mümkün olduğunca vücuda yakın mikrocerrahi forseps ile müstakil kavradı ve 8-10-gün eski bir konak tavuk kültürlü ex ovo (prosedürü aşılama) CAM aktarılır. </li></ol> Bölüm 7: fare bacak tomurcukları hazırlanması <ol><li> Zaman hamile çiftleşmelerin kadar vajinal fiş kadın çiftleşme tespit edildiği günün sabah ve gebeliğin gün 0 belirlenmiş. </li><li> Hamile kadın, embriyo gelişimi, (E) 10 13 embriyonik gün ulaştı ve bir balmumu kurulu sabit servikal dislokasyon ile sakrifiye. </li><li> Karın duvarı orta hat boyunca kesilir ve cilt flepleri pimleri ile yanal sabit% 70 ETOH ile ıslatılır. </li><li> Soğuk PBS ile müstakil ve bir behere aktarılır karın, rahmin iki boynuz kaldırılır. </li><li> Embriyolar, ayrılmış bir Petri kabı ve rahim duvarına aktarılır ve embriyonik membranlar forseps kullanımı dikkatle kaldırılır. </li><li> Ekstremite tomurcukları yaylı makas kullanılarak kesilmiş veya ince pens ile mümkün olduğunca vücuda yakın müstakil kavradı ve CAM transfer 8-10-günlük eski konak tavuk kültürlü ex ovo (aşılama işlemi bakınız). </li></ol> Bölüm 8: tümör örneklerinin toplanması <ol><li> Tümör biyopsileri tümör hücre belirli bir kültür ortamı ile dolu 2 ml Eppendorf tüpleri (burada: Leibovitz orta) toplanır ve oda sıcaklığında bekletilir. </li><li> Tümör biyopsileri steril neşter 1-2 mm3 parçalar halinde kesilir. Not: tümör örnekleri çok küçük olsaydı, onlar çok büyük olsaydı, onlar, CAM eklemek olmayabilir, CAM yaralı olabilir ve embriyo ölmek olabilir . </li><li> Biyopsi örneği temel bir parçası CAM üzerine aşılı 8-10-günlük eski ev sahibi tavuk kültürlü ex ovo prosedür aşılama. Not: biyopsi yüzeyinden malzeme almak kas veya bağ dokusu ile kontaminasyon riski artar. </li></ol> Bölüm 9: Aşılama prosedürü <ol><li> Bacak tomurcukları veya tümör örneklerinin, 8-10-gün eski civciv embriyosunda kültürlü ex ovo kullanılır. Tam gelişmiş CAM grefti. </li><li> Greft ideal bir kan damarı Y çatallanma yakın CAM yerleştirilir. </li><li> Istediğiniz uygulamayı yerinde, CAM seçici, bazal tabaka olduğu gibi bırakarak, nazik kazıma kapalı (forseps) çift epitel tabakası üst peridermal parçası travmatize. Not: kanama ya da kılcal damarların görünür rüptürü önlemek için çok önemlidir. </li><li> Greft minimal PBS bağlı CAM aktarılır. Greft bağlı olarak, bir veya iki kez aşılama herhangi bir final aşırı PBS kaldırmak için tasarlanmıştır ve sonra nihayet hazırlanan travmatize CAM yerinde aşılı CAM, bir sitede yerleştirilmiş olabilir. </li><li> Greft ince pens ile kavradı ve CAM üzerine katmanlı. Greft hassasiyetine bağlı olarak, hafif bir basınç (tümör örnekler için uygun) CAM girinti içine manevra greft (bacak tomurcukları için uygun değildir) uygulanan olabilir. Not: ana civciv embriyosunda sık ölecek gibi embriyonik gün (E) 18 civciv bağışıklık sistemini geliştirir, ex ovo xenografts kültürler E17 ötesinde uzatılabilir olmamalıdır. Seçtiğiniz donör doku kaynağı ile aynı zamana denk sırasıyla ev sahipliği CAM'lar, civciv embriyosunda kültürlü ex ovo olması önemlidir. </li></ol> Bölüm 10: Re-greft <ol><li> Ana civciv embriyo dekapitasyon tarafından öldürülür. </li><li> Ile CAMekli greft sivri makas ile dairesel bir kesim tarafından kaldırılır ve PBS ile dolu bir Petri kabı aktarılır. </li><li> Aşırı CAM eski eki sitesi dışında yaylı makas greft kesilir. </li><li> Daha büyük tümör örneklerinin durumda greft yarısı ya da birkaç küçük parçalara kesilir ve ikinci konak yeni CAM bakan kesme kenarı ile yeniden aşılı. </li></ol> Bölüm 11: Temsilcilik Sonuçlar <img src="/files/ftp_upload/1620/1620fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Shell-daha az tavuk kültür Petri kutularına farklı gelişim aşamaları kültürlü ex ovo Chicken embriyolar. <img src="/files/ftp_upload/1620/1620fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 Ex-ovo CAM anjiyogenez tahlil Döllenmiş tavuk yumurtası 37 ° yatay inkübe ° C ve nem 60 -% 62 ve embriyonik gün 4 (E4) Petri kapları içine kırık. Kuluçka aynı koşullar altında devam etti. CAM üstüne E10 steril filtre kağıtları (çapı 5.5 mm) az katlı ve 5 ul PBS veya 3 mg angiotropin6 yerli ya batırılmış. Kılcal damarların E14 angiotropin ıslatılmış filtre kağıdı doğru belirgin uyum gösterdi. <img src="/files/ftp_upload/1620/1620fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3 bacak tomurcukları grefti Ex ovo Civciv (E3/E4) ve fare (E13) Ekstremite tomurcukları kabuk az tavuk kültürlerin CAM üzerine aşılanmıştır. CAM Kan damarları, iki gün sonra bacak tomurcukları girdi. Bacak tomurcukları gelişme bu ex ovo kültür civciv iki falanks sahne ulaşan ve fare bacak tomurcukları interdijital ağları azaltılması devam etti. <img src="/files/ftp_upload/1620/1620fig4.jpg" alt="Şekil 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 4"> Şekil 4 tümör örnek ex ovo aşılama Mesane kanseri, biyopsi örneği 10 günlük civciv embriyo kültür ex ovo CAM üzerine ekildi. Kültür iki gün sonra, tümör örnek CAM damarsal bağlı olduğu ve 7 gün sonra, greft giren birden fazla kan damarları gözlenmiştir.

<ol><li>Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+procedure+for+long-term+cultivation+of+chicken+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">A simple procedure for long-term cultivation of chicken embryos.</a> Dev. Biol. 41, 391-394 (1974).</li>
<li>Tufan, A. C., Akdogan, I., Adiguzel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shell-less+culture+of+the+chick+embryo+as+a+model+system+in+the+study+of+development+neurobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroanatomy%22%5BJournal%5D)">Shell-less culture of the chick embryo as a model system in the study of development neurobiology.</a> Neuroanatomy. 3, 8-11 (2004).</li>
<li>Deryugina, E. I., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+models+to+quantify+angiogenesis+induced+by+inflammatory+and+tumor+cells+or+purified+effector+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Chick embryo chorioallantoic membrane models to quantify angiogenesis induced by inflammatory and tumor cells or purified effector molecules.</a> Methods Enzymology. 444, 21-44 (2008).</li>
<li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+useful+tool+to+study+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Rev.+Cell+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Chick embryo chorioallantoic membrane as a useful tool to study angiogenesis.</a> Int. Rev. Cell Mol. Biol. 270, 181-224 (2008).</li>
<li>Höckel, M., Sasse, J., Wissler, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purified+monocyte-derived+angiogenic+substance+%28angiotropin%29+stimulates+migration%2C+phenotypic+changes%2C+and+%22tube+formation%22+but+not+proliferation+of+capillary+endothelial+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Purified monocyte-derived angiogenic substance (angiotropin) stimulates migration, phenotypic changes, and "tube formation" but not proliferation of capillary endothelial cells in vitro.</a> J. Cell Physiol. 133, 1-13 (1987).</li>
<li>Wissler, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+of+blood+vessel+patterns+by+Angio+Morphogens+%5BAngiotropins%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Materialwiss.+Werkstofftech%22%5BJournal%5D)">Engineering of blood vessel patterns by Angio Morphogens [Angiotropins].</a> Materialwiss. Werkstofftech. 32, 984-1008 (2001).</li>
<li>Kistler, H. B. J. r., LaVail, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Penetration+of+horseradish+peroxidase+into+the+optic+nerve+after+vitreal+or+vascular+injections+in+the+developing+chick%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Penetration of horseradish peroxidase into the optic nerve after vitreal or vascular injections in the developing chick.</a> Invest Ophthalmol. Vis. Sci. 20, 705-716 (1981).</li>
<li>Halfter, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Change+in+embryonic+eye+size+and+retinal+cell+proliferation+following+intravitreal+injection+of+glycosaminoglycans%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Change in embryonic eye size and retinal cell proliferation following intravitreal injection of glycosaminoglycans.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 3289-3298 (2008).</li>
<li>Oppitz, M., Busch, C., Shriek, G., Metzger, M., Just, L., Drews, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-malignant+migration+of+B16+mouse+melanoma+cells+in+the+neural+crest+and+invasive+growth+in+the+eye+cup+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Melanoma+Res%22%5BJournal%5D)">Non-malignant migration of B16 mouse melanoma cells in the neural crest and invasive growth in the eye cup of the chick embryo.</a> Melanoma Res. 17, 17-30 (2007).</li>
<li>Uchibayashi, T., Egawa, M., Nakajima, K., Hisazumi, H., Tanaka, M., Endo, Y., Sasaki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+of+tumour+cell+lines+implanted+onto+the+chorioallantoic+membrane+of+chick+embryo+to+anticancer+agents+in+combination+with+hyperthermia%5BTitle%5D)+AND+%22Urol.+Res%22%5BJournal%5D)">Responses of tumour cell lines implanted onto the chorioallantoic membrane of chick embryo to anticancer agents in combination with hyperthermia.</a> Urol. Res. 20, 237-239 (1992).</li>
<li>Demir, R., Naschberger, L., Demir, I., Melling, N., Dimmler, A., Papadopoulus, T., Sturzl, M., Klein, P., Hohenberger, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+generates+a+more+invasive+phenotype+of+tumour+cells%3A+an+in+vivo+experimental+setup+based+on+the+chorioallantoic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Pathol.+Oncol.+Res%22%5BJournal%5D)">Hypoxia generates a more invasive phenotype of tumour cells: an in vivo experimental setup based on the chorioallantoic membrane.</a> Pathol. Oncol. Res. , (2008).</li>
<li>Kunzi-Rapp, K., Genze, F., Kufer, R., Reich, E., Hautmann, R. E., Gschwend, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chorioallantoic+membrane+assay%3A+vascularized+3-dimensional+cell+culture+system+for+human+prostate+cancer+cells+as+an+animal+substitute+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Chorioallantoic membrane assay: vascularized 3-dimensional cell culture system for human prostate cancer cells as an animal substitute model.</a> J. Urol. 166, 1502-1507 (2001).</li>
<li>Hall, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Grafting+of+organs+and+tissues+to+the+chorioallantoic+membrane+of+the+embryonic+chick%5BTitle%5D)+AND+%22TCA+Manual%22%5BJournal%5D)">Grafting of organs and tissues to the chorioallantoic membrane of the embryonic chick.</a> TCA Manual. 4 (3), 881-883 (1978).</li>
<li>Kunzi-Rapp, K., Kaskel, P., Steiner, R., Peter, R. U., Krahn, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+blood+levels+of+human+S100+in+melanoma+chick+embryo+xenografts%27+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Increased blood levels of human S100 in melanoma chick embryo xenografts' circulation.</a> Pigment Cell Res. 14, 9-13 (2001).</li>
<li>McFall, R. C., Sery, T. W., Makadon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+new+continuous+cell+line+derived+from+a+human+retinoblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Characterization of a new continuous cell line derived from a human retinoblastoma.</a> Cancer Research. 37, 1003-1010 (1977).</li>
<li>Deryugina, E. I., Zijlstra, A., Partridge, J. J., Kupriyanova, T. A., Madsen, M. A., Papagiannakopoulos, T., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unexpected+effect+of+matrix+metalloproteinase+down-regulation+on+vascular+intravasation+and+metastasis+of+human+fibrosarcoma+cells+selected+in+vivo+for+high+rates+of+dissemination%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Unexpected effect of matrix metalloproteinase down-regulation on vascular intravasation and metastasis of human fibrosarcoma cells selected in vivo for high rates of dissemination.</a> Cancer Research. 65, 10959-10969 (2005).</li>
<li>Kim, J., Kovalski, K., Ossowski, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((requirement+for+specific+proteases+in+cancer+cell+intravasation+as+revealed+by+a+novel+semiquantitative+PCR-based+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">requirement for specific proteases in cancer cell intravasation as revealed by a novel semiquantitative PCR-based assay.</a> Cell. 94, 353-362 (1998).</li>
</ol>

Yenilikçi ya da sadece başka bir civciv kültür protokolü? Eski kabuk kültür protokolleri ile civciv embriyo 1-4 toplam sağkalım oranları, örneğin ca düşüktü. % 30 1. Bu video makalede açıklanan rafine ex ovo kültür protokolü aksine,% 50&#39;nin üzerinde sağkalım oranları sağlar. Civciv embriyo ovo kültürlerin klasik karşılaştırıldığında ex ovo kültürü CAM ve civciv embriyo erişilebilirliğini önemli ölçüde kolaylaştırır ve deneysel man...

<table><tbody><tr><td>Döllenmiş Yumurtalar</td><td>Hayvan</td><td>Sorries-Trockels Vermehrungszucht GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fareler</td><td>Hayvan</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Döner yumurta tepsili 3000 Tipi inkübatör</td><td>Araçlar</td><td>Siemens AG</td><td>9503</td><td>37°C'de muhafaza edin&amp;#x00B0;bağıl nemi %60'ın üzerine ayarlanmış C</td></tr><tr><td>Yumurta inkübatörü BSS 160</td><td>Araçlar</td><td>Grumbach, Almanya</td><td>8101</td><td>37-38 °C'de ve %60'ın üzerinde ayarlanmış bağıl nemde muhafaza edin</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>PBS soğuk olmalıdır (&lt;güçlü&gt;&amp;gt;&lt;/strong&gt; 4&amp;#x00B0;C) ve steril</td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;modifiye edilmiş eagle ortamı&amp;rsquo;s besiyeri</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D 6429</td><td>DMEM kültür ortamı</td></tr><tr><td>Leibovitz&amp;rsquo;L-15 Besiyeri</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>31415-029</td><td>tümör örnekleri için toplama medyumu</td></tr><tr><td>Tümör hücresine özgü besiyeri</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>her araştırma grubu, tümör hücrelerini kültüre ettikleri besiyerini veya Leibovitz gibi yaygın kültür besiyerlerini kullanmalıdır&amp;rsquo;Besiyeri veya Dulbecco&amp;rsquo;modifiye edilmiş kartal ortamı&amp;rsquo;s medyumu&lt;br/&gt;%15 fetal bovin serum (FBS), 4mM L-glutamin ve 50 ile desteklenmiş &amp;#x03BC;M insülin</td></tr><tr><td>%70 EtOH</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Manyetik karıştırma çubuğu, üçgen 80 mm</td><td>Araç</td><td>VWR international</td><td>442-0391</td><td>Üçgen bir manyetik karıştırma çubuğu, yumurta kabuklarını kırmak için oldukça kullanışlıdır.</td></tr><tr><td>DUMONT #5 Pens </td><td>Araç</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-30</td><td>pahlanmış çok ince şaftlar (0,05 mm x 0,02 mm uç)</td></tr><tr><td>DUMONT #7 Pens</td><td>Araç</td><td>Fine Science Tools</td><td>11271-30</td><td>kavisli şaftlar (0,07 mm x 0,10 mm uç)</td></tr><tr><td>Yaylı makas, düz, 8cm</td><td>Araç</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-00</td><td>ince, küçük düz bıçaklar</td></tr><tr><td>Hassas iris makası, düz</td><td>Araç</td><td>Fine Science Tools</td><td>14094-11</td><td>CAM'yi kesip çıkarmak için kullanın</td></tr><tr><td>Standart makas, düz, keskin/küt</td><td>Araç</td><td>Fine Science Tools</td><td>14007-14</td><td>Dekapitasyon veya servikal dislokasyon için kullanın</td></tr><tr><td>mikrolitre şırınga 1702 TLLX, 25 &amp;mu;l</td><td>Araç</td><td>Hamilton Co</td><td>80222</td><td>Vitreus içi enjeksiyon için kullanın</td></tr><tr><td>Hamilton 33-G iğne (15 mm)</td><td>Araç</td><td>Fine Science Tools</td><td>18073-15</td><td>Vitreus içine enjeksiyon için kullanılır</td></tr><tr><td>Steril skalpeller</td><td>Araç</td><td></td><td></td><td>Tümör örneklerinin diseksiyonu için kullanın</td></tr><tr><td>Küçük süzme kaşığı</td><td>Araç</td><td>Geuder</td><td>15758</td><td>Küçük civciv embriyolarının transferinde kullanılır</td></tr><tr><td>Sabitleme pimli mum levha</td><td>Araç</td><td>Ev yapımı</td><td></td><td>Diseksiyon için hayvanların tespit edilmesinde kullanılır</td></tr><tr><td>Petri kapları 60 x 15 mm</td><td>Araç</td><td>Greiner Bio-One</td><td>628102</td><td></td></tr><tr><td>Petri kapları 92 x 16 mm</td><td>Araç</td><td>Sarstedt Ltd</td><td>82.1472</td><td></td></tr><tr><td>Steril Petri kabı 100 x 20 mm</td><td>Araç</td><td>Greiner Bio-One</td><td>664160</td><td>havalandırma için ara parçalı, ekstra derin</td></tr><tr><td>Beher</td><td>Araç</td><td></td><td></td><td>300-600 ml</td></tr><tr><td>FALCON tüpleri</td><td>Araç</td><td>Falcon BD</td><td></td><td>15 ml ve 50 ml</td></tr><tr><td>Eppendorf tüpleri</td><td>Araç</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>1,5 ml ve 2 ml</td></tr><tr><td>1 ml pipet uçları</td><td>Araç</td><td></td><td></td><td>Maddelerin / hücrelerin uygulanması için plastik halkaları kesmek amacıyla kullanın</td></tr><tr><td>Periferik venöz kateter (PVK)</td><td>Araç</td><td>Viggo&amp;#174;</td><td></td><td>Maddelerin / hücrelerin uygulanması için tüpten silikon halkalar kesmek amacıyla kullanın</td></tr><tr><td>Pipetler ve uçlar</td><td>Araç</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Otoklavlanmış katlanmış Filtreler 595 1/2, 110 mm çap</td><td>Araç</td><td>Schleicher Schuell</td><td>311643</td><td>CAM üzerinde en az irritasyona neden olan taşıyıcı; makalede kullanılmıştır</td></tr><tr><td>PTFE-Pledget, emilmeyen, 6,3 x 152,4 x 1,6 mm</td><td>Araç</td><td>santec-medical</td><td>REF 277, LOT 832/511-1</td><td>Taşıyıcı; yanlış pozitif sonuçlara neden oldu</td></tr><tr><td>Hidroksietilselüloz Tylose H 100000</td><td>Reaktif</td><td></td><td></td><td>Kollidon 17 PF ile karıştırılmış taşıyıcı; yanlış pozitif sonuçlara neden oldu</td></tr><tr><td>Kollidon 17 PF</td><td>Reaktif</td><td>BASF</td><td>S30200</td><td>Hidroksietilselüloz ile karıştırıldığında; yanlış pozitif sonuçlara yol açtı</td></tr><tr><td>Kollajen Biyomatris TissuDura</td><td>Araç</td><td>Baxter International Inc.</td><td>REF B2246000999999</td><td>Taşıyıcı; yanlış pozitif sonuçlara neden oldu</td></tr><tr><td>Yuvarlak cam lamel, 11 mm</td><td>Araç</td><td>Asistan Almanya</td><td>1001/0011</td><td>Taşıyıcı; yanlış pozitif sonuçlara neden olur</td></tr><tr><td>Sığır Kolajen Süngeri</td><td>Araç</td><td>Wyeth Animal Health</td><td></td><td>Taşıyıcı; yalancı pozitif sonuçlara neden oldu</td></tr><tr><td>Resodont Emilimli Kolajen Membran</td><td>Araç</td><td>Resorba Woundcare Germany</td><td>LOT 280303</td><td>Taşıyıcı; yalancı pozitif sonuçlara neden oldu</td></tr><tr><td>Dokunmamış Yüzeyli Pamuklu Çubuklar</td><td>Araç</td><td>Fink Walter GmbH</td><td>REF 328132</td><td>Taşıyıcı; yanlış pozitif sonuçlara neden oldu</td></tr></tbody></table>

civciv ex ovo kültür ve ex ovo cam testi: gerçekten nasıl Çalışır?

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Islah erken dönemde tavuk yumurtası, in vitro ve in vivo sistemleri arasında ve anjiyogenez okumak için değil, aynı zamanda tümörogenez çalışma sadece vasküler bir test ortamı sağlamak . Civciv chorioallantoic membran (CAM) sonra, kan damarı ağına kolayca erişilen manipüle ve gözlenen ve bu nedenle anjiyogenez deneyleri için uygun bir ortam sağlar. Lenfoid sistem tamamen inkübasyon geç evrelerine kadar gelişmemiş olduğundan, civciv embriyo türe özgü bir kısıtlama olmaksızın aşılı doku ve hücreler sürdürme yeteneğine doğal bağışık yetmezliği olan bir ev sahibi olarak hizmet vermektedir. Gelişmekte olan besleyici ek olarak allo ve xenografts, CAM kan damarı ağı, tümör hücresi intravasation, dağıtılması, ve damar tutuklandı hücrelerin mikro metastatik odaklar oluşturmak için extravasate tutuklanması ve bir depo için benzersiz bir destekleyici bir ortam sağlar. Deneysel amaçlar için, son çalışmalar en CAM yumurta kabuğu ile bir pencere kesme ve deneyler, gözlem ve etkileri fotoğraf dokümantasyon imkanları CAM ve erişilebilirliğini önemli sınırlamalar, ovo yapılmıştır maruz kalmıştır . Civciv embriyo kabuk az kültürleri 1-4 kullanıldığı zaman, eğer yayınlanan hiçbir deneysel ayrıntıları, sağlanan ve bu kültürlerin sağkalım oranları oldukça düşüktür. Biz yumurta içeriğini bir rasyonel kontrollü ekstrüzyon tanıtarak civciv embriyo ex ovo kültürünün önemli yöntem rafine. Bu ex ovo kültürlerinin etkileri in vivo belgelerinde kolay sağlayan ve embriyo deneysel manipülasyon kolaylaştırılması, CAM ve civciv embriyo erişilebilirliğini artırmak. Bu bilimsel soruların çok sayıda başarılı uygulama sağlar: (1) tahlil 5,6 olarak geliştirilmiş bir anjiyogenez, (2) deneysel (3), 7-9 civciv embriyo göz vitreus kolaylaştırdı enjeksiyonlar için ayarlamak yaygınlaştırılması ve intravasation için bir test ortamı (5 CAM 10-12 inoküle kurulan hücre hatları tümör hücrelerinin, (4), tavuk ve fareler 13 de bacak tomurcukları başarılı transplantasyon ve kültürünün sürdürülmesi için geliştirilmiş bir sistem olarak dağınık olarak , aşılama, yayılımı, ve CAM (14) yüzeyinde biyopsilerinde elde edilen katı primer tümör dokusunun yeniden aşılama) . Bu video makalede rafine civciv ex ovo kültür ve CAM sağkalım oranları% 50 üzerinde tahlil kurulması açıklanmaktadır. Ayrıca, çok sayıda bilimsel uygulamaları için ex ovo kültürünün başarılı bir uygulama adım gösteri bir adım sağlar . Daniel S. Dohle, Susanne D. Paşa ve Sebastian Gustmann Bu çalışmada eşit katkıda bulunmuştur.

Civciv chorioallantoic membran (CAM), anjiyogenez ve tümörogenez çalışmak için eşsiz bir doğal bağışık yetmezliği olan, destekleyici bir kültür ortamı. Bu video makale piliç farklı adımları gösteriyor.<em&gt; Ex ovo</em&gt; Kültür, potansiyel anjiyogenik maddeler ve CAM yüzeyinde tümör hücre ve dokuların başarılı aşılama uygulaması.

Civciv Ex ovo Kültür ve Ex ovo CAM Testi: Gerçekten Nasıl Çalışır?

Üretimin erken evresindeki tavuk yumurtaları, in vitro ve in vivo sistemler arasında yer alır ve yalnızca ... incelemek için değil, aynı zamanda vasküler bir test ortamı da sağlar.

Merhaba, ben Susan Paa. Almanya'daki Burg Esen Üniversitesi'nin Fizyolojik Kimya Enstitüsü, Biyokimyasal Endokrinoloji bölümündenim. Merhaba, ben Daniel Ze Basian Dole.Susan ile aynı kurumdanım. Merhaba, ben Burg Üniversitesi Anatomi Enstitüsü Nöroloji Bölümü'nden Mann. Size CH X kültürü ve ko membran denemesinin gerçekte nasıl çalıştığını göstereceğiz.Öyleyse laboratuvarla devam edelim. Güncel deneysel çalışmaların çoğunda, koroiyonik membran olan CAM, yumurta kabuğunda bir pencere açılarak açığa çıkarılmış ve deneyler in ovo olarak gerçekleştirilmiştir; bu durum, CAM'e erişimde ve etkilerin gözlemlenmesi ile fotoğraflanması olanaklarında önemli sınırlamalara yol açmıştır. Civciv embriyolarının ex ovo kültürleri, CAM'e ve civciv embriyosuna erişimi önemli ölçüde kolaylaştırmaktadır.Embriyonun etkilerinin ve deneysel manipülasyonlarının kolayca in vivo olarak belgelenmesine olanak tanıyan atan kalbe bakınız. Video makalemizde, çok sayıda bilimsel soru için X ovo kültürünün başarılı uygulamasının adım adım bir gösterimini sunacağız. Yumurtalar, hareketli tepsisi olan bir inkübatörde inkübe edilir.Burada, ısıtıcı elemanı ve yumurtaları günde 12 kez sürekli olarak döndüren tepsi hareket ettiricisini görebilirsiniz. Nem, inkübatörün altındaki plastik kaplara su eklenerek %60 seviyesinde tutulur ve inkübasyon sıcaklığı, inkübasyon başlamadan önce 37,5 °C olarak ayarlanır. Yumurta kabuklarındaki kir, tüyler ve dışkılar dikkatle temizlenir; ancak yumurtaların etanol veya dezenfektan ile mekanik olarak silinmesi, embriyoların hayatta kalma oranlarını önemli ölçüde düşürür.Yumurtalar, inkübatörün hareketli tepsisine yatay olarak yerleştirilir. Serbest rotasyonu sağlamak için münferit yumurtalar arasında yeterli mesafe bıraktığınızdan emin olun. 72 saatlik inkübasyonun ardından yumurtalar inkübatörden çıkarılır ve yumurtaların embriyonun bulunduğu üst kısmı kurşun kalemle işaretlenir.Embriyo belli bir ölçüde rotasyona karşı direnç gösterdiğinden ve burada konumlandığından, daha iyi bir his alabilmek için yumurtaları kırmak amacıyla eldiven kullanılmamalı, ancak eller %70 ethanol ile dezenfekte edilmelidir. Yumurta, üst kısmında bir kurşun kalem işareti olacak şekilde yatay tutulmalı ve kırılma işlemleri sırasında maksimum kuvvet kontrolü sağlamak için dirsekler tezgah üzerine dayanmadan, üçgen bir manyetik karıştırma çubuğunun kenarında kırılmalıdır. Kırma işlemi sırasında hem yumurta kabuğunun hem de yumurta membranının açılması önemlidir; yumurta akının sızması, yumurta membranının delindiğinin güvenilir bir işaretidir.Yumurta, petri kabının tabanına yakın tutulur. Bu ilk açma işlemi sırasında yumurta akının daha fazla sızmasını önlemek için, petri kabının tabanındaki yumurta akının yumurtanın içindeki geri kalan kısma hâlâ bağlı olması önemlidir. Bu durum yumurta içinde bir vakum oluşturarak sarısını sabit tuttuğundan; başparmak ve orta parmakla çatlağın ve yumurtanın ekvatorunun üzerinden geçen meridyene hafifçe basınç uygulayarak vakumu ve yumurta içeriğinin dışarı çıkışını düzenlemek mümkündür.Ardından yumurta içeriği, sarısı zarar görmeden Petri kabına aktarılabilir. Yumurta nazikçe kaldırılıp kabuğun her iki yarısı dikkatlice ayrılırsa, ex ovo kültürleri bir tepsiye yerleştirilir, inkübatöre geri konur ve 37.5 ile 38.2 °C sıcaklıkta ve %70 nemde tutulur. Karbondioksit veya oksijen beslemesine gerek yoktur.Kapak ve kap arasında ara parçalar bulunan özel petri kapları ve havalandırma ızgaralı inkübatörler kullanılıyorsa, havalandırma ızgarası yarı açık tutulmalıdır. Korion membranı (kam) üzerine uygulanan sıvı maddeler için destek malzemesi olarak otoklavlanmış filtre kağıtları kullanılır, çünkü bunlar membranda en az irritasyona neden olan malzemeler olarak görünmektedir. Uygulama bölgesi, embriyo ile membranın kenarı arasında orta noktada olmalıdır; aksi takdirde embriyo, iletim ışığı altında etkilerin mikroskobik olarak gözlemlenmesini engeller.Kurumayı önlemek için, filtre kam üzerine yerleştirildikten hemen sonra buradaki sıvı atropin uygulanmalıdır. Her gün ya ek dozlar ya da tampon çözelti yeniden uygulanmalıdır. Kam tamamen geliştiğinde, altı farklı örneğe kadar uygulama yapılabilir ve bunların etkileri tek bir kam üzerinde karşılaştırılabilir. Ağırlığı minimize etmek ve kamda çökme oluşmasını önlemek için, bir mililitrelik pipet ucundan mümkün olduğunca ince halkalar kesilmelidir.Ardından halka kama üzerine yerleştirilir ve hücreler pipetle halkanın içine aktarılır. Bir Hamilton mikrolitre şırınga, birkaç kez %70 ethanol ve son olarak steril fosfat tamponlu salin veya PBS ile durulanır. Mikro şırınga hazırlanan hücre süspansiyonu ile doldurulur; şırınga iğnesiyle kama ve göz katmanları dikkatli ancak hızlı bir şekilde delinir ve hücre süspansiyonu sürekli olarak enjekte edilir. Enjekte edilen hücre süspansiyonunun sızıntı yoluyla kaybını önlemek için iğne birkaç saniye boyunca gözde kalmalıdır; sızıntı olup olmadığını kontrol etmek için X Ovo'ya bakınız.Üç gün boyunca inkübe edilen yumurta kültürleri uzuv tomurcuğu donörü olarak kullanılır. Embriyo, bağlı olduğu vitellus damarlarından diseke edilir. A dairesi kesilerek embriyo, küçük bir drenaj kaşığı yardımıyla soğuk steril PBS ile doldurulmuş bir Petri kabına aktarılır ve çalkalama yoluyla yıkanır.Ardından embriyo, steril PBS ile doldurulmuş taze bir Petri kabına aktarılır ve ince bir pens yardımıyla çevreleyen membranlar dikkatlice yırtılarak ayrıştırılır. Uzuv tomurcukları, pens ile vücuda mümkün olduğunca yakın yerden koparılır, tutulur ve sekiz ila 10 günlük konakçının koroyallantois membranına (CAM) aktarılır. İstenen uygulama bölgesinde, pensin bir ucuyla nazikçe kazıma yapılarak koroyallantois membranında seçici olarak travma oluşturulur.Ardından greft kavranır ve pensin diğer ucuyla kam üzerine katmanlar halinde yerleştirilir. Kurban dişi fare bir tahtaya sabitlenir. Karın duvarı %70 etanol ile nemlendirilir, orta hat boyunca kesilir ve deri flepleri pinlerle yanlara sabitlenir.Uterus karın bölgesinden çıkarılır, ayrılır ve soğuk PBS içeren bir behere aktarılır. Demonstrasyon amaçlı olarak, embriyonik membranlar pens yardımıyla dikkatlice temizlenir.Ekstremite tomurcuklarının daha iyi görünürlüğü için burada 16 günlük bir fare embriyosu gösterilmektedir. En uygun greftleme sonuçları yalnızca bu şekilde elde edilir. Bununla birlikte, 10 ile 13 günlük embriyolardan ekstremite tomurcukları kullanılacaksa, ekstremite tomurcukları ya kesilerek alınmalı ya da ince pensler kullanılarak vücuda mümkün olduğunca yakın bir noktadan koparılmalıdır.İstenen uygulama bölgesinde, CAM forsepsle hafifçe sıyrılıp seçici olarak travmatize edilir. Ardından ekstremite tomurcukları tutulur ve sekiz ile 10 günlük bir konak tavuğun CAM'ine aktarılır. Fazla PBS'yi uzaklaştırmak için greft, CAM'in nihai greftlemenin planlanmadığı bir yan tarafına bir veya iki kez yerleştirilir.Greftler ideal olarak, bir kan damarı tümörünün Y çatallanmasına yakın kam üzerine yerleştirilir. Biyopsiler, steril bistürilerle bir ila iki kübik milimetrelik parçalar halinde kesilir. Biyopsinin yüzeyinden materyal alınması, kas veya bağ dokusu ile kontaminasyon riskini artırır.İstenen uygulama bölgesinde, CAM hafifçe kazınarak seçici olarak travmatize edilir. Biyopsi örneğinin merkezinden alınan bir parça, sekiz ile 10 günlük bir konak tavuğun CAM'ine greftlenir. Greftler, ideal olarak CAM üzerinde bir kan damarının Y çatallanmasının yakınına yerleştirilir.Ardından greft, üzerine minimum miktarda PBS eklenmiş halde CAM'e aktarılır. Grefti kamın oluşan girintisine yerleştirmek için hafif basınç uygulanabilir. Konak civciv embriyosu, başı kesilerek öldürülür.Ekli greft ile birlikte CAM, dairesel bir kesiyle çıkarılır ve PBS ile doldurulmuş bir Petri kabına aktarılır. Eski yapışma bölgesi hariç, greft üzerindeki fazla CAM kısımları kesilir. Ardından, istenen uygulama bölgesine yerleştirilir.Yeni bir konak civciv embriyosunun kam bölgesi hafifçe kazınarak seçici olarak travmatize edilir ve greft, minimum PBS ile birlikte ikinci konağın kam bölgesine transfer edilir. CH X veya kültür yönteminin gerçekte nasıl çalıştığını göstermiş olduk. Size in Orval deneylerine kıyasla avantajlarını gösterdim ve uygulamasıyla ilgili bazı örnekler verdim.İşte böyle. İzlediğiniz için teşekkür eder, deneylerinizde başarılar dileriz.

chick-ex-ovo-culture-and-ex-ovo-cam-assay-how-it-really-works

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video Yeni kültür, civciv embriyolarının 24 saat kadar yumurta dışında kültür olan bir yöntem gösteriyor. Bu yöntem, erken gelişme (14 som ilkel bir çizgi.) Fare E7-9 karşılık gelen bir süre çalışma sağlar. In situ hibridizasyon ve immünohistokimya, bu tekniğin Uygulamaları elektroporasyon içerir.

Erken Civciv Embriyolar ex vivo (Kültür) Kültür Yöntemi

Bu makalede, biz uzun vadeli sağlamak için basit bir yöntem...

Bir Eski-ovo</emGörüntüleme ve Mikrocerrahi Uygulamaları için uygundur> Tavuk Embriyo Kültürü Sistemi

<em&gt; Ovo</emSarkoma için bir Xenograftmodel olarak&gt; CAM-testi

Embriyonik civciv retinal hücre kültürleri fotoreseptör biyoloji çalışma için değerli araçlar oluşturmaktadır. Biz kültür öncesinde retina plazmid elektroporasyon ovo ex dayalı etkin gen transferi tekniğini geliştirdi. Bu teknik önemli ölçüde bu sistem için uygun genetik manipülasyon yaparak, mevcut protokoller üzerinde transfeksiyon verimliliği artırır.

Primer Hücre Kültürü Araştırmaları Chick retina Verimli Gen Transferi: Bir Eski-ovo Elektroporasyon Yaklaşımı

Gelişim sırasında tavuk embriyosunu görüntülemek ve ona erişmek zor olabilir. Basit, uygun maliyetli ve bir sınıfta veya araştırma ortamında kolayca kullanılabilecek bir ex ovo yöntemi geliştirdik. Bu yöntem, embriyonik gelişimin geç aşamalarına kadar embriyoya erişim sağlar (HH 40).

Optimize Ex-ovo Kalkınma Gelişmiş Aşamaları Chick Embriyolar ekimi

Civciv koryoallantoik membran (CAM) immün yetmezliklidir ve oldukça vaskülarizedir, bu da onu doğal bir in vivo tümör büyümesi ve anjiyogenez modeli yapar. Bu protokolde, CAM testi kullanılarak üç boyutlu, vaskülarize hepatosellüler karsinom (HCC) tümörlerinin büyütülmesi için güvenilir bir yöntem tanımlanmıştır.

<em&gt; Ovo</emHepatosellüler karsinom Verimli Xenograftlarında Modeli olarak&gt; Piliç Chorioallantoic Membran (CAM) Deneyi

Burada, üç boyutta normal doku parçaları canlı olarak tümör hücrelerinin istilasını incelemek için bir protokol mevcut. Bu organ kültürü tekniği, özellikle in vitro koşullarında potansiyel anti-invasif ilaçlar test etmek için uygulanır.

Test Chick Kalp Invasion Testi Kanser hücrelerinin invazivliğini ve Potansiyel Anti-invaziv Bileşikler Etkinlik

Burada, iletilen ışık ve floresan mikroskobu kullanarak hızlandırılmış görüntüleme için civciv embriyolarını ex ovo kültürlemek için yeni bir teknik sunuyoruz. Batık filtre kağıdı sandviçi, sıvı bir kültür ortamına tamamen batırılmış civciv embriyolarının kültürlenmesine izin veren, iyi bilinen filtre kağıdı taşıyıcı tekniğinin1 bir çeşididir.

Uzun vadede bir Batık Filtre Kağıdı Sandviç Ex Ovo Time-lapse Görüntüleme

Kuş embriyosunun koryoallantoik membranı (CAM), çeşitli araştırma alanları için çok yararlı ve uygulanabilir bir araçtır. Japon bıldırcın CAM'in özel bir ex ovo modeli, fotodinamik tedavi araştırması için uygundur.

Bıldırcın Korioallantoik Membran - Fotodinamik Tanı ve Tedavi için Bir Araç

Burada, insan yumurtalık dokusu için bir civciv koryoallantoik membran (CAM) ksenogreftleme modeli geliştirmek için bir protokol açıklıyoruz ve tekniğin etkinliğini, greft revaskülarizasyon zaman çerçevesini ve 6 günlük bir greftleme süresi boyunca doku canlılığını gösteriyoruz.

Yumurtalık Dokusu Transplantasyonunu İncelemek İçin Bir Araç Olarak Civciv Korioallantoik Membran (CAM) Modeli

Keşfedin civciv ex ovo kültür ve CAM testi yöntemlerini anjiyogenez ve tümör biyolojisi araştırmaları için. Bu teknik, kanser çalışmalarında canlı model kullanımını kolaylaştırır.

Civciv Ex ovo Kültür ve Ex ovo CAM Testi: Gerçekten Nasıl Çalışır?

Daha fazla video keşfet